吸烟对SD大鼠肝脏视黄醇代谢的影响

为从肝脏中筛选可靠、特异的视黄醇代谢发生显著改变及纤维化的生物标志物,建立无创伤性、准确的肝脏早期纤维化临床诊断方法,利用超高效液相色谱串联质谱联用仪进行吸烟后大鼠肝脏代谢蛋白组学分析,应用统计分析筛选潜在的生物标志物。结果表明:共鉴定出9个潜在生物标志物,分别为Ugt2b、Cyp1a2、Cyp3a2、Adh6、Adh4、Fasn、Cyp2c12、Hsd17b6、Csad,其中5个物质在模型组上调, 4个物质在模型组下调。该研究提示可建立一种无创伤性、用于肝脏视黄醇代谢发生显著改变及早期纤维化的诊断方法。

兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的功能性表达、纯化及活性鉴定

目的:用原核蛋白表达系统对兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)进行功能性表达,并对其活性进行鉴定。方法:从兔肝中克隆出NRDR全长序列,运用Gateway表达系统将其编码区序列构建到表达载体(pDEST 17)上,再转化到大肠杆菌(E.coli)(BL21-AI)中表达出兔NRDR蛋白并鉴定其表达形式;取工程菌裂解上清通过金属离子亲和层析纯化出目的蛋白,再运用反相高效液相色谱法(HPLC)测定该酶的Km值和Vmax值。结果:构建出含兔NRDR编码区(768 bp)的表达克隆,转化到BL21-AI中表达出氨基端含6×His标签的重组兔NRDR蛋白,诱导表达4 h后目的蛋白可占总蛋白量的41.4%;经一步亲和层析得到的兔NRDR纯度为97.2%,比活性提高了64倍;经HPLC测定,该酶对视黄醛的Km值为(4.55±0.33)μmol/L,Vmax为(0.307±0.065)μmol/(min.mg)。结论:应用pDEST 17可在BL21-AI中对兔肝NRDR进行高效的功能性表达。

Apelin-13对小鼠血脂代谢的影响及其机制研究

本研究旨在探索Apelin-13调控小鼠血脂代谢的生理机制。试验选取体重相近的小鼠96只,随机分为4个处理,每个处理4个重复。对照组和3个试验组小鼠分别每天皮下注射100μL 0.9%的生理盐水、10、20和50μg·kg^-1的Apelin-13,试验期为14 d。测定小鼠的生长性能、血清Apelin-13和血脂含量,并采用Illumina Novaseq测序平台进行小鼠肝组织转录组测序(RNA-seq)。结果表明,与对照组相比,皮下注射Apelin-13极显著提高了血清Apelin-13和高密度蛋白胆固醇含量(P<0.01),显著降低了血清甘油三酯含量(P<0.05)。试验组和处理组共检测到340个上调和350个下调的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。这些DEGs最显著富集的信号通路为视黄醇代谢,该通路中的细胞色素P450(Cyp)和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(Ugt)两个超家族基因大部分上调表达。试验结果表明,Apelin-13可能通过调控视黄醇代谢信号通路中的Cyp和Ugt两个超家族基因的表达来调控小鼠的血脂代谢。

2型糖尿病患者视黄醇结合蛋白4与炎症因子、脂代谢及胰岛素抵抗的相关分析

目的探讨RBP-4对与2型糖尿病患者炎症因子超敏C反应蛋白（hs—CRP）、脂代谢及胰岛素抵抗的关系。方法105例门诊初诊患者及同期门诊或体检中心健康体检者，正常葡萄糖耐量（NGT）组34例和T2DM组71例，按BM1分为正常体重组（NW）56例及超重／肥胖组（OW／OB）49例。用ELISA测定血清RBP-4。全自动生化仪检测hs—CRP、游离脂肪酸（FFA）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（Tc）；化学发光法检测胰岛素。结果T2DM组ln（HOMA—IR）、TG、FFA、In（hs—CRP）均高于NGR组[1．20±0．38VS0．76±0．34，（2．74±2．20）mmol／L vs（1．88±1．41）mmol／L，（0．80±0．29）mmol／L vs（0．61±0．22）mmol／L，0．62±1．00 vs -0．17±1．07]，差异有统计学意义。单因素简单相关分析显示，NGR组lnRBP-4与In（HOMA-IR）存在正相关（r=0．382，P〈0．05），与TC、TG、FFA、in（hs．CRP）无关。T2DM组，lnRBP-4与FFA、In（hs—CRP）呈正相关（r=0．242，P〈0．05；r=0．346，P〈0．01），但与in（HOMA—IR）、TC、TG均无相关性。NW组，lnRBP-4与ln（HOMA—IR）、TC、TG、FFA、ln（hs-CRP）均无相关性。而OW／OB组，lnRBP-4与ln（HOMA—IR）、In（hs—CRP）呈正相关（r=0．290，0．295，P〈0．05），但与TC、TG、FFA无关。逐步多元线性回归分析显示，各组的ln（hs—CRP）、TC、TG、FFA、in（HOMA—IR）均非lnRBP-4的独立影响因素。结论在T2DM患者中，RBP-4与ln（hs．CRP）、FFA正相关，可作为一新的炎症标志物。

新诊断2型糖尿病老年患者血清脂联素、视黄醇结合蛋白4水平与代谢综合征的关系研究

目的 研究新诊断2型糖尿病（T2DM）老年患者血清脂联素（ADPN）、视黄醇结合蛋白4（RBP4）水平和代谢综合征的关系.方法 选择2012年1月至2014年6月在本院门诊就诊及住院的100例＞ 60岁T2DM患者为研究对象,依据代谢综合征（MS）与糖尿病情况将患者分为单纯2型糖尿病组（T2DM组）及联合组（T2DM＋ MS组）.检测两组患者体质量指数（BMI）、腰围（WC）、空腹胰岛素（FINS）、空腹血糖（FBG）、ADPN、RBP4以及血脂等.结果 T2DM组ADPN及RBP4水平分别为（9.19 ±3.78） μg/L,（27.01 ±2.78） mg/L,T2DM＋ MS组ADPN及RBP4为（8.40±4.72） μg/L,（32.51±3.90） mg/L,T2DM＋ MS组ADPN水平低于T2DM组,RBP4水平高于T2DM组,差异有统计学意义（P＜0.05）.相关性分析发现RBP4与BMI、WC、TC及TG呈正相关（r=0.352,0.283,0.288,0.267,P＜0.05）;ADPN与HDL-C呈正相关（r=0.301,P＜0.05）,与BMI及WC呈负相关（r=-0.277,-0.234,P＜0.05）.结论 MS患者血清ADPN水平下降、RBP4明显升高,在其发病中可能起重要的作用。

妊娠期糖尿病视黄醇结合蛋白4与炎症因子、胰岛素抵抗相关分析

目的探讨RBP-4与妊娠期糖尿病患者炎症因子超敏C反应蛋白（hs-CRP）、游离脂肪酸（FFA）及胰岛素抵抗的关系。方法97例就诊产科及内分泌科门诊的妊娠期女性，正常葡萄糖耐量（NGT）组50例、糖耐量异常（IGT）组20例、妊娠期糖尿病组（GDM）组27例，按BMl分为正常体重组（NW）42例及超重／肥胖组（OW／OB）55例。用ELISA测定血清RBP-4。全自动生化仪检测hs-CRP．游离脂肪酸（FFA）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）；化学发光法检测胰岛素。结果IGT组、GDM组In（HOMA—IR）、FFA、ln（hs-CRP）均高于NGT组（P〈0．05），OW／OB组的FFA[（0．90±0．31）mmol／LVS（0．71±0．28）mmol／L，t=2．73，P〈0．05j、ln（hs-CRP）（0．62±1．00VS-0．17±1．07，t=2．90，P〈0．05）、In（HOMA-IR）、lnRBP（0．56±0．27VS0．30±0．14，t=2．86，P〈0．05）高于NW组，差异有统计学意义。单因素简单相关分析显示，GDM组与OW／OR组中，lnRBP-4与FFA及In（hs-CRP）均呈正相关（r=0．23I，0．237，0．371，O．247，P〈0．05）。而NGT、IGT组及NW组lnRBP-4与FFA、In（hs-CRP）无相关。NGT组、OW／OB组InRBP-4与1n（HOMA-IR）呈正相关（r=oJ276，0．290，P〈oJ05）。IGT组、GDM组及NW组InRBP-4与In（HOMA-IR）均无相关。逐步多元线性回归分析显示，ln（hs-CRP）、FFA、In（HOMA．IR）均非lnRBP-4的独立影响因素。结论在GDM患者中，RBP-4可作为一种新的炎症标志物。

血清视黄醇结合蛋白、前白蛋白、腺苷脱氨酶、胆碱酯酶在肝硬化中的应用价值

目的探讨血清视黄醇结合蛋白（RBP）、前白蛋白（PA）、腺苷脱氨酶（ADA）、胆碱酯酶（CHE）在肝硬化中的应用价值。方法测定90例肝硬化患者（肝硬化组）和90例健康人（对照组）血清RBP、PA、ADA、CHE，并按childpush分级标准进行分组比较。结果肝硬化组RBP、PA含量和CHE活性较正常对照组显著降低（P〈0．05），ADA活性明显升高（P〈0．05）；按childpugh分级，RBP、PA含量和CHE活性随肝硬化程度的加重而降低，ADA活性随肝硬化程度的加重而升高，各组之间差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论血清RBP、PA含量和ADA、CHE活性的检测对判断肝硬化程度具有直接指导意义，可作为肝硬化患者病情诊断、治疗和预后判断的指标。

2型糖尿病患者视黄醇结合蛋白4与颈动脉硬化的关系

目的探讨2型糖尿病患者血清视黄醇结合蛋白4（RBP4）与颈动脉粥样硬化的关系。方法收集2010年1月至2010年12月本院内分泌科住院的的2型糖尿病患者共176例，采用彩色多普勒超声诊断仪10MHz高频探头检测患者双侧颈动脉，根据颈动脉内膜中层厚度（CIMT）分为颈动脉正常组92例（CIMT〈0．9mm）和颈动脉内膜增厚组84例（CIMT≥0．9mm）。记录每个病例的年龄、病程、体重、身高，计算体质量指数BMI（kg／m2），同时测定空腹血糖（FPG）、血尿酸（UA）、血肌酐（CR）、血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL）、视黄醇结合蛋白4（RBP4）、空腹及餐后1h及餐后2hC肽（FCP、1h-CP、2h-CP）。结果两组除空腹血糖及血清总胆固醇外，其余各指标比较差异均有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05），多元直线相关分析显示CIMT与RBP4、年龄、病程、BMI、TG、LDL呈正相关（P〈0．05），多元逐步回归分析示RBP4是CIMT的独立相关因素（r2=0．538，P〈0．05）。结论2型糖尿病患者血清视黄醇结合蛋白4（RBP4）与颈动脉硬化呈独立正相关，RBP4可作为2型糖尿病患者心血管疾病风险的预测因子。

aldh3a2a敲除对斑马鱼体色的影响

本研究探究了aldh3a2a在斑马鱼色素细胞发育中的意义及其对醛代谢和肝脏健康的影响。利用CRISPR/Cas9技术,成功构建aldh3a2a敲除纯合突变家系,导致黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞数量减少,csf1ra、pnp4a、itk下调,黑色素合成通路关键基因mitfa、tyrp1b和kita下调。转录组分析揭示了基因表达谱系的变化,差异基因scd、lpla和aox5在类固醇生物合成途径中下调,指示aldh3a2a对类固醇生物合成的关键作用。对视黄醇代谢通路的转录组分析和qpcr联合研究结果表明,aldh3a2a可以调控raldh2、rxrab以及aox5,表明其对视黄酸受体的信号传导有一定影响,同时aldh3a2a可以调控钾离子通道蛋白kcns3b,指示其对色素细胞的影响与钾离子信号传导有关。GO和KEGG富集分析发现突变体的细胞周期、同源重组、RNA降解、RNA转运、p53信号通路、真核生物核糖体生物发生、DNA复制、碱基切除修复、氨基酰基-tRNA生物合成、细胞质DNA传感通路、类固醇生物合成、错配修复、类固醇激素生物合成和醛酸盐代谢等通路也有着广泛影响。此外,aldh3a2a基因敲除会导致体内醛积累明显,产生细胞毒性进而引发肝脏体积异常增大、肝脏内出现空泡,体质量增加的表征,类似于Sjögren-Larsson综合征的症状,揭示了aldh3a2a在斑马鱼体内的作用及其与人类遗传疾病的相关性,将有助于更深入地了解其在斑马鱼和人类中的功能和潜在的治疗靶点。

突发性耳聋患者内脂素和RBP4含量变化的研究

目的探讨突发性耳聋患者血清内脂素（visfatin）和视黄醇结合蛋白4（RBP4）的含量变化，及其在突发性耳聋发生过程中的作用和意义。方法采用酶联免疫（ELISA）法检测血清内脂素和RBP4含量；检测102例突发性耳聋患者、35例其他疾病对照组和30例正常健康对照组的血清内脂素和RBP4含量，并比较治疗前后血清内脂素和RBP4的测定结果。结果突发性耳聋患者治疗后血清内脂素[（24．26±2．17）μg／L]和RBP4含量[（46．65±5．26）mg／L]显著高于其它疾病对照组[内脂素：（20．67±2．14）μg／L；RBP4：（34．37±5．73）mg／L]和健康对照组[内脂素：（17．61±2．45）μg／L；RBP4：（24．82±5．24）mg,／L]（t=10．38，10．41，12．16，15．06，P〈0．01），较治疗前明显降低[内脂素：（32．24±2．37）μg／L；RBP4：（57．43±6．19）mg／L]（t=17．25，15．12，P〈0．01）。同时重度组突发性耳聋患者血清内脂素[（36．52±2．46）μg／L]和RBP4[（67．17±5．92）mg,／L]浓度明显高于中度组[内脂素：（28．92±2．26）μg／L；RBP4：（55．34±5．95）mg／L]（t=11．21，11．17，P〈0．01），中度组患者明显高于轻度组[内脂素：（25．31±2．32）μg／L；RBP4：（47．48±5．82）ms／L]，且差异有统计学意义（t=10。43，10．49，P〈0．01）。突发性耳聋患者血清内脂素和RBP4含量之间呈正相关（r=0．68，P〈0．01）。结论血清内脂素和RBP4水平的变化与突发性耳聋病情严重程度密切相关。

新生儿营养评价生化指标参考区间的调查

目的对新生儿营养评价指标血清总蛋白、白蛋白、前白蛋白及视黄醇结合蛋白的参考区间进行调查。方法收集2016年12月至2017年8月间湖南省儿童医院健康体检新生儿的血清标本403例,测定血清中总蛋白、白蛋白、前白蛋白及视黄醇结合蛋白的浓度;对各检测项目结果按性别、周龄进行分组比较后建立各项目的参考区间。结果健康新生儿各项目测定值男女间差异无统计学意义(P>0. 05);总蛋白、白蛋白、视黄醇结合蛋白在出生后各周龄间差异无统计学意义(P>0. 05), 1周龄的新生儿前白蛋白浓度与其他周龄的新生儿比较差异有统计学意义(P <0. 05)。健康新生儿血清总蛋白、白蛋白、视黄醇结合蛋白及前白蛋白的参考区间依次为:40. 69～65. 72 g/L、28. 77～42. 3 g/L、12. 13～33. 19 mg/L、42. 26～161. 52 mg/L(≤7 d)及59. 05～170. 23 mg/L(8～28d)。结论新生儿血清总蛋白、白蛋白、视黄醇结合蛋白建立参考区间时可不区分性别、周龄,而前白蛋白1周内新生儿的参考区间需要与其他周龄的新生儿区分。