山茱萸对苯扎氯铵诱导的干眼症小鼠视黄醇转运的调控作用

目的:观察山茱萸对视黄醇转运的调控作用,阐明山茱萸对干眼症的治疗作用机制。方法: 60只BALB/c小鼠随机分为空白对照组,模型组,阳性对照组,低、中和高剂量山茱萸组。采用苯扎氯铵滴眼法制备干眼症小鼠模型。阳性对照组小鼠经口灌服石斛夜光丸(20 mL·kg^-1 体质量),低、中和高剂量山茱萸组小鼠分别经口灌服600、1 200和2 400 g·L^-1 山茱萸水煎剂(20 mL·kg^-1 体质量),空白对照组小鼠不处理,模型组小鼠经口灌服等量生理盐水;各给药组大鼠均每日给药1次,连续4周。泪液测试试纸法检测各组小鼠泪液分泌量,荧光素染色法检测各组小鼠泪膜破裂时间,ELISA法检测各组小鼠血清中前蛋白(PA)、视黄醇结合蛋白(RBP)和肝组织中视黄醇水平,免疫组织化学法和免疫印迹法检测各组小鼠泪腺组织中胞内视黄醇结合蛋白(CRBP)和RBP受体—维甲酸诱导蛋白6(STRA6)蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠泪液分泌量明显减少(P<0.01),泪膜破裂时间明显缩短(P<0.01);与模型组比较,阳性对照组和不同剂量山茱萸组小鼠泪液分泌量明显增加(P<0.05或 P<0.01),泪膜破裂时间明显延长(P<0.01)。与空白对照组比较,模型组小鼠血清中PA和RBP水平及肝组织中视黄醇水平明显降低(P<0.01),泪腺组织中CRBP和STRA6蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与模型组比较,阳性对照组和不同剂量山茱萸组小鼠血清中PA和RBP水平及肝组织中视黄醇水平明显升高(P<0.01),泪腺组织中CRBP和STRA6蛋白表达水平明显升高(P<0.05 或 P<0.01);与阳性对照组比较,高剂量山茱萸组小鼠血清中PA和RBP水平明显升高(P<0.05或 P<0.01),泪腺组织中CRBP和STRA6蛋白表达水平进一步升高(P<0.01)。结论:干眼症发生时,机体伴随视黄醇缺乏和视黄醇转运障碍,而酸味药山茱萸水煎液可以促进视黄醇吸收,改善机体视黄醇缺乏状态,进而调控视黄醇转运过程。

山茱萸对苯扎氯铵诱导的干眼症小鼠视黄醇转运调控作用研究

目的探讨山茱萸对视黄醇转运的调控作用,阐述其治疗干眼症的作用机制,丰富“酸补肝明目”的分子基础。方法 60只BALB/c小鼠随机分为6组,每组10只,分别为对照组、模型组、阳性对照(石斛夜光丸2.9 g/kg)组及山茱萸低、中、高剂量(12、24、48g/kg)组。采用苯扎氯铵滴眼法诱导干眼症模型小鼠,ig给予不同剂量的山茱萸水煎液,通过检测各组小鼠泪液分泌量、泪膜破裂时间,评价山茱萸水煎剂对干眼症模型小鼠的干预作用。ELISA法检测血清前蛋白(PA)、视黄醇结合蛋白(RBP)水平、肝脏中视黄醇水平;免疫组织化学法(IHC)及Western blotting法检测泪腺组织中胞内视黄醇结合蛋白(CRBP)及RBP受体(STRA6)的表达水平。结果与对照组比较,模型组小鼠泪液分泌量显著减少,泪膜破裂时间显著缩短(P<0.01),泪腺组织中CRBP及STRA6蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠血清PA、RBP及肝脏组织中视黄醇水平显著升高(P<0.01),泪腺组织中CRBP及STRA6蛋白表达水平显著升高(P<0.05、0.01)。结论干眼症发生时,机体伴随视黄醇缺乏和转运障碍,而酸味药山茱萸水煎液可以促进视黄醇吸收,改善机体视黄醇缺乏状态,进而调控其转运过程,这可能是“酸入肝,明目”的分子机制之一。

创建酿酒酵母细胞工厂发酵生产视黄醇

视黄醇是维生素A的主要活性形式之一,对于机体的生长发育、眼部和皮肤功能维持至关重要,被广泛应用于化妆品、医药和饲料添加领域。动物体内不具备完整的维生素A合成途径,但可通过膳食直接摄入或将膳食中获得的β-胡萝卜素转化获得。为了推进视黄醇的生物法合成研究,首先以β-胡萝卜素合成平台CAR*1为基础,筛选了3种不同来源的醇脱氢酶,确定了大肠杆菌来源的ybbO具有最高的催化活性,转化率可达95.6%。为了进一步提高反应速率和产量,采用蛋白质融合技术将视黄醇合成模块中2个相邻酶blh和ybbO进行融合后,在高产β-胡萝卜素工程菌株CAR*3中进行评估,获得了最优组合blh-GGGS-ybbO,其产量较融合前提高了44.9%,达到(111.1±3.5)mg·L^(-1)。进一步工作中,通过引入人源的视黄醇结合蛋白(RBP4)以及转甲状腺素蛋白(TTR),在酿酒酵母中模拟了人体肝脏细胞分泌视黄醇的过程,视黄醇产量增加至(158.0±13.1)mg·L^(-1)。最后,采用过表达INO2扩张β-胡萝卜素合成途径反应区室,提高血红蛋白VHb表达量以增强氧气的供给,强化PDR3m表达促进视黄醇的转运和开发2个阶段发酵工艺等方法,在5 L发酵罐中成功将视黄醇的产量提升至(2320.0±26.0)mg·L^(-1),为视黄醇产业化发展提供了重要基础。

血清视黄醇结合蛋白4在2型糖尿病视网膜病中的价值

目的 通过测定正常糖调节者、合并与未合并糖尿病视网膜病(DR)的2型糖尿病(T2DM)患者血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)浓度以及视黄醇结合蛋白4/甲状腺素转运蛋白(RBP4/TTR)比值探讨RBP4在DR中的意义.方法 选取2008年1月至9月苏州大学附属第一医院内分泌科收治的72例2型糖尿病住院患者,应用酶联免疫法和全自动生化分析仪检测35例合并DR的T2DM患者(DR组)血清RBP4、TTR、真胰岛素、C肽、糖化血红蛋白等,并与37例非DR的2型糖尿病患者(NDR组)和30名正常糖调节者(NGR组)作横断面对照.所有入选对象均符合以下标准:(1)排除肝肾疾病,并且入院后生化检查无肝酶、胆红素、白蛋白及球蛋白异常;尿蛋白/尿肌酐＜0.2,肾小球滤过率＞90 ml/min;(2)无营养不良及体重指数(BMI)＜19 kg/m2;(3)无感染及应激状态,且血清超敏C反应蛋白＜3.0 mg/L;(4)1个月内未服用维生素A、铁剂及影响其代谢的药物.采用方差分析、t检验、二元Logistic回归等进行统计学分析.结果 DR组RBP4/TTR较NDR组及NGR组显著增高(0.12±0.06、0.09±0.04、0.072±0.021,F=9.562,P＜0.05).DR组RBP4与NGR组比较差异有统计学意义[(16±4)、(13±3)mg/L,t=3.74,P＜0.05],但与NDR组无统计学差异[(15±4)、(15±3)mg/L,t=1.73,P＞0.05].分别将RBP4和RBP4/TTR引入二元Logistic回归分析,发现RBP4(B=0.214,OR=1.239,P＜0.05)和RBP4/TTR(B=0.718,OR=2.051,P＜0.05)均为DR的危险因素.结论 血清RBP4可能在T2DM发生DR的过程中起作用;血清RBP4/TTR比值在评估DR危险因素时的价值要优于血清RBP4浓度.