基于转录组测序芒果抗细菌性角斑病SNP/In Del分析

旨在挖掘与芒果抗细菌性角斑病紧密联系的SNP/InDel位点,以进一步揭示芒果抗细菌性角斑病的遗传多样性和分子机理。试验材料为细菌性角斑病高抗品种‘热农1号’和高感品种‘凯特’,分别对两个品种接病菌后0d、2d、6d的果皮进行转录组分析,以基因组‘红象牙’作为参考,鉴定并分析芒果中SNP/InDel位点的特征。结果表明,‘凯特’和‘热农1号’分别获得32.77Gb和36.83Gb的数据量,每个样本过滤后的Q30均高于90%。将reads比对到芒果参考基因组上,两个品种共检测到1213112个SNP位点,62888个InDel位点,主要分布在内含子区、外显子区、基因间区和基因上下游区域。SNP中转换位点和颠换位点分别为751006个(61.91%)和462106个(38.09%),其中转换型中A->G略多,而A->T在颠换型中占多数;In Del位点插入和缺失分别每个样本平均有18769和25015个。生物信息学分析表明,全部的SNP和InDel位点所在的差异基因,主要参与分子功能有代谢途径、应答刺激和生物学调控等过程。

烟草角斑病的发生及防治研究

烟草角斑病是一种常见于烟田中的细菌性病害,一旦发生,严重影响烟草产量.本研究介绍了烟草角斑病的病原菌的生物学特征和侵染规律,探究控制病害的有效方法.通过研究该病在田间发病因素以及发病规律的影响因素,更好地了解其传播方式和危害程度,从而制订相应高效的防治措施.最终提出预测发病趋势并提前做好防病准备是预防该病的最佳策略之一,可以结合气候变化、流行规律以及病害历史数据等,开展综合分析与研究,从而有效地控制该病的发生.

曹州镜面柿角斑病的发病规律与防治措施

镜面柿又称曹州耿饼,菏泽古称曹州,因其在菏泽耿庄大量生产,顾名思义,这就是曹州耿饼。曹州耿饼就是菏泽的传统名吃,据历史记录,已有上千年,在明代更是被列为贡品。镜面柿如今也是菏泽特色美食,它的果肉呈金黄色,鲜嫩味甜,果皮细腻光滑,深受老百姓喜爱,所以镜面柿在菏泽得以推崇并大规模种植。病虫害的防治是曹州镜面柿生产管理的重要组成部分,病害的发生将严重影响其生长发育和果实的品质,其商品性和经济效益也会受一定程度的影响。

山东东平县棚室栽培黄瓜细菌性角斑病综合防治技术

近年来,山东东平县黄瓜种植面积不断增加,但由于环境和管理技术的差异,各种病虫害频发,影响了产品的优质高产。黄瓜细菌性角斑病是保护地黄瓜栽培的主要细菌性病害之一,合理有效地控制黄瓜细菌性角斑病是保障产品质量和提高产品价值的重要保证。根据多年的工作经验,总结了黄瓜细菌性角斑病的症状、传播途径、发生规律等,提出了科学的综合防治措施,希望能给广大农民朋友带来帮助。

黄瓜细菌性角斑病菌的分离与鉴定

黄瓜细菌性角斑病是黄瓜生产中的重要病害之一,在陕西的危害严重,发病率在50%以上。本研究采用常规组织分离法和柯赫氏证病律从杨凌地区黄瓜细菌性角斑病标样中分离到1株病原菌,结合形态学、生理生化指标及16S rDNA序列分析,鉴定为丁香假单胞杆菌（Pseudomonas syringestrain）CP001。初步确定适合丁香假单胞杆菌CP001菌株生长的最佳pH为6~8,最适温度为22~29℃。

杧果细菌性角斑病菌细胞壁降解酶的致病作用

【目的】从细胞壁降解酶的角度开展其致病机制的研究,探讨杧果细菌性角斑病在发病过程中产生细胞壁降解酶的种类及其在致病过程中的作用,以期为对该病害的有效监测和研发防控新技术提供理论依据。【方法】采用活体外诱导培养和病原菌接种处理,利用3,5-二硝基水杨酸法（DNS法）和紫外分光光度计法检测病原菌侵染过程中细胞壁降解酶活性变化,DDS-ⅡA型电导率仪测定叶片组织浸出液的电导率,并观测细胞壁降解酶对杧果叶片的致病作用。【结果】病原菌在改良的Marcus培养液和罹病组织中均能产生6种主要细胞壁降解酶,其中羧甲基纤维素酶（Cx）活性较高,多聚半乳糖醛酸酶（PG）、果胶甲基半乳糖醛酸酶（PMG）和β-葡萄糖苷酶次之,果胶甲基反式消除酶（PMTE）和多聚半乳糖醛酸反式消除酶（PGTE）较低。病原菌接种杧果叶片后,6种酶活性显著升高,在病菌侵染前期（0-4 d）,PMG接种后2 d达到最大活性高峰,酶活值为8.470 U·mg^-1,以未含致病菌株的培养基接种杧果叶片作为对照,此时接种处理酶活值是对照的3.805倍;β-葡萄糖苷酶接种后4 d酶活性值最大,为15.190 U·mg^-1,是对照的4.388倍。在病菌侵染后期（4-14 d）,Cx、PG、PMTE和PGTE均在接种后的10 d达到最高峰,酶活性值分别为25.941、14.605、0.009、0.014 U·mg^-1,是对照的2.672、14.634、12.571和4.121倍,在整个测定过程中,对照始终处于较低水平。此外,细胞壁降解酶对杧果叶片具有浸解作用,且浸解损伤程度与酶浓度成正比。【结论】细胞壁降解酶在病原菌的入侵和致病过程中起重要作用。果胶酶在病原菌侵染初期最早分泌并起作用,纤维素酶主要降解次生壁,致病作用发生在后期,并且果胶酶比纤维素酶对杧果叶片的致病作用明显。

黄瓜细菌性角斑病的拮抗细菌筛选初报

从土壤中分离得到的120个菌株中,筛选出对黄瓜角斑病菌有较强抑菌活性的拮抗细菌B9。温室盆栽防治试验结果表明:该菌株显著抑制角斑病的发生,防治效果达72.1%;拮抗细菌B9在28℃、pH值7.0生长最好,培养60h时,其OD值可达到1.708。经初步鉴定,该拮抗菌株属于黄杆菌属(Flavobacteriumsp.)。

雷公藤角斑病菌的生物学特性及侵入途径观察

对雷公藤(Tripterygium wilfordii)角斑病病原福木假尾孢菌(Pseudocercospra elaeodendri)的生物学特性及侵入方式研究表明,该菌菌丝生长最适温度27-29℃,以胡萝卜培养基生长最好,pH值4.5-9.0适合生长.产孢最适温度31℃,最适pH值为6,燕麦培养基最适产孢.孢子萌发最适温度31℃,最适pH值为3,雷公藤汁液及暗培养条件对孢子萌发有促进作用,且萌发需要一定的湿度.扫描电镜结果显示,接种24 h时萌发芽管直接从背面气孔侵入雷公藤叶片.

黄瓜细菌性角斑病PMA-qPCR检测方法的建立和应用

黄瓜细菌性角斑病为黄瓜常见的一种细菌病害,其致病菌为丁香假单胞菌黄瓜致病型。目前该病在全球范围内已经造成严重的经济损失。针对于PMA染料能够区分细胞死活的特性将其与荧光定量PCR技术结合。(1)通过比对分析Gen Bank中该菌种不同株的gap1基因序列,找出gap1基因的保守区并根据保守区基因序列设计了一对特异性引物Dxf1和Dxr1,以其他5种非丁香假单胞菌基因组为模板进行实时定量PCR扩增,只有丁香假单胞菌有扩增曲线,证明引物非常特异。(2)以gap1基因为目的基因构建其克隆载体,将克隆载体导入到大肠杆菌感受态细胞中进行培养,使其大量复制。再将质粒提取,以提取的质粒作为标准品,根据其浓度将其稀释为5×101-5×107 7个梯度绘制标准曲线,获得的扩增效率为96.6%,并做组内重复和组间重复,变异系数均在2%内,证明标准曲线重复性良好。(3)将构建好的方法用于实际样品的检测,得到的Ct值为27.99,根据标准曲线所得的起始模板与Ct值之间的线性关系公式,检测到100 mg患病叶片中含有的菌体为7.69×102拷贝。研究表明,该方法可以快速鉴定并检测实际样品中的活的致病菌的数量,为黄瓜细菌性角斑病的防控提供技术支持。

黄瓜叶片细菌性角斑病侵染初期cDNA文库分析

文章以接种细菌性角斑病原菌48h的抗病品种‘D0462’黄瓜叶片为材料,构建了黄瓜叶片cDNA文库,文库插入片段大小为0.45～2.1kb之间,平均长度为1kb。随机选取2966个克隆进行测序,共拼接出2352个假定独立转录本(TUTs),其中包括282个重叠群(Contigs),2070个单拷贝EST(Singlets)。经BlastX分析共获得已知功能和未知功能基因1848个,无序列相似性新基因504个。文库中含有大量防御/抗病基因,如金属硫蛋白、谷胱甘肽-S-转移酶、泛素、β-1,3-葡聚糖酶、锌指蛋白和半胱氨酸蛋白酶等,这些基因很可能参与了植物与病原菌互作过程。

我国现行推广黄瓜品种及种质资源对细菌性角斑病的抗性评价

采用室内苗期人工喷雾接种鉴定方法,对我国现行推广的222个黄瓜品种和52份黄瓜种质资源进行了细菌性角斑病的人工接种抗病性鉴定。结果表明,222个黄瓜栽培品种中,3个品种D07194(金满田黄瓜)、D07207(绿丰园8号青瓜)和D07251(新津春4)表现为高抗,占鉴定品种总数的1.4%;56个品种表现为抗病,125个品种表现为中抗,30个品种表现为感病,8个品种表现为高感。从52份黄瓜种质资源中筛选出13份高抗细菌性角斑病的材料,分别为D0618、C05-056、F02-07.04、C05-36、D0327、C04-02、D0463、D0435-3、D0328、D0462、D2009-1、129和北进,未发现对细菌性角斑病免疫的材料。

雷公藤角斑病菌产毒条件研究

对雷公藤角斑病菌福木假尾孢(Pseudocercospora elaeodendri)毒素的生物活性进行测定。结果表明,该菌所产生的毒素对雷公藤叶片具有毒性。生物活性测定方法选择离体叶片针刺法。对雷公藤角斑病菌产毒条件研究表明,该菌产毒的最佳培养液为查彼+培养液,最适pH值为7.0,适宜温度为29℃,并在全黑暗条件下充分震荡(120 r.min-1)培养25 d。

细菌性角斑病菌诱导黄瓜叶片水杨酸的积累

对黄瓜(Cucumis sativa L.)幼苗第一片真叶接种细菌性角斑病菌(Pseudomonas syringae pv.lachy-mans)后,利用TLC和HPLC方法分离测定了不同时间内游离态和结合态水杨酸(SA)的含量。结果表明,接种显著提高了第一片真叶游离态SA含量,增加了30％～197％,结合态SA的含量变化与游离态相似,提高了79％～240％,但是接种后第三天游离态SA和结合态SA含量都下降。接种还诱导了非接种第二片真叶中SA的积累:游离态SA含量在接种初期增加了29％～46％,接种后第三天达到峰值,第五天回复到正常水平,结合态SA含量在接种初期没有变化,接种后第四至六天也显著增加,提高了62％～107％。

黄瓜和甜瓜细菌性角斑病病原菌鉴定及药敏测定

从黄瓜和甜瓜上分离到的细菌性角斑病H_1,H_2和T_1,T_4菌株,经致病性测定、革兰氏染色、形态学、培养性状、生理生化特性等鉴定,均为丁香假单胞杆菌,属黄瓜角斑病致病变种。药敏测定表明,此4菌株对波尔多液、链霉素、敌克松、代森锰锌、细菌灵(CT)等均有较大的敏感度。

丙硫唑与溴菌腈对杧果细菌性角斑病菌的协同作用及田间防效

测定了丙硫唑和溴菌腈对杧果细菌性角斑病菌(Xanthomonas campestris pv.Mangiferaeindicae)的联合毒力及田间防治效果。结果表明,丙硫唑与溴菌腈对杧果细菌性角斑病菌EC50值分别为2.869和0.206μg/mL,当质量比为1∶2混配时毒力增效作用最明显,增效系数为1.595,其EC50值为0.187μg/mL;二者以75 g/hm^2与150 g/hm^2(有效成分质量比1∶2)进行田间桶混处理15 d,防效达80%以上,显著高于单剂防效。

防治黄瓜细菌性角斑病药剂筛选

采用抑菌圈法对市场上常见的9种杀细菌剂进行室内毒力测定,并进行田间防效试验,以期筛选出有效药剂.试验结果表明:6种化学药剂中,5%噻霉酮水剂和0.3%四霉素水剂对黄瓜细菌性角斑病的抑制效果较好,其他4种药剂则效果较差.3种生物药剂中,10亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂对黄瓜细菌性角斑病的抑制效果较好,其他2种药剂则效果较差.田间试验中,10亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂1 500倍液和20%春雷霉素水剂42g/hm^2的防效较好,其防效分别为82.74%和72.38%.0.3%四霉素水剂和33.5%喹啉铜悬浮剂则效果较差.所以,防治黄瓜细菌性角斑病推荐使用10亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂.

烟草角斑病菌拮抗细菌筛选及抗菌活性物质研究

研究从黑龙江省健康烟草植株及其根际土壤和海南三亚采集的20种杂草中分别分离到287和98个细菌分离物，筛选出对烟草角斑病菌有拮抗活性的菌株22个，其中来自三亚稗草叶片中的一株细菌PA-2的抑菌效果最好，抑菌效果稳定。经形态学、生理生化及分子生物学鉴定， PA-2为铜绿假单胞杆菌（Pseudomonas aeruginosa）。筛选出最佳实验室发酵配方：氮源1%（牛肉膏？？蛋白胨=5？？3），葡萄糖0.3%， NaCl 0.5%， KNO30.3%；最佳培养条件：发酵温度28℃，培养基pH 7.0~7.5，接种量4%，装液量为250 mL三角瓶中装液50 mL。PA-2优化发酵液的田间防效达69.77%，比农用链霉素防效提高24.47%。采用硫酸铵分级沉淀法分离抑菌活性物质，结果表明，在（NH4）2SO4浓度为30%~90%各浓度梯度下均有抑菌活性物质沉淀，其中60%~70%（不含60%）是抑菌活性物质的最适盐析饱和度。抑菌活性物质具有较强的热稳定性、较好的蛋白酶耐受性、较好的耐碱性、较差的耐酸性，能溶于部分有机溶剂，经乙醇、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和丙酮萃取后，该抑菌活性物质抑菌活性下降范围为1.4%~4%。确定该抑菌活性物质为小分子碱性、水溶性脂肽类物质。

8种杀菌剂对黄瓜细菌性角斑病的防治效果

为明确供试的8种杀菌剂防治黄瓜细菌性角斑病的效果,采用含毒介质法、琼脂扩散法和盆栽法测定了8种杀菌剂对丁香假单胞杆菌的最小抑菌浓度(MIC)、抑菌圈大小及保护和治疗效果。结果表明,0.3%四霉素AS、80%乙蒜素EC、5%中生菌素WP、72%农用硫酸链霉素SP、20%乙酸铜WP和46%可杀得叁千WG的MIC分别为20、80、200、400、800 mg/L和2 000 mg/L。当浓度为400 mg/L时,0.3%四霉素AS、5%中生菌素WP、20%乙酸铜WP和80%乙蒜素EC的抑菌圈直径分别为1.75、1.33、0.93 cm和0.90 cm。盆栽试验结果表明,保护作用好于治疗作用,其中20%噻菌铜SC、46%可杀得叁千WG、5%中生菌素WP、20%乙酸铜WP和72%农用硫酸链霉素SP在浓度200~400 mg/L时,保护作用的防治效果分别为78.9%~82.2%、78.1%~81.0%、69.7%~78.3%、61.7%~63.1%和57.1%~65.0%。综合考虑,20%噻菌铜SC、46%可杀得叁千WG、5%中生菌素WP、20%乙酸铜WP和72%农用硫酸链霉素SP对黄瓜细菌性角斑病有较好的防治效果。

黄瓜非特异性脂质转移蛋白基因的序列分析及细菌性角斑病菌浸染下的表达

非特异性脂质转移蛋白(nsLTP)是植物中大量存在的小分子脂类结合蛋白,具有抗菌防御功能。分析黄瓜非特异性脂质转运蛋白基因nsLTP的序列特征及其在细菌性角斑病菌浸染过程中的表达模式,对其应用于黄瓜等农作物转基因工程,增强作物抗病性具有重要意义。在黄瓜叶cDNA文库中,获得非特异性脂质转移蛋白(nsLTP)cDNA序列,命名为CsnsLTP;该基因全长566 bp,编码121个氨基酸残基;序列分析表明,该基因具有N端信号肽,具有nsLTP家族共有的典型保守区域,属nsLTP家族基因。实时荧光定量PCR分析表明,CsnsLTP在黄瓜叶中有表达。在黄瓜细菌性角斑病菌浸染下,该基因在黄瓜叶中表达增高,并随浸染时间的延长而增强,明显受黄瓜细菌性角斑病菌的诱导,推测该基因在抵御黄瓜细菌性角斑病菌浸染时具有重要作用。

兼抗黄瓜枯萎病、角斑病和黑星病育种材料苗期筛选

通过苗期复合接种法对44份黄瓜高代自交系材料进行枯萎病、角斑病和黑星病多抗抗源鉴定、筛选。接种鉴定结果表明,44份材料对枯萎病均表现为高抗或抗病;14份材料抗角斑病,2份表现感病,其余均为中抗类型;只有2份材料抗黑星病,其余均为高度感病或感病。同时兼抗3种病害的材料只有1份,占2.3%;兼抗枯萎病和角斑病的材料15份,占34.1%,兼抗枯萎病和黑星病的材料只有2份,占4.6%。