人角朊干细胞体外筛选及鉴定的实验研究

目的 探讨体外筛选及鉴定人角朊干细胞 (KSC)的方法。 方法 利用 KSC对细胞外基质的快速黏附性 ,选择不同时间黏附的细胞分为 5、2 0和 6 0分钟 3组 ,并以不进行筛选的细胞作对照组。体外培养扩增后 ,以 KSC的相对特异性标识分子 β1 整合素、角蛋白 19(Ck19)的单克隆抗体 ,免疫组织化学方法对各组细胞进行鉴定 ,利用图像分析系统测平均灰度值。并用流式细胞仪、透射电镜对各组细胞进行检测。 结果 各组细胞在 10～ 14天均有克隆形成 ,组间比较 5分钟组细胞生长较慢 ,但形成克隆较大 ,细胞体积较小。免疫组织化学β1 整合素、Ck19在各组都有表达 ,各组平均灰度值统计学分析显示 ,β1 整合素在 5分钟组的表达与另 3组间有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ,Ck19的表达在 5分钟组与 2 0分钟组间无差异 (P>0 .0 5 ) ,6 0分钟组与对照组间差异不显著 ,而前两组与后两组之间比较有统计学意义 (P<0 .0 5 )。流式细胞仪检测提示 5分钟组细胞大部分处于 G1 期 ,与其它 3组有区别。透射电镜显示 5分钟组细胞体小 ,核浆比大 ,细胞器不成熟。 结论 利用细胞外基质筛选的 5分钟组细胞处于幼稚状态 ,并有强克隆形成能力 ,符合预期的KSC特点 ,可利用 KSC对细胞外基质的快速黏附性对其纯化筛选 ,同时利用 β1 整合素。

免疫磁珠分选人角朊干细胞的实验研究

目的:探索人角朊干细胞(keratinocyte stem cells,KSCs)的免疫磁珠分选(Magnetic Activated Cell Sorting,MACS)的方法。方法:从人包皮组织获得角朊细胞悬液,然后利用人角朊干细胞表面CD49f(整合素α6)和CD71的表达情况(CD49fbriCD71dim)通过MACS法将KSCs分选出来,在荧光显微镜下观察其荧光标记情况,同时将分选所得的CD49fbriCD71dim细胞进行体外无血清培养,观察其形态及克隆形成。结果:人角朊细胞经MACS法分选后所得的CD49fbriCD71dim细胞比率可达12．02(±6．92)%。CD49fbriCD71dim细胞经培养可见细胞为典型的上皮样特征,呈铺路石样形态,高核浆比例,细胞紧密排列,轮廓清楚,折光性好,并可在5-7天左右形成全克隆,符合KSCs的特点。结论:研究表明MACS分选法可以得到较高比例的人角朊干细胞,并能进行后续培养研究,其不失为一种较理想的人角朊干细胞的分选方法。

角朊干细胞生物学行为调控的研究进展

表皮终身处于更新之中 ,这是由于表皮基底层中角朊干细胞的增殖分化与外层终末分化细胞不断脱落之间的动态平衡所致。角朊干细胞在保持口腔黏膜和皮肤的自稳状态 ,创伤后口腔黏膜和皮肤的修复再生方面有着重要意义。特别是近来组织工程皮肤的构建方面 ,角朊干细胞更是成为热点。本文仅就近年来在角朊干细胞分化影响等方面的部分研究进展加以综述。

角朊细胞长期培养过程中角蛋白19表达的分析研究

目的:分析实验室条件下人角朊细胞长期体外培养过程中有无角朊干细胞的存在。方法:利用细胞工程方法进行组织分离、细胞培养及传代培养等,并且通过免疫组化方法,利用角蛋白多克隆抗体（Cytokeratin,Ck）、波形丝蛋白抗体（Vimentin,Vim）对培养细胞鉴定,并利用角肮干细胞（keratinocyte stem cell）的相对特异标识分子——Ck19（Cytokerain 19）对其进行检测分析。结果:表皮自真皮较完整分离,分离所得的角朊细胞至少可传至10代以上,可得细胞数为原代培养角朊细胞数的105倍以上。免疫组化结果显示,Ck反应阳性,Vim反应阴性,而Ck19阳性表明有角朊干细胞的存在,且Ck19阳性细胞数在第3代时占细胞总数的18％～20％,第10代时阳性率下降至9％～11％。结论:所用的组织分离方法可得到包括角朊干细胞在内的几乎全部数目的表皮基底层细胞,长期培养过程中,仍有角朊干细胞的存在,因而在培养过程中角朊细胞增殖活力强、可传代数多、不易衰老。