AlkB同源蛋白5去除前mRNA加工因子6的mRNA甲基化修饰调控肝细胞癌的细胞增殖

目的探讨AlkB同源蛋白5(AlkBhomolog5,ALKBH5)在肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的细胞增殖中的作用。方法通过癌症基因组图谱数据库分析ALKBH5和前mRNA加工因子6(pre-mRNA processing factor 6,PRPF6)在HCC组织中的表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测ALKBH5和PRPF6在HCC细胞系(Huh7和Hep3B)中的mRNA和蛋白表达水平。荧光原位杂交确定ALKBH5和PRPF6在HCC细胞系(Huh7和Hep3B)中的亚细胞定位。在免疫沉淀复合物中检测PRPF6的N6-甲基腺苷甲基化水平。通过过表达和敲低基因表达的方法,将Huh7细胞和Hep3B细胞分别进行转染,分组为sh-NC组(阴性对照转染细胞)、sh-ALKBH5实验组(ALKBH5干扰序列转染细胞)、sh-ALKBH5+ex-PRPF6实验组(ALKBH5干扰序列转染+PRPF6 pcDNA 3.1过表达质粒转染细胞),并采用CCK-8和染色增殖试验检测各组细胞的增殖情况。裸鼠异种移植瘤实验验证ALKBH5和PRPF6在体内的生物学功能。蛋白质印迹法检测各组细胞中AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平。结果HCC细胞中ALKBH5的表达上调,可以去除PRPF6的甲基化修饰。体外和体内实验结果显示,ALKBH5可通过调节PRPF6的表达参与HCC细胞的恶性增殖。此外,敲低ALKBH5会抑制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase,AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的磷酸化,而PRPF6的过表达则有助于AKT和mTOR的磷酸化。结论ALKBH5能促进HCC细胞的增殖,相关机制是通过ALKBH5/PRPF6/AKT/mTOR轴实现的。

血清胃泌素释放肽前体、细胞角蛋白19的可溶性片段和白介素-6对非小细胞肺癌的诊断价值分析

目的探讨血清胃泌素释放肽前体(ProGRP)、细胞角蛋白19的可溶性片段(CYFRA21-1)和白介素-6(IL-6)对非小细胞肺癌的诊断价值。方法选取2018年2月至2022年8月在新乡市中心医院经病理检查确诊为非小细胞肺癌的86例患者,分为鳞癌组(n=51)和腺癌组(n=35);纳入同期接受治疗的肺部疾病(非肺癌)患者86例。检测并比较3组患者血清ProGRP、CYFRA21-1和IL-6水平。结果鳞癌组、腺癌组患者血清ProGRP、CYFRA21-1和IL-6水平均高于肺部疾病组(鳞癌组:P<0.001、P<0.001、P<0.001,腺癌组:P<0.001、P<0.001、P<0.001)。鳞癌组、腺癌组患者血清ProGRP、CYFRA21-1和IL-6阳性率均高于肺部疾病组(鳞癌组:χ^(2)=34.360,P<0.001;χ^(2)=36.810,P<0.001;χ^(2)=15.860,P<0.001;腺癌组:χ^(2)=29.040,P<0.001;χ^(2)=37.620,P<0.001;χ^(2)=18.860,P<0.001)。血清ProGRP、CYFRA21-1和IL-6与肺鳞癌、肺腺癌均呈正相关(鳞癌组:r=0.782,P<0.001;r=0.672,P<0.001;r=0.684,P<0.001;腺癌组:r=0.756,P<0.001;r=0.678,P<0.001;r=0.789,P<0.001)。血清ProGRP、CYFRA21-1和IL-6水平诊断肺鳞癌的曲线下面积(AUC)分别为0.753、0.810、0.771,联合诊断的AUC为0.888;血清ProGRP、CYFRA21-1和IL-6水平诊断肺腺癌的AUC分别为0.750、0.802、0.768,联合诊断的AUC为0.924。结论血清ProGRP、CYFRA21-1、IL-6水平可作为临床诊断非小细胞肺癌的辅助诊断指标。

KRT6A介导Wnt/β-catenin信号通路调节上皮-间质转化促进非小细胞肺癌A549细胞抗辐射

目的 探讨KRT6A对非小细胞肺癌A549细胞抗辐射的促进作用,并阐明其作用机制。方法 诱导并建立抗辐射A549(A549-RR)细胞,通过CCK-8法、平板克隆形成实验和流式细胞术验证细胞构建成功。Western blotting检测A549和A549-RR细胞中KRT6A表达情况。将A549-RR细胞分为敲减对照组(sh-NC组)和敲减KRT6A组(sh-KRT6A组),Western blotting检测KRT6A、上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和Slug)以及β-catenin的表达;采用CCK-8法、平板克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡情况。将A549-RR细胞分为sh-NC组、sh-KRT6A组、敲减KRT6A和过表达对照(shKRT6A+ov-NC组)以及敲减KRT6A和过表达β-catenin (sh-KRT6A+ov-β-catenin组),Western blotting检测β-catenin以及EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和Slug的表达;采用CCK-8法、平板克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡情况。结果 成功建立了A549-RR细胞,A549-RR细胞中KRT6A表达上调。敲减KRT6A降低A549-RR细胞增殖活性和克隆形成能力,增加细胞凋亡率,上调E-cadherin蛋白表达并下调N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug和β-catenin蛋白表达;过表达β-catenin可逆转此作用。结论 KRT6A在A549-RR细胞中表达上调,敲减KRT6A可降低A549-RR细胞的抗辐射能力,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路诱导的EMT有关。

p53、Ki67、CK5/6、AR在三阴性乳腺癌组织中表达情况及意义

目的:分析肿瘤蛋白p53(tumor protein p53,p53)、细胞周期调节蛋白-67(Cell cycle regulatory protein-67,Ki67)、细胞角蛋白5/6(cytokeratin5/6,CK5/6)、雄激素受体(androgen receptor,AR)在三阴性乳腺癌组织中表达情况及意义。方法:选取2020年1月—2022年12月我院80例三阴性乳腺癌患者,采集全部患者切除后的癌组织及临近癌症超过3cm左右的癌旁组织,以免疫组化法检测癌组织及癌旁组织内p53、Ki67、CK5/6、AR水平,并分析三阴性乳腺癌组织中p53、Ki67、CK5/6、AR表达情况。结果:癌组织内的p53阳性检出率为67.50%(54/80)、Ki67阳性检出率为77.50%(62/80)、CK5/6阳性检出率为73.75%(59/80)、AR阳性检出率为27.50%(22/80),较癌旁组织中的7.50%(6/80)、6.25%(5/80)、5.00%(4/80)、3.75%(3/80)高(P<0.05)。p53、Ki67、CK5/6、AR阳性与三阴性乳腺癌患者的有无淋巴结转移、临床分期、组织学分级存在明显关联性(P<0.05)。结论:三阴性乳腺癌组织中的p53、Ki67、CK5/6、AR表达较高,且乳腺组织中的p53、Ki67、CK5/6、AR表达与有无淋巴结转移、临床分期、组织学分级具有明显相关性。

卷曲螺旋结构域蛋白2通过促进线粒体自噬抑制帕金森病SH-SY5Y细胞凋亡

背景:卷曲螺旋结构域蛋白2(coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing 2,CHCHD2)能否调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在帕金森病中发挥神经保护作用尚未可知。目的:探讨CHCHD2在6-羟基多巴胺诱导的帕金森病细胞模型中对PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬发挥的作用及机制。方法:利用重组质粒转染技术过表达或敲低CHCHD2,用6-羟基多巴胺构建SH-SY5Y细胞帕金森病模型后分对照组、模型组、过表达阴性对照+6-羟基多巴胺组、敲低阴性对照+6-羟基多巴胺组、过表达CHCHD2+6-羟基多巴胺组和敲低CHCHD2+6-羟基多巴胺组。Western blot及RT-qPCR检测CHCHD2的表达;Western blot检测LC3Ⅰ/Ⅱ、p62、MFN1、COXⅣ、DRP1、PINK1、Parkin、TIM23、Bax、Bcl-2及cleavedcaspase3蛋白表达;CCK-8、JC-1和活性氧试剂盒检测细胞活性、线粒体膜电位和活性氧水平,单丹磺酰尸胺染色观察细胞自噬情况,透射电镜观察自噬溶酶体。结果与结论:①与对照组相比,模型组细胞活性、线粒体膜电位及CHCHD2、PINK1、Parkin蛋白表达降低,活性氧水平、凋亡水平及LC3Ⅰ/Ⅱ、p62蛋白表达升高(P<0.05),并观察到自噬溶酶体的存在;②与模型组相比,过表达CHCHD2能降低细胞活性氧水平,升高线粒体膜电位及PINK1、Parkin和MFN1蛋白表达水平,并观察到线粒体自噬溶酶体增多,而敲低CHCHD2后有与上述相反的作用,并伴有COXⅣ、TIM23和p-DRP1蛋白表达的升高(P<0.05);③与模型组相比,过表达CHCHD2能减少细胞凋亡,上调Bcl-2并下调Bax及cleavedcaspase3蛋白的表达,而敲低CHCHD2后有与上述相反的作用(P<0.05);④结果提示,CHCHD2在6-羟基多巴胺诱导的帕金森病细胞模型中可以通过促进PINK1/Parkin介导的线粒体自噬改善线粒体功能从而减轻细胞凋亡发挥神经保护作用。

细胞角蛋白CK5/6和EGFR在乳腺癌组织中的表达

目的观察检测表皮生长因子受体(EGFR)和细胞角蛋白CK5/6在乳腺癌组织中的表达。方法回顾性分析医院经病理确诊的乳腺癌患者60例临床及病理资料。免疫组化检测EGFR和CK5/6在乳腺癌组织中的表达。结果 EGFR和CK5/6在乳腺癌组织中阳性表达率分别为16.7%(10/60)和25.0%(15/60);EGFR和CK5/6在三阴乳腺癌组织中的表达比非三阴乳腺癌组织中的表达更高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论EGFR和CK5/6在乳腺癌组织中的高表达提示CK5/6和EGFR可作为乳腺癌预后不良因素。

CGRP通过ALKBH5/m6A抑制自噬促进缺氧/复氧心肌细胞增殖

目的探讨CGRP通过ALKBH5/m6A调控自噬对缺氧/复氧心肌细胞增殖和凋亡的影响。方法将心肌细胞H9c2随机分为Control组(H9c2细胞正常培养基培养)、H/R组(制备缺氧/复氧H9c2细胞损伤模型组)、CGRP组(缺氧/复氧模型前加入1×10^(-1)mol/L的CGRP作用20 min)和CGRP+sh-ALKBH5组(将sh-ALKBH5转染至H9c2细胞中,培养24 h后加入1×10^(-1)mol/L CGRP作用20 min,后制备缺氧/复氧模型)。采用CCK-8和EdU染色检测H9c2细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;检测心肌细胞中乳酸脱氢酶(LDH)活性;Dot blot检测m6A甲基化水平;蛋白质印迹法和RT-PCR检测细胞中ALKBH5、Beclin-1、p62、LC3Ⅱ、LC3Ι蛋白和m RNA表达。结果与Control组比较,H/R组细胞存活率[(46.27±4.09)%]、EdU阳性细胞率[(3.89±0.87)%]明显降低,细胞凋亡率[(13.62±1.27)%]、LDH浓度(276.32±25.14)、m6A相对表达量(2.46±0.18)明显增加(P<0.05);与H/R组比较,CGRP组细胞存活率[(87.31±6.24)%]、EdU阳性细胞率[(40.71±2.53)%]均明显增加,细胞凋亡率[(3.17±0.82)%]、LDH浓度(78.24±7.19)、m6A相对表达量(1.42±0.13)明显降低(P<0.05);CGRP+sh-ALKBH5组细胞存活率[(61.04±5.48)%]、EdU阳性细胞率[(8.76±1.24)%]均明显低于CGRP组,细胞凋亡率[(10.19±0.95)%]、LDH浓度(229.06±22.43)、m6A相对表达量(2.09±0.15)明显高于CGRP组(P<0.05)。与Control组比较,H/R组细胞中ALKBH5(0.34±0.03)、p62蛋白(0.32±0.04)和mRNA表达(0.21±0.04)明显降低,Beclin-1蛋白(0.97±0.13)及mRNA表达(2.14±0.17)和LC3Ⅱ/LC3Ι比值(0.64±0.08)明显升高(P<0.05);与H/R组比较,CGRP组细胞中ALKBH5(0.78±0.09)、p62蛋白(0.71±0.08)和m RNA(0.87±0.08)表达明显增加,Beclin-1蛋白(0.41±0.06)及mRNA表达(1.26±0.12)和LC3Ⅱ/LC3Ι比值(0.23±0.03)明显降低(P<0.05);与CGRP组比较,CGRP+sh-ALKBH5组细胞中ALKBH5(0.50±0.07)、p62蛋白(0.40±0.05)和mRNA表达(0.30±0.05)明显降低,Beclin-1蛋白(0.86±0.10)及mRNA表达(1.95±0.14)和LC3Ⅱ/LC3Ι比值(0.58±0.06)明显升高(P<0.05)。结论CGRP可能通过促进m6A去甲基酶ALKBH5的表达来发挥作用,抑制心肌细胞在缺氧/复氧条件下的自噬和凋亡,从而提高心肌细胞的存活率。

非小细胞肺癌组织中CK5/6的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中细胞角蛋白5/6(CK5/6)的表达及与临床病理特征和预后的相关性。方法 收集52例NSCLC患者的临床资料,检测其CK5/6表达情况,并比较不同临床病理特征者癌组织CK5/6表达差异。以1年为观察终点,比较不同癌组织CK5/6表达者总生存及无瘤生存情况。结果52例中22例癌组织CK5/6表达阳性,阳性率为42.31%。年龄≥65岁、有吸烟史、组织类型为鳞癌、低分化、淋巴结转移及TNM分期Ⅲ~Ⅳ期者癌组织CK5/6表达阳性率更高(均P <0.05)。肺鳞癌CK5/6表达阳性与表达阴性者1年总生存率、1年无瘤生存率及无瘤生存时间差异均无统计学意义(均P> 0.05)。肺腺癌CK5/6表达阳性者1年无瘤生存率、无瘤生存时间均低于表达阴性者(均P <0.05)。结论 CK5/6的表达不仅与NSCLC组织类型、恶性程度有关,还能辅助预测肺腺癌不良预后,指导临床诊疗。

NKX2-5基因多态性联合血清白细胞介素-6、正五聚蛋白3浓度对风湿性心脏病合并心房颤动患者的预测价值

目的探讨NKX2-5基因多态性联合血清白细胞介素(interleukin,IL)-6、正五聚蛋白3(pentraxin 3,PTX3)浓度对风湿性心脏病(rheumatic heart disease,RHD)合并心房颤动(atrial fibrillation,AF)患者的预测价值。方法选取成都医学院第三附属医院2017年1月至2020年12月收治的156例RHD患者作为研究对象,根据患者病程中是否出现AF,分为AF组(81例)和非AF组(75例)。对两组患者NKX2-5基因多态性及血清IL-6、PTX3浓度进行比较分析,采用Logistic回归分析对RHD患者并发AF的危险因素进行分析,并通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析各因素的预测能力。结果AF组患者NKX2-5基因rs251253位点AG型(37.0%vs.18.7%,χ^(2)=6.490,P=0.011)和AA型(11.1%vs.2.7%,χ^(2)=4.237,P=0.040)患者比例明显高于非AF组,差异有统计学意义;AF组患者A等位基因分布频率明显高于非AF组,差异有统计学意义(28.4%vs.13.3%,χ^(2)=14.513,P<0.001)。相对于非AF组患者,AF组患者血清IL-6和PTX3浓度明显升高,差异具有统计学意义[IL-6:(17.00±4.61)ng/L vs.(10.80±4.01)ng/L,t=8.931,P<0.01;PTX3:(2.50±0.67)mg/L vs.(1.23±0.46)mg/L,t=13.695,P<0.01]。二元Logistic回归分析提示,血清IL-6(OR=1.360,95%CI:1.189~1.555)和PTX3(OR=4.896,95%CI:2.237~10.716)浓度升高及NKX2-5基因rs251253位点突变(OR=12.777,95%CI:4.576~35.677)是RHD患者合并AF的独立危险因素。ROC分析结果提示IL-6、PTX3和NKX2-5基因多态性的曲线下面积分别为0.778、0.751和0.723,而三者联合预测概率的曲线下面积为0.902,相较于单个指标显著提升,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论采用CNKX2-5基因多态性联合血清IL-6、PTX3浓度可显著提升对RHD患者合并AF的预测价值,值得临床进一步推广。

三阴性乳腺癌患者超声造影征象及其与抑癌蛋白P53、细胞角蛋白5/6的关系

目的探讨三阴性乳腺癌(TNBC)患者超声造影征象及其与抑癌蛋白P53、细胞角蛋白5/6(CK5/6)的关系。方法选取2014年7月-2020年6月于南京医科大学附属江宁医院和南京医科大学第一附属医院超声医学科行乳腺超声造影的98例TNBC患者(研究组)和103例其他分子分型乳腺癌患者(对照组)。患者均接受手术治疗,取TNBC患者术中切除的乳腺癌组织,采用免疫组织化学法检测P53和CK5/6的表达。分析TNBC患者二维超声以及造影征象与P53和CK5/6表达的关系。结果研究组肿块形态规则、后方回声增强、血流Ⅱ级和Ⅲ级比例患者多于对照组,边缘模糊、有微钙化患者少于对照组(P<0.05)。两组肿块直径、纵横比比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组高增强、增强后结节范围扩大不明显、有充盈缺损患者多于对照组,有均匀增强患者少于对照组(P<0.05)。两组患者有无穿支血管比较,差异无统计学意义(P>0.05)。血流分级Ⅱ级、Ⅲ级患者P53阳性率高于血流分级0级、I级患者(P<0.05),边缘清晰患者CK5/6阳性率高于边缘模糊患者(P<0.05)。高增强患者P53阳性率低于等/低/无增强患者(P<0.05),增强后结节范围扩大不明显患者CK5/6阳性率高于增强后结节范围扩大明显患者(P<0.05)。结论TNBC超声造影征象与其他分子分型乳腺癌具有显著差异,P53、CK5/6表达与TNBC超声造影征象具有一定关系。

非小细胞肺癌患者血清anti-CK5,anti-P63和anti-TTF-1水平表达及与预后相关性研究

目的 探讨血清细胞角蛋白5抗体(cytokeratin 5 antibody,anti-CK5)、P63抗体(P63 antibody,anti-P63)、甲状腺转录因子-1抗体(thyroid transcription factor 1 antibody,anti-TTF-1)在非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)患者中的表达水平以及其与预后的相关性。方法 对2015年6月~2017年6月在中国科学院大学深圳医院接受治疗的80例NSCLC患者作为NSCLC组进行分析,根据预后情况进一步将其分为预后良好(生存)组(n=19)和预后不良(死亡)组(n=61)。并纳入同期80例肺炎患者为肺炎组(良性病变)和健康体检者(n=80)为对照组。酶联免疫吸附试验法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清anti-CK5,anti-P63和anti-TTF-1水平;COX回归分析NSCLC不良预后的影响因素;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清anti-CK5,anti-P63和anti-TTF-1水平对NSCLC不良预后的预测价值。结果 对照组、肺炎组和NSCLC组血清中antiCK5(140.01±46.31 pg/ml,158.79±46.51 pg/ml,178.68±46.44 pg/ml),anti-P63(1.92±0.43 ng/ml,2.17±0.50 ng/ml,2.36±0.52 ng/ml)和anti-TTF-1(2.20±0.44 ng/ml, 2.41±0.42 ng/ml,2.73±0.43 ng/ml)表达水平比较,差异均有统计学意义(F=13.883,16.572,30.809,均P <0.001)。ROC结果显示,血清anti-CK5,anti-P63和anti-TTF-1水平预测NSCLC发生的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.725(95%CI:0.649~0.793),0.710(95%CI:0.633~0.779)和0.735(95%CI:0.660~0.802),三者联合预测AUC为0.852(95%CI:0.788~0.903),高于三者单独预测AUC,差异具有统计学意义(Z=2.500,2.795,2.378,P=0.012,0.005,0.021),敏感度和特异度分别为78.75%和85.00%。死亡组与生存组NSCLC患者血清中anti-CK5(183.57±47.45 pg/ml vs 163.00±42.66 pg/ml),anti-P63(2.41±0.40 ng/ml vs 2.18±0.39 ng/ml)和anti-TTF-1水平(2.80±0.46 ng/ml vs 2.51±0.39 ng/ml)比较,差异均有统计学意义(t=3.820,2.201,2.481,均P <0.05)。COX回归分析显示,T分期、N分期、anti-CK5,anti-P63和anti-TTF-1水平均是影响NSCLC患者预后的独立危险因素(HR=1.443,1.375,1.518,1.771,2.012,均P<0.05)。ROC结果显示,血清anti-CK5,anti-P63和anti-TTF-1水平预测NSCLC患者预后结局的AUC分别为0.773(95%CI:0.666~0.859),0.741(95%CI:0.631~0.833)和0.729(95%CI:0.618~0.822),三者联合预测AUC为0.880(95%CI:0.788~0.942),高于三者单独预测AUC,差异具有统计学意义(Z=3.834,3.868,3.686,P=0.043,0.032,0.028),敏感度、特异度分别为90.16%和84.21%。结论 NSCLC患者血清anti-CK5,anti-P63和anti-TTF-1水平升高,与NSCLC不良预后相关,且联合检测对NSCLC不良预后的预测价值较高,有一定的临床参考价值。

2型糖尿病患者糖类抗原19-9、糖类抗原12-5、细胞角蛋白19片段与糖化血红蛋白A1c水平相关性研究

目的 探讨2型糖尿病患者肿瘤标志物糖类抗原19-9(CA19-9)、糖类抗原12-5(CA12-5)、细胞角蛋白19片段(CY21-1)与糖化血红蛋白A1c(HbA1c)水平的相关性。方法 选取自2021年6月至2021年12月收治的101例2型糖尿病患者为糖尿病组,并选取同期体检人群70例纳入健康组。糖尿病组患者根据其HbA1c水平分为糖尿病A组(6%~8%,n=51)与糖尿病B组(8%~12%,n=50)。比较各组CA19-9、CA12-5及CY21-1等指标水平,分析糖尿病患者血清中肿瘤标志物水平与HbA1c水平的相关性。结果 糖尿病B组CA19-9、CY21-1水平明显高于糖尿病A组与健康组,差异有统计学意义(P<0.05);糖尿病A组与健康组CA19-9、CY21-1水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组受试者CA12-5水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。皮尔逊相关性分析结果显示,糖尿病患者血清CA19-9、CY21-1水平与HbA1c水平呈明显正相关(P<0.05)。结论 2型糖尿病患者血清CA19-9、CY21-1水平与HbA1c水平存在相关性。

细胞角蛋白5/6、P63蛋白、甲状腺转录因子-1、细胞角蛋白7在肺癌组织中的表达及意义

目的探讨细胞角蛋白5/6(cytokeratin5/6,CK5/6)、P63蛋白、甲状腺转录因子-1(thyroid transcription factor,TTF-1)、细胞角蛋白7(cytokeratin7,CK7)在肺癌中的表达情况及临床意义。方法收集潍坊医学院附属医院2016年1月至2017年4月经皮肺穿刺活检及经纤维支气管镜活检、刷检确诊肺癌病人标本110例,其中鳞癌48例,腺癌60例,腺鳞癌2例,通过免疫组化方法检测CK5/6、P63、TTF-1、CK7在不同病理类型中的表达情况。结果 CK5/6和P63在鳞癌中的阳性率分别是93.75%93.75%,而在腺癌中的阳性率分别是5.00%和18.33%;TTF-1和CK7在腺癌中的阳性率分别是90.00%和93.33%,而在鳞癌中的阳性率是8.33%和91.67%、75.00%。结论CK5/6,P63,TTF-1和CK7对肺癌活检标本中腺癌和鳞状细胞癌的鉴别具有诊断意义,可指导临床治疗。

miR-17-5p、IL-6及MCP-1联合检测对卵巢子宫内膜异位症患者术后复发的预测价值

目的 分析研究血清微小RNA-17-5p(miR-17-5p)、白细胞介素-6(IL-6)及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)联合检测对卵巢子宫内膜异位症(OEM)患者术后复发的预测价值。方法 选取郑州大学第三附属医院2019年1月至2022年12月收治的OEM患者作为研究对象,将其命名为OEM组(n=100),另选同期在本院进行体检的健康女性为对照组(n=60)。比较两组血清miR-17-5p、IL-6及MCP-1水平;OEM组患者在入院后均进行手术与药物对症治疗,在治疗结束后对患者随访12个月。以多因素Logistic回归分析OEM患者术后复发的影响因素,并绘制ROC曲线分析血清miR-17-5p、IL-6、MCP-1水平对OEM患者术后复发的预测价值。结果 OEM组的血清miR-17-5p水平低于对照组,IL-6、MCP-1水平均高于对照组,差异有统计学意义(t=11.015、59.651、38.199,均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,囊肿直径>5 cm(OR=1.828)、ASRM分期为Ⅲ~Ⅳ期(OR=1.815)、血清miR-17-5p水平降低(OR=2.042)、IL-6水平升高(OR=2.136)及MCP-1水平升高(OR=1.966)均是OEM患者术后复发的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清miR-17-5p、IL-6、MCP-1水平及联合检测的曲线下面积(AUC)分别为0.816、0.781、0.745、0.933,联合检测优于单一检测(P<0.05)。结论 miR-17-5p、IL-6及MCP-1联合检测对OEM患者术后复发具有一定预测价值。

细胞角蛋白5/6、P63蛋白、细胞角蛋白7、甲状腺转录因子1免疫组织化学染色指标在非小细胞肺癌鉴别诊断中的应用

目的研究非小细胞肺癌患者采用细胞角蛋白5/6、P63蛋白、细胞角蛋白7、甲状腺转录因子1免疫组织化学染色指标检测方式对病情进行诊断的效果。方法选择2018年10月至2020年10月在江西省胸科医院治疗后证实为非小细胞肺癌、慢性阻塞性肺疾病患者的肺部病变组织支气管镜活检切片,各40例,再抽取上述肺病患者的肺部正常组织支气管镜活检切片40例,分别将其定义为研究1组、研究2组、对照组。采用免疫组织化学染色法对三组研究对象的细胞角蛋白5/6、P63蛋白、细胞角蛋白7、甲状腺转录因子1四项指标的阳性表达情况进行测定,比较三组研究对象的细胞角蛋白5/6、P63蛋白、细胞角蛋白7、甲状腺转录因子1四项指标水平的检测结果。结果研究1组研究对象的细胞角蛋白5/6、P63蛋白、细胞角蛋白7、甲状腺转录因子1四项指标阳性表达率高于研究2组,差异有统计学意义(P<0.05);研究2组研究对象的细胞角蛋白5/6、P63蛋白、细胞角蛋白7、甲状腺转录因子1四项指标阳性表达率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论非小细胞肺癌患者采用细胞角蛋白5/6、P63蛋白、细胞角蛋白7、甲状腺转录因子1四项免疫组织化学染色指标的阳性表达率高于慢性阻塞性肺疾病患者及健康人群,临床中可以将其作为非小细胞肺癌患者病情筛查和诊断的重要依据。

调控circCORO1C/miR-642a-5p/HOXC6轴对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨circCORO1C/miR-642a-5p/HOXC6轴对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:(1)收集2020年12月至2021年2月收治的43例乳腺癌患者癌及其癌旁正常组织标本,分别采用qRT-PCR、Western blot法检测circCORO1C、miR-642a-5p、HOXC6蛋白表达量。(2)采用双荧光素酶报告实验验证circCORO1C与miR-642a-5p、miR-642a-5p与HOXC6 mRNA的靶向关系。(3)取MDA-MB-231细胞,采用脂质体转染法分2组分别转染sh-NC、sh-circCOROC1;另取MDA-MB-231细胞分别转染miR-NC、miR-642a-5p mimic。转染48 h后,CCK-8法检测细胞增殖能力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,qRT-PCR法检测circCORO1C、miR-642a-5p的表达,Western blot法检测HOXC6、pro-caspase3、Cleaved-caspase3蛋白的表达。结果:(1)与癌旁正常组织比较,乳腺癌组织中circCORO1C、HOXC6蛋白表达增高,miR-642a-5p表达降低(P<0.05)。(2)circCORO1C与miR-642a-5p、miR-642a-5p与HOXC6 mRNA存在靶向关系。(3)与sh-NC组比较,sh-circCOROC1组细胞增殖能力、pro-caspase3蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、miR-642a-5p表达、Cleaved-caspase3蛋白表达增高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-642a-5p mimic组细胞增殖能力、HOXC6和pro-caspase3蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达升高(P<0.05)。结论:沉默circCORO1C可上调miR-642a-5p表达、下调HOXC6表达,进而抑制乳腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

新辅助化疗对宫颈鳞状细胞癌CK5/6和p63蛋白表达的影响

目的探讨新辅助化疗对宫颈鳞状细胞癌(鳞癌)CK5/6和p63蛋白表达的影响。方法对48例临床ⅠB-ⅡB期宫颈鳞癌患者行以顺铂为基础的新辅助化疗3周期,其后3周行手术治疗,观察临床疗效及病理组织学疗效;用免疫组织化学方法检测癌组织化疗前后CK5/6和p63表达情况。结果新辅助化疗临床总有效率为56%(27/48),病理组织学总有效率为50%(24/48),48例患者化疗前癌组织均弥漫表达CK5/6和p63,阳性表达率均为100%,化疗后有癌残留的46例患者癌组织均表达CK5/6和p63,阳性率均为100%(P≥0.05),但阳性表达强度均弱于化疗前。结论新辅助化疗对宫颈鳞癌特异性标记物CK5/6和p63表达无显著影响,CK5/6和p63可用于形态学难确诊的化疗后宫颈鳞癌的诊断与鉴别诊断。

非小细胞肺癌活检标本中CK7、TTF-1、NapsinA、CK5/6及p63的表达及其意义

目的检测CK7、TTF-1、Napsin A、CK5/6及p63在非小细胞肺癌(NSCLC)活检标本中的表达及其意义。方法采用免疫组化SP法检测100例NSCLC活检标本中CK7、TTF-1、Napsin A、CK5/6及p63的表达,并结合NSCLC的临床病理特征进行分析。结果 CK7、TTF-1和Napsin A在68例肺腺癌中的阳性率分别为98.5%(67/68)、92.6%(63/68)和97.1%(66/68),表达水平明显高于CK5/6(7.3%,5/68)和p63(8.8%,6/68)(P<0.05);而CK5/6和p63在32例肺鳞状细胞癌中的阳性率分别为96.9%(31/32)和93.8%(30/32),表达水平明显高于CK7、TTF-1和Napsin A的阳性率28.1%(9/32)、9.4%(3/32)和3.1%(1/32)(P<0.05),两者差异均具有统计学意义。结论 CK7、TTF-1、Napsin A、CK5/6及p63在对肺活检标本腺癌和鳞状细胞癌的鉴别中具有重要意义,可作为非小细胞肺癌鉴别诊断的特异性免疫组化套餐。

绵羊角蛋白关联蛋白KAP6-1基因5′端调控区的分子克隆及测序结果比较

根据绵羊毛囊角蛋白关联蛋白(KAP 6-1)基因已知DNA序列设计合成了两个特异性引物,以绵羊基因组DNA为模板,PCR扩增出1 042 bp的特异性片段,连接到pM D 19T载体中获得该片段克隆.经过快速提质粒法筛选、限制性内切酶分析表明该克隆包含所需的目的片段.DNA测序结果也证明该克隆片段与原基因5′端调控区序列相比具有很高的一致性.研究结果为今后制备转基因克隆动物,在毛囊细胞中特异性表达绒毛生长调控基因奠定了基础.

口腔粘膜癌变过程中细胞角蛋白CK10和CK13的变化

目的：探讨细胞角蛋白ＣＫ１０和ＣＫ１３在口腔粘膜癌变过程的各阶段组织中的分布和表达强度。方法：用ＬＳＡＢ免疫组化染色方法对口腔正常粘膜、上皮单纯增生、上皮异常增生和口腔磷癌切片进行染色，光镜观察。结果：正常颊粘膜和口底舌腹粘膜基底上层ＣＫ１０表达阴性，ＣＫ１３表达强阳性；上皮过度不全角化时，ＣＫ１０表达可为阳性，ＣＫ１３表达减少；上皮过度正角化时，ＣＫ１０在基底上层呈强阳性表达，ＣＫ１３表达进一步减少甚至缺失。随上皮异常增生程度加重，基底上层细胞ＣＫ１０和ＣＫ１３表达减少甚至缺失。在口腔浸润癌中，不管分化程度如何，ＣＫ１３均表达阴性，而ＣＫ１０在分化较好的癌细胞及癌巢中呈阳性表达。结论：ＣＫ１３表达减少或缺失可作为口腔癌前病变诊断的辅助指标，ＣＫ１０可为口腔癌的分化程度及其预后判定提供帮助。