鸡胚发育过程中角膜神经的分布和变化

背景了解动物或人的角膜神经分布和发育过程对于角膜疾病的临床和基础研究具有重要意义，目前关于动物角膜神经发育和特异性定位的研究结果已有发表，但是有关胚胎发育阶段角膜神经纤维的分布规律和角膜神经纤维的定量研究结果尚少见。目的了解鸡胚发育过程中角膜神经纤维的分布，并定量评价随着鸡胚龄增长其角膜神经纤维长度和密度的变化规律。方法选取胚胎期6～20d（E6-E20）的鸡胚作为角膜胚胎发育模型，获取相应胚期的带有角膜缘的完整鸡角膜，使用β-tubulinⅢ抗体进行角膜免疫荧光染色，以标记角膜神经，将角膜上皮面朝上做角膜上皮的放射状切开，制备全角膜铺片，用含DAPI抗荧光淬灭缓冲甘油封片。利用正置荧光显微镜拍摄获取整个角膜的神经纤维图像，使用PhotoshopCS4测量不同胚龄的鸡胚角膜表面积和神经纤维束数量，采用Imaris x647．4．2软件测量不同胚龄的鸡胚角膜神经纤维总长度和密度。结果全角膜铺片显示，鸡胚E6～E8可见神经束从颞侧巩膜进入角膜缘，E9～E10时神经纤维在角膜缘呈环状分布，E11～E15时延伸进入角膜中央，E16～E20时角膜形成神经纤维丛。E6～E20期间，鸡胚角膜表面积、角膜神经纤维长度、角膜神经纤维密度均随着胚龄的增长而逐渐增加，总体比较差异均有统计学意义（F=127．007、227．051、67．748，均P〈0.01），鸡胚角膜表面积与角膜神经纤维长度间呈强正相关（r=0．863，P〈0．01）。鸡胚角膜神经纤维束从E13开始出现，为（59．00±1．14）／mm^2，此后缓慢增加，至E18达到高峰，数量为（576．75±29．16）／mm^2，至E20时角膜神经纤维束数量减少，为（299．67±25．46）／mm^2，不同胚龄期鸡胚角膜神经纤维束数量的总体比较差异有统计学意义（F=13．759，P=0．000）。结论鸡胚角膜神经发育从E9开始，随着发育鸡胚角膜表面积、角膜神经纤维总长度及密度均快速增加。