模拟角膜缘干细胞微环境诱导人多潜能干细胞分化为角膜上皮细胞的研究

目的:探讨模拟角膜缘干细胞(LSCs)微环境诱导人多潜能干细胞(hiPSCs)分化为角膜上皮细胞的可行性。方法:体外建立hiPSCs细胞系,利用transwell体系将hiPSCs与角膜基质细胞共培养模拟角膜缘干细胞微环境,添加小分子骨形态发生蛋白4(BMP4)和特异性转化生长因子β抑制剂(SB431542),诱导hiPSCs向角膜上皮细胞分化。采用免疫荧光染色、流式细胞方法检测角膜上皮细胞特异标志物CK3和CK12,角膜上皮细胞前体CK15,角膜缘干细胞标志物ABCG5的表达。结果:hiPSCs体外培养增殖活跃,免疫荧光染色显示干细胞特异性标志物OCT4、SOX2、TRA-1-60、NANOG呈阳性。采用transwell体系将hiPSCs与角膜基质细胞共培养,免疫荧光染色结果显示角膜缘干细胞标志物ABCG5及角膜上皮细胞前体标志物CK15阳性,角膜上皮细胞标志物CK3及CK12阴性;在共培养的基础上添加小分子BMP4和SB431542,免疫荧光染色及流式细胞检测结果显示角膜上皮细胞特异性标志物CK3阳性表达,且随分化时间延长表达比例增高。结论:模拟角膜缘干细胞微环境同时添加小分子SB431542及BMP4,可成功诱导体外培养的hiPSCs向角膜上皮细胞分化。

枸杞多糖对高糖诱导衰老小鼠角膜上皮细胞增殖的影响

目的:观察不同剂量枸杞多糖(LBP)对高糖诱导的衰老小鼠角膜上皮(MCE)细胞增殖的影响。方法:采用含有不同浓度葡萄糖(5.5 mmol/L、12.5 mmol/L、25 mmol/L、50 mmol/L、100 mmol/L、200 mmol/L)的杜氏改良Eagle培养基(DMEM)孵育MCE细胞48 h,用MTT检测不同葡萄糖浓度对MCE细胞增殖的影响。建立高糖损伤模型,用不同浓度(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml)的LBP处理葡萄糖损伤的MCE细胞48 h,观察MCE细胞增殖情况。结果:在用25 mmol/L的葡萄糖浓度处理MCE细胞,细胞增殖最强(P<0.01),葡萄糖浓度为200 mmol/L时,MCE细胞增殖力最低(P<0.01)。在所建立的高糖损伤模型(葡萄糖200 mmol/L)中LBP 200μg/ml促进MCE细胞增殖作用最强(P<0.05)。结论:一定浓度的葡萄糖可抑制MCE细胞增殖,LBP可保护高糖损伤的MCE细胞,促进其增殖。

夏桑菊浸膏对高渗诱导干眼模型人角膜上皮细胞保护机制研究

目的研究夏桑菊浸膏对高渗诱导下人角膜上皮细胞的保护作用及机制。方法采用NaCl构建高渗模型,通过MTS法检测细胞活力;利用RT-qPCR及酶联免疫吸附测定法检测相关炎症因子IL^(-1)β、IL-6、IL^(-1)8的表达;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐荧光探针法检测细胞内活性氧水平。结果对比对照组,模型组600 mOsm·L^(-1)中细胞活力明显下降,经夏桑菊浸膏处理后,细胞活力明显上升;在炎症指标中,与对照组相比,模型组450 mOsm·L^(-1)细胞中IL^(-1)β、IL-6及IL^(-1)8的分泌水平与IL^(-1)β表达水平明显升高。夏桑菊浸膏处理细胞后,以上指标较450 mOsm·L^(-1)模型组明显下降;抗氧化研究中,模型组450 mOsm·L^(-1)中的细胞活性氧水平明显上升,夏桑菊浸膏处理后,细胞活性氧水平明显降低。结论夏桑菊浸膏对高渗诱导下的人角膜上皮细胞活力下降起到抑制作用,在高渗环境下具有保护人角膜上皮细胞的能力,保护作用通过抑制炎症因子产生和活性氧水平升高实现。

阿魏酸在烟曲霉菌诱导人角膜上皮细胞中的抗炎作用

目的探讨阿魏酸(FA)在烟曲霉菌诱导的人角膜上皮细胞中的抗炎作用。方法采用CCK-8方法检测不同浓度FA(0、50、100、150、200、250、300μmol/L)溶液对人角膜上皮细胞(HCEC)活力的影响;采用RT-PCR方法检测灭活的烟曲霉菌菌丝感染HCEC后,FA对炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及核因子E2相关因子2(Nrf2)mRNA表达的影响;采用ELISA方法检测FA对炎症因子IL-6及单核细胞趋化蛋白(MCP-1)蛋白表达的影响。结果300μmol/L的FA溶液处理组HCEC存活率低于其他各组(F=5.390,P<0.05),250μmol/L及以下浓度FA溶液处理对HCEC活力无影响(P>0.05)。250μmol/L FA处理可显著升高Nrf2 mRNA表达,降低IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达水平,并显著降低IL-6及MCP-1蛋白表达(F=4.720~990.967,P<0.05)。结论FA可能通过上调Nrf2的表达,抑制烟曲霉菌诱导的HCEC炎症反应中促炎因子的表达,发挥抗炎作用。

小鼠角膜上皮细胞诱导获得小胶质样细胞

背景:小胶质细胞是中枢神经系统最主要的免疫细胞,对研究多种疾病的发生和治疗有重要意义,但体外个体化细胞的获得受限。目的:建立一种新的小胶质细胞诱导培养体系,将小鼠角膜上皮细胞诱导成为小胶质样细胞并对其进行鉴定。方法:裂解2周龄小鼠角膜上皮组织获得上皮细胞,先后加入含有白细胞介素34(100 ng/mL)、集落刺激因子1(5 ng/mL)和转化生长因子β(1 ng/mL)、白细胞介素6(1 ng/mL)、重组血管内皮生长因子(1 ng/mL)的改良培养基,并且持续处理到16 d。通过转录水平、蛋白表达水平、亚细胞定位、流式分析和形态学观察多角度评估诱导后的细胞性质。结果与结论:诱导后获得表达TMEM119、CXCL11、CD11b、CD68小胶质细胞特征分子的细胞,形态学观察、流式分析和荧光检验后确定其表达产物具有较高丰度,与小胶质细胞极为相似。

蒙花苷对CXCL12诱导人角膜上皮细胞表达VEGF的影响

目的:探讨蒙花苷对基质细胞衍生因子(CXCL12)诱导人角膜上皮细胞(HCEC)表达血管生成因子(VEGF)的抑制作用。方法:培养HCEC,ELISA检测不同滴度CXCL12慢性病毒基因转染HCEC上清液中VEGF含量,并建立细胞模型。ELISA检测不同浓度的蒙花苷干预后细胞上清液VEGF含量,Western Blot检测细胞中的VEGFA蛋白的表达,实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测细胞中的VEGFA mRNA水平的表达。结果:在CXCL12慢性病毒基因滴度为1.775 TU/mL时,HCEC分泌的VEGF的含量明显高于正常细胞组及阴性对照组(P<0.05),具有显著性差异。选用1.775 TU/mL滴度的CXCL12慢性病毒基因对HCEC进行造模。与模型组及阴性对照组比较,不同浓度的蒙花苷均能减少HCEC分泌VEGF,减少VEGFA蛋白含量和VEGFA mRNA表达量(P<0.05)。不同浓度的蒙花苷作用比较差异有统计学意义(P<0.05),随蒙花苷浓度增加,呈先增强后减弱的趋势,且当浓度为66.7μmol/L时对VEGFA蛋白及mRNA表达抑制力最为显著。结论:蒙花苷能够抑制CXCL12诱导HCEC分泌VEGF,减少VEGFA蛋白及VEGFA mRNA的表达,这为中药密蒙花“消目中赤脉”作用提供实验佐证。

正常人眼角膜上皮细胞的原子力显微镜观察

应用原子力显微镜(AFM)在单细胞水平上分析了人眼角膜上皮细胞的形貌和机械性质,为进一步探讨人眼角膜上皮细胞结构与功能的关系奠定了基础。将体外培养的人眼角膜上皮细胞用2.5%戊二醛固定,空气中干燥后用原子力显微镜进行观察。从AFM形貌图可知,细胞呈长梭形,膜表面布满颗粒状物质,由AFM附带软件IP2.1的线分析及面分析功能,得到细胞膜表面结构的几何参数,包括高低差Rp-v、均方根粗糙度Rq、平均粗糙度Ra、平均高度Meant Ht。利用AFM高空间分辨的力位移曲线测量系统,可得出细胞膜的粘弹力、硬度和杨氏模量。AFM能对人眼角膜上皮细胞表面的超微结构清晰地成像并提供更多更确切的表面信息,从另一层面增加对眼角膜上皮细胞的认识。

去势雄性小鼠泪膜功能异常及角膜上皮细胞超微结构改变

背景体内雄性激素水平的下降对睑板腺与泪腺上皮细胞的分泌功能产生不利影响，导致泪膜质与量的异常，但与泪膜稳定性密切相关的黏蛋白层是否受雄激素水平下降的影响尚不清楚。目的探讨去势手术对雄性小鼠泪膜功能及角膜上皮细胞超微结构的影响。方法采用随机数字表法将56只SPF成年BALB／c雄性小鼠分为正常对照组、伪手术组、和去势术后1、2、4、6、8周组，各手术组小鼠均实施双侧睾丸摘除术，伪手术组小鼠仅切开局部组织而不摘出睾丸。分别于术前和术后1、2、4、6、8周采集各组小鼠外周血样本，采用竞争放射免疫法检测血清睾酮的质量浓度。各组小鼠干眼功能相关检查包括采用酚红棉线法检测泪液分泌功能，检测泪膜破裂时间（BUT）及角膜荧光素染色评分。根据分组于相应时间点颈椎脱臼法处死各组小鼠后收集其角膜组织，透射电子显微镜下观察小鼠角膜上皮组织超微结构的变化。结果正常对照组、伪手术组血清睾酮质量浓度分别为（573．87±6．74）ng/μl和（579．74±8．24）ng/μl，组间差异无统计学意义（t=1．432，P=0．251），但各手术组小鼠血清睾酮质量浓度均为0ng/μl。正常对照组、伪手术组及去势术后1、2、4、6、8周组小鼠泪液分泌量分别为（5．26±0．99）、（4．89±0．56）、（4．62±0．83）、（4．28±0．63）、（3．36±0．56）、（2．60±0．27）和（2．08±0．35）mm／5min，其中术后2、4、6、8周组小鼠泪液分泌量均明显低于正常对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；正常对照组、伪手术组及去势术后1、2、4、6、8周组小鼠BUT分别为（68．33±12．86）、（62．47±3．75）、（58．67±10．03）、（47．17±7．64）、（39．51±3．39）、（32．67±3．88）和（31．00±2．36）s，其中术后2、4、6、8周组小鼠泪液BUT较正常对照组均明显缩短，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；小鼠角膜荧光素染色评分随术后时间的延长逐渐增加。透射电子显微镜下可见手术组小鼠角膜上皮细胞微绒毛数量减少、变短和肿胀，细胞间桥粒连接分离。结论去势小鼠血清雄激素水平骤降，小鼠泪液量分泌减少，泪膜稳定性下降，角膜上皮细胞结构损坏，与人类干眼的临床表现吻合。

角膜上皮细胞IL-1β含量与干眼症关系的实验研究

目的 研究高渗透压对人角膜上皮细胞 IL - 1β含量的影响。方法 在液渗透压分别为 4 0 0 m Osm、4 5 0 m Osm、5 0 0 m Osm的细胞培养液中分别加入等量的人角膜上皮细胞 ,采用酶标法 (EL ISA法 )测定 2 4小时后培养液中 IL- 1β含量。结果 不同渗透压组 IL- 1β含量有显著差异 (P<0 .0 5 ) ;培养液渗透压越高 ,IL- 1β含量越高。结论 IL-

聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响

目的:观察聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响。方法:观察不同浓度聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响,取体外培养的生长良好的角膜上皮细胞按随机数字法分为:对照组、低浓度组、中浓度组和高浓度组。观察不同消毒时间聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响,取体外培养的生长良好的角膜上皮细胞按随机数字法分为:对照组、短时间组、中等时间组和长时间组。采用ELISA检测各组丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,采用倒置显微镜、CCK-8法检测各组细胞活性,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。结果:聚维酮碘浓度越高,角膜上皮细胞的MDA含量越高,SOD含量越低,细胞活性越低,凋亡率越高。聚维酮碘对角膜上皮细胞的氧化损伤呈浓度依赖性,组间有差异(均P<0.01)。聚维酮碘消毒时间越长,角膜上皮细胞的MDA含量越高,SOD含量越低,细胞活性越低,凋亡率越高。聚维酮碘对角膜上皮细胞的氧化损伤呈时间依赖性,组间有差异(均P<0.01)。结论:聚维酮碘对角膜上皮细胞有氧化损伤作用,损伤呈浓度和时间依赖性。

雄激素调节小鼠泪膜功能与角膜上皮细胞Mucins表达的体内研究

目的:探讨去势小鼠干眼模型中雄激素浓度对小鼠泪膜稳定性以及角膜上皮细胞Mucins表达的影响。方法:通过双侧睾丸切除去势手术,改变体内雄激素水平,观察泪膜破裂时间的变化,同时在不同时间点采用RT-PCR法与Western-Blot法分别检测小鼠角膜上皮细胞中Muc1和Muc4的mRNA和蛋白水平的表达变化。结果:去势1wk后小鼠睾酮质量浓度下降至0ng/μL;正常对照组、伪手术组及去势术后1、2、4、6、8wk组小鼠BUT分别为68.33±12.86、62.47±3.75、58.67±10.03、47.17±7.64、39.51±3.39、32.67±3.88、31.00±2.36s,其中术后2、4、6、8wk组小鼠泪液BUT值较正常对照与伪手术组均明显缩短,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Muc1与Muc4的mRNA与蛋白水平表达,随雄激素浓度下降,表达下调(P<0.05),Muc1在去势后第2wk表达最低,而Muc4在去势后第1wk表达降至最低。结论:在体内,雄激素可调控小鼠角膜上皮Mucins表达,并缩短泪膜破裂时间,参与泪膜稳定性的维持。

渗透压对角膜上皮细胞的影响及牛磺酸对高渗环境细胞的保护作用

目的观察渗透压对体外培养的兔角膜上皮细胞的影响及牛磺酸对高渗环境细胞的保护作用,为人工泪液的处方制定提供理论依据。方法采用分离培养的兔角膜上皮细胞,分为低渗组(143,229和257 mOsm·L^-1)、等渗对照组(286 mOsm·L^-1)和高渗组(315,343和429 mOsm·L^-1),用不同渗透压的培养液作用3 h后,换回正常培养液培养3 d,记录作用3 h及恢复培养3 d时的细胞形态,并用MTT法检测作用3 h、恢复培养1 d和恢复培养3 d后的细胞活性。在正常培养液286 mOsm·L^-1中加入牛磺酸培养细胞24 h后,换为429 mOsm·L^-1的高渗培养液培养3 h后,换回含牛磺酸的等渗培养液恢复培养1 d,倒置显微镜下记录作用3 h及恢复培养1 d时的细胞形态,并用MTT法检测细胞活性。结果高渗环境会导致细胞活性降低,甚至死亡;低渗环境会改变细胞形态及活性。257 mOsm·L^-1渗透压组与等渗对照组相比,在作用3 h及恢复培养1和3 d后细胞形态及细胞活性差异无统计学意义。含有不同浓度牛磺酸培养基的各组细胞也有轻度肿胀,高渗培养基作用3 h后以及恢复正常培养基培养1 d后,细胞活性差异具有显著统计学意义(P<0.05)。结论泪液高渗透压会造成眼表损伤。应用渗透压为257 mOsm·L^-1的人工泪液,在对正常细胞无影响的条件下,可降低干眼患者泪液的高渗透压,有助于干眼病的治疗。牛磺酸作为细胞保护剂,可降低高渗透压对细胞的损害,在干眼病治疗方面,具有很好的应用前景。

缺氧诱导因子-1α在早期糖尿病大鼠角膜上皮细胞中的表达

目的:观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在早期糖尿病大鼠角膜上皮细胞中的表达以探讨其在糖尿病性角膜上皮细胞病变发生及发展中的作用。方法:用链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,在制模成功后1,2,4,6,8,10及12wk取眼球组织,以年龄匹配正常大鼠作为对照组,分别以免疫组织化学染色及Westernblotting方法检测角膜上皮细胞中HIF-1α表达的位置及表达量。结果:糖尿病模型诱导成功后1wk,角膜上皮细胞中即有HIF-1α表达,主要位于基底细胞的细胞核内,4wk时阳性细胞数大于1wk(21.80±1.93vs15.30±2.05),6～10wk达到高峰(6,8和10wk分别为49.00±2.82,90.80±4.23,51.40±5.21),12wk下降(14.40±2.06)。Westernblotting分析显示HIF-1α蛋白表达模式与免疫组织化学相似,1wk时即有表达,6～10wk达到高峰,12wk下降。结论:HIF-1α在早期糖尿病角膜上皮细胞中的瞬时高表达而不是持续表达,可能是早期糖尿病角膜上皮细胞病变的原因。

冰片对兔角膜上皮细胞膜促渗透作用的实验研究

目的：探讨冰片对兔角膜上皮细胞促渗透作用的机理。方法：将培养的兔角膜上皮细胞分为实验组和两个对照组。应用电子自旋共振方法对实验组和对照组的细胞膜磷脂分子排列的有序性参数进行测量。结果：两个对照组和实验组的有序参数分别为０．７１１±０．０２４，０．７１７±０．０１８，０．７４３±０．０３９。实验组与其他两组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论：冰片的促渗透作用与其改善角膜上皮细胞的细胞膜磷脂分子排列有关。

低浓度地塞米松对兔角膜上皮细胞的影响(英文)

目的: 探讨地塞米松(dexam ethasone,D EX)对培养的兔角膜上皮细胞和角膜上皮伤口愈合的影响。方法: 体外实验原代培养兔角膜上皮细胞, 用四唑盐(M TT)实验和流式细胞仪检测不同浓度 D EX 对兔角膜上皮细胞的作用, 同时通过 H E 、免疫组织化学染色和扫描电镜及临床观察兔角膜上皮细胞刮除后 0.1g/L D EX 用药组和对照组伤口愈合的情况。结果: M TT 检测显示小于 0.1g/L 浓度的 D EX 对兔角膜上皮细胞的生长无明显影响。流式细胞仪检测到 0.1g/L 浓度的 D EX 对兔角膜细胞生长周期无抑制作用。动物实验: 0.1g/L 地塞米松作用后上皮愈合时间显著性缩短, 两组中新生成的上皮细胞均有较强的 PC N A 蛋白的表达。0.1g/L 地塞米松组与对照组相比, 电子显微镜检查角膜基质排列更规则, 炎症反应较轻。结论: 低于 0.1g/L 浓度的地塞米松对培养的兔角膜上皮细胞的生长无抑制作用。0.1g/L 浓度的地塞米松眼液能有效的促进角膜上皮生长并降低炎症反应, 将有利于准分子激光角膜屈光手术后早期角膜伤口愈合。

各类滴眼剂对角膜上皮细胞的毒性—组织培养法研究

目的观察各类滴眼剂对人角膜上皮细胞的毒性，以便提供临床上对药物的评估。方法应用组织培养的方法，观察３０种滴眼剂的毒性。结果氯霉素（ｐＨ６．７）、庆大霉素（ｐＨ５．１）、磺胺类、喹诺酮类、咪唑类药物、地卡因、氧氰化汞等毒性较大。皮质类固醇的晚期毒性明显。结论我们认为滴眼剂的毒性与主药、防腐剂和溶剂的毒性有关，特别是ｐＨ值。为此我们要注意配方的科学性，妥善的存放和合理的用药。

表皮生长因子对晶状体和角膜上皮细胞增生的刺激作用

目的探讨不同浓度的表皮生长因子（ＥＧＦ）对晶状体和角膜上皮细胞增生的刺激作用。方法利用培养的兔晶状体和角膜上皮细胞，通过ＭＴＴ方法，检测细胞增殖密度。培养晶状体上皮细胞的ＥＧＦ浓度（１～２５０ｎｇ／ｍｌ）分为８组；而培养角膜上皮细胞的ＥＧＦ浓度（４～１０００ｎｇ／ｍｌ）分为１０组。结果ＥＧＦ浓度在３２ｎｇ／ｍｌ时，促晶状体上皮细胞的增生作用最强，与无血清组比较差异非常显著（Ｐ＜０．０１）。促角膜上皮细胞增生的最佳浓度为１６ｎｇ／ｍｌ，与无血清组比较差异显著（Ｐ＜０．０５）。结论上述结果为今后在细胞和分子水平上研究白内障和角膜伤口愈合的发生规律及其机制提供实验资料。

层粘连蛋白对体外角膜上皮细胞凋亡的保护

目的 观察层粘连蛋白 (LN)对离体角膜上皮细胞存亡的影响 ,以寻找预防角膜上皮细胞凋亡的途径。方法 应用流式细胞仪 (FACStarplus)检测凋亡细胞的亚 2倍体DNA的方法 ,对基础培养的、与LN共育的以及阻断LN受体后的兔角膜上皮细胞的凋亡情况进行了对比观察及分析。结果 基础培养的第 6代角膜上皮细胞出现明显的细胞凋亡 ;与LN共育的角膜上皮细胞凋亡不明显 ;阻断LN受体后 ,角膜上皮细胞出现显著的凋亡现象。结论 LN对离体培养的角膜上皮细胞的凋亡有保护作用。

改良兔角膜上皮细胞原代培养及纯化的方法

目的改良原代培养及纯化兔角膜上皮细胞的方法,提高角膜上皮细胞原代培养的成功率。方法采用全角膜组织培养法培养兔角膜上皮细胞,利用机械刮除和差速贴壁法进行纯化并传代,通过倒置显微镜对细胞进行形态学观察并应用免疫组织化学的方法对细胞进行鉴定。结果兔全角膜24h贴壁,48h后即可见有细胞自角膜缘爬出,5d后细胞大量爬出可见成纤维细胞和角膜上皮细胞共存,界限明显;角膜上皮细胞复层生长。在界限融合前刮除成纤维细胞,角膜上皮细胞继续旺盛生长,10d后达到融合。兔角膜上皮细胞传至第4代后细胞体积明显变大,传至第5代,细胞衰老、凋亡。兔角膜上皮细胞免疫组织化学显示PCK单克隆抗体阳性。结论改良原代培养及纯化兔角膜上皮细胞的方法简单、经济、有效,并可获得具有良好生物学特性的角膜上皮细胞,为角膜及角膜疾病的研究奠定实验基础。

体外诱导人骨髓间充质干细胞横向分化为角膜上皮细胞的可行性

背景：目前同种异体角膜移植是角膜病的主要治疗手段，但该法存在免疫排斥反应、供体来源短缺、角膜内皮细胞慢性丧失功能等难以克服的缺点。目的：探讨人骨髓间充质干细胞在体外向角膜上皮细胞横向分化的可能性。设计、时间及地点：细胞学体外对比观察，于2004-06／2005-06在江西省人民医院中心实验室江西省干细胞重点实验室完成。材料：成人角膜缘上皮组织由江西省眼库提供，南志愿者捐献。经肝素抗凝的成人骨髓7份，来自汀西省人民医院骨髓穿刺室同期收治的需要行骨髓细胞学榆查的患者，均排除血液系统恶性疾病。方法：无菌条件下将人角膜缘上皮组织剪碎，胰蛋白酶消化，过滤离心，加入含20％FBS的DMEM／F12培养液，制作条件培养基，置于-20℃备刷。采用淋巴细胞分离液密度梯度法从人骨髓液中分离出单个核细胞层，贴蹙法培养扩增，取传至第5代的骨髓间充质干细胞，按2×10^4个/孔密度接种，待细胞完全贴壁后吸除培养液，设立5组：第1组为空白对照，仅加入含10％FBS的DMEM／F12培养基继续培养；其余4组在空白对照的基础上分别加入5，10，15μg/L表皮生长因子、10μg／L表皮生长因子＋50％条件培养基，每3d换液1次，培养30d。主要观察指标：通过细胞角蛋白抗体AE1、AE5免疫组织化学染色结果检测细胞横向诱导转化率。结果：AE1免疫组化染色后与空白对照组比较，5，10，15μg／L表皮生长因子组、10μg／L表皮生长因子＋50％条件培养基组的细胞显色率均明显升高（F=415．39，P〈0．01）；各诱导组间两两比较差异均有显著性意义（F=373．96，q=38．65，18．16，20．49，P〈0，01）：10μg／L表皮生长因子组与10μg／L表皮生长因子＋50％条件培养基组细胞显色率基本相似（t=-0．12，P〉0．05）。AE5免疫组化染色后，各组细胞的胞浆都能被DAB均匀淡染。结论：5～15μg/L表皮生长因子能诱导人骨髓间充质干细胞横向分化为角膜上皮细胞，且此浓度范围内的表皮生长因子诱导作用逐渐增强。用成人角膜缘干细胞培养液制成的50％条件培养基对诱导人骨髓间充质干细胞横向分化为角膜上皮细胞无明显促进作用。