mTOR通路抑制剂雷帕霉素对真菌性角膜炎小鼠角膜瘢痕化的影响

目的探讨mTOR通路抑制剂雷帕霉素对真菌性角膜炎小鼠角膜瘢痕化的影响。方法取96只SPF级C57BL/6J雄性小鼠,随机分为雷帕霉素组和对照组,每组各48只。两组小鼠同时建立真菌性角膜炎模型。雷帕霉素组模型制作前1 d按6.0 mg·kg-1雷帕霉素对小鼠进行腹腔注射预处理,之后按0.2 g·L^-1浓度在结膜下注射5μL,持续3 d;对照组注射PBS溶液。造模后对各组小鼠进行角膜临床评分,Western blot和实时荧光定量PCR分别检测造模后各组小鼠不同时间角膜LC-3Ⅱ、α-SMA和TGF-β1表达情况。结果造模后24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、336 h,对照组小鼠角膜临床评分均明显高于雷帕霉素组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。造模后144 h、216 h雷帕霉素组小鼠角膜LC-3Ⅱ表达上调,LC-3Ⅱ蛋白和mRNA相对表达量与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05);而在造模后72 h及336 h两组LC-3Ⅱ蛋白和mRNA相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与对照组相比,造模后144 h、216 h雷帕霉素组小鼠角膜α-SMA蛋白及mRNA相对表达量下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05);造模后144 h、336 h雷帕霉素组TGF-β1 mRNA相对表达量亦下降,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论雷帕霉素通过促进自噬作用下调角膜瘢痕化相关因子的表达,减轻了真菌性角膜炎模型小鼠角膜瘢痕化程度。

除风益损汤对兔角膜损伤后瘢痕形成及TGF-β1、Smad3、α-SMA蛋白表达的影响

目的探讨除风益损汤对兔角膜损伤后瘢痕形成及转化生长因子-β1(ransforming growth factor-beta 1,TGF-β1)、果蝇母本抗生存因子蛋白3(small mothers against decapentaplegic 3,Smad3)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达的影响。方法取健康月龄新西兰兔48只,按随机数字法将其分成4组,每组12只,设为空白组、模型组、除风益损汤组(以下简称中药组)、重组牛碱成纤维细胞生长因子滴眼组(以下简称贝复舒组);中药组予除风益损汤灌胃,1次/d,空白组、模型组、贝复舒组予等体积生理盐水灌胃,1次/d,贝复舒组予重组牛碱成纤维细胞生长因子滴眼液滴眼,3次/d;建模后各组于7、14、28 d在高倍显微镜下观察角膜损伤修复情况,共聚焦激光断层扫描观察角膜细胞,Masson染色观察角膜组织病理改变,Western blot检测角膜组织中TGF-β1、Smad3、α-SMA蛋白表达。结果眼前节拍照:可见兔角膜7、14、28 d时中药组、贝复舒组角膜损面积伤较模型组角膜损伤面积明显减小。共聚焦激光断层扫描角膜浅层细胞:在造模后28 d,模型组呈现出大量瘢痕组织,同时存在肌成纤维细胞;中药组和贝复舒组可见成纤维细胞及角膜基质细胞,以及极少量瘢痕组织。角膜混浊度分级:与空白组比较,模型组在造模后7、14、28 d的角膜混浊分级均明显升高(P<0.01),呈时间相关性,但28 d时模型组的角膜混浊分级出现回落,与模型组相比,中药组和贝复舒组在造模后7、14、28 d的角膜混浊分级均明显降低(P<0.01),且呈时间相关性(P<0.01)。Masson切片染色:在造模后28 d,空白组可见角膜上皮整齐连续排列,基质层纤维排列整齐,染色致密,厚度均一;模型组伤口处角膜上皮细胞不连续分布,且角膜前部基质浅蓝色胶原纤维排列紊乱,呈不连续状态,厚度不一,角膜后部基质浅蓝色胶原纤维排列较混乱,呈紊乱纤维束;中药组可见角膜前部基质浅蓝色胶原纤维较模型组排列有序,稍疏松,呈连续状态,角膜后部基质浅蓝色胶原纤维排列有序;贝复舒组见角膜前部基质浅蓝色胶原纤维较模型组排列有序,稍疏松,呈连续状态,仍存在纤维束,角膜后部基质浅蓝色胶原纤维排列有序。Western blot检测:与模型组比较,中药组、贝复舒组的角膜组织中TGF-β1、Smad3、α-SMA蛋白表达在7、14、28 d时均显著降低(P<0.05)。结论除风益损汤能促进角膜损伤修复,抑制角膜瘢痕化,并对TGF-β1、Smad3、α-SMA蛋白产生影响。