长链非编码RNA DANCR调控角膜细胞DNA氧化损伤的功能研究

目的氧化应激是引发角膜疾病的重要因素。研究表明,DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)在圆锥角膜中显著增加。目前,长链非编码RNA(lnc RNA)调控角膜细胞DNA氧化损伤的功能和机制尚不清楚。方法通过生物信息学分析获得圆锥角膜差异表达lnc RNAs;根据编码性预测并构建lnc RNAs开放阅读框的表达载体,筛选能够编码小肽的lnc RNA DANCR为靶标lnc RNA;RT-PCR验证DANCR在人圆锥角膜样本的表达;利用CCK8、荧光染色、彗星电泳和微核实验,检测DANCR及其编码小肽对角膜上皮细胞(HCET)的增殖、过氧化氢(H2O2)敏感性、活性氧(ROS)水平、DNA氧化损伤修复和基因组稳定性的影响。结果DANCR在人圆锥角膜细胞中表达下调;敲低DANCR导致HCET细胞的增殖速率、H2O2敏感性、ROS水平及微核比例显著降低、DNA氧化损伤的修复水平增强;同时,在DANCR敲低细胞中回转其编码小肽能够部分逆转H2O2对细胞的杀伤作用及微核比例。结论Lnc RNA DANCR在圆锥角膜低表达,促进DNA氧化损伤的修复,降低ROS对圆锥角膜细胞的杀伤。DANCR部分依赖其编码小肽应答ROS,是调控角膜氧化应激的新因子,有助于理解角膜疾病的发病机理以及开发新的治疗策略。

明胶/聚乳酸复合纤维膜的制备、表征及作为角膜细胞载体的评价

利用静电纺丝技术制备了明胶与聚乳酸的复合纤维膜,研究了组分配比对复合膜的表面性能、孔隙结构和力学性能的影响,并以复合膜为组织工程支架进行兔角膜上皮细胞的体外培养.采用扫描电子显微镜、免疫荧光染色和噻唑蓝四氮唑溴化物(MTT)比色法综合评价了细胞在支架表面的黏附与增殖能力.结果表明,纺丝溶液的组分对纤维的直径分布和表面亲水性有显著影响,不同组分配比的复合纤维膜均具有高孔隙率的通孔结构;以明胶为基材可维持复合膜的细胞黏附性;与聚乳酸复合可以明显提高复合膜的力学性能.

免角膜细胞的原代培养实验研究

报告了兔角膜三种细胞的体外培养技术,成功地建立了兔角膜上皮、基质和内皮细胞的原代纯培养且形成良好的细胞单层,可用于对角膜组织细胞的体外实验研究。

准分子激光角膜切削术后角膜细胞的增生及激素的治疗作用

目的 探讨PRK激光角膜切削术后 (PRK)角膜细胞的增生情况及皮质类固醇的治疗作用。方法 通过对准分子后角膜上皮及基质细胞的转化生长因子 β1 (TGF β1 )和增生细胞核抗原 (PCNA)的免疫组化观察 ,在 2 4只日本大白兔中设立对照 6只 ,其余 1 8只应用轰炸式准分子激光行光学角膜切除术 ,术后每只兔一眼用单纯抗生素治疗 ,另一眼用抗生素加皮质类固醇激素治疗 ,皮质类固醇眼药水按每日3、2、1次逐月递减。术后用裂隙灯显微镜观察眼前段情况 ,检查角膜上皮下混浊的形成情况并按照Rai的分级标准进行记录。分别于 4天、1个月及 2个月随机处死 3只兔取角膜 ,1 /2用于普通光镜及免疫组化染色 ,另 1 /2用于透射电镜观察。用免疫组化方法观察TGF β1、PCNA在兔角膜上皮细胞及基质细胞中的表达状况。结果 应用抗生素加皮质类固醇治疗的兔眼 ,角膜上皮愈合较单纯抗生素组延迟(P <0 0 1 ) ;但角膜上皮下混浊 (Haze)的程度较轻且消失快(P <0 0 5)。免疫组化结果表明 :术后第 4天 ,行PRK手术治疗的兔眼虽然仅有单层角膜上皮细胞覆盖 ,角膜上皮细胞及基质细胞TGFβ1和PCNA的表达水平均较对照组高 (P<0 0 5) ;至 1月时 ,行PRK治疗的两组上皮细胞层数增多且TGFβ1和PCNA的表达水平仍高 ,激素应用组略有下降 ;术后

改良兔角膜细胞冻存与复苏方法的实验研究

目的建立一种改良的兔角膜细胞冻存和复苏的方法。方法兔角膜细胞消化培养。取第2代细胞分别进行传统和改良方法冻存,于冻存后的第2周、3个月、6个月、1a分别行传统和改良的复苏方法。用MTT法测细胞生长曲线,应用三因素分析统计方法评定不同冻存方法、不同复苏方法、不同复苏时间三因素单独和(或)组合对细胞复苏率的影响。结果兔角膜细胞体外生长良好。培养细胞Vim单克隆抗体阳性。细胞的复苏率均受不同冻存方法和复苏方法单、双因素影响,不受复苏时间及与冻存和复苏方法单、双因素及三因素的影响。冻存复苏后生长曲线良好。结论改良后的兔角膜细胞冻存和复苏方法可使细胞保持最佳生物学特性,细胞复苏率高,适用于体外实验研究。

猴、兔角膜细胞成分原代培养的研究

目的建立从同一角膜片上分离培养角膜上皮、基质和内皮细胞的方法。方法采用消化法培养猴角膜内皮细胞、上皮细胞和兔角膜上皮细胞，组织块培养法培养角膜基质细胞和兔角膜内皮细胞。结果猴、兔角膜内皮细胞培养１周后，均能形成细胞单层；猴角膜上皮细胞培养３～４天生长旺盛，但难以形成细胞单层，兔上皮细胞生长旺盛，１周后已达融合状态，细胞呈膜状伸出板层伪足；猴、兔基质细胞易培养，１周后融合成单层细胞。结论从同一角膜中能分别培养出角膜３种细胞，消化法和组织块培养法相结合既节省材料，又简单易行。

基于动态阈值选择和细化算法的角膜细胞轮廓抽取

角膜细胞图象轮廓提取的关键是分隔出细胞与背景，生成二值图象．由于角膜细胞图象的光照不均匀，用单一域值无法兼顾亮区与暗区．提出了一种基于动态域值选择和细化算法的角膜细胞轮廓抽取算法．首先对处理图象进行灰度平均和中值滤波平滑处理，消除细胞内部的不均匀性和保持细胞之间的边界；然后用动态域值选择算法分割细胞和背景；最后使用细化算法抽取细胞的轮廓．此算法应用于角膜细胞图象，处理结果证明了算法的有效性．

角膜细胞因子网络的研究

信号从上皮层传递到基质层或者从基质层传递到上皮层构成了上皮-基质相互作用的基础。上皮-基质相互作用在胚胎发育[1-3]、形态发生[4-6]、伤口愈合[7,8]及肿瘤转移[9]等方面起到至关重要的作用。细胞外基质、细胞膜关联分子(cellmembrane-associatedmole-cules)和细胞因?..

人角膜细胞的原代培养实验研究

报告了人角膜细胞的体外培养技术,成功地建立了人角膜上皮、基质和内皮细胞的原代纯培养且形成良好的细胞单层。并对培养的三种细胞的形态进行了描述,可用于对角膜组织细胞的体外实验研究,并讨论了在该项工作中获得成功的经验和注意事项。

VEGF水平及其受体分型和角膜细胞增殖能力的相关性

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)水平及其受体分型(VEGFR1、VEGFR2)与角膜细胞增殖能力的相关性。方法受试者为A、B、C 3组,每组20例。A组为新生血管性青光眼组,B组为原发性青光眼组,C组为年龄相关性白内障组。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和房水中VEGF、VEGFR1、VEGFR2水平和促红细胞生成素(EPO)水平。结果3组血清VEGF水平差异有统计学意义(F=680.667,P<0.001),3组血清EPO水平无显著差异(F=0.773,P>0.05)。3组房水VEGF水平差异具有统计学意义(F=552.247,P<0.001)。3组房水中EPO水平差异有统计学意义(F=1757.436,P<0.001)。新生血管性青光眼房水VEGF、EPO水平相关性不显著(r=-0.182,P>0.05)。A、B组血清VEGF、VEGFR2含量与C组相比有显著差异(均P<0.01)。3组血清VEGFR1含量未见明显差异(P>0.05)。结论血管生成性青光眼患者体内VEGF、VEGFR2和EPO局部水平升高,但EPO与虹膜血管生成无明显相关性。

不同波长激光对角膜细胞DNA的定量测定

以254nm,308nm,632.8nm和2.94μm波长的光和激光分别照射15只兔角膜,经Feulgen方法染色,通过显微分光光度计检测角膜上皮和内皮细胞DNA染色量,以进行比较。实验结果提示紫外光和紫外激光对角膜细胞DNA有明显影响。而可见和中红外波长激光则无。

角膜细胞轮廓抽取(英文)

角膜细胞图像轮廓提取的关键是分隔出细胞区域与背景,生成二值图像.由于角膜细胞图像光照不均匀,采用传统的单一域值法无法兼顾亮区与暗区,不能正确地提取出角膜细胞区域.为此本文提出了一种基于动态域值选择和细化算法的角膜细胞轮廓抽取算法.首先对被处理图像进行灰度平均和中值滤波平滑处理,消除细胞内部的不均匀性并保持细胞之间的边界;然后应用动态域值选择算法分割出细胞和背景;最后采用细化算法得到角膜细胞的粗轮廓,并采用去毛刺算法去除细化结果上的毛刺,抽取到角膜细胞的轮廓.此算法应用于角膜细胞图像,处理结果证明了算法的有效性.

UVB诱发人角膜细胞损伤模型构建及损伤机制初探

对紫外线(UVB)照射前后的人角膜细胞进行形态学观察以及基因表达差异分析.实验结果显示:(1)未经UVB照射的细胞形状规则,充盈饱满. 144 m J/cm2UVB辐射组细胞形态较规则,少数细胞透明度降低. 288 m J/cm2UVB辐射组细胞形状不规则,多数细胞透明度降低.(2)抗氧化相关基因SOD1、CAT、GPX1、Prdx1,2,4,5,6在角膜细胞发生氧化损伤时,表现出显著上调表达趋势; Prdx3基因呈下调表达趋势.(3) P53、FASL、Caspase8、Caspase3和Caspase9均随着UVB辐射剂量的增加而上调表达; BCL2在各实验组细胞中均未检测到表达.

传代培养角膜细胞的染色体遗传变异率分析

目的 分析传代培养角膜细胞染色体数目的变异率。方法 选择人角膜上皮细胞（HCE）、牛角膜内皮细胞（BCE）和兔角膜上皮细胞（RCE）细胞，采用直接法制备传代细胞染色体标本，常规Giemsa染色，1000倍光学显微镜下计数分裂相染色体数目，进行核型分析，统计染色体数目变异情况。结果 HCE染色体众数为56—65，为超二倍体；BCE染色体众数为27～34，为亚二倍体；RCE染色体众数为74～88，为超二倍体。与起源细胞相比，以上3种传代细胞染色体数目均发生了改变。结论 该项核型分析为HCE、BCE和RCE的功能研究提供了重要的参考信息。

急慢性闭角型青光眼患者角膜细胞形态学特征及其与手术疗效相关性分析

目的研究急慢性闭角型青光眼患者角膜细胞形态学特征及其与手术疗效的相关性。方法回顾性分析2016年1月至2017年12月该院接诊的60例闭角型青光眼患者的诊疗情况,将所有患者分为研究组和对照组,每组各30例,依据闭角型青光眼的分型,将患者分为急性亚组与慢性亚组。研究组患者行超声乳化手术治疗,对照组患者行小梁切除术治疗。对两组患者手术前后眼压水平、前房深度改变情况、前房角改变情况、角膜内皮细胞指标及并发症情况进行观察比较。结果术前,研究组和对照组的急性亚组与慢性亚组患者眼压水平及前房深度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。手术后1年,研究组和对照组的急性亚组与慢性亚组患者眼压水平均明显降低,且研究组患者眼压水平降低情况明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组的急性亚组和慢性亚组患者前房深度均较术前明显升高,且研究组患者前房深度升高情况明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组和对照组的急性亚组与慢性亚组间最大细胞面积、最小细胞面积、单位面积细胞密度、平均细胞面积、细胞面积的变异系数及平均细胞面积标准差比较,差异均无统计学意义(P>0.05);研究组和对照组的急性亚组六角细胞比例明显低于慢性亚组,差异有统计学意义(P<0.05)。手术后研究组和对照组的慢性亚组与急性亚组并发症发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论早期及时采用超声乳化手术对青光眼患者进行治疗,可明显改善角膜细胞形态,可提高治疗效果,值得临床推广应用。

蠕形螨感染程度与BKC患者角膜细胞密度和眼表功能的相关性分析

目的:探究蠕形螨感染程度与睑缘炎相关性角结膜病变(BKC)患者角膜细胞密度变化、眼表功能的相关性。方法:选取2019-07/2020-07于本院眼科就诊的BKC患者94例为研究对象(BKC组),另外同期选择相匹配的健康志愿者80例为对照组。根据BKC患者是否感染蠕形螨,分为感染组45例和未感染组49例。根据睫毛检出蠕形螨数量分为可疑感染17例、中度感染18例、重度感染10例。对所有研究对象使用激光共聚焦显微镜检查,计算中央角膜和周边角膜各层组织的细胞密度。检查BKC患者眼表功能[泪液分泌试验、眼表疾病指数(OSDI指数)、睑缘异常评分、角膜荧光素染色检查及泪膜破裂时间(TF-BUT)检查],分析BKC患者蠕形螨感染与角膜细胞密度、眼表功能的相关性。结果:与对照组相比,BKC组在中央和周边角膜浅基质层细胞密度较低(P<0.05),OSDI指数、睑缘异常评分、角膜荧光素染色评分较高(P<0.05);BKC未感染组、蠕形螨可疑感染、蠕形螨中度感染、蠕形螨重度感染患者中央和周边角膜浅基质层细胞密度依次降低(P<0.05),OSDI指数、睑缘异常评分、角膜荧光素染色评分依次显著增加(P<0.05);蠕形螨感染程度与BKC患者中央和周边角膜浅基质层细胞密度负相关(P<0.05),与OSDI指数、睑缘异常评分、角膜荧光素染色评分正相关(P<0.05)。结论:蠕形螨感染严重程度与BKC患者角膜中央和周边角膜浅基质层细胞密度具有显著负相关,与眼表功能障碍具有显著正相关。

基于mRNA/miRNA表达谱差异探讨多西环素抑制TGF-β1介导角膜细胞纤维化的机制研究

应用微小RNA(miRNA)高通量测序技术和生物学信息分析,从分子层面解释多西环素抑制TGF-β1介导角膜细胞纤维化的可能机制。方法:以正常角膜细胞作为对照组,使用TGF-β1诱导角膜细胞分化成角膜肌成纤维细胞构建角膜细胞纤维化组,多西环素组在使用TGF-β1诱导角膜细胞分化后给予20ng/ml多西环素溶液干预;观察各组细胞形态并使用RT-qPCR检测纤维化相关基因的表达,然后对各组细胞进行miRNA测序和相关生物信息学分析。结果:给予多西环素溶液干预后,与角膜细胞纤维化组相比,纤维化基因Fibronectin和CollagenI的mRNA表达下降。与对照组相比,纤维化组中有其中170个mi RNA上调、44个mi RNA下调;与纤维化组相比,多西环素组中有95个mi RNA上调、152个mi RNA下调;差异表达的miRNA靶基因GO富集在转录调控、细胞质、蛋白质结合,KEGG主要富集在甲状腺激素合成相关通路、鞘脂类信号通路、葡糖胺聚糖生物合成-硫酸软骨素相关通路、Hippo信号通路等。结论: hsa?novel?156可能是多西环素抑制角膜细胞纤维化的直接靶点。

角膜的组织学研究——角膜细胞的立体定位及其与胶原纤维的位置关系

本文应用组织学常规方法和自行设计的角膜标本制备法制做7个胎儿角膜及15个兔角膜标本,光学显微镜及透射电子显微镜的观察结果表明:1.角膜细胞不但在同一水平而且在不同水平也相互连接;2.多数角膜细胞都与胶原纤维相联系,其方式有3种,即贴附于纤维表面;镶嵌于纤维一侧;也可能被包裹于纤维之中。对这种位置关系的生理学意义做了尝试性讨论。

壳聚糖基角膜细胞载体的制备及其细胞相容性

为探讨羟丙基壳聚糖基共混膜作为组织工程技术中角膜细胞培养载体的可行性,分别制备了羟丙基壳聚糖/硫酸软骨素、羟丙基壳聚糖/明胶/硫酸软骨素以及羟丙基壳聚糖/氧化透明质酸/硫酸软骨素三种共混膜。测定其透光率、含水量和蛋白吸附性能;在共混膜上培养兔角膜上皮细胞,通过观察角膜上皮细胞在不同载体膜上的生长状态、贴附情况,测定细胞活性以及上清液中乳酸脱氢酶的活性,研究三种壳聚糖基载体膜片与角膜上皮细胞的相容性。膜片理化性质测定结果表明三种共混膜片具有良好的透明度,适宜的含水量和较强的蛋白吸附性能;细胞相容性实验结果表明羟丙基壳聚糖/明胶/硫酸软骨素共混膜对细胞的损伤最小,有利于细胞在膜上的贴附和生长,表现出良好的细胞相容性,有望作为角膜细胞载体体外构建组织工程化角膜。

羟丙基壳聚糖的制备、表征及其对角膜细胞生长的影响

以异丙醇为介质,用环氧丙烷与碱化壳聚糖反应合成水溶性羟丙基壳聚糖,并用FTIR,1H-NMR和XRD对其结构进行表征,元素分析法测定其取代度;以MTT法研究该衍生物对兔角膜基质细胞生长的影响。结构分析结果表明:在壳聚糖的C6—OH上成功引入了羟丙基基团;MTT实验结果表明:该衍生物对角膜基质细胞的生长无抑制作用,具有良好的细胞相容性,为其在组织工程化角膜中的应用提供了一定的理论基础。