碱烧伤诱导兔部分性角膜缘干细胞失代偿模型

目的:探讨诱导兔部分性角膜缘干细胞失代偿(limbal stem cell deficiency,LSCD)动物模型的一种新方法。方法:分别采用C57小鼠和新西兰白兔制作完全性和部分性角膜缘干细胞失代偿动物模型。小鼠(n=30)采用1mol/L氢氧化钾溶液浸泡的滤纸片(直径3mm)置于左眼中央角膜表面30s,随后用生理盐水冲洗。白兔(n=19)切除瞬膜(第三眼睑)后,采用1mol/L氢氧化钾溶液浸泡的滤纸片(直径5mm)置于左眼颞上方角膜表面30s,随后用生理盐水冲洗。烧伤眼术后采用0.5%盐酸左氧氟沙星滴眼液4次/d。烧伤前、烧伤后第1、2、4wk,2mo采用裂隙灯显微镜观察、摄像,记录角膜溃疡、穿孔等并发症。术后2mo采用印迹细胞学检测角膜杯状细胞分布,根据裂隙灯显微镜检查所见和角膜印迹细胞学检查判断LSCD严重程度。术后2mo处死动物,角结膜切片观察角膜新生血管、杯状细胞分布。意外死亡动物不计入总数,计算并比较完全性LSCD和部分性LSCD的模型诱导成功率。结果:30只小鼠中6只意外死亡,2只于烧伤后出现角膜穿孔,其余22只发生完全性LSCD,诱导成功率92%,烧伤后2mo小鼠角膜可见新生血管广泛分布于角膜浅层及深基质层,病理切片可见角膜新生血管。19只白兔,7只意外死亡,其余12只发生不同程度LSCD(部分性LSCD,平均累及1.17±0.39个象限),未发生角膜穿孔情况,诱导成功率100%(P=0.543)。正常角膜区域无杯状细胞,LSCD区域角膜上皮印迹细胞学PAS染色可见杯状细胞,平均密度58.60±12.58个细胞/HP。结论:中央角膜碱烧伤可以诱导产生完全性LSCD,部分动物会因为角膜溃疡穿孔而导致模型诱导失败,LSCD往往比较严重,且合并深层角膜新生血管。颞上方角膜碱烧伤可以诱导产生部分性LSCD,合并较少的角膜病变,角膜新生血管位于浅层。

自体角膜缘干细胞移植联合羊膜移植治疗角膜缘干细胞失代偿

目的观察自体角膜缘干细胞移植联合羊膜移植术治疗角膜缘干细胞失代偿的有效性与安全性。方法采用回顾性研究方法,统计分析2014年6月~2016年6月在武汉同济医院眼科住院的角膜缘干细胞失代偿患者资料,所有患者均采用自体角膜缘干细胞移植联合羊膜移植术治疗。采用裂隙灯显微镜照相、眼前节光学相干断层扫描(OCT)等方法检查,并记录手术患者手术前后视力、新生血管面积及其并发症,随访观察5~38个月。结果共计9例患者纳入该研究,其中7例患者完成5个月以上随访。术前视力为光感~0.25,平均(0.025±0.017),术后最佳矫正视力为0.05~0.3,平均(0.097±0.094),术后视力较术前视力平均增加(0.076±0.080)(P=0.037)。术前角膜新生血管面积平均为(75.968±25.973)mm2,术后为(36.472±31.810)mm2,较术前明显减少(P=0.008)。OCT检查显示术前中央角膜厚度410~577μm,平均(495.778±56.464)μm,角膜前血管膜厚度150~956μm,平均(325.111±235.127)μm,术后角膜厚度420~570μm,平均(492.857±47.121)μm,与术前比较厚度无明显差异(P=0.630)。角膜前膜行病理切片苏木精-伊红染色,可见病变组织表面被覆复层扁平上皮,上皮下为致密纤维组织及血管增生。随访过程中2例患者手术出院后即失访,2例患者术后3个月时复发,复发率28.57%。所有患者没有感染发生,但是1例患者出现上皮愈合延迟。结论自体角膜缘干细胞移植联合羊膜移植术是治疗角膜缘干细胞失代偿的有效方法。

利用静电纺丝技术构建组织工程角膜缘的研究现状

角膜缘干细胞失代偿是由各种原因所致的角膜缘干细胞缺乏以及角膜缘微环境破坏引起,严重可致患者失明。利用组织工程技术构建可供移植的组织工程角膜缘是目前角膜病研究领域的方向之一。采用静电纺丝技术构建三维支架,为角膜缘干细胞和角膜缘微环境细胞提供生长条件,获得组织工程角膜缘,可治疗双眼角膜缘干细胞失代偿患者。其优点是成膜薄,与人体角膜缘组织的三维结构相似,并可根据实际调整纤维结构。本文综述了静电纺丝技术的原理、聚合物材料的选择、接种细胞的选择、静电纺丝制作组织工程支架的优势和静电纺丝在构建角膜缘方面的研究进展与方向。