自体角膜缘移植对角膜血管新生抑制作用的实验研究

目的 研究早期自体角膜缘移植对碱烧伤后角膜血管新生 (CNV)的影响。方法 2 0只家兔 ,用NaOH建立角膜新生血管动物模型。在伤后 1、3、5、7天进行自体角膜缘移植。结果 角膜上皮愈合时间手术组平均 12 3 8天 ,对照组 19天。CNV程度 :手术组 1～ 2级 15眼占 93 75 % ,对照组 3～ 4级 4眼占 10 0 %。手术组CNV侵入角膜少 ,血管细小 ,管腔内红细胞少。结论 自体角膜缘移植可抑制CNV ,促进角膜上皮的愈合。

高压氧抑制外伤性角膜血管新生的实验研究

目的 探讨高压氧对化学烧伤所致角膜血管新生(cornealneovascularization ,CNV)的影响。方法 实验组与对照组各 2 6只鼠 ( 5 2眼 ) ,用硝酸银灼伤双眼角膜 ,实验组行高压氧治疗。伤后不同时期定量检测角膜中血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的积分光密度 (integrationopticden sity ,IOD) ,计数血管内皮细胞标记指数 (labelingindex ,LI) ;伤后第7天用血管灌注、计算机图象分析测定CNV面积百分比。结果 第 7天实验组CNV显著少于对照组 (P <0 0 1) ;伤后两组角膜VEGF的IOD与血管内皮细胞LI呈明显的平行关系 ,实验组各值均低于对照组对应值 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。结论 高压氧治疗能降低角膜VEGF蛋白水平和血管内皮细胞增殖水平 。

血管抑素抑制兔眼表碱烧伤角膜缘移植术后的角膜血管新生

目的:检测眼表碱烧伤角膜缘移植术后血管抑素抑制角膜新生血管的作用。方法:16只新西兰大白兔双眼制作碱烧伤模型1d后,双眼行角膜缘移植术,术后左眼局部应用血管抑素治疗2周,右眼作对照;观测4周,根据新生血管侵入角膜缘内的范围、角膜混浊与水肿程度进行分级并作统计学处理;同时测量术后7、14、21及28d的眼压。结果:术后4周时,应用血管抑素的左眼的新生血管的评分为1.19±0.10,而对照组为1.63±0.72,统计学处理显示左眼的新生血管较右眼的明显减少(P<0.05),角膜混浊与水肿程度亦明显下降。各时间点各术眼的眼压均在正常范围,无统计学差异。结论:局部应用血管抑素能有效抑制眼表碱烧伤角膜缘移植术后的新生血管增生。

缝线诱导大鼠角膜血管新生过程中环氧化酶2和基质金属蛋白酶2的表达

背景:研究表明环氧化酶2和基质金属蛋白酶2在角膜新生血管的发生中起重要作用,但其具体机制及相互关系仍不明确。目的:观察环氧化酶2和基质金属蛋白酶2在缝线法诱导的大鼠角膜新生血管中的表达,并分析其相关性,探讨角膜新生血管形成的有关机制。方法:采用缝线法建立SD大鼠角膜新生血管模型,术后每日裂隙灯观察角膜新生血管的生长情况,并于1,4,7,14,21d取材,行免疫组化及RT-PCR检测环氧化酶2和基质金属蛋白酶2蛋白的分布及二者mRNA的相对表达量,并进行相关性分析。结果与结论:角膜缝线后三四天可见明显从角膜缘伸入角膜的毛刷状小血管,垂直角膜缘切线方向,角膜缝线处水肿;7d角膜新生血管生长旺盛,角膜水肿继续加重,14d新生血管延伸到达或超过缝线位置,分支密集并互相吻合形成袢状血管;21d角膜新生血管变细。免疫组化及RT-PCR显示环氧化酶2和基质金属蛋白酶2于缝线后表达逐渐增加,7d达高峰,以后随炎症细胞的减少而减弱,主要分布于炎症细胞胞质及新生血管内皮细胞,两种因子的表达在角膜新生血管中具有正相关性(r=0.981,P<0.05)。证实炎症相关的角膜新生血管中环氧化酶2和基质金属蛋白酶2的表达增加,并且与新生血管的发生、发展密切相关。

MiR-200b通过调控PIK3CA/AKT通路抑制大鼠角膜血管新生

目的探讨microRNA-200b(miR-200b)在大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)形成中的作用及其调节机制。方法24只雌性SD大鼠采用一眼经缝线法构建CNV模型(实验组),另一眼作为正常对照组,于裂隙灯下观察建模后第4、7、14天角膜新生血管情况,采用HE染色观察角膜组织结构改变及炎性细胞浸润情况,RT-PCR检测造模后第14天各组大鼠角膜组织中miR-200b以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达。利用脂质体转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分为miR-200b模拟物(miR-200b mimic)组、阴性对照(miR-NC)组、空白对照(CON)组,利用RT-PCR验证转染效果,分别采用CCK-8检测HUVECs增殖能力,划痕实验检测HUVECs迁移能力,Matrigel胶成管实验检测HUVECs管腔形成能力。并通过Western blot检测VEGF及PIK3CA、AKT蛋白的表达。结果成功构建大鼠CNV模型,HE染色显示与正常组相比,缝线后第4、7、14天,大鼠角膜组织排列紊乱,炎性细胞浸润逐渐加重(P<0.05),RT-PCR结果显示缝线后第14天角膜组织中miR-200b表达明显降低,而VEGF表达明显升高(P<0.01)。与CON组和miR-NC组相比,miR-200b mimic组中miR-200b相对表达量显著升高(P<0.01),而增殖、迁移及管腔形成能力显著下降(P<0.05),转染miR-200b mimic后,HUVECs中VEGF、PIK3CA、p-AKT蛋白表达均明显下降(P<0.05)。结论miRNA-200b可显著抑制HUVECs的增殖、迁移及成管能力,可能通过抑制PIK3CA/AKT通路参与CNV的发生和发展。

1-磷酸鞘氨醇对角膜血管新生的影响

目的评价1-磷酸鞘氨醇(S1P)对大鼠角膜新生血管(CNV)的影响。方法 20只SD大鼠随机分成对照组和实验组,制做角膜微囊袋并分别植入空白缓释微粒体和含S1P的微粒体,术后1d,7d,14d观察各组大鼠角膜新生血管的生长情况。结果对照组未见明显新生血管生长而实验组新生血管生长明显,差异有统计学意义(P<0.05),实验组CNV的面积、累积钟点数和血管长度随观察时间推移而增多(P<0.05)。结论 1-磷酸鞘氨醇可促进角膜的血管增生,作用机理可能与激活角膜缘附近血管内皮细胞S1PR通路有关。

穿心莲内酯对碱灼烧引起的小鼠角膜血管新生的作用

目的利用碱灼烧引起的小鼠角膜血管新生模型探究穿心莲内酯对角膜血管新生的抑制作用。方法构建小鼠碱灼烧角膜新生血管模型;于建模后4 d开始,每3天一次腹腔注射不同浓度穿心莲内酯(0.1 M,0.2 M),14 d后观察两种浓度穿心莲内酯对角膜血管新生的作用。结果成功地构建了小鼠角膜新生血管模型。给予两种穿心莲内酯后,小鼠角膜新生血管面积明显比模型组少(P<0.05),且当穿心莲内酯浓度达到0.2 M时对角膜新生血管形成的抑制作用更明显。结论穿心莲内酯对小鼠角膜血管新生有抑制作用。

抗FGF-2纳米抗体抑制碱烧伤诱导大鼠角膜血管新生

目的:研究抗成纤维细胞生长因子(FGF-2)纳米抗体对碱烧伤诱导的大鼠角膜血管生成的治疗作用。方法:将SD大鼠分为:假手术组(Sham),模型组(Model,直径为3 mm的浸有1 mol/L NaOH溶液圆形滤纸贴于大鼠眼角膜中央处30 s,制备大鼠碱烧伤血管生成模型)和治疗组(Treatment,术后7天至21天用3 mg/mL的抗FGF-2纳米抗体溶液滴眼,每日3次,每次10μL,共14天)。通过体视显微镜和CD31免疫组织化学染色计算大鼠角膜血管生成情况。实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附测定和免疫组织化学染色3种方法检测抗血管内皮生长因子(VEGF)和FGF-2的mRNA和蛋白表达水平。结果:(1)血管:治疗组较模型组的面积显著减少,血管管腔较窄(P<0.05),在药物干预14天后,差异最为显著;(2)FGF-2的mRNA和蛋白表达水平:模型组与治疗组的结果相近(P>0.05);(3)VEGF的mRNA和蛋白表达水平:治疗组显著高于模型组(P<0.05)。此外,假手术组的持续给药也使得VEGF表达显著增加(P<0.05)。结论:抗FGF-2纳米抗体可抑制由碱烧伤诱导的角膜血管新生,但也使得正常大鼠角膜或病理大鼠角膜的VEGF表达水平代偿性升高。

外泌体负载的KV11通过VDAC1和自噬机制对角膜新生血管的抑制作用

目的探讨外泌体(EXO)负载的抗新生血管短肽KV11在角膜新生血管(CNV)中的作用及其机制。方法利用EXO锚定肽CP05将KV11结合到血管内皮来源的EXO膜表面,形成EXO-KV11。通过Apogee纳米流式分析EXO负载KV11的效率和最佳浓度比。选取8周龄SPF级健康雄性SD大鼠100只,其中10只大鼠不做任何处理,为正常对照组;其余大鼠在建立碱烧伤诱导CNV大鼠模型后,采用随机数字表法随机将大鼠分为EXO-KV11组、KV11组和生理盐水组,每组各30只。从碱烧伤后第1天开始每隔1天,各组分别结膜下注射100μl EXO-KV11(25μg)、KV11(25μg)或生理盐水。观察第1、4、7、14天时CNV的生成情况;采用荧光素心室灌注、角膜血管造影法计算CNV面积;采用苏木精-伊红染色法观察各组CNV管腔数量;采用免疫组织化学法检测角膜组织中CD31的表达分布;采用Western blot法检测电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)和内质网应激、自噬及凋亡相关蛋白的表达水平。结果Apogee流式分析确定KV11与EXO最佳浓度比为4∶1,EXO负载KV11效率高达87.5%。碱烧伤后7 d和14 d,各组CNV面积总体比较差异均有统计学意义(F=4.613、15.590,均P<0.05),其中碱烧伤后7 d,EXO-KV11组CNV面积小于KV11组和生理盐水组;碱烧伤后14 d,EXO-KV11组和KV11组CNV面积均小于生理盐水组,EXO-KV11组CNV面积小于KV11组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。角膜荧光铺片定量分析结果显示,生理盐水组、KV11组和EXO-KV11组CNV相对荧光面积分别为(8.3±1.7)%、(5.2±1.6)%和(3.4±0.7)%,总体比较差异有统计学意义(F=11.735,P<0.01),其中KV11组和生理盐水组CNV相对荧光面积均大于EXO-KV11组,生理盐水组CNV相对荧光面积大于KV11组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。碱烧伤后14 d,生理盐水组基质内可见大量新生血管管腔;KV11组基质内新生血管管腔数量较生理盐水组少;EXO-KV11组角膜结构趋于正常,少见新生血管管腔。生理盐水组角膜基质内可见大量CD31染色阳性细胞,细胞围成大小不一的管腔结构;KV11组角膜基质内CD31染色阳性细胞围成的管腔数量较生理盐水组少,EXO-KV11组管腔数量较KV11组少。EXO-KV11组、KV11组、生理盐水组和正常对照组VDAC1、蛋白质激酶R样内质网激酶(PERK)、自噬接头蛋白(SQSTM1/p62)、活化半胱氨酸蛋白酶3(cleaved caspase 3)相对表达量总体比较差异均有统计学意义(F=35.960、8.947、17.791、101.168,均P<0.01),其中EXO-KV11组VDAC1、PERK、p62、cleaved caspase 3相对表达量高于KV11组和生理盐水组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。各组自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)Ⅱ/LC3BⅠ蛋白相对表达量总体比较,差异无统计学意义(F=0.445,P=0.727)。结论与KV11相比,EXO-KV11可通过增加VDAC1表达、刺激PERK产生、抑制自噬流的发生等机制更有效地抑制CNV。

角膜新生血管治疗的研究新进展

生理状态下角膜中的血管生成因子和抗血管生成因子存在平衡,多种外界因素破坏了对其保持平衡作用的正常保护措施,例如感染、炎症、缺氧、外伤、角膜变性和角膜移植术均能破坏角膜结构的正常保护措施,从而促进角膜新生血管(CNV)的形成。CNV的形成可能是目前世界范围内导致视力水平下降严重的主要原因之一,严重时可致盲。因此,抑制CNV的形成具有十分积极重要的医学临床诊断意义。本文将对CNV的治疗新进展作一综述。

DMU-212诱导凋亡及自噬抑制角膜新生血管形成

目的 探讨白藜芦醇类似物反式-3,4,5,4′-四甲基二苯乙烯(DMU-212)在抑制角膜新生血管(CNV)形成的过程中对细胞凋亡和自噬的影响。方法 选取人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为体外研究材料,随机将细胞分为6组,均使用10 ng·mL^(-1)VEGF进行诱导处理,并分别暴露于0、10、20、40、80、120μmol·L^(-1)DMU-212,用CCK-8法检测各组细胞增殖;分别通过划痕实验和管腔形成实验检测对照组(0μmol·L^(-1)DMU-212处理)和DMU-212组(40μmol·L^(-1)DMU-212处理)的细胞迁移能力和血管形成能力;通过蛋白免疫印迹实验检测2组凋亡和自噬相关蛋白表达水平;分别通过TUNEL实验和MDC实验检测2组细胞凋亡和自噬水平。结果 各DMU-212处理组与对照组相比,细胞增殖率总体呈现浓度依赖性抑制,差异显著(F=11.35,P<0.001)。与对照组相比,DMU-212组细胞迁移速率和管腔形成能力显著受到抑制(均P<0.01);DMU-212组cleaved caspase3、cleaved caspase9、Bax、Cyto-c、ATG7、LC3-Ⅱ和Beclin 1蛋白相对表达量显著升高(P<0.05或P<0.01),P62和Bcl2蛋白相对表达量显著降低(P<0.01);DMU-212组凋亡探针和自噬探针的荧光强度均显著增加(P<0.05和P<0.01)。结论 DMU-212可诱导HUVECs凋亡并提高自噬水平,从而抑制新生血管的形成。

石斛酚抑制碱烧伤大鼠角膜新生血管的实验研究

目的 探讨石斛酚抑制碱烧伤大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization, CNV)的作用。方法 构建SD大鼠角膜碱烧伤模型,随机分成正常对照组、模型对照组、低浓度石斛酚组、高浓度石斛酚组、阿柏西普组,每组各10只。低浓度石斛酚组、高浓度石斛酚组、阿柏西普组分别于伤后第1天结膜下注射2.5 mg/0.05 mL、5 mg/0.05 mL石斛酚,2 mg/0.05 mL阿柏西普。伤后第3、7、14天,观察并计算角膜新生血管占全角膜面积的百分比、角膜混浊评分并测量角膜厚度。碱烧伤第14天,处死全部大鼠,通过苏木素-伊红(HE)染色和免疫组化观察角膜组织中VEGF和CD34蛋白表达水平,以及通过ELISA检测各组VEGF、IL-1β、TNF-α的蛋白含量。结果 碱烧伤后第7、14天,低浓度石斛酚组、高浓度石斛酚组、阿柏西普组角膜新生血管面积占全角膜面积百分比均显著低于模型对照组(所有P<0.05)。碱烧伤后第14天,高浓度石斛酚组角膜混浊评分显著小于模型对照组(P<0.05),模型对照组、低浓度石斛酚组角膜厚度均显著高于正常对照组(所有P<0.001)。但是,高浓度石斛酚组、阿柏西普组角膜厚度与正常对照组相比较,均无显著性差异(所有P>0.05)。此外,低浓度石斛酚组、高浓度石斛酚组、阿柏西普组角膜组织中VEGF、IL-1β、TNF-α蛋白表达均显著低于模型对照组(所有P<0.01)。结论 结膜下注射石斛酚对碱烧伤大鼠角膜新生血管有抑制作用,并能促进角膜水肿的吸收。

脐带血间充质干细胞对角膜新生血管形成的抑制作用

目的:研究球结膜下注射人脐带血来源的间充质干细胞悬液治疗角膜碱烧伤新生血管的有效性。方法:本研究将30只新西兰家兔制备右眼碱烧伤模型,随机分实验组和对照组各15只(15眼)。实验组球结膜下注射脐带血来源间充质干细胞悬液,对照组不给予球结膜下治疗。采用裂隙灯生物显微镜观察并拍照记录注射后第5天,14天角膜新生血管情况,计算角膜新生血管面积。取两组角膜进行HE染色,观察角膜上皮愈合情况。结果:实验结果显示,第5天实验组和对照组之间的角膜新生血管面积差异没有显著性统计意义(P > 0.05),但第14天实验组的新生血管面积显著小于对照组(P < 0.05)。结论:本研究结果证明,球结膜下注射人脐带血间充质干细胞可抑制角膜新生血管并促进碱烧伤角膜上皮的修复。

MiR-497对角膜新生血管的抑制作用及其靶向STAT3调控机制

目的探讨miR-497在碱烧伤诱导的角膜新生血管(CNV)形成过程中的作用及其机制。方法选用健康清洁级6~8周龄野生型(WT)C57BL/6小鼠42只以及成功鉴定为CRISPR/Cas9介导的miR-497敲除(KO)和过表达转基因(TG)小鼠各42只,分别作为WT组、KO组和TG组。构建角膜碱烧伤模型,分别于造模后第3、7、14、21天行裂隙灯显微镜检查并进行角膜上皮损伤评分和角膜基质混浊评分,测量CNV面积;采用组织病理染色法观察角膜结构变化和炎症细胞的表达;采用免疫组织化学染色法检测角膜组织中CD31的表达;采用荧光素酶报告基因检测miR-497与信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)之间的靶向结合关系;采用实时荧光定量PCR法检测各时间点小鼠角膜组织中miR-497以及血管内皮生长因子A(VEGFA)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1 mRNA的相对表达量变化;采用Western blot法检测各组造模后14 d角膜组织中STAT3、p-STAT3蛋白的表达。结果小鼠角膜碱烧伤后出现角膜损伤和炎症细胞浸润,同时出现CNV。角膜上皮损伤评分、角膜基质混浊评分和CNV面积呈现先升高后降低的趋势,并在造模后第14天时达峰值。各组造模后不同时间点角膜上皮损伤评分、角膜基质混浊评分、CNV面积和CD31阳性细胞数总体比较差异均有统计学意义(F_(分组)=49.19、34.56、44.56、77.56,均P<0.01;F_(时间)=51.62、65.62、71.32、46.12,均P<0.01);其中KO组各时间点角膜上皮损伤评分、角膜基质混浊评分、CNV面积和CD31阳性细胞数均高于WT组和TG组,TG组各指标均低于WT组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在野生型STAT3共转染细胞中,miR-497组荧光素酶活性明显低于miR-阴性对照组和正常对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);在突变型STAT3转染细胞中,各组间荧光素酶活性比较,差异无统计学意义(F=0.69,P=0.56)。WT组、KO组、TG组造模后14 d角膜组织中miR-497的相对表达量分别为0.68±0.11、0.41±0.06、1.05±0.14,均明显低于造模前的1.00±0.04、0.56±0.07、1.34±0.11,差异均有统计学意义(均P<0.01)。造模后第14天,KO组STAT3及p-STAT3蛋白相对表达量均明显高于WT组和TG组,TG组各蛋白相对表达量低于WT组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。各组造模后各时间点VEGFA、TNF-α、IL-6、IL-1β和MCP-1 mRNA相对表达量均明显高于造模前,KO组各mRNA相对表达量明显高于同时间点WT组和TG组,TG组各mRNA相对表达量明显低于同时间点WT组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论MiR-497可抑制碱烧伤诱导的角膜炎症反应及CNV形成,其可能通过靶向STAT3抑制炎症信号通路的激活。

miR-296抑制自噬促进角膜新生血管生成

目的本研究探讨miR-296在角膜新生血管生成中的作用以及其对自噬蛋白LC3B-Ⅰ/Ⅱ、P62的调控作用。方法利用血管内皮生长因子诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立体外角膜新生血管模型。实验分为6组(Control组、模型组、VEGF+miR-296 mimic NC组、VEGF+miR-296 mimic组、VEGF+miR-296 inhibitor NC组、VEGF+miR-296 inhibitor组)。采用RT-qPCR检测miR-296在体外新生血管中的表达;转染过表达或者低表达miR-296,采用CCK-8、划痕实验、成管实验探究miR-296在体外角膜新生血管生成中的作用;采用KEGG和GO分析预测miR-296参与的通路及其靶基因的作用;采用Western blot检测miR-296对自噬蛋白LC3B-Ⅰ/Ⅱ、P62表达的影响。结果RT-qPCR结果显示,与Control组相比,模型组中miR-296表达升高[(2.84±0.23)比(1.32±0.04),t=6.42,P<0.01];与VEGF+miR-296 mimic NC组相比,VEGF+miR-296 mimic组细胞的吸光度[(1.24±0.02)比(1.07±0.01),t=7.55,P<0.05]、迁移数[(123.30±2.60)比(85.33±2.33),t=10.87,P<0.01]、分支数[(128.70±2.73)比(107.30±1.20),t=7.16,P<0.05]升高;与VEGF+miR-296 inhibitor NC组相比,VEGF+miR-296 inhibitor组细胞的吸光度[(0.82±0.01)比(1.06±0.02),t=11.69,P<0.05]、迁移数[(62.00±1.16)比(84.33±1.8),t=10.59,P<0.01]、分支数[(85.67±2.60)比(102.30±1.45),t=5.59,P<0.05]降低;KEGG和GO分析预测了miR-296及其靶基因可能参与血管生成类通路和自噬水平的调控;western blot显示,与VEGF+miR-296 mimic NC组相比,VEGF+miR-296 mimic组细胞中LC3B-Ⅱ蛋白表达降低[(1.27±0.05)比(1.57±0.05),t=4.46,P<0.05],p62蛋白表达升高[(1.30±0.02)比(0.85±0.04),t=10.91,P<0.01];相反,与VEGF+miR-296 inhibitor NC组相比,VEGF+miR-296 inhibitor组细胞中LC3B-Ⅱ蛋白表达升高[(2.37±0.01)比(0.04±0.03),t=11.78,P<0.01],p62蛋白表达降低[(0.52±0.02)比(0.85±0.03),t=9.24,P<0.01]。结论miR-296在体外可促进角膜新生血管生成,且此过程与自噬水平的下调有关。

LncRNA NEAT1调控miR-505-3p/VEGFA对碱烧伤大鼠角膜新生血管的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)核旁斑组装转录本1(NEAT1)调控微小RNA-505-3p(miR-505-3p)/血管内皮生长因子A(VEGFA)轴对碱烧伤大鼠角膜新生血管生成的影响及其作用机制。方法 144只SD大鼠随机分为对照组、模型组、sh-NC组、sh-NEAT1组、sh-NEAT1+antagomir-NC组和sh-NEAT1+miR-505-3p antagomir组,每组24只。除对照组外,其余组大鼠均建立碱烧伤模型。观察大鼠角膜新生血管情况,并计算角膜新生血管面积;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测大鼠角膜中LncRNA NEAT1、miR-505-3p、VEGFA mRNA表达;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠角膜病理形态学改变;免疫组织化学染色、Western blot检测大鼠角膜中VEGFA、CD31蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-505-3p与LncRNA NEAT1、VEGFA的靶向关系。结果 与对照组比较,模型组大鼠角膜新生血管面积增加,LncRNA NEAT1、VEGFA mRNA相对表达水平以及VEGFA、CD31蛋白表达水平均升高,miR-505-3p相对表达水平降低(均为P<0.05),角膜组织存在炎症细胞浸润、上皮细胞缺损等病理学损伤;与sh-NC组比较,sh-NEAT1组大鼠角膜新生血管面积减少,LncRNA NEAT1、VEGFA mRNA相对表达水平以及VEGFA、CD31蛋白表达水平均降低,miR-505-3p相对表达水平升高(均为P<0.05),角膜组织病理学损伤有所改善;与sh-NEAT1+antagomir-NC组比较,sh-NEAT1+miR-505-3p antagomir组大鼠角膜新生血管面积增加,VEGFA mRNA相对表达水平以及VEGFA、CD31蛋白表达水平均升高,miR-505-3p相对表达水平降低(均为P<0.05),角膜组织病理学损伤加重。经验证,大鼠角膜上皮细胞中miR-505-3p与LncRNA NEAT1、VEGFA均存在靶向关系。结论 干扰LncRNA NEAT1可能通过靶向上调miR-505-3p并下调VEGFA表达抑制碱烧伤大鼠角膜新生血管生成。

羊膜移植抑制兔角膜碱烧伤后新生血管增殖的研究

目的 比较采用保存羊膜和新鲜羊膜移植抑制角膜碱烧伤后新生血管增殖的效果 ;探讨应用保存人羊膜移植防治角膜碱烧伤后新生血管的手术时机。方法 制备角膜碱烧伤后新生血管增殖的动物模型 ;2 2只家兔 ( 2 2眼 )随机分为4组 :A组 ( 4眼 )作为对照组 ;B组 ( 6眼 )在碱烧伤的急性期行新鲜羊膜移植 ;C组 ( 6眼 )在急性期行保存人羊膜移植 ;D组 ( 6眼 )在瘢痕期行保存人羊膜移植。应用计算机彩色图像处理系统测定角膜新生血管面积。结果 3个移植组和对照组比较 ,角膜新生血管面积的差异均有显著性意义 (P <0 0 1) ;B组与C组比较无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;C组的新生血管面积明显少于D组 (P <0 0 1)。结论 保存羊膜和新鲜羊膜移植均能有效地抑制角膜碱烧伤后新生血管的增殖 ,治疗效果无显著性差异 ;在角膜碱烧伤的急性期施行羊膜移植防治新生血管增殖的效果要优于在瘢痕期手术。

血管内皮生长因子靶向抗体对大鼠角膜碱烧伤后新生血管抑制作用的研究

目的通过对角膜碱烧伤大鼠模型结膜下注射VEGF靶向抗体MIL60,观察其对角膜新生血管(corneal neovascularization,CoNV)生长的影响,初步探讨MIL60抑制大鼠CoNV生长的基本作用机制。方法建立碱烧伤诱导的SD大鼠CoNV模型(右眼造模),根据碱烧伤后第1天结膜下注射的药物不同将72只大鼠随机分为:25 mg·m L^(-1) MIL60组、地塞米松组、MIL60溶剂组和NaCl组。观察并记录CoNV生长情况及角膜的形态变化,通过软件分析Co NV的长度及累及面积。碱烧伤后第3天、第7天、第14天、第21天和第28天分别处死动物,取角膜组织行HE染色和免疫组织化学染色,同时检测角膜中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、VEGF受体-1(VEGF receptor-1,VEGFR-1)、VEGFR-2和基质金属蛋白酶-9(matrix metallopeptidase-9,MMP-9)蛋白的表达。结果在各个时间点,与MIL60溶剂组和NaCl组比较,地塞米松组、25 mg·m L^(-1) MIL60组CoNV面积和长度显著减少,差异均具有统计学意义(均为P<0.01);25 mg·m L^(-1)MIL60组的CoNV长度和面积与地塞米松组相当(均为P>0.05)。同时,MIL60还能有效降低角膜组织中VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2以及MMP-9蛋白的表达。结论 MIL60能显著抑制角膜碱烧伤后CoNV的生长,并且还能减轻碱烧伤引起的炎症反应。

兔角膜碱烧伤后VEGF的表达与新生血管的关系

目的:研究碱烧伤后角膜血管内皮生长因子(vascular endo-thelial growth factor,VEGF)的表达与角膜新生血管的关系。方法:普通家兔25只碱烧伤诱导角膜新生血管模型。碱烧伤后不同时间(1,3,5,7,14d)形态学分析来评价角膜新生血管的情况,免疫组化评价角膜VEGF的表达。结果:角膜碱烧伤后24hVEGF的表达开始升高,伤后5d达高峰(阳性表达最强,遍布全层),伤后7dVEGF的表达开始下降,14d后显著下降。碱烧伤后,角膜新生血管与VEGF的表达呈明显的平行关系。结论:碱烧伤后兔角膜VEGF的表达水平与新生血管的形成有相关性,并在其中发挥了重要作用。

碱烧伤大鼠角膜新生血管模型的初步探索

目的:探索相对稳定可靠的碱烧伤大鼠角膜新生血管(CNV)动物模型。方法:随机将48只S-D大鼠分成4组,每组12只,采用浸润1mol/L氢氧化钠的3mm滤纸片,分别制作烧灼时间为15、30、40、60s的碱烧伤鼠眼模型,每天裂隙灯观察角膜新生血管、角膜溃疡及前房积血情况,并在3、7、14、21、28d记录上述指标。结果:伤后3d,新生血管开始侵入角膜;7d,新生血管生长活跃,向中央烧灼区侵入;14d,新生血管达到生长高峰;14d后新生血管逐渐回退。烧伤后7d,15、30、40和60s组CNV诱导率分别为16.7%、75%、100%、100%,各实验组角膜新生血管诱导率随着烧伤时间延长而增加。。15sCNV散在稀疏分布,长度较短。30s组CNV接近烧灼区边缘,分布局限。40s组CNV致密,连接成网状,生长均匀一致。30s组和40s组间CNV长度和面积差异均具有统计学差异(P<0.05)。40s组前房积血率16.7%,表现为虹膜血管点片状渗血;60s组前房积血率83.3%,积血量多严重影响到角膜新生血管观察,两组前房积血发生率具有统计学差异(P<0.05)。60s组角膜溃疡率50%,穿孔率33.3%。结论:采用浸润1mol/L氢氧化钠溶液的3mm滤纸片烧灼中央角膜40s的大鼠模型是研究化学性角膜新生血管较理想的动物模型。