角蛋白酶基因kerB的提取、克隆及表达

从角蛋白酶产生菌株地衣芽孢杆菌L-25中提取基因组DNA,借助特定引物通过聚合酶链反应(PCR)扩增得到kerB基因片段.扩增后的kerB片段通过分子生物学方法克隆到产酶缺陷型枯草芽孢杆菌DB104菌株敏感细胞中进行表达.结果表明,表达成功的FD-8菌株(DB104/pLK18)可以在羽毛培养基上生长并完全水解羽毛.

嗜麦芽窄食单胞菌S．maltophilia YHJ-1角蛋白酶基因的克隆表达及活性鉴定

从长期堆积废弃羽毛的土壤中分离得到一株高效降解羽毛的菌株YHJ—1，经16S rDNA序列分析鉴定为嗜麦芽窄食单胞菌，命名为嗜麦芽窄食单胞菌S．mahophilia YHJ-1。以菌株YHJ-1基因组为模板，通过PCR方法克隆了该菌的角蛋白酶基因（GenBank登录号：FJ765514），命名为kerD。将其编码区插入到表达载体pET28a（＋）中，转化大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3），筛选获得重组菌。通过对重组菌破碎上清液酶活测定和SDS—PAG分析，证实该酶在大肠杆菌中获得了高效表达，但酶活较低，最高酶活为10．5U／mL。酶学性质研究结果表明，该酶的最适反应温度为50℃，最适反应pH值为7．8，为中性酶。实验结果为嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶的基础理论和应用研究奠定了基础。