miR-21-3p靶向STAT3促进银屑病角质形成细胞增殖的研究

目的探讨miR-21-3p及其靶蛋白信号转导子和转录激活子3蛋白(STAT3)在寻常型银屑病发生过程中角质形成细胞的作用意义。方法对皮肤组织中STAT3蛋白表达情况的检测选择免疫组织化学法,对健康人群皮肤组织及银屑病患者皮损组织miR-21-3p表达量的检测选择实时荧光定量PCR法,靶基因STAT3和miR-21-3p关系的检测选择双荧光素酶报告基因。化学合成miR-21-3p模拟物、抑制剂,瞬时转染HaCaT细胞,对不同分组细胞进行CCK8、流式细胞凋亡实验,探究分析miR-21-3p调控细胞表型主要作用。对于转染细胞中STAT3蛋白表达情况,选择Western Blot检测。结果寻常型银屑病患者皮肤组织中miR-21-3p呈高表达(P<0.05)。STAT3免疫组化阳性表达定位于细胞浆,在银屑病组患者皮损组织阳性表达率为82.22%(37/45)高于正常皮肤组织(P<0.01)。双荧光素酶报告基因显示miR-21-3p与STAT3存在结合,呈靶向关系。miR-21-3p mimics促进HaCaT细胞增殖活性,抑制细胞凋亡;miR-21-3p inhibitor抑制HaCaT细胞的增殖能力,促使细胞趋向凋亡。miR-21-3p转染HaCaT过表达可对STAT3蛋白表达量产生促进,相反则降低(F=48.632,P<0.01)。结论miR-21-3p呈现正调控关系,能够靶向调控STAT3;两者共同作用参与并加重银屑病的病程,并抑制患者细胞凋亡,调节角质形成细胞增殖活性。

白芨外泌体的分离及对体外人永生化角质形成细胞(Hacat)的凋亡保护研究

探索鲜白芨(Bletilla striata)外泌体对体外人永生化角质形成细胞(Hacat)的生物活性,为其在护肤品上的开发提供数据。聚乙二醇(PEG)沉淀法提取白芨外泌体,透射电镜鉴定,BCA法测蛋白浓度;细胞计数试剂(Cell Counting Kit-8,CCK8)法检测Hacat细胞存活率,流式双染检测凋亡,蛋白印迹法检测凋亡相关通路蛋白。白芨外泌体呈茶杯状具双层膜,平均粒径69.63 nm,每克鲜白芨含外泌体浓度为5.24E+8 Particles,内含蛋白19.53μg;白芨外泌体(≥5μg/mL)可显著提高体外Hacat细胞存活率(P<0.05);10μg/mL白芨外泌体处理48h,可显著降低H_(2)O_(2)氧化造模引起的Hacat细胞早凋亡、晚凋亡和总凋亡的细胞比例(P<0.01),同时,模型组caspase-9和caspase-3表达显著上升,外泌体处理能显著降低其表达,而Bcl-2表达在组间无差异(P<0.05)。PEG沉淀法分离的白芨外泌体,可促进体外Hacat生长,抑制H_(2)O_(2)引起的细胞凋亡且与蛋白caspase-9和caspase-3相关。

不同来源成纤维细胞对角质形成细胞再上皮化影响

目的比较人牙龈及皮肤来源成纤维细胞条件培养基对永生化角质形成细胞再上皮化作用的差异,分析成纤维细胞促进再上皮化作用的关键因子,探究牙龈来源成纤维细胞在创伤修复中的可能应用。方法分别制备人牙龈成纤维细胞(hGFs)和人真皮成纤维细胞(hDFs)条件培养基(CM),添加到人永生化角质形成细胞(Human keratinocyte cells,HaCaT)中,采用CCK-8、EdU染色检测HaCaT细胞增殖能力;细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力;通过ABplex多因子检测及酶联免疫吸附法(ELISA)对hGFs、hDFs分泌的多种与创伤修复相关的生长因子、细胞因子和趋化因子进行定量分析。结果CCK-8、EdU染色、细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验结果表明:2种条件培养基均能显著提高HaCaT细胞的增殖及迁移能力(P<0.05),hGFs-CM对HaCaT细胞增殖和迁移能力的促进作用显著强于hDFs-CM(P<0.01);hGFs和hDFs分泌的因子有较大的差异,其中hGFs分泌的生长因子如肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)明显多于hDFs。结论人牙龈来源成纤维细胞较人皮肤来源成纤维细胞的条件培养基对角质形成细胞的增殖和迁移能力的有更强的促进作用,可能与其旁分泌产生的因子不同有关。

升麻鳖甲汤对银屑病小鼠表皮炎症及角质形成细胞增殖的影响

目的:探讨升麻鳖甲汤对银屑病小鼠表皮炎症及角质形成细胞增殖的影响及机制。方法:将48只BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、甲氨蝶呤组、升麻鳖甲汤低剂量组、升麻鳖甲汤中剂量组、升麻鳖甲汤高剂量组,每组8只。除空白组外,其余各组采用咪喹莫特造模并予相应药物干预,观察小鼠银屑病皮损严重程度指数(PASI)评分;干预结束后处死小鼠,取小鼠皮肤HE染色观察皮损部病理变化并评定Baker评分;采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测小鼠皮损部p-STAT3、STAT3蛋白相对表达量;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定皮损部白细胞介素-17(IL-17)、IL-22、维甲酸相关孤儿核受体-γt(ROR-γt)蛋白含量;采用免疫组化法检测小鼠皮损部Ki-67的阳性细胞表达率。结果:模型组小鼠PASI评分、Baker评分均高于空白组(P<0.01);升麻鳖甲汤中剂量组、升麻鳖甲汤高剂量组、甲氨蝶呤组小鼠PASI评分、Baker法评分均低于模型组(P<0.01)。模型组小鼠皮损部p-STAT3/STAT3高于空白组(P<0.05);升麻鳖甲汤高剂量组、甲氨蝶呤组小鼠皮损部p-STAT3/STAT3均低于模型组(P<0.05)。模型组小鼠皮损部IL-17、IL-22、ROR-γt蛋白含量及Ki-67阳性细胞率高于空白组(P<0.01);甲氨蝶呤组小鼠皮损部IL-17、IL-22、ROR-γt蛋白含量及Ki-67阳性细胞率低于模型组(P<0.01);升麻鳖甲汤高剂量组小鼠皮损部IL-17蛋白含量低于模型组(P<0.01);升麻鳖甲汤中、高剂量组小鼠皮损部IL-22、ROR-γt蛋白含量及Ki-67阳性细胞率均低于模型组(P<0.01)。结论:升麻鳖甲汤可能通过抑制STAT3信号通路活性,抑制皮损部IL-17、IL-22、ROR-γt分泌及角质形成细胞增殖,发挥治疗银屑病的作用。

中药有效成分对银屑病角质形成细胞凋亡的调控作用及机制的研究进展

细胞凋亡是一种程序性细胞死亡过程,具有维持皮肤平衡的功能。在银屑病中,细胞凋亡障碍表现为角质形成细胞异常增殖。传统中药对角质形成细胞凋亡具有调控作用,以抑制银屑病表皮过度增殖、促进表皮正常分化、维护表皮稳态,且具有不良反应少、作用靶点多的优势。因此,该文对中药中多种有效成分通过干预相关因子、信号通路等以诱导银屑病角质形成细胞凋亡的具体机制进行总结分析,以期为中药治疗银屑病提供参考。

角质形成细胞Wnt5a调控MMP9参与CRPS-Ⅰ型外周敏化机制研究

目的探究皮肤角质形成细胞Wnt5a通过靶向调控基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase⁃9,MMP9)的表达参与复杂区域疼痛综合征(complex regional pain syndrome,CRPS)⁃Ⅰ型外周敏化的机制,寻找该慢性疼痛的潜在治疗策略。方法本研究分为两部分,第一部分为体外实验。体外培养人永生化角质形成细胞HaCaT进行氧糖剥夺/复氧(oxygen⁃glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)处理,初步观察OGD/R早期(24 h内)线粒体损伤及膜电位变化,并探究给予不同浓度Wnt5a抑制剂Box5对MMP9的影响。第二部分为动物实验。将大鼠随机分为慢性缺血后疼痛(chronic postischemia pain,CPIP)组、Box5(20)组、Box5(40)组和对照组,每组8只,CPIP组、Box5(20)组、Box5(40)组先建立大鼠患肢缺血再灌注CPIP模型,模拟CRPS⁃Ⅰ型病理生理过程,Box5(20)组和Box5(40)组在此基础上分别足底注射20μmol/L和40μmol/L Box5溶液100μL,对照组和CPIP组则分别注射生理盐水100μL。通过疼痛行为学测定观察4组大鼠2周内不同时间点(D1,D2,D4,D10,D14)机械痛和热痛阈值变化情况。HE染色观察大鼠皮肤炎症浸润及角化情况,免疫荧光染色观察4组MMP9的表达情况,ELISA检测4组背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的IL⁃1β及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor⁃α,TNF⁃α)水平。结果体外实验:HaCaT细胞进行OGD/R处理后,MMP9平均荧光强度显著增加(P<0.001);透射电镜下观察到OGD/R组出现线粒体明显萎缩,线粒体膜电位检测显示,与对照组相比,OGD/R组提示线粒体膜电位下降明显(P=0.027)。动物实验:与OGD/R组相比,仅Box5(40)组线粒体膜电位上升具有统计学差异(P=0.046)。行为学检测发现CPIP组大鼠术后各时间点(D1,D2,D4,D10,D14)机械痛阈值和热痛阈值均显著降低(P均<0.05)。HE染色提示CPIP组大鼠患足真皮层出现大量炎症细胞浸润,表皮出现过度角化,颗粒层及棘层厚度显著增加(P<0.001)。免疫荧光试验显示,CPIP组角质形成细胞MMP9荧光强度显著增加(P<0.001);与CPIP组相比,Box5(20)组(P=0.002)和Box5(40)组(P<0.001)MMP9荧光强度均显著下降。ELISA检测结果显示,CPIP组IL⁃1β(P=0.048)和TNF⁃α浓度(P=0.002)显著升高;与CPIP组相比,Box5(40)组IL⁃1β(P=0.047)和TNF⁃α浓度(P=0.047)显著下降。结论外周局部缺血再灌注损伤可导致角质形成细胞MMP9过度表达,引起CRPS⁃Ⅰ型外周敏化。靶向抑制Wnt5a/MMP9可逆转CPIP大鼠疼痛行为,为临床治疗慢性痛提供了参考依据。

miR-410-3p通过靶向YAP1调节IL-22诱导的人角质形成细胞增殖和凋亡

目的:探究miR-410-3p在银屑病中的表达及其对角质形成细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:收集12例寻常型银屑病患者和12例健康志愿者空腹静脉血,qRT-PCR检测血清miR-410-3p表达。将常规培养的人角质形成细胞HaCaT分为:对照组、IL-22组、miR-NC组和miR-410-3p组。后3组使用100 ng/ml IL-22刺激24 h,体外建立银屑病模型。miRNC组和miR-410-3p组加入IL-22前48 h分别转染miR-NC和miR-410-3p,对照组不进行任何处理。CCK-8分析细胞活力,BrdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR检测miR-410-3p和YAP1 mRNA表达,Western blot分析YAP1蛋白表达。Starbase软件和双荧光素酶报告基因分析miR-410-3p和YAP1的靶向关系。转染miR-410-3p的HaCaT银屑病细胞模型中同时过表达YAP1,检测细胞活力和凋亡。结果:miR-410-3p在银屑病患者血清中的表达显著低于健康志愿者(P<0.05)。与对照组相比,IL-22组miR-410-3p表达降低,YAP1 mRNA和蛋白表达增加,细胞活力增强,BrdU阳性细胞增多,凋亡率降低(均P<0.05);与IL-22组相比,miR-410-3p组miR-410-3p表达增加,YAP1 mRNA和蛋白表达减少,细胞活力减弱,BrdU阳性细胞减少,凋亡率升高(均P<0.05)。此外,本实验证实miR-410-3p与YAP1存在靶向结合关系,过表达YAP1可逆转miR-410-3p对IL-22诱导的HaCaT细胞增殖和凋亡的影响。结论:miR-410-3p在银屑病患者中表达减少,上调其表达可通过靶向YAP1抑制IL-22诱导的角质形成细胞增殖,促进细胞凋亡。

枸杞籽油对中波紫外线诱导人永生化角质形成细胞光损伤的防护作用

明确枸杞籽油对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)诱导人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes,HaCaT)光损伤的防护作用,进一步提高枸杞籽油的利用率。采用GB 5009.168—2016、GB 5009.83—2016、DB64/T 1514—2017、《保健食品中功效成分检测方法》和GB 5009.82—2016(第一法)提供的方法分别测定枸杞籽油主要活性成分脂肪酸、β-胡萝卜素、玉米黄质、叶黄素、谷甾醇以及维生素E的含量,利用HaCaT细胞构建UVB光损伤模型,检测枸杞籽油对UVB诱导的光损伤HaCaT细胞存活率、凋亡率、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、凋亡相关细胞因子和炎症因子的影响。结果表明,与模型组相比,枸杞籽油可明显提高UVB光损伤HaCaT细胞的存活率(P<0.05),促进抗凋亡因子B淋巴细胞瘤/白血病-2 mRNA的表达(P<0.01),抑制细胞内ROS的生成(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.01),抑制细胞凋亡相关因子Bcl-2相关X蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9和p53 mRNA的表达(P<0.01),减少炎症因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β和白细胞介素-6的蛋白含量及mRNA表达(P<0.05)。结果表明枸杞籽油可通过调控细胞凋亡及减轻炎症反应来缓解UVB所致HaCaT细胞光损伤。

角质形成细胞与2型炎症互作在特应性皮炎发病机制中的作用

特应性皮炎(AD)患者皮肤屏障功能受损,与角质形成细胞(KC)异常密切相关。在外界因素的刺激下,KC释放炎症因子、趋化因子等炎症介质,作用于2型免疫细胞,进而引起皮肤免疫向2型炎症方向偏移。反之,2型炎症进一步加剧皮肤屏障破坏,故而形成恶性循环。因此,KC和2型炎症之间的互作是促进AD发生发展、加剧炎症反应与瘙痒的重要因素。目前,AD治疗领域的靶向创新药物如生物制剂和小分子药的抗炎作用已逐步得到证实,部分研究表明他们还具有修复皮肤屏障的作用。针对KC与2型炎症互作的研究不仅有助于理解AD的发病机制,也有望优化疾病的治疗方案,提供更多治疗参考。

皮肤镜和反射式共聚焦显微镜在角质形成细胞皮肤肿瘤中的应用

角质形成细胞皮肤肿瘤(KSC)是一类发病率逐年上升的肿瘤,与年紫外线辐射量直接相关,根据不同阶段可以分为光线性角化病(actinic keratosis, AK)、鲍温病(Bowen′s disease, BD)和侵袭性鳞状细胞癌(invasive squamous cell carcinoma, SCC)。KSC的诊断主要通过组织病理学确诊,但早期筛查以及后期随访,无创诊断显得尤为重要。皮肤镜(dermoscopy)和反射式共聚焦显微镜(reflectance confocal microscopy, RCM)属于在体观测皮肤表面以及表皮以下细微结构的无创诊断技术,在皮肤疾病诊断中具有极高的应用价值。本文主要总结并探讨KSC在皮肤镜和RCM下的表现特征以及皮肤镜和RCM在KSC的诊断、筛查和随访中的应用。

紫铆花素对人黑色素瘤细胞A375与人永生化角质形成细胞HaCaT共培养细胞生物学活性的影响

目的探讨紫铆花素对人黑色素瘤细胞A375与人永生化角质形成细胞HaCaT共培养细胞生物学活性的影响。方法建立A375细胞与HaCaT细胞的共培养细胞体系,实验分为对照组(等体积培养液),紫铆花素低、中、高剂量组(以下简称低、中、高剂量组,0.5,1.0,5.0μg/L)。采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;采用流式细胞仪检测细胞的周期分布和线粒体膜电位;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测干细胞因子(SCF)和其受体c-Kit,以及小眼畸形相关转录因子(MITF)的mRNA表达水平;采用Western blot法检测细胞酪氨酸酶相关蛋白1,2(TRP-1,TRP-2)及SCF,c-Kit,MITF的蛋白表达水平。结果与对照组比较,中、高剂量组细胞的增殖率均显著升高(P<0.01);与对照组比较,各剂量组G0/G1期细胞比例均显著降低,S期和G_(2)/M期细胞比例均显著升高(P<0.01),高线粒体膜电位细胞比例均显著升高(P<0.05或P<0.01),SCF,c-Kit,MITF的mRNA表达水平及SCF,c-Kit,MITF,TRP-1,TRP-2的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论紫铆花素可能通过调节SCF,cKit,MITF的表达而影响A375细胞与HaCaT细胞共培养细胞的增殖、细胞周期和线粒体膜电位等细胞生物学活性。

土大黄提取物对人永生化表皮角质形成细胞(HaCaT)增殖的影响

目的土大黄根醇提物化学组分分析及其对人永生化表皮角质形成细胞(HaCaT细胞)增值的影响。方法利用D101大孔树脂、HPLC对土大黄根70%乙醇提取物(原粗提取物)进行分离纯化、主要化学组分分析,同时观察对HaCaT细胞增殖的作用。结果通过D101大孔树脂处理得到了30%、50%、70%、90%乙醇洗脱部位的出膏率分别为5.4%、14.8%、11%、0.72%。HPLC检测得知,30%洗脱部位占0.151%,成分为大黄素;50%洗脱部位占1.952%,成分为芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚;70%洗脱部位占21.409%,成分为芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚;90%洗脱部位占1.927%,成分为大黄酸、大黄素、大黄素甲醚;土大黄根70%乙醇提取物(原粗提取物)占1.591%,成分为芦荟大黄素和大黄酸;对HaCaT细胞增殖的抑制作用由强到弱依次为90%乙醇洗脱部位、70%乙醇洗脱部位、50%乙醇洗脱部位、70%乙醇提取物(原粗提取物)、30%乙醇洗脱部位,抑制率分别为17.55%、16.66%、10.99%、10.25%和7.86%。结论土大黄根醇提物70%乙醇洗脱部位是最佳富集部位(21.409%)、也是最佳洗脱部位。土大黄根70%乙醇提取物(原粗提取物)及其不同洗脱部位均对HaCaT细胞增殖具有一定的抑制作用,其作用可能与土大黄所含的蒽醌类成分有关,提示土大黄具有治疗银屑病的作用。

莪术醇可能通过Notch信号通路影响角质形成细胞的增殖、迁移、凋亡

目的:探讨莪术醇对角质形成细胞增殖、迁移、凋亡的作用及其相关的分子机制。方法:体外分离培养银屑病角质形成细胞,使用浓度0、10、40、80 mg·L^(-1)莪术醇处理细胞,CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Notch 1、Hes 1蛋白表达水平;Transwell小室、伤口愈合实验检测细胞迁移。以0 mg·L^(-1)莪术醇作为对照,将80 mg·L^(-1)莪术醇、Notch信号通路抑制剂DAPT加入80 mg·L^(-1)莪术醇处理的细胞内,通过上述方法检测加入Notch通路抑制剂对银屑病角质形成细胞增殖、迁移和凋亡的影响。多组间比较通过单因素方差分析,组内间比较使用LSD-t检验。结果:莪术醇呈剂量效应降低银屑病角质形成细胞活性、迁移率、迁移细胞数和Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达,增加凋亡率和Bax、Cleaved-Caspase3、Cleaved-Caspase9、Notch 1、Hes 1蛋白表达(P<0.05)。与莪术醇组比较,莪术醇+DAPT组细胞活性、迁移率、迁移细胞数和Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达增加,凋亡率和Bax、Cleaved-Caspase3、Cleaved-Caspase9蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:莪术醇可能通过激活Notch信号通路抑制银屑病角质形成细胞的增殖、迁移,并诱导细胞凋亡。

银屑病血清与M5因子对角质形成细胞炎症和增殖影响的比较研究

目的探讨银屑病血清与五联因子(M5)对角质形成细胞炎症和增殖影响的差异性。方法分别用健康人、银屑病患者血清和M5因子对人类永生化角质形成细胞(Human immortalized keratinocyte cell line,HaCaT)进行培养,通过CCK-8监测细胞的增殖情况,并采用RT-qPCR检测各组HaCaT细胞中炎症因子白介素1β/8/21/23(IL-1β/8/21/23)与增殖标志物角蛋白6/16(K6/K16)和细胞相关抗原67(Ki67)的mRNA表达水平。结果健康人、银屑病血清和M5因子均能有效促进HaCaT细胞的生长,且银屑病血清和M5因子对细胞生长的促进作用强于健康人血清。与M5因子相似,银屑病患者血清显著促进细胞中炎症因子IL-1β、IL-8、IL-23和增殖标志物K6、Ki67的表达;与M5因子不同的是,银屑病患者血清对炎症因子IL-21的促进作用增强,而对增殖标志物K16的促进作用减弱。结论银屑病患者血清微环境对角质形成细胞增殖和炎症反应的促进作用高于健康人,且与M5因子相似,可以用于构建银屑病角质形成细胞模型。

基于Notch信号通路探讨银屑平丸含药血清对TNF-α诱导的人表皮角质形成细胞相关蛋白及炎症因子的影响

目的基于调节Notch信号通路探讨银屑平丸含药血清对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人表皮角质形成细胞相关蛋白及炎症因子的影响。方法根据中药血清药理学方法制备银屑平丸含药血清、阿维A含药血清,将血清分为5%、10%、20%3个浓度对人表皮角质形成细胞进行干预,采用CCK-8试剂筛选含药血清最佳作用浓度;建立TNF-α诱导的银屑病细胞损伤模型,设置空白组、模型组、银屑平丸含药血清组、阿维A组、模型+γ-分泌酶抑制剂(DAPT)组、银屑平丸含药血清+DAPT组。采用ELISA法检测各组细胞上清液中TNF-α、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)水平,采用Real-timePCR法检测Notch信号通路Notch1,Jagged-1表达,免疫荧光法检测各组细胞内皮蛋白(Involucrin)表达水平。结果TNF-α最佳作用浓度为10 ng·mL^(-1),银屑平丸含药血清最佳作用浓度为20%。与空白组比较,模型组可使各组细胞上清TNF-α、IL-6、IL-8水平升高(均P<0.0001),Notch1、Jagged-1表达上调(均P<0.0001),并使细胞Involucrin荧光表达增强(P<0.0001);与模型组比较,银屑平丸含药血清组可使细胞上清TNF-α、IL-6、IL-8水平降低(P<0.05,P<0.01),使Notch信号通路Notch1、Jagged-1表达下调(均P<0.0001),并使细胞Involucrin荧光表达减弱(P<0.05);与银屑平丸含药血清组比较,银屑平丸含药血清+DAPT组细胞上清TNF-α、IL-6、IL-8水平降低(P<0.0001,P<0.05,P<0.01),Notch1、Jagged-1表达下调(均P<0.0001),细胞Involucrin荧光表达减弱(P<0.05)。结论银屑平丸含药血清可抑制TNF-α诱导的人表皮角质形成细胞增殖,降低炎症因子表达水平及人表皮角质形成细胞相关蛋白表达,其机制可能与调节Notch信号通路有关。

黄芩提取物抑制IL⁃22诱导的人角质形成细胞系HaCaT过度增殖

目的探究黄芩提取物通过miR-369-3p对白介素-22(IL-22)诱导的人角质形成细胞系HaCaT增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法将HaCaT细胞分为对照组、IL-22组(细胞模型,100 ng/mL的IL-22培养细胞)、低、中和高剂量组(黄芩提取物50、100、150μg/mL)、anti-miR-NC干预组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-369-3p干预组(转染anti-miR-369-3p)、miR-NC+高剂量组(转染miR-NC,高剂量黄芩提取物培养细胞)、miR-369-3p+高剂量组(转染miR-369-3p,高剂量黄芩提取物培养细胞)。MTT法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;Western blot检测cleaved caspase-3蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6含量;RT-qPCR检测miR-369-3p表达。结果与对照组相比,IL-22组细胞存活率、miR-369-3p表达、TNF-α、IL-6表达升高(P<0.05),细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达的差异无统计学意义;与IL-22组相比,低、中和高剂量组细胞存活率、miR-369-3p表达、TNF-α、IL-6表达降低,细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。与anti-miR-NC干预组相比,anti-miR-369-3p干预组细胞存活率、TNF-α、IL-6表达降低,细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。过表达miR-369-3p可以部分逆转黄芩提取物对银屑病细胞模型的细胞活性,凋亡以及炎性水平的作用(P<0.05)。结论黄芩提取物可能通过抑制miR-369-3p表达,抑制IL-22诱导的人角质形成细胞过度增殖和炎性反应,并促进其凋亡。

川陕花椒根皮提取物对人角质形成细胞辐射损伤的防护作用

放射性皮肤损伤是接受放射治疗的患者常见的并发症,其发病机制复杂,患者个体化差异较大,临床上防治药物疗效良莠不齐,因而积极开发防治放射性皮肤损伤的药物仍十分必要。花椒是中医临床上用于治疗皮肤疾病的常用药,本文研究川陕花椒根皮提取物(ZPE)对人皮肤角质形成细胞HaCaT的辐射防护作用,并初步探讨其机制。研究结果显示,2 mg/mL ZPE对8.0 Gyγ射线照射引起的HaCaT细胞损伤具有防护作用,可减少细胞凋亡和坏死,其作用机制可能与降低细胞炎症因子IL-1β和IL-6的分泌、细胞内ROS水平以及p38和JNK蛋白磷酸化水平有关。本文的研究可为放射性皮肤损伤防治药物的研发提供理论依据。

基于绵羊角质形成细胞探究SHH通过Krox20调节IGFBP5的表达影响羊毛弯曲

本研究旨在探究音猬因子(Sonic hedgehog,SHH)与羊毛弯曲形成的关系及其调控机制。本研究通过培养原代绵羊角质形成细胞,构建过表达和沉默载体,利用细胞转染、免疫共沉淀、实时荧光定量PCR和Western blot等方法探究SHH与羊毛弯曲的关系,分析SHH是否通过早期生长应答基因2(early growth response 2,EGR2/Krox20)调控胰岛素样生长因子结合蛋白5(insulin-like growth factor binding proteins 5,IGFBP5)来影响羊毛弯曲。结果显示,体外成功分离培养绵羊原代角质形成细胞,显微镜下呈“铺路石”样,免疫荧光鉴定结果呈阳性表达,CCK-8结果表明细胞生长曲线呈“S”型,符合细胞增殖趋势;过表达和沉默SHH后,羊毛弯曲相关基因KRT71、β-catenin和TCHH的表达量显著升高和降低;过表达Krox20后,羊毛弯曲相关基因的表达量显著升高;免疫共沉淀试验表明,在绵羊角质形成细胞中SHH可以与Krox20相互作用且正调控Krox20;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,过表达SHH后显著上调IGFBP5的相对表达量,沉默SHH后显著下调IGFBP5的相对表达量;过表达Krox20后IGFBP5的相对表达量显著升高。本研究表明,在绵羊角质形成细胞中SHH通过Krox20调控IGFBP5来影响羊毛弯曲,结果为毛发弯曲性状形成的相关分子调控机制提供了理论依据。

4种品系小鼠角质形成细胞原代培养比较研究

目的体外分离、培养并鉴定成年小鼠背部皮肤角质形成细胞(KC);对比4种品系小鼠KC的增殖与分化能力。方法剪取4种品系成年小鼠背部皮肤,剥离皮下脂肪组织,0.25%胰蛋白酶消化获得KC;免疫荧光法鉴定KC;显微镜下观察细胞生长状况;设计不同的种板时间和密度,使用CCK-8法、EdU和高内涵法检测细胞增殖活力;通过Western blot检测4种成年小鼠KC分化情况。结果对4种品系成年小鼠背部相同面积的皮肤组织进行胰蛋白酶消化,昆明(Kunming,KM)小鼠提取的KC数量最低,C57BL/6提取的细胞数量最多;BALB/c、KM、裸小鼠分别以8×10^(3)个/孔的密度铺板增殖效率较高,C57BL/6以1.6×10^(4)个/孔的密度铺板增殖效率较高;4种品系小鼠,BALB/c小鼠原代KC较C57BL/6小鼠原代KC增殖能力弱,分化程度差异无统计学意义。结论采用简便易行的方法成功分离并比较4种成年小鼠背部皮肤原代KC的增殖和分化能力,为皮肤相关疾病模型小鼠的品系选择提供一定实验依据。

重楼皂苷Ⅰ对紫外损伤的人永生化角质形成细胞(HaCaT)的保护作用研究

【目的】研究重楼皂苷Ⅰ(polyphyllinⅠ,PPⅠ)对急性中波紫外线(medium wave ultraviolet rays,UVB)损伤的人永生化角质形成细胞(HaCaT)的保护作用及分子机制,为滇重楼在日化用品中的应用提供理论依据。【方法】采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度PPⅠ处理HaCaT的存活率,筛选出无毒性PPⅠ浓度;将HaCaT细胞随机分为4组:空白对照组、UVB处理组(21.6 mJ/cm^(2))、0.250μmol/L PPⅠ+UVB处理组和0.500μmol/L PPⅠ+UVB处理组,采用结晶紫染色法探究2种浓度PPⅠ对UVB处理后HaCaT细胞增殖的影响;采用蛋白质免疫印迹法检测HaCaT细胞凋亡蛋白多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP1)、cleaved-PARP1、乙酰基-赖氨酸、K68位点的线粒体超氧化物歧化酶重组蛋白(mitochondrial recombinant superoxide dismutase 2,K68-SOD2)和沉默调节3蛋白(sirtuin3,SIRT3)的表达。【结果】与空白对照组相比,UVB组的HaCaT细胞存活率显著下降,cleaved-PARP1和K68-SOD2表达显著增加,而SIRT3表达显著降低,造模成功。与UVB组相比,PPⅠ各剂量处理组可提高UVB照射后HaCaT细胞的存活率,增加SIRT3的表达,降低K68-SOD2的乙酰化水平,进而减少凋亡蛋白cleaved-PARP1的表达,降低细胞的凋亡水平。【结论】PPⅠ可能通过增强SIRT3活性使SOD2去乙酰化,以增强SOD2活性,减轻UVB照射HaCaT细胞引起的氧化应激和凋亡,从而对HaCaT细胞起到保护作用。