miR-21-3p靶向STAT3促进银屑病角质形成细胞增殖的研究

目的探讨miR-21-3p及其靶蛋白信号转导子和转录激活子3蛋白(STAT3)在寻常型银屑病发生过程中角质形成细胞的作用意义。方法对皮肤组织中STAT3蛋白表达情况的检测选择免疫组织化学法,对健康人群皮肤组织及银屑病患者皮损组织miR-21-3p表达量的检测选择实时荧光定量PCR法,靶基因STAT3和miR-21-3p关系的检测选择双荧光素酶报告基因。化学合成miR-21-3p模拟物、抑制剂,瞬时转染HaCaT细胞,对不同分组细胞进行CCK8、流式细胞凋亡实验,探究分析miR-21-3p调控细胞表型主要作用。对于转染细胞中STAT3蛋白表达情况,选择Western Blot检测。结果寻常型银屑病患者皮肤组织中miR-21-3p呈高表达(P<0.05)。STAT3免疫组化阳性表达定位于细胞浆,在银屑病组患者皮损组织阳性表达率为82.22%(37/45)高于正常皮肤组织(P<0.01)。双荧光素酶报告基因显示miR-21-3p与STAT3存在结合,呈靶向关系。miR-21-3p mimics促进HaCaT细胞增殖活性,抑制细胞凋亡;miR-21-3p inhibitor抑制HaCaT细胞的增殖能力,促使细胞趋向凋亡。miR-21-3p转染HaCaT过表达可对STAT3蛋白表达量产生促进,相反则降低(F=48.632,P<0.01)。结论miR-21-3p呈现正调控关系,能够靶向调控STAT3;两者共同作用参与并加重银屑病的病程,并抑制患者细胞凋亡,调节角质形成细胞增殖活性。

miR-410-3p通过靶向YAP1调节IL-22诱导的人角质形成细胞增殖和凋亡

目的:探究miR-410-3p在银屑病中的表达及其对角质形成细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:收集12例寻常型银屑病患者和12例健康志愿者空腹静脉血,qRT-PCR检测血清miR-410-3p表达。将常规培养的人角质形成细胞HaCaT分为:对照组、IL-22组、miR-NC组和miR-410-3p组。后3组使用100 ng/ml IL-22刺激24 h,体外建立银屑病模型。miRNC组和miR-410-3p组加入IL-22前48 h分别转染miR-NC和miR-410-3p,对照组不进行任何处理。CCK-8分析细胞活力,BrdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR检测miR-410-3p和YAP1 mRNA表达,Western blot分析YAP1蛋白表达。Starbase软件和双荧光素酶报告基因分析miR-410-3p和YAP1的靶向关系。转染miR-410-3p的HaCaT银屑病细胞模型中同时过表达YAP1,检测细胞活力和凋亡。结果:miR-410-3p在银屑病患者血清中的表达显著低于健康志愿者(P<0.05)。与对照组相比,IL-22组miR-410-3p表达降低,YAP1 mRNA和蛋白表达增加,细胞活力增强,BrdU阳性细胞增多,凋亡率降低(均P<0.05);与IL-22组相比,miR-410-3p组miR-410-3p表达增加,YAP1 mRNA和蛋白表达减少,细胞活力减弱,BrdU阳性细胞减少,凋亡率升高(均P<0.05)。此外,本实验证实miR-410-3p与YAP1存在靶向结合关系,过表达YAP1可逆转miR-410-3p对IL-22诱导的HaCaT细胞增殖和凋亡的影响。结论:miR-410-3p在银屑病患者中表达减少,上调其表达可通过靶向YAP1抑制IL-22诱导的角质形成细胞增殖,促进细胞凋亡。

骨形成蛋白7对糖皮质激素诱导PC12细胞凋亡的作用研究

目的探究骨形成蛋白7(BMP-7)对糖皮质激素(GC)诱导PC12细胞凋亡的作用。方法采用不同浓度GC干预PC12细胞,明确不同浓度GC对PC12细胞凋亡的影响;在PC12细胞中感染BMP-7过表达/敲低慢病毒和对照病毒,然后采用DMSO或GC干预细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Bax基因表达,Western blotting法检测Cleaved-Caspase-3蛋白表达。结果不同浓度GC处理后的细胞凋亡率、Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);与0μmol/L GC比较,GC浓度为10μmol/L时,PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.05);GC浓度为50μmol/L时,PC12细胞Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05)。过表达或敲低BMP-7后4组细胞的细胞凋亡率、Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);与GC-NC组比较,GC-oe BMP-7组细胞凋亡率、Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05);与DMSO-NC组比较,GC-oe BMP-7组细胞凋亡水平、Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与DMSO-NC组比较,DMSO-sh BMP-7组细胞凋水平、Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达均增加(P<0.05);与GC-NC组比较,GC-sh BMP-7组细胞凋水平、Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论高水平GC激素诱导PC12细胞凋亡增加,BMP-7可以拮抗GC诱导的细胞凋亡增加。

胸苷激酶1、细胞角质蛋白19片段抗原21-1在非小细胞肺癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系

目的探讨胸苷激酶1(TK1)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法选取100例NSCLC患者,采用免疫组化法检测肿瘤组织及癌旁组织中TK1、CYFRA21-1表达情况,比较NSCLC患者肿瘤组织与癌旁组织中TK1、CYFRA21-1的表达情况,以及不同临床特征NSCLC患者肿瘤组织中TK1、CYFRA21-1的表达情况。根据预后情况将NSCLC患者分为预后不良组和预后良好组,采用Logistic回归分析NSCLC患者的预后影响因素。结果肿瘤组织中TK1、CYFRA21-1的阳性表达率均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同淋巴结转移情况NSCLC患者肿瘤组织中TK1、CYFRA21-1阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。预后良好组(n=71)和预后不良组(n=29)患者淋巴结转移情况及TK1、CYFRA21-1表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,有淋巴结转移及TK1、CYFRA21-1阳性表达均是NSCLC患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05)。结论TK1、CYFRA21-1在NSCLC中的阳性表达率较高,有淋巴结转移及TK1、CYFRA21-1阳性表达均是NSCLC患者预后不良的危险因素。

血小板血小板/淋巴细胞比值淋巴细胞比值、预后营养指数预后营养指数、细胞角质蛋白细胞角质蛋白19片段抗原2121-1与胸腺瘤患者临床特征及预后的关系

目的目的探讨血小板/淋巴细胞比值(PLR)、预后营养指数(PNI)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYR-FA21-1)与胸腺瘤患者临床特征及预后的关系。方法方法选取125例胸腺瘤患者作为观察组,另选取116例健康体检者作为对照组,比较两组受试者及不同临床特征胸腺瘤患者PLR、PNI、CYFRA21-1。对胸腺瘤患者随访1年,根据预后情况分为预后良好组和预后不良组,比较不同预后胸腺瘤患者的临床特征,并采用多元Logistic回归模型分析胸腺瘤患者预后的影响因素。结果结果观察组患者PLR、PNI及CYFRA21-1均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同组织学类型、Masaoka分期、肿瘤直径胸腺瘤患者PLR、CYFRA21-1比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01);不同组织学类型、Masaoka分期胸腺瘤患者PNI比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。预后良好组(n=98)和预后不良组(n=27)患者组织学类型、Masaoka分期、PLR、PNI、CYFRA21-1比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,组织学类型、Masaoka分期、PLR、PNI、CYFRA21-1均是胸腺瘤患者预后的影响因素(P﹤0.05)。结论结论PLR、PNI、CYFRA21-1在胸腺瘤中高表达,与患者的临床特征有关,是胸腺瘤患者预后的影响因素。

白芨外泌体的分离及对体外人永生化角质形成细胞(Hacat)的凋亡保护研究

探索鲜白芨(Bletilla striata)外泌体对体外人永生化角质形成细胞(Hacat)的生物活性,为其在护肤品上的开发提供数据。聚乙二醇(PEG)沉淀法提取白芨外泌体,透射电镜鉴定,BCA法测蛋白浓度;细胞计数试剂(Cell Counting Kit-8,CCK8)法检测Hacat细胞存活率,流式双染检测凋亡,蛋白印迹法检测凋亡相关通路蛋白。白芨外泌体呈茶杯状具双层膜,平均粒径69.63 nm,每克鲜白芨含外泌体浓度为5.24E+8 Particles,内含蛋白19.53μg;白芨外泌体(≥5μg/mL)可显著提高体外Hacat细胞存活率(P<0.05);10μg/mL白芨外泌体处理48h,可显著降低H_(2)O_(2)氧化造模引起的Hacat细胞早凋亡、晚凋亡和总凋亡的细胞比例(P<0.01),同时,模型组caspase-9和caspase-3表达显著上升,外泌体处理能显著降低其表达,而Bcl-2表达在组间无差异(P<0.05)。PEG沉淀法分离的白芨外泌体,可促进体外Hacat生长,抑制H_(2)O_(2)引起的细胞凋亡且与蛋白caspase-9和caspase-3相关。

TGF-β_(1)通过miR-21d-5p调控BMP7表达诱导肾小管上皮细胞增殖及迁移

目的:探讨转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))可能通过微小RNA-21d-5p(miR-21d-5p)对骨形态发生蛋白7(BMP7)的调控,从而对肾小管上皮细胞的增殖以及迁移的影响及可能机制。方法:观察TGF-β_(1)处理的肾小管上皮细胞HK-2并检测miR-21d-5p的表达,在HK-2细胞中分组转染miR-21d-5p或anti-miR-21d-5p,再使用TGF-β_(1)处理,观察过度表达或抑制表达miR-21d-5p对TGF-β_(1)诱导肾小管上皮细胞的细胞活性及迁移的影响。分析TGF-β_(1)、miR-21d-5p与BMP7的靶向关系。共转染miR-21d-5p和pcDNA3.1-BMP7,或anti-miR-21d-5p和si-BMP7,使用TGF-β_(1)处理,评估TGF-β_(1)、miR-21d-5p与BMP7的在肾小管上皮细胞的增殖以及迁移的相互关系。结果:TGF-β_(1)处理HK-2细胞后,miR-21d-5p表达和迁移细胞数量升高(P<0.05),P21和E-钙黏蛋白(E-cadherin)水平降低(P<0.05)。过度表达miR-21d-5p增加TGF-β_(1)诱导HK-2细胞增殖和迁移上调(P<0.05),降低P21和E-cadherin蛋白表达(P<0.05),过度表达BMP7可以逆转此过程。抑制miR-21d-5p降低TGF-β_(1)诱导HK-2细胞增殖和迁移细胞水平(P<0.05),显著升高P21和E-cadherin蛋白水平(P<0.05),被抑制表达的BMP7可以逆转此过程。结论:TGF-β_(1)可能通过miR-21d-5p靶向调控BMP7表达,从而诱导肾小管上皮细胞增殖及迁移,进一步影响肾脏纤维化进展。

circ_0015756靶向miR-136调控银屑病角质形成细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探讨环状_0015756(circ_0015756)对银屑病角质形成细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常皮肤组织、银屑病患者皮损组织中circ_0015756与微小核糖核酸-136(miR-136)的表达量;原代分离培养人银屑病角质形成细胞,根据转染物不同将细胞分为以下几组:circ_0015756小分子干扰RNA(si-circ_0015756)组、si-circ_0015756阴性对照(si-NC)组、miR-136寡核苷酸模拟物(miR-136)组、miR-136寡核苷酸模拟物的阴性对照(miR-NC)组、si-circ_0015756+miR-136特异性寡核苷酸模拟物的阴性对照(anti-miR-NC)组、si-circ_0015756+miR-136特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-136)组;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、平板克隆形成实验与流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成能力及凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测circ_0015756与miR-136的靶向关系。结果与正常皮肤组织比较,银屑病患者皮损组织中circ_0015756的相对表达量升高(P<0.05),miR-136的相对表达量降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-circ_0015756组细胞活力降低(P<0.05),克隆形成数减少(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05);circ_0015756可靶向调控miR-136;与miR-NC组比较,miR-136组细胞活力降低(P<0.05),克隆形成数减少(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05);与si-circ_0015756+anti-miRNC组比较,si-circ_0015756+anti-miR-136组细胞活力升高(P<0.05),克隆形成数增多(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05)。结论干扰circ_0015756表达可通过靶向调控miR-136而抑制银屑病角质形成细胞增殖、克隆形成及诱导细胞凋亡。

MMP9、AEG-1及EphA7蛋白在中耳鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、星形细胞提升基因-1(AEG-1)、络氨酸蛋白激酶受体A7(EphA7)蛋白在中耳鳞癌组织中的表达及其意义。方法选取65例中耳鳞癌患者作为研究对象,均行手术治疗,术中采集癌组织及癌旁正常组织送检,检测MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白表达情况,比较癌组织与癌旁正常组织内上述表达差异;并分析MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白表达与年龄、性别、肿瘤分期、淋巴结转移、分化程度等病理特征的关系。结果癌组织内MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白阳性表达患者Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移占比高于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白在中耳鳞癌组织内呈高表达状况,且其表达与肿瘤分期、淋巴结转移关系密切,或可作为临床治疗的新靶点。

IL-17A对人永生化角质形成细胞角蛋白17表达及STAT3信号通路的影响

目的观察白细胞介素-17A(IL-17A)对体外培养的人永生化角质形成细胞(Ha Ca T)角蛋白17(K17)表达及信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法采用RPMI1640培养液培养Ha Ca T细胞,将细胞随机分为空白对照组、诱导组、抑制剂组,空白对照组仅加DMEM高糖培养基,诱导组加入含50μg/L IL-17A的DMEM高糖培养基,抑制剂组加入含50μg/L IL-17A的DMEM高糖培养基和10μmol/L STAT3抑制剂Piceatannol。收集培养的Ha Ca T细胞,采用MTT比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞K17 mRNA表达水平,Western blotting法检测细胞K17和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达水平。结果诱导组细胞增殖A值高于空白对照组和抑制剂组,细胞凋亡率低于空白对照组和抑制剂组(P均<0.01);诱导组K17mRNA及K17、p-STAT3蛋白相对表达量均高于空白对照组和抑制剂组(P均<0.01)。结论 IL-17A能够上调体外培养的Ha Ca T细胞K17表达,其调控机制可能是通过激活STAT3来实现,表明IL-17A在银屑病中发挥的作用可能与K17有关。

转甲状腺素蛋白介导STAT4/miR-223-3p/FBXW7通路对高糖诱导的人视网膜内皮细胞新生血管生成的影响

目的分析转甲状腺素蛋白(TTR)介导信号转导和转录激活因子4(STAT4)/miR-223-3p/F-box WD重复蛋白7(FBXW7)通路对高糖(HG)诱导的人视网膜内皮细胞(hRECs)新生血管生成的影响。方法将hRECs分为对照组、HG组、HG+TTR组、HG+NC mimic组、HG+miR-223-3p mimic组和HG+TTR+miR-223-3p mimic组。生物信息学分析STAT4与miR-223-3p的靶向关系,并采用双荧光素酶报告实验进行验证。ELISA检测细胞中TTR水平,RT-PCR检测miR-223-3p水平,CCK-8法检测细胞增殖,血管生成实验分析血管生成率,Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)、TTR、STAT4和FBXW7蛋白表达。结果与对照组相比,HG组hRECs中TTR水平升高(P<0.05)。培养24 h时,与HG组相比,HG+TTR组细胞活力明显下降(P<0.05)。与HG组血管生成率(38.12±4.91)%相比,HG+TTR组hRECs血管生成率[(19.46±2.12)%]明显较小(P<0.05)。与HG+NC mimic组相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p表达上调,细胞活力增加(均为P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p表达下调,细胞活力下降(均为P<0.05)。与HG+NC mimic组血管生成率(40.11±4.10)%相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs血管生成率[(61.52±6.25)%]增多(P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs血管生成率[(42.24±4.33)%]减少(P<0.05),且与HG+NC mimic组比较差异无统计学意义(P>0.05)。生物信息学分析结果显示,STAT4与miR-223-3p启动子区域相互作用。与HG组相比,HG+TTR组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均降低,FBXW7和VEGF蛋白表达均升高(均为P<0.05);与HG+TTR组相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均升高,FBXW7和VEGF蛋白表达均降低(均为P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均降低,FBXW7和VEGF蛋白表达均升高(均为P<0.05);与HG+TTR组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、VEGF、STAT4和FBXW7蛋白表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论TTR可能通过调节STAT4/miR-223-3p/FBXW7通路抑制HG诱导的hRECs的血管生成。

lncRNA SNHG7通过miR-122-5p/CCND1轴调节胃癌细胞的增殖、凋亡及肿瘤免疫逃逸

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(lncRNA SNHG)7通过miR-122-5p/细胞周期蛋白(CCN)D1轴对胃癌细胞的增殖、凋亡及肿瘤免疫逃逸的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测体外培养的人胃癌细胞株NCI-N87、SNU-1、MKN-45和人胃癌组织源细胞、人胃黏膜上皮细胞中lncRNA SNHG7、miR-122-5p与CCND1表达。体外培养的人胃癌细胞MKN-45,随机分为对照组、lncRNA SNHG7 siRNA(si-lncRNA SNHG7)组、lncRNA SNHG7 siRNA阴性对照(si-NC)组、lncRNA SNHG7 siRNA(si-lncRNA SNHG7)+miR-122-5p inhibitor组,分组转染后,检测各组MKN-45细胞增殖、凋亡、活化CD8+T细胞杀伤率、miR-122-5p及CCND1、细胞增殖核抗原(PCNA)、凋亡蛋白〔B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3〕表达,并检测lncRNA SNHG7对MKN-45细胞miR-122-5p的靶向调节作用。结果与胃黏膜上皮细胞相比,胃癌组织源和MKN-45、SNU-1、NCI-N87细胞lncRNA SNHG7、CCND1 mRNA表达明显升高,miR-122-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组相比,si-lncRNA SNHG7组细胞活力、EdU阳性率、细胞CCND1、PCNA蛋白表达明显降低,凋亡率、活化CD8+T细胞对各组MKN-45细胞的杀伤率、miR-122-5p及Bax、caspase-3蛋白表达明显升高(均P<0.05);si-NC组细胞各指标均无显著差异(P>0.05);lncRNA SNHG7 siRNA和miR-122-5p inhibitor联合可逆转lncRNA SNHG7 siRNA对细胞各指标的作用。lncRNA SNHG7可靶向下调MKN-45细胞miR-122-5p表达。结论下调lncRNA SNHG7可通过上调miR-122-5p而降低CCND1表达,进而抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡,并减轻其免疫逃逸。

普萘洛尔对人脐静脉内皮细胞生物学行为及SOX18、MMP-7、VEGFA表达的影响

目的探讨普萘洛尔对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖、凋亡、迁移及成管能力,以及对性别决定区Y框18(sex determining region Y-box 18,SOX18)、基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7,MMP-7)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)表达的影响。方法以不同浓度的普萘洛尔处理HUVEC,采用CCK-8法检测细胞活力,选出最佳浓度及时间。实验分为对照组,普萘洛尔不同浓度(50、100、150μmol/L)组,采用流式细胞术、细胞划痕实验和成管实验观察HUVEC凋亡、迁移和管腔形成情况,Western blot和实时荧光定量PCR法检测SOX18、MMP-7、VEGFA蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组相比,普萘洛尔不同浓度组细胞凋亡率升高(P<0.05),且随药物浓度增加显著升高(P<0.05);普萘洛尔不同浓度组伤口愈合率降低,成管节点数和成管总长度减少,SOX18、MMP-7、VEGFA蛋白及mRNA表达下调(P<0.05)。结论普萘洛尔可抑制HUVEC的增殖、迁移、成管能力并促进细胞凋亡,降低SOX18、MMP-7和VEGFA表达水平。

血清胸苷激酶1、细胞角质蛋白19片段抗原21-1及dickkopfWNT信号通路抑制剂1对食管癌的诊断价值

目的探讨血清胸苷激酶1(TK1)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)及dickkopf WNT信号通路抑制剂1(DKK1)对食管癌的诊断价值。方法选取62例食管癌患者作为食管癌组,59例健康体检者作为对照组。对比两组受试者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平,对比不同分期食管癌患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平,分析TK1、CYFRA21-1、DKK1单独及联合检测对食管癌的诊断价值。结果食管癌组患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Ⅲ~Ⅳ期食管癌患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平均明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。TK1+CYFRA21-1+DKK1联合检测诊断食管癌的灵敏度和特异度分别为88.50%、79.10%,曲线下面积为0.779(95%CI:0.695~0.864),均高于三者单独检测。结论TK1、CYFRA21-1、DKK1联合检测有利于提高食管癌的诊断效能,防止误诊漏诊,三者对其病情评估具有一定参考价值。

血清细胞角质蛋白19片段抗原21-1、神经元特异性烯醇化酶、组织因子水平对肺癌患者术后发生肺栓塞的预测价值

目的探讨血清细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、组织因子(TF)水平与肺癌患者凝血功能指标的关系及对术后发生肺栓塞的预测价值。方法选取80例肺癌患者和80例肺良性病变患者,分别作为肺癌组和对照组,比较两组患者血清CYFRA21-1、NSE、TF水平及凝血功能指标[凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、D-二聚体(D-D)、血小板计数],依据是否继发肺栓塞,比较栓塞和未栓塞肺癌患者血清CYFRA21-1、NSE、TF水平。血清CYFRA21-1、NSE、TF水平与凝血功能指标的相关性采用Pearson相关分析;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估CYFRA21-1、NSE、TF单独及联合检测对肺癌患者术后发生肺栓塞的预测价值。结果肺癌组患者血清CYFRA21-1、NSE、TF、血小板计数、D-D水平均明显高于对照组(P﹤0.01),PT明显长于对照组(P﹤0.01)。80例肺癌患者中,发生肺栓塞16例,未发生肺栓塞64例,发生肺栓塞肺癌患者血清CYFRA21-1、NSE、TF水平均高于未发生肺栓塞患者(P﹤0.05)。Pearson相关分析结果显示,肺癌患者血清CYFRA21-1、NSE、TF水平与血小板计数、PT、D-D水平均呈正相关(P﹤0.05)。ROC曲线显示,CYFRA21-1、NSE、TF联合检测预测肺癌患者术后发生肺栓塞的AUC为0.847(95%CI:0.749~0.918),高于各指标单独检测。结论血清CYFRA21-1、NSE、TF水平在肺癌患者血清中异常升高,且与凝血因子D-D、PT、血小板计数均呈正相关,CYFRA21-1、NSE、TF联合检测对肺癌患者术后发生肺栓塞具有较高的预测价值。

膜相关环指蛋白7在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达及作用机制研究

目的:探究膜相关环指蛋白7(MARCH7)在上皮性卵巢癌(EOC)组织和细胞中的表达及作用机制。方法:选取就诊且经手术治疗的患者32例,包括EOC患者16例和卵巢组织正常患者16例,收集EOC患者和卵巢组织正常患者的卵巢组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MARCH7 mRNA表达水平。构建过/低表达MARCH7的上皮性卵巢癌细胞(SKOV3、CAOV3)后,采用Transwell实验观察MARCH7对EOC细胞迁移和侵袭能力的影响,采用Western blot检测过/低表达MARCH7的EOC细胞上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、锌指转录因子1(Snail1)、锌指转录因子2(Slug)蛋白表达。结果:卵巢癌组织MARCH7 mRNA表达水平高于正常卵巢组(P<0.05)。在SKOV3和CAOV3细胞中,正常对照组与低表达对照组和过表达对照组细胞迁移和侵袭能力,以及MARCH7和EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Snail1和Slug蛋白表达比较无统计学差异(均P>0.05);与低表达对照组比较,沉默MARCH7的细胞迁移和侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、Snail1和Slug蛋白表达降低(均P<0.01);与过表达对照组比较,过表达MARCH7的细胞迁移和侵袭能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、Snail1和Slug蛋白表达升高(均P<0.01)。结论:MARCH7在EOC组织和细胞中呈高表达,可能通过促进EOC细胞的EMT过程,增强EOC细胞的侵袭和迁移能力。

IL-22可诱导角质形成细胞双调蛋白表达促进银屑病发病

目的研究IL-22对角质形成细胞系HaCaT细胞双调蛋白(amphiregulin,AREG)表达的调控,了解其在寻常型银屑病(PsV)中的作用。方法收集PsV患者皮损( n =26)和健康人皮肤组织( n =15),RT-qPCR检测IL-22、 IL-22R1 、 IL-22BP 及AREG的表达并分析其相关性。用IL-22(20 ng/mL)及其可溶型受体IL-22BP(20 ng/mL)干预培养HaCaT细胞24 h,RT-qPCR及Western blot检测AREG的表达变化。结果PsV患者皮损IL-22(P<0.001)、 IL-22R1 (P<0.001)及AREG(P<0.01)的mRNA表达分别高于健康人皮肤36倍、24倍和15倍。PsV皮损的 IL-22 与AREG mRNA水平密切相关( r =0.49,P<0.05)。IL-22干预时,HaCaT细胞AREG mRNA表达升高22倍(P<0.01),蛋白表达亦明显升高(P<0.01)。IL-22BP则抑制了IL-22的这一功能(P<0.05)。结论IL-22可能通过刺激角质形成细胞增强AREG的表达参与银屑病的发病,IL-22BP可作为阻断剂抑制这种增强作用,可能在银屑病的治疗中发挥作用。

骨形态形成蛋白-7对体外培养肾小管上皮细胞TGF-β1诱导转分化的作用

目的观察骨形态形成蛋白-7(BMP-7)对转化生长因子β1穴TGF-β1雪诱导的人类肾小管上皮细胞穴HKC雪转分化的作用,并探讨其作用机制。方法将体外培养的HKC分为5组(1)无血清培养基阴性对照组;(2)TGF-β1阳性对照组;穴3雪BMP-7单独作用组;穴4雪BMP-7与TGF-β1共同作用组;穴5雪BMP-7预处理后加入TGF-β1组。间接免疫荧光法测定HKC角蛋白(keratin)的表达;免疫组织化学方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及E-钙粘素(E-cadherin)表达;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数;半定量反转录PCR穴RT-PCR雪方法测定HKC细胞α-SMA、TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA的表达。结果TGF-β1与BMP-7共同作用HKC细胞48h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;BMP-7预处理后再加入TGF-β1作用HKC细胞48h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数,在BMP-7与TGF-β1共同作用组明显低于阳性对照组(9.7%vs19.8%熏5.8%vs19.8%熏P<0.05)。BMP-7组预处理组亦明显低于阳性对照组(8.7%vs19.8%,P<0.05)。RT-PCR显示BMP-7与TGF-β1共同或者预处理HKC细胞熏α-SMAmRNA表达分别为阳?

姜黄素对IL-17诱导的人表皮角质形成细胞株CCL20表达的影响

目的探讨姜黄素对IL-17诱导的人表皮角质形成细胞株(HaCaT细胞株)CCL20表达的影响。方法用IL-17刺激HaCaT细胞,并加入不同浓度的姜黄素(2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L)共培养24h。提取总RNA并收集细胞上清液,分别进行荧光定量PCR和ELISA实验,从mRNA及蛋白表达水平两方面观察姜黄素对CCL20表达的影响。结果 IL-17能够有效地诱导HaCaT细胞CCL20的表达。加入姜黄素共培养后,CCL20在mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P均<0.05)。结论姜黄素对IL-17诱导的HaCaT细胞CCL20的表达具有明显的抑制作用,可为其对银屑病的治疗提供理论依据。

血管内皮生长因子对肾小管上皮-间充质细胞转化的作用及其与骨形成蛋白-7、分化抑制因子表达的关系

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用及其与骨形成蛋白-7(BMP-7)、分化抑制因子(Id)2、Id3表达的关系。方法体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)经转化生长因子-β1(TGF-β1,5ng/ml)与不同浓度VEGF165(0.1、1、10、100ng/ml)共同作用,或TGF-β1(5ng/ml)与血管内皮生长因子受体-1(VEGFR1)抗体(10μg/ml)共同作用48h后,免疫组织化学双染方法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素表达,实时荧光定量PCR法、Westernblot法检测细胞α-SMA、BMP-7、Id2和Id3的表达。TGF-β1(5ng/ml)、VEGF165(100ng/ml)与激活素受体样激酶-6/Fc嵌合体(Alk6/FcChimera)(2μg/ml,中和内源性BMP-7)共同作用48h后,Westernblot法检测细胞α-SMA、Id2的表达情况。结果TGF-β1作用后,α-SMA表达比正常对照显著增强(P<0.05),E-钙黏素、BMP-7、Id2及Id3的mRNA及蛋白质表达均显著减弱(P<0.05)。VEGF165以浓度依赖方式增强BMP-7及Id2蛋白表达,而显著降低TGF-β1上调α-SMA表达的作用(P<0.05)。加入VEGFR1抗体(10μg/ml)后,TGF-β1上调α-SMA表达的作用显著增强(P<0.05),而E-钙黏素、BMP-7、Id2表达显著减弱(P<0.05)。TGF-β1+VEGF165+Alk6/FcChimera共同作用后α-SMA蛋白表达比TGF-β1+VEGF165共同作用后显著增强(P<0.05),而Id2表达差异无显著性。结论VEGF165可抑制TGF-β1诱导HK-2细胞发生EMT;其机制可能与BMP-7和Id2表达上调有关,而与Id3表达变化无关。Id2表达增强可能与VEGF165的直接作用有关,而与BMP-7无关。