角质生长因子、缺氧诱导因子修饰的骨髓间充质干细胞对大鼠脊髓损伤修复的影响

目的探讨角质生长因子(KGF)与缺氧诱导因子(HIF)修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠脊髓损伤(SCI)的修复作用。方法全骨髓贴壁法分离培养骨髓MSCs;携带重组KGF和HIF-1基因的腺病毒感染修饰MSCs,自由落体法制备大鼠SCI模型,分为MSCs组、KGF-MSCs组、HIF-1-MSCs组及KGF/HIF-MSCs组,分别于损伤部位移植无修饰、KGF因子修饰、HIF-1因子修饰及KGF/HIF双修饰的骨髓MSCs,应用联合行为学评分评价大鼠运动能力恢复情况,观察脊髓组织病理学变化及神经细胞修复情况,并测定SRY及腺病毒基因Adeno的表达水平。结果KGF-MSCs、HIF-1-MSCs及HIF-MSCs组联合行为学评分均高于MSCs组,且KGF/HIF-MSCs组效果最明显(P<0.05)。4组大鼠脊髓组织中细胞数目增加,神经细胞坏死减少,均高表达SRY及Adeno基因。结论细胞因子KGF、HIF可增强骨髓MSCs移植后SCI修复作用。

稳定表达角质生长因子与缺氧诱导因子的大鼠骨髓间充质干细胞的制备

目的制备角质生长因子（KGF）与缺氧诱导因子（HIF）修饰的大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）,评价细胞因子表达效率及其活性。方法骨髓全细胞贴壁培养法分离培养大鼠骨髓MSCs,经免疫荧光法检测细胞表面标志物后,以KGF、HIF重组腺病毒感染,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测KGF、HIF的表达水平,成骨细胞增殖实验评价KGF、HIF的活性。结果获得了可在体外连续传代、高表达CD44、CD133表面分子的骨髓MSCs;KGF、HIF细胞因子获得稳定表达,且在感染24 h即出现表达,随培养时间的延长表达量逐渐上升,至120 h开始下降;骨髓MSCs培养上清含量为50%~100%时成骨细胞增殖水平明显提高。结论成功制备可稳定表达KGF、HIF的大鼠骨髓MSCs,其表达的KGF、HIF因子含量高,可促进成骨细胞的增殖,具有良好的生物活性。

角质细胞生长因子对人工流产术后子宫内膜的修复作用及对月经转归、卵巢排卵的影响

目的探讨角质细胞生长因子(KGF)对人工流产术后子宫内膜的修复作用及对月经转归、卵巢排卵的影响。方法选取2019年12月至2020年12月在石家庄市人民医院行人工流产术的早孕妇女120例,将所有孕妇按随机数字表法分为观察组60例,对照组60例,对照组采用玻璃酸钠治疗,观察组采用KGF治疗,观察并统计两组的阴道出血天数和月经复潮时间,采用彩色多普勒超声诊断仪对两组子宫动脉阻力指数、血流量、搏动指数、收缩末期血流峰值/舒张末期血流峰值(S/D)、平均流速血流动力学参数进行测评,采用腹部B超检查两组的子宫内膜厚度变化情况,统计两组的卵巢恢复排卵例数。B超检查两组的宫腔粘连程度。结果观察组阴道出血天数(4.62±0.23)d和月经复潮时间(28.12±2.06)d均短于对照组(6.23±0.55)d、(34.12±2.16)d(P<0.05);治疗后,对照组阻力指数、搏动指数、血流量、平均流速、S/D均显著降低(P<0.05),且观察组治疗后上述指标均高于对照组(P<0.05);观察组子宫内膜厚度(9.36±1.09)mm大于对照组(6.22±1.11)mm(P<0.05);观察组卵巢恢复排卵例数22例多于对照组6例(P<0.05);观察组宫腔粘连程度低于对照组(P<0.05)。结论KGF治疗可有效改善人工流产术后月经转归情况,稳定术后血流动力学,促进子宫内膜修复和卵巢排卵功能的恢复。

角质细胞生长因子-2与新生儿相关肺部疾病的研究进展

角质细胞生长因子-2(KGF-2)是一类来源于间充质细胞的生长因子,具有多功能生物学作用,特别其作为一种肺组织保护因子,可调控肺泡上皮细胞增殖、分化及迁移,促进受损肺组织修复和抑制肺泡纤维化。KGF-2缺失或基因突变与新生儿相关肺部疾病的发生、发展密切相关,且有增加儿童期甚至成年后发生慢性肺部疾病的风险。本文就KGF-2结构、生物学功能,以及其与新生儿相关肺部疾病的关系做一综述,旨在为开拓新生儿呼吸系统疾病新的诊治策略提供理论参考依据。

重组人角质细胞生长因子-2基因克隆、表达、纯化与活性分析

从人胚肺二倍体细胞KMB17中抽提总RNA ,经RT PCR扩增获得编码人角质细胞生长因子 2 (keratinocytegrowthfactor 2 ,KGF 2 )的cDNA .克隆于硫氧环蛋白表达载体pThioHisA ,序列分析表明与文献报道一致 .经IPTG诱导 ,在大肠杆菌BL2 1中实现高效表达 ,表达量可达菌体总蛋白 10 %～15 % .菌体超声破碎 ,上清经CM SepharoseFF阳离子交换 ,Heparin Sepharose亲和层析 ,Superdex 75凝胶过滤层析纯化得到重组人KGF 2 ,纯度高于 95 % .生物活性分析表明 ,它能够促进成纤维细胞NIH 3T3的增殖 ,诱导鸡胚背根神经结神经轴突的生长 ,促进鸡胚尿囊膜血管生成 .研究结果表明 ,获得了 95 %纯度的具有生物学活性的重组人KGF 2 。

角质细胞生长因子2对细胞生长、移行及创伤愈合的作用

角质细胞生长因子2(KGF-2)是成纤维细胞生长因子超家族的一员,由间质细胞合成并分泌,能特异促进上皮细胞增殖、分化与迁移,对脊椎动物多种组织和器官的发育起重要调控作用.通过PCR从人的肾组织cDNA文库中克隆分离获得了KGF-2的cDNA,表明该因子在成人肾中有表达.采用大肠杆菌表达并纯化重组蛋白用于生物学功能研究的结果显示:KGF-2在体外不仅能够促进角质细胞的生长和增殖,而且对其凋亡具有抑制作用,还对细胞的移行具有影响.在动物实验中,KGF-2能促进皮肤切除产生的伤口愈合,提示该蛋白质可以作为创伤治疗或辅助用药的候选分子.

重组人角质细胞生长因子-2对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用

目的:研究外用旋滴重组人角质细胞生长因子-2(KGF-2)对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用,为角膜上皮损伤的早期治疗探索新方法。方法:制备兔角膜碱烧伤模型,60只日本大耳白兔随机分为碱烧伤对照组和KGF-2组(25mg·mL-1)(n=30);各组日本大耳白兔于造模后以50μL药物滴眼,每日3次。7和14d裂隙灯观察角膜烧伤面积以及角膜新生血管的形成,MTT法检测角膜上皮细胞活性,免疫组化方法进行病理组织学检查。结果:碱烧伤后7和14d,KGF-2组角膜烧伤面积小于碱烧伤对照组,差异有显著性(P<0.01)。碱烧伤对照组7d角膜新生血管发生率为17.50%,KGF-2组为7.32%;碱烧伤对照组14d角膜新生血管发生率为41.67%,KGF-2组为32.50%。MTT检测结果显示:碱烧伤后7和14d,KGF-2组492nm吸光度与碱烧伤对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。碱烧伤后7和14d,病理切片HE染色显示:对照组角膜基质水肿,板层纤维排列松散、紊乱,炎症反应反复出现,角膜上皮层变薄,部分脱落,角膜内皮层内侧有大量成纤维细胞增生;KGF-2组碱烧伤后7d,角膜上皮细胞生长良好,基质轻度增厚,无明显的炎症反应;碱烧伤后14d,未出现炎症复发,角膜上皮细胞生长良好,排列整齐,角膜基质仅有轻度增厚。结论:外用旋滴25mg·mL-1KGF-2可加速角膜上皮损伤的恢复,减轻角膜烧伤的各种炎症反应症状;减轻角膜基质水肿和纤维化,同时KGF-2亦表现出显著的抑制角膜新生血管形成的作用;KGF-2有可能成为另一个对角膜上皮损伤具有重要调控作用的生长因子。

重组人角质细胞生长因子-2对实验秃毛大鼠的毛发再生作用

目的建立实验秃毛大鼠模型,研究重组人角质细胞生长因子-2(recombinant human keratinocyte growth factor-2,rhKGF-2)对实验秃毛大鼠的毛发再生作用。方法对大鼠背部以脱毛膏拔毛,随机分为7个组,即正常对照组、5%米诺地尔组、aFGF组、rhKGF2高、中、低剂量组、0.9%生理盐水组。造模次日皮肤涂抹给药,以给药第1、5、9、14天为观察时间点,记录实验大鼠的体重、实验区毛长、实验区毛发生长状况。于第14天处死实验大鼠,取实验区皮肤进行组织病理学检查。结果体重方面:在第1、5、9、14天,与正常对照组相比,各组差异无显著性(P>0.05);毛长方面:与0.9%生理盐水组相比,在第5、9天,rhKGF2高、中剂量组存在显著性差异(P<0.05,P<0.01)。在第14天,高、中、低剂量组差异有显著性(P<0.05,P<0.01,P<0.05);毛重方面:在第14天,与0.9%生理盐水组相比,各组(正常对照组除外)差异有显著性(P<0.01);病理检查结果显示:rhKGF2具有促进实验秃毛大鼠毛囊新生与成熟的作用。结论 rh-KGF2具有促进实验秃毛大鼠毛发再生的作用。rhKGF2具有很好的临床应用前景。

重组人角质细胞生长因子的体内外作用研究

目的研究重组人角质细胞生长因子(K102)在体内和体外的生物活性。方法运用3T3BALB/c细胞和大鼠CCl4肝纤维化模型对K102在体内体外的生物活性进行测定。结果体外生物活性检测:K102明显抑制成纤维细胞的生长,bFGF对K102有一定拮抗作用,且具有剂量依赖性;体内生物活性检测:治疗给药组血清ALT,AST和肝组织羟脯氨酸含量较CCl4模型组明显改善。病理组织学检查见K102大、小剂量组肝细胞脂肪变性和水样变性比较轻,汇管区纤维组织仅有轻微增生。结论K102的抗肝纤维化作用可能是通过促进肝细胞增生、合成代谢,以及抑制成纤维细胞生长、减少纤维组织增生而产生的。

角质细胞生长因子对常染色体显性遗传型多囊肾病囊肿衬里上皮细胞的促增殖作用

目的 :观察角质细胞生长因子 (KGF)在体外对常染色体显性遗传型多囊肾病 (ADPKD)囊肿衬里上皮细胞的促增殖作用并探讨其可能的作用机制。方法 :外源性给予不同浓度的 KGF(0～ 10 0 ng/ ml) ,采用 MTT法检测细胞增殖情况 ,流式细胞术检测细胞周期 ,在电镜下观察细胞形态。结果 :KGF呈剂量、时间依赖性地促进了 ADPKD囊肿衬里上皮细胞的增生 ,表现为细胞数量增多 ,S期细胞比率增高 ,细胞分裂活跃 ,增生的细胞形态尤其是细胞核较正常体积增大。结论 :KGF可显著刺激 ADPKD囊肿衬里上皮细胞的增殖 ,提示 KGF可能参与 ADPKD肾囊肿的形成和发展。

角质细胞生长因子对口腔黏膜上皮细胞凋亡的作用研究

目的研究不同浓度角质细胞生长因子(KGF)对口腔黏膜上皮细胞凋亡的作用,为探讨KGF在口腔黏膜病发生发展中的作用提供依据。方法将不同浓度的KGF(对照组0 ng·mL-1,实验1组5 ng·mL-1,实验2组25 ng·mL-1,实验3组50 ng·mL-1)分别加入体外培养的口腔黏膜上皮细胞,培养12、24、48 h后,倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,荧光实时定量检测细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达水平。结果 1)实验组较对照组细胞贴壁明显,且48 h时实验3组细胞核仁明显。2)培养48 h时,4组之间的细胞凋亡率、Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达均有统计学差异,随着KGF浓度的增加,细胞凋亡率和Bax mRNA表达逐渐降低,Bcl-2 mRNA表达逐渐升高(P<0.05)。结论 KGF可通过上调Bcl-2 mRNA和下调Bax mRNA的表达抑制上皮细胞的凋亡。

重组人角质细胞生长因子-2涂膜剂促进大鼠皮肤伤口愈合

目的研究重组人角质细胞生长因子-2(Recombinanthumankeratinocytegrowthfactor-2,rhKGF-2)涂膜剂对大鼠皮肤伤口愈合速度的影响。方法(1)用预热100℃的100g砝码在大鼠背部脱毛部位烫8s,形成4个直径约2.5cm的深II度烫伤口;(2)手术方法切除大鼠背部部分皮肤,形成2个1.5cm×4cm的皮肤全层缺损伤口。造模后第2天开始每天局部给药1次,连续15d,每4d测量伤口面积并计算愈合率,第16天取伤口及其周围皮肤组织,石蜡切片,Masson’s三色法染色,MOTICAdvanced3.2形态分析软件分析新生上皮面积、厚度和上皮细胞迁移距离。结果rhKGF-2涂膜剂对大鼠皮肤深II度烫伤和皮肤全层切除伤口的愈合均有明显的促进作用,使新生上皮面积、平均厚度和上皮细胞移行距离等明显增加。作用强度比同剂量的单纯的rhKGF-2溶液剂好。结论rhKGF-2涂膜剂能明显加快大鼠皮肤烫伤和皮肤全层切除伤口周围上皮细胞的增生与迁移,加快创面愈合过程。

角质细胞生长因子及氯化锂诱导毛囊干细胞定向分化中的信号通路

背景:毛囊干细胞的增殖分化受到自身基因及外来信号的共同作用,Wnt/β-catenin信号通路在毛囊毛发发育中起重要作用,但详细机制尚未明确。目的:探讨在角质细胞生长因子及氯化锂干预下,Wnt/β-catenin信号通路在人毛囊干细胞向毛囊乳突细胞或表皮细胞定向分化中的作用及与其他信号分子的相互关系。方法:获取毛囊隆突区干细胞进行培养,检测其生长曲线,观察1×106 L-1、1×107 L-1、1×108 L-1和1×109 L-1培养的毛囊干细胞在不同时间点的增殖效应;使用免疫荧光染色法对毛囊干细胞及其分化细胞进行鉴定。分别以0,0.5,1.5,10,25 mmol/L氯化锂及0,10,25,50,100μg/L角质细胞生长因子诱导毛囊干细胞分化,对比各组细胞的增殖效应,探索促毛囊干细胞分化的最佳氯化锂及角质细胞生长因子浓度。使用RT-PCR检测未处理对照组、10 mmol/L氯化锂组和10μg/L角质细胞生长因子组干预后3,5,7,9 d细胞的β-catenin、APC、GSK-3β、Axin和Lef1的mRNA转录水平。结果与结论:分离培养的毛囊干细胞在体外经多次传代后仍具有很强的增殖能力和多向分化潜能,随氯化锂浓度升高,细胞增殖效应减弱;而随角质细胞生长因子组质量浓度增高细胞增殖能力增强。含有氯化锂的K-SFM条件培养基中毛囊干细胞形态改变明显,各组间有明显差别,氯化锂>10 mmol/L时分化比例高,β-catenin表达量增高;而含有角质细胞生长因子K-SFM条件培养基中毛囊干细胞向表皮细胞分化,β-catenin变化不明显。提示氯化锂在促毛囊干细胞分化中,激活Wnt/β-catenin信号通路,抑制降解复合物重要成分GSK-3β的表达下降,促使β-catenin在细胞浆表达增加并转入核内,增加靶基因转录,促使毛囊干细胞向毛囊细胞方向分化。氯化锂>10 mmol/L是促毛囊干细胞分化的最佳浓度,但增殖效应减弱。角质细胞生长因子可促进毛囊干细胞向表皮分化,可促进毛囊干细胞增殖和迁移,促进创面再上皮化及创面愈合。氯化锂和角质细胞生长因子促毛囊干细胞定向分化的作用机制可能为激活Wnt/β-catenin信号通路,促使β-catenin表达改变,从而激活Wnt信号通路中Lef介导相关靶基因的转录。

ERK1/2信号通路在角质细胞生长因子-2诱导角膜基质细胞增殖中的作用

目的观察角质细胞生长因子(keratinocyte growthfactor-2,KGF-2)对角膜基质细胞的增殖作用及ERK1/2信号在角膜基质细胞增殖中的调控作用,探讨KGF-2对角膜基质细胞增殖的可能机制。方法体外培养角膜基质细胞,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测磷酸化ERK1/2表达水平。结果 KGF-2在1～100 mg·L-1对角膜基质细胞有明显的促进增殖作用且呈现剂量-效应关系;100 mg·L-1 KGF-2处理角膜基质细胞,5、15、30 min后ERK1/2磷酸化表达水平明显升高,60、90、120、180 min后ERK1/2磷酸化表达水平逐渐减弱;20μmol.L-1 ERK1/2抑制剂PD98059可抑制KGF-2对角膜基质细胞的促增殖作用。结论 KGF-2激活ERK1/2信号通路,提高细胞增殖率,可被抑制剂PD98059阻断;ERK1/2信号通路调控角膜基质细胞的增殖,在角膜基质细胞损伤中发挥作用。

人角质细胞生长因子的克隆及表达

目的为获得高表达的重组人角质细胞生长因子生物工程菌。方法应用ＲＴ－ＰＣＲ技术，从人胚 胎肺成纤维细胞中，扩增出ＫＧＦ ｃＤＮＡ基因，并插入ｐＵＣ１８－Ｔ载体，构建成了重组人ＫＧＦ基因，经ＤＮＡ测序证实与 文献报道一致。将ＫＧＦ基因定向插入大肠杆菌表达载体ＰＥＴ１１ｂ内，转化大肠杆菌ＨＢ１０１。结果获得的重组子 经ＩＰＴＧ诱导，在相对分子质量为１９０００处表达重组蛋白，约占菌体蛋白的１０％。结论建立了制备重组人ＫＧＦ表 达系统，为今后进一步研究ＫＧＦ的生物学功能奠定可靠的物质基础。

角质细胞生长因子-2对角膜激光烧伤的治疗作用及机制研究

目的探讨角质细胞生长因子-2(KGF-2)对角膜激光烧伤的治疗作用及其作用机制。方法采用日本大耳白兔构建激光角膜烧伤模型,实验分烧伤对照组、bFGF治疗对照组、KGF-2 12.5μg/ml组、KGF-225μg/ml组、KGF-2 50μg/ml组。通过裂隙灯显微镜与组织病理学观察、烧伤斑图像分析、角膜OD值测定和MTT法检测损伤后角膜的恢复情况,比较治疗后7、14 d各组的差异。结果 KGF-2治疗后兔角膜上皮细胞修复良好,基质中纤维板层排列整齐,无明显的炎症反应,新生血管形成较少,角膜透光率增加,损伤斑面积明显缩小,且KGF-2浓度为25μg/ml时达到最大修复。KGF-2对角膜上皮细胞无明显的促增殖活性。结论 KGF-2可通过减轻角膜激光烧伤后的各种炎症反应、加速角膜上皮细胞的再生和迁移以及促进角膜基质纤维修复等机制,促进激光烧伤后受损角膜的修复。

乳糖诱导角质细胞生长因子-2在大肠杆菌中的表达

目的:研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行角质细胞生长因子-2(KGF-2)基因重组蛋白的表达,探讨工程化生产的可能性。方法:分别比较乳糖诱导浓度、诱导时机、诱导时间及诱导温度对重组表达产物的影响,并以IPTG诱导作为对照,确定较为优化的乳糖诱导条件。结果:对于重组目的产物,乳糖作为诱导剂也可以起到良好效果,以乳糖为诱导剂的A600值较IPTG高,诱导产物的表达量与IPTG诱导产物相当。以终浓度为10g.L-1乳糖在33℃下诱导6h,可以达到良好的诱导效果,并且具有较好的可溶性和促细胞生长活性。结论:乳糖可替代IPTG诱导角质细胞生长因子基因表达,并取得良好效果,为工程化生产提供了良好的实验依据。

重组人角质细胞生长因子(KGF-2)在毕赤酵母中的克隆与表达

利用RT -PCR技术 ,从体外培养的人胚胎成纤维细胞中扩增出人角质细胞生长因子 (KGF - 2 )的cDNA及基因序列 ,并将其基因序列克隆入质粒pGEM -TEasy中 ,经测序与文献报道序列一致 .将KGF - 2基因切出后定向插入酵母分泌性表达质粒pPICZαA中 ,转化毕赤酵母菌株GS115 ,获得的重组体经甲醇诱导可表达出人角质细胞生长因子KGF - 2 .表达的KGF - 2经Ni2 + 柱亲和层析纯化后 ,有很好的生物学活性 .

角质细胞生长因子对无排卵型功血子宫内膜上皮细胞生长与分泌CA125的影响

目的观察角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)对离体培养的无排卵型功血子宫内膜上皮细胞生长和分泌CA125的影响。方法体外培养无排卵型功血子宫内膜上皮细胞,加入不同浓度的KGF作用后,微量噻唑蓝分析法检测细胞量,了解生长情况,磁酶免法测定CA125分泌,分析两者之间的相关性,并与培养的正常子宫内膜上皮细胞进行比较。结果无排卵型功血子宫内膜上皮细胞与正常子宫内膜上皮细胞的外观特征相似;CK19免疫组化染色结果为无排卵型功血子宫内膜上皮细胞的细胞质被染成棕黄色。②不同浓度的KGF作用体外培养的无排卵型功血子宫内膜上皮细胞后,细胞增生明显,但增生程度不如正常子宫内膜上皮细胞(P<0.05)。③不同浓度KGF作用后两组子宫内膜上皮细胞的CA125浓度均升高,无排卵型功血子宫内膜上皮细胞的增高程度明显低于正常子宫内膜上皮细胞(P<0.05)。④正常和功血的子宫内膜上皮细胞中二者的吸光度值与细胞培养上清液中的CA125浓度有显著的相关性,两者的相关系数分别为0.681和0.885(P<0.05)。结论KGF对体外培养的无排卵型功血子宫内膜上皮细胞有促进生长和分泌CA125的作用,但促进作用的程度不如正常子宫内膜上皮细胞,提示无排卵型功血子宫内膜上皮细胞存在与正常子宫内膜上皮细胞不同的生长机制和功能,可能参与无排卵型功血的发病。

人角质化细胞生长因子-2基因的克隆、表达及产物的纯化、鉴定

用高表达菌株BL 2 1codonpluscompententcells表达重组人角质化细胞生长因子 (hKGF 2 )蛋白并初步纯化和检测其活性。通过RT PCR从流产胎儿肺组织中钓取hKGF 2cDNA ,将其克隆入pBV2 2 0载体质粒。在大肠杆菌BL 2 1codonpluscompentcells中表达hKGF 2蛋白。采用亲和层析和离子交换层析分离纯化 ,以细胞增殖实验测定表达蛋白的生物活性。结果显示 ,hKGF 2蛋白在BL2 1中得到高效表达 ;hKGF 2蛋白能刺激NIH3T3细胞的增殖 ,具有显著的促有丝分裂活性。