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人角质细胞生长因子基因转化水稻的初探
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作者 苏勇波 张红心 +1 位作者 沈明山 陈亮 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B05期70-72,共3页
角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)在组织的损伤修复中起着重要的作用.在植物里面表达高活性的KGF具有成本低、易开发的优点.本实验将人角质细胞生长因子基因经农杆菌介导转入水稻中,获得110株再生植株.对再生植株进行... 角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)在组织的损伤修复中起着重要的作用.在植物里面表达高活性的KGF具有成本低、易开发的优点.本实验将人角质细胞生长因子基因经农杆菌介导转入水稻中,获得110株再生植株.对再生植株进行GUS检测发现有44.7%植株呈阳性,PCR检测的结果也显示有52.6%的植株为阳性植株. 展开更多
关键词 角质细胞生长因子 遗传转化 基因表达
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单侧膈神经切断对幼猪肺内表皮生长因子及角质细胞生长因子基因表达的影响
2
作者 杨勇 陈亮 顾玉东 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期586-589,共4页
目的研究膈神经切断后幼猪肺内表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)mRNA及角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)mRNA表达的变化及其意义。方法健康雄性幼猪36只,按手术时日龄10、30和50d分为三组,每组12只,再随机... 目的研究膈神经切断后幼猪肺内表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)mRNA及角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)mRNA表达的变化及其意义。方法健康雄性幼猪36只,按手术时日龄10、30和50d分为三组,每组12只,再随机分为实验组(膈神经切断,n=6)和对照组(n=6)。实验组于颈部将左侧膈神经切断,对照组仅行左侧膈神经暴露。分别于术后2周处死动物,采用RT-PCR方法对肺组织中EGF及KGF mRNA的表达水平进行检测分析。结果RT-PCR的融解曲线示EGF、KGF和内参基因GAPDH分别在80.0、84.5和89.0℃附近各有一单峰,融解温度均一。单侧膈神经切断术后2周,10d和30d实验组幼猪肺内EGF mRNA相对表达水平分别为3.53±0.36和1.73±0.29,KGF mRNA的相对表达水平为4.71±0.42和2.77±0.29,均较相同日龄对照组(EGF mRNA表达水平4.60±0.41、2.18±0.24和KGF mRNA表达水平6.05±0.42、3.58±0.31)低,比较差异有统计学意义(P<0.05);50d实验组幼猪肺内EGF及KGF mRNA的表达水平(0.72±0.15和1.83±0.22)与对照组(0.74±0.18和2.09±0.23)比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组间比较显示幼猪肺内EGF及KGF mRNA的表达水平差异有统计学意义(P<0.01),随幼猪年龄增长肺内EGF及KGF mRNA的表达水平下降。结论单侧膈神经切断将导致术时日龄<30d幼猪肺内生长因子表达水平的下降,进而影响肺组织的正常发育,提示年龄较小的患儿应慎行膈神经移位术。 展开更多
关键词 单侧膈神经切断 表皮生长因子 角质细胞生长因子 RT-PCR
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非小细胞肺癌治疗中胸腔积液、血液表皮生长因子受体基因突变检测的价值
3
作者 张昌志 余倩 +1 位作者 王霄 彭春红 《中国社区医师》 2024年第6期128-130,共3页
目的:分析非小细胞肺癌(NSCLC)治疗中实施胸腔积液、血液表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测的价值。方法:选取2022年1—12月于贵州省人民医院呼吸与危重症医学科治疗的42例NSCLC患者作为研究对象。检测患者血液、组织、胸腔积液3种标... 目的:分析非小细胞肺癌(NSCLC)治疗中实施胸腔积液、血液表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测的价值。方法:选取2022年1—12月于贵州省人民医院呼吸与危重症医学科治疗的42例NSCLC患者作为研究对象。检测患者血液、组织、胸腔积液3种标本EGFR基因突变状态,以肿瘤组织病理检查结果为“金标准”,分析3种标本检测的诊断效能。结果:42例患者中,共发生EGFR基因突变45.24%(19/42)。其中,L858R突变26.32%(5/19),19Del突变52.63%(10/19),G719X突变21.05%(4/19)。3种检查方式检测EGFR基因突变的灵敏度、特异度、准确度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NSCLC治疗中实施胸腔积液、血液EGFR基因突变检测的价值确切,可以帮助医生更便捷地评估患者对于酪氨酸激酶抑制剂类药物的响应程度,预测治疗效果,从而指导治疗方案的制定和调整,为临床治疗提供依据。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 胸腔积液 血液 表皮生长因子受体 基因突变检测
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复方苦参注射液联合甲磺酸奥希替尼片治疗表皮生长因子受体基因突变型晚期非小细胞肺癌临床研究 被引量:1
4
作者 应卫平 钟国美 《新中医》 CAS 2024年第2期147-150,共4页
目的:观察复方苦参注射液联合甲磺酸奥希替尼片治疗痰湿毒蕴型表皮生长因子受体(EGFR)基因突变型晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效。方法:回顾性分析80例痰湿毒蕴型EGFR基因突变型晚期NSCLC患者的临床资料,根据治疗方法不同分成观察... 目的:观察复方苦参注射液联合甲磺酸奥希替尼片治疗痰湿毒蕴型表皮生长因子受体(EGFR)基因突变型晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效。方法:回顾性分析80例痰湿毒蕴型EGFR基因突变型晚期NSCLC患者的临床资料,根据治疗方法不同分成观察组和对照组各40例,观察组采用复方苦参注射液联合甲磺酸奥希替尼片治疗,对照组单纯采用甲磺酸奥希替尼片治疗。2组均以治疗6周为1个疗程,共治疗2个疗程。治疗前后评价Karnofsky功能状态评分(KPS评分),比较2组的临床疗效、不良反应发生率。结果:治疗后,观察组疾病控制率高于对照组(P<0.05);2组客观缓解率、不良反应发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组KPS评分高于治疗前(P<0.05);对照组KPS评分高于治疗前,但差异无统计学意义(P>0.05)。观察组KPS评分高于对照组(P<0.05)。结论:采用复方苦参注射液联合甲磺酸奥希替尼片治疗痰湿毒蕴型EGFR基因突变型晚期NSCLC的患者,能够提高疗效,减少不良反应的发生,对患者的健康状况有明显的改善作用。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 表皮生长因子受体基因突变 痰湿毒蕴证 复方苦参注射液 Karnofsky功能状态评分
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独立生长因子1负调控GREM1基因抑制肝星状细胞增殖与活化实验研究
5
作者 刘刚 朱冬梅 +2 位作者 赵芹 刘晓玲 彭洪 《陕西医学杂志》 CAS 2023年第6期655-659,共5页
目的:探讨独立生长因子1(GFI1)负调控GREM1基因对肝星状细胞(HSC)增殖与活化的影响。方法:选择HSC细胞株LX-2培养并进行相关实验。采用CCK-8法检测GREM1基因和GFI1对LX-2细胞增殖的影响。采用Western blot分析GREM1基因和GFI1对α-平滑... 目的:探讨独立生长因子1(GFI1)负调控GREM1基因对肝星状细胞(HSC)增殖与活化的影响。方法:选择HSC细胞株LX-2培养并进行相关实验。采用CCK-8法检测GREM1基因和GFI1对LX-2细胞增殖的影响。采用Western blot分析GREM1基因和GFI1对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达的影响。利用生物信息学方法分析GREM1基因的转录因子并通过染色质免疫共沉淀(CHIP)实验验证GREM1基因是否可与GFI1结合。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测GFI1对GREM1 mRNA的影响。通过抑制GFI1并下调GREM1表达分析GFI1是否通过负调控GREM1抑制LX-2细胞增殖和α-SMA表达。结果:过表达GREM1可促进LX-2细胞增殖及上调α-SMA蛋白表达水平(均P<0.05)。GFI1可能是GREM1的上游转录因子,CHIP实验证实GFI1可与GREM1直接结合。下调GFI1表达可促进GREM1 mRNA表达和LX-2细胞增殖,并上调α-SMA蛋白表达水平(均P<0.05)。下调GREM1表达可以减弱GFI1表达(P<0.05)。结论:GREM1可促进HSC活化,而GFI1可通过负调控GREM1基因抑制HSC增殖与活化。 展开更多
关键词 肝星状细胞 独立生长因子1 GREM1基因 增殖 活化 机制
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腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子165对大鼠超比例随意皮瓣成活的影响及机制研究
6
作者 赵毅 闫洪伟 +3 位作者 王玉琦 陈丽娟 洪城 田诗政 《中国美容医学》 CAS 2024年第2期60-63,97,共5页
目的:观察术前注射腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子165(Ad-HGF/VEGF165)对大鼠超比例随意皮瓣成活的影响和其机制的初步研究。方法:大鼠背部设计超比例随意皮瓣模型,将其随机分为Ad-HGF/VEGF165组、AdVEGF165组和对照组。... 目的:观察术前注射腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子165(Ad-HGF/VEGF165)对大鼠超比例随意皮瓣成活的影响和其机制的初步研究。方法:大鼠背部设计超比例随意皮瓣模型,将其随机分为Ad-HGF/VEGF165组、AdVEGF165组和对照组。术前7 d,Ad-HGF/VEGF165组和Ad-VEGF165组分别于大鼠皮瓣及创缘内多点注射Ad-HGF/VEGF165及AdVEGF165,对照组注射等容量0.9%氯化钠注射液。分别于术后7 d、14 d观测皮瓣成活面积,切取皮瓣组织标本HE染色、免疫组化观察微血管密度及组织间VEGF阳性率等指标,WesternBlot检测目的蛋白表达情况。结果:术后7 d、14 d,Ad-HGF/VEGF165组、Ad-VEGF165组皮瓣存活面积、组织间微血管数目、VEGF及细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达情况均高于对照组(P<0.001),且Ad-HGF/VEGF165组明显高于Ad-VEGF165组(P<0.05)。结论:Ad-HGF/VEGF165具有协同作用,能显著促进VEGF和ERK1/2信号因子表达,短期内促进血管网重建,改善皮瓣血液灌注,提高大鼠超比例随意皮瓣成活面积。 展开更多
关键词 超比例随意皮瓣 基因治疗 腺病毒 血管新生 细胞生长因子 血管内皮生长因子
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晚期非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变的危险因素及表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂的疗效分析 被引量:7
7
作者 姬巧霞 张红斌 +1 位作者 王愿 赵敏 《中国医药》 2023年第2期211-215,共5页
目的探讨晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的危险因素及EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的疗效。方法回顾性选取河北省胸科医院2018年5月至2021年1月收治的150例晚期NSCLC患者,包括EGFR基因突变58例、野生型92例。... 目的探讨晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的危险因素及EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的疗效。方法回顾性选取河北省胸科医院2018年5月至2021年1月收治的150例晚期NSCLC患者,包括EGFR基因突变58例、野生型92例。EGFR基因突变患者根据自愿原则接受EGFR-TKI(39例)或含铂化疗方案(19例)治疗。分析晚期NSCLC患者EGFR基因突变的危险因素,比较不同治疗方案患者的客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)。随访1年,统计EGFR基因突变患者无进展生存期及1年无进展生存率。结果58例EGFR基因突变晚期NSCLC患者中,以EGFR基因外显子19(24例)、21(17例)突变最为常见。EGFR基因突变发生率在不同性别、病理类型和有无吸烟史的患者中比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果表明,女性(比值比=2.530,95%置信区间:1.176~5.443,P=0.018)、腺癌(比值比=3.401,95%置信区间:1.449~7.980,P=0.005)、无吸烟史(比值比=2.478,95%置信区间:1.105~5.556,P=0.031)是NSCLC患者EGFR基因突变的独立危险因素。EGFR-TKI治疗患者的ORR、DCR均高于化疗患者(均P<0.05)。EGFR-TKI治疗患者中,女性患者ORR高于男性患者,腺癌、无吸烟史患者的ORR、DCR分别高于非腺癌、有吸烟史患者(均P<0.05)。EGFR-TKI治疗患者1年无进展生存率高于化疗患者(P<0.001)。在EGFR-TKI治疗患者中,女性、腺癌、无吸烟史患者1年无进展生存率分别高于男性、非腺癌、有吸烟史患者(均P<0.05)。结论EGFR-TKI治疗EGFR基因突变晚期NSCLC患者的临床效果及短期预后优于含铂方案化疗。女性、腺癌、无吸烟史是EGFR基因突变的危险因素,且此类患者接受EGFR-TKI治疗后获益更加明显。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 表皮生长因子受体 基因突变 靶向治疗
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埃克替尼联合体部立体定向放射治疗表皮生长因子受体基因突变的转移性非鳞状非小细胞肺癌的临床疗效 被引量:1
8
作者 郭艺彤 杨卫华 杨泽华 《中国医刊》 CAS 2023年第4期386-390,共5页
目的分析埃克替尼联合体部立体定向放射(stereotactic body radiation therapy,SBRT)治疗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变的转移性非鳞状非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床疗效... 目的分析埃克替尼联合体部立体定向放射(stereotactic body radiation therapy,SBRT)治疗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变的转移性非鳞状非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床疗效。方法选取2020年6月至2021年6月山西医科大学山西白求恩医院收治的EGFR基因突变转移性非鳞状NSCL患者110例,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组55例。对照组采用埃克替尼联合常规治疗,观察组采用埃克替尼联合SBRT治疗。比较两组的客观缓解率、预后生存情况、不良反应发生情况及治疗前后的血清肿瘤标志物水平变化。结果观察组的客观缓解率高于对照组,无进展生存期长于对照组,差异均有显著性(P<0.05)。两组的总生存时间及不良反应发生率比较差异无显著性(P>0.05)。治疗后两组患者的血清癌胚抗原、鳞状细胞癌抗原、细胞角蛋白19片段抗原水平均明显低于治疗前,且观察组明显低于对照组,差异均有显著性(P<0.05)。结论EGFR基因突变的转移性非鳞状NSCLC患者应用埃克替尼联合SBRT治疗可提高疗效,延长无进展生存期,安全性较好。 展开更多
关键词 埃克替尼 体部立体定向放射治疗 表皮生长因子受体基因突变 非小细胞肺癌
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影像组学在预测非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变中的应用 被引量:1
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作者 杨露 欧阳治强 +4 位作者 单海燕 陈龙 朱钰 褚吉祥 廖承德 《放射学实践》 CSCD 北大核心 2023年第6期783-787,共5页
非小细胞肺癌表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与否对患者治疗方案的选择以及预后评估具有重要的作用。目前,临床上主要依靠有创手段获得肿瘤的病理组织并进行分子检测来确定非小细胞肺癌患者的EGFR基因突变状况,但由于采样和分析的局限... 非小细胞肺癌表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与否对患者治疗方案的选择以及预后评估具有重要的作用。目前,临床上主要依靠有创手段获得肿瘤的病理组织并进行分子检测来确定非小细胞肺癌患者的EGFR基因突变状况,但由于采样和分析的局限性,检测到的结果可能无法完全反应病灶部位肿瘤内和肿瘤间的异质性。影像组学可从影像图像中高通量地提取并分析大量影像组学特征数据,并将其与肿瘤基因表达相关联,可为临床诊断和治疗提供更多的参考依据。本文将对影像组学辅助诊断非小细胞肺癌EGFR基因突变的研究进行综述。 展开更多
关键词 影像组学 影像基因组学 非小细胞 表皮生长因子受体基因 突变
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重组人角质细胞生长因子-2基因克隆、表达、纯化与活性分析 被引量:13
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作者 马雁冰 李擎 +4 位作者 谢天宏 李鸿钧 冮宏映 戴长柏 孙茂盛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期761-765,共5页
从人胚肺二倍体细胞KMB17中抽提总RNA ,经RT PCR扩增获得编码人角质细胞生长因子 2 (keratinocytegrowthfactor 2 ,KGF 2 )的cDNA .克隆于硫氧环蛋白表达载体pThioHisA ,序列分析表明与文献报道一致 .经IPTG诱导 ,在大肠杆菌BL2 1中实... 从人胚肺二倍体细胞KMB17中抽提总RNA ,经RT PCR扩增获得编码人角质细胞生长因子 2 (keratinocytegrowthfactor 2 ,KGF 2 )的cDNA .克隆于硫氧环蛋白表达载体pThioHisA ,序列分析表明与文献报道一致 .经IPTG诱导 ,在大肠杆菌BL2 1中实现高效表达 ,表达量可达菌体总蛋白 10 %~15 % .菌体超声破碎 ,上清经CM SepharoseFF阳离子交换 ,Heparin Sepharose亲和层析 ,Superdex 75凝胶过滤层析纯化得到重组人KGF 2 ,纯度高于 95 % .生物活性分析表明 ,它能够促进成纤维细胞NIH 3T3的增殖 ,诱导鸡胚背根神经结神经轴突的生长 ,促进鸡胚尿囊膜血管生成 .研究结果表明 ,获得了 95 %纯度的具有生物学活性的重组人KGF 2 。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子-2 基因克隆 表达 纯化 活性分析
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人角质化细胞生长因子-2基因的克隆、表达及产物的纯化、鉴定 被引量:4
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作者 吴斌文 段招军 +7 位作者 李武平 陈勇 吕宏亮 衣作安 张成海 林菊生 王家駹 侯云德 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期461-464,共4页
用高表达菌株BL 2 1codonpluscompententcells表达重组人角质化细胞生长因子 (hKGF 2 )蛋白并初步纯化和检测其活性。通过RT PCR从流产胎儿肺组织中钓取hKGF 2cDNA ,将其克隆入pBV2 2 0载体质粒。在大肠杆菌BL 2 1codonpluscompentcell... 用高表达菌株BL 2 1codonpluscompententcells表达重组人角质化细胞生长因子 (hKGF 2 )蛋白并初步纯化和检测其活性。通过RT PCR从流产胎儿肺组织中钓取hKGF 2cDNA ,将其克隆入pBV2 2 0载体质粒。在大肠杆菌BL 2 1codonpluscompentcells中表达hKGF 2蛋白。采用亲和层析和离子交换层析分离纯化 ,以细胞增殖实验测定表达蛋白的生物活性。结果显示 ,hKGF 2蛋白在BL2 1中得到高效表达 ;hKGF 2蛋白能刺激NIH3T3细胞的增殖 ,具有显著的促有丝分裂活性。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子-2 克隆和表达 纯化 鉴定
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低氧诱导因子-1α和角质细胞生长因子双基因重组减毒沙门菌菌株的构建及其在肠上皮细胞中的表达 被引量:3
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作者 哈小琴 李晓云 +6 位作者 邓芝云 董菊子 赵勇 王鲲 张媛媛 张俊 杨志华 《解放军医药杂志》 CAS 2013年第11期7-11,15,共6页
目的构建同时携带低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和角质细胞生长因子(KGF)真核表达载体的减毒沙门菌菌株(Ty21a-pIRES-HIF-IRES-KGF,TPHK),观察其在防治肠黏膜损伤方面潜在的应用前景。方法采用RT-PCR法从低氧处理A549细胞扩增HIF-1αcDNA... 目的构建同时携带低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和角质细胞生长因子(KGF)真核表达载体的减毒沙门菌菌株(Ty21a-pIRES-HIF-IRES-KGF,TPHK),观察其在防治肠黏膜损伤方面潜在的应用前景。方法采用RT-PCR法从低氧处理A549细胞扩增HIF-1αcDNA后连接到载体pIRES-SEQ的NheI和MluI酶切位点,构建单基因重组质粒pIRES-HIF。然后以质粒pIRES2-EGFP-KGF为模板扩增KGF基因并克隆到重组质粒pIRES-HIF的XbaI和NotI酶切位点上,获得双基因重组质粒pIRES-HIF-IRES-KGF。采用电穿孔法将pIRES-HIF-IRES-KGF质粒转入减毒沙门菌Ty21a中,通过筛选获得TPHK。该菌株转染肠上皮细胞IEC-6后48 h,用ELISA法检测上清中HIF1α和KGF的表达水平。并采用MTT方法分析不同剂量表达产物对IEC-6细胞的作用。结果通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实TPHK构建成功。TPHK转染正常肠上皮细胞IEC-6后,48 h取上清用ELISA法检测HIF和KGF的表达,结果表明6×105个细胞可表达(16.03±1.47)ng的HIF蛋白和(17.77±1.83)ng的KGF蛋白。MTT结果表明表达上清有明显刺激正常肠上皮细胞IEC-6增殖的活性(P<0.05),加入20%表达上清时刺激活性达高峰。结论成功构建了TPHK,其可有效转染肠上皮细胞IEC-6,表达上清可显著促进IEC-6细胞增殖。提示TPHK具有潜在的在肠黏膜损伤局部应用的前景。 展开更多
关键词 低氧诱导因子-1Α 角质细胞生长因子 基因 减毒沙门菌 构建 表达
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角质细胞生长因子-2与新生儿相关肺部疾病的研究进展
13
作者 侯琳(综述) 舒桂华(审校) 《检验医学与临床》 CAS 2023年第9期1302-1306,共5页
角质细胞生长因子-2(KGF-2)是一类来源于间充质细胞的生长因子,具有多功能生物学作用,特别其作为一种肺组织保护因子,可调控肺泡上皮细胞增殖、分化及迁移,促进受损肺组织修复和抑制肺泡纤维化。KGF-2缺失或基因突变与新生儿相关肺部疾... 角质细胞生长因子-2(KGF-2)是一类来源于间充质细胞的生长因子,具有多功能生物学作用,特别其作为一种肺组织保护因子,可调控肺泡上皮细胞增殖、分化及迁移,促进受损肺组织修复和抑制肺泡纤维化。KGF-2缺失或基因突变与新生儿相关肺部疾病的发生、发展密切相关,且有增加儿童期甚至成年后发生慢性肺部疾病的风险。本文就KGF-2结构、生物学功能,以及其与新生儿相关肺部疾病的关系做一综述,旨在为开拓新生儿呼吸系统疾病新的诊治策略提供理论参考依据。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子-2 新生儿 肺部疾病
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人表皮生长因子基因转染原代角质形成细胞 被引量:1
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作者 周建大 王少华 +6 位作者 罗成群 谢慧清 刘进言 胡媛 谭建湘 李文波 陈勇 《激光生物学报》 CAS CSCD 2009年第2期184-188,共5页
目的:将带信号肽的人表皮生长网子基因转染原代成人角质肜成细胞,证实细胞活性及hEGF的有效表达,为后期的皮肤修复研究打下基础。方法:先酶切验证pcDNA3.1-hEGF,后消化成人皮肤组织,以Defined Keratinocyte—SFM(DKSFM)传代... 目的:将带信号肽的人表皮生长网子基因转染原代成人角质肜成细胞,证实细胞活性及hEGF的有效表达,为后期的皮肤修复研究打下基础。方法:先酶切验证pcDNA3.1-hEGF,后消化成人皮肤组织,以Defined Keratinocyte—SFM(DKSFM)传代培养角质形成细胞并鉴定,脂质体转染质粒pcDNA3.1-hEGF人细胞,转基因细胞培养48h再作RT-PCR和Western—blot分析,上清分别进行放射免疫测定和MTT测定。结果:质粒peDNA3.1-hEGF上的hEGF序列经测序证实,双酶切后获得约230bp和5.4kb条带;成人角质形成细胞体外培养可快速稳定增殖,转hEGF基因细胞经RT—PCR扩增出一条约230bp的特异性条带。Westem—blot检测到hEGF表达明显升高;放射免疫法和MTT实验证实转基因细胞有稳定的hEGF蛋白分泌。结论:质粒pcDNA3.1-hEGF在脂质体介导下成功转染成人皮肤角质形成细胞,转基因细胞能分泌有生物活性的EGF;体外培养的成人皮肤角质形成细胞可见少量EGF分泌. 展开更多
关键词 皮肤 表皮生长因子 基因 角质形成细胞 质粒
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重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆、表达及活性 被引量:2
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作者 田海山 唐禄 +3 位作者 王晓杰 王艳芳 官丽莉 李校堃 《吉林大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1150-1156,共7页
从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA,利用RT-PCR法获得人角质细胞生长因子-2(hKGF-2)cDNA,并通过PCR方法扩增,再与原核表达载体pET3c连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中获得表达菌株.通过流加补料方式和发酵条件的控制,进行高密度培养,并通过I... 从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA,利用RT-PCR法获得人角质细胞生长因子-2(hKGF-2)cDNA,并通过PCR方法扩增,再与原核表达载体pET3c连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中获得表达菌株.通过流加补料方式和发酵条件的控制,进行高密度培养,并通过IPTG诱导获得可溶性表达的目的产物.结果表明:目的蛋白占菌体总蛋白的30.0%以上;经阳离子交换层析、肝素亲和层析两步柱层析方法获得的rhKGF-2纯度高于99.0%.建立了利用转受体FGFR2-Ⅲb的BaF3细胞株进行rhKGF-2促增殖作用的活性测定方法,活性测定结果呈典型的S型曲线,并在一定范围内具有剂量依赖性. 展开更多
关键词 重组角质细胞生长因子-2(rhKGF.2) 高密度培养 柱层析 转受体FGFR2-Ⅲb BaF3细胞 生物活性
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转角质细胞生长因子-2基因红花研究 被引量:1
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作者 杨晶 王兰 +8 位作者 黄建 陈玉斌 郭咏昕 易善勇 官丽莉 杜林娜 李海燕 李校堃 姜潮 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2015年第2期210-216,共7页
【目的】构建转角质细胞生长因子-2基因(KGF2)红花,为KGF2药用蛋白的生产奠定了基础。【方法】利用融合PCR方法扩增人源KGF2基因与拟南芥油体蛋白Oleosin基因的融合基因,将融合基因克隆至表达载体pOP上,构建了重组质粒pOP-OL-KGF2,采用... 【目的】构建转角质细胞生长因子-2基因(KGF2)红花,为KGF2药用蛋白的生产奠定了基础。【方法】利用融合PCR方法扩增人源KGF2基因与拟南芥油体蛋白Oleosin基因的融合基因,将融合基因克隆至表达载体pOP上,构建了重组质粒pOP-OL-KGF2,采用冻融法将质粒pOP-OL-KGF2转入根癌农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化红花,采用PCR检测筛选转基因红花阳性植株,SDS-PAGE检测Oleosin-KGF2融合蛋白的表达情况。【结果】成功构建了植物特异表达载体pOP-OL-KGF2,转染后共获得了12株转基因红花植株,其中2株鉴定为阳性,阳性率为17%,对转化植株进行DNA水平检测和蛋白水平检测,可知KGF2基因已经整合进红花基因组中,且有所表达。【结论】成功获得转KGF2基因的红花株系。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子-2 红花 遗传转化
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人角质细胞生长因子2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:2
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作者 余德荣 游力 +2 位作者 王郡甫 许晓群 高春义 《生物技术通讯》 CAS 2007年第2期224-226,共3页
目的:构建人角质细胞生长因子2(hKGF2)基因的高效原核表达载体pET-30a(+)-hKGF2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达。方法:从培养的人胚胎肺成纤维细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出去除了信号肽部分的hKGF2基因,克隆到pMD18-T载体,... 目的:构建人角质细胞生长因子2(hKGF2)基因的高效原核表达载体pET-30a(+)-hKGF2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达。方法:从培养的人胚胎肺成纤维细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出去除了信号肽部分的hKGF2基因,克隆到pMD18-T载体,经DNA序列分析后与pET-30a(+)表达载体连接,在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达6×His-hKGF2,用SDS-PAGE及Western印迹鉴定表达蛋白。结果:构建了表达载体pET-30a(+)-hKGF2,经IPTG诱导后,表达的重组蛋白理论相对分子质量约为23000,约占菌体总蛋白的20%。结论:6×His-hKGF2蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中为可溶性高效表达,为获得高纯度、高活性的产物,以及进一步的大规模生产和应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子2 克隆 可溶性表达
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不同HBV基因型乙肝相关肝细胞癌患者的临床特征和血管内皮生长因子及其受体在肝癌组织中的表达
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作者 白露 李庆刚 《河南医学研究》 CAS 2023年第17期3181-3184,共4页
目的探讨不同HBV基因型乙肝相关肝细胞癌患者的临床特征和血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Flt-1,Flk-1)在肝癌组织中的表达。方法前瞻性连续纳入2020年10月至2022年10月在郑州大学第一附属医院就诊住院的乙肝相关肝细胞癌患者200例作... 目的探讨不同HBV基因型乙肝相关肝细胞癌患者的临床特征和血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Flt-1,Flk-1)在肝癌组织中的表达。方法前瞻性连续纳入2020年10月至2022年10月在郑州大学第一附属医院就诊住院的乙肝相关肝细胞癌患者200例作为研究对象,根据患者HBV基因型检测结果将患者分为HBV基因型B型组101例,HBV基因型C型组90例,HBV基因型D型组9例,分析肝功能相关指标以及VEGF和受体(Flt-1,Flk-1)的表达的差异。结果HBV基因型C型肝细胞癌患者甲胎蛋白(AFP)水平以及HBV载量、Child-Pugh评分、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Flt-1,Flk-1)表达较HBV基因型B型肝细胞癌与HBV基因型D型肝细胞癌更高。结论不同HBV基因型患者的肿瘤标志物、病毒载量以及肝功能比较有区别,对于确诊的肝细胞癌患者及时进行HBV基因型检测和VEGF及其受体(Flt-1,Flk-1)表达检测对于治疗以及预后具有指导意义。 展开更多
关键词 HBV基因 细胞 临床特征 血管内皮生长因子
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血浆外泌体淋巴细胞白血病缺失基因1水平对表皮生长因子受体/间变性淋巴瘤激酶野生型进展期非小细胞肺癌患者免疫治疗反应的预测价值
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作者 柳秋霞 嵇龙飞 +3 位作者 胡燕勤 潘楠楠 强鑫华 李勇 《中国医药导报》 CAS 2023年第32期28-32,共5页
目的 探讨血浆外泌体淋巴细胞白血病缺失基因1(exoDLEU1)在预测表皮生长因子受体(EGFR)/间变性淋巴瘤激酶(ALK)野生型进展期非小细胞肺癌(NSCLC)患者免疫治疗反应中的临床意义。方法 收集2017年6月至2019年2月于浙江省湖州市第一人民医... 目的 探讨血浆外泌体淋巴细胞白血病缺失基因1(exoDLEU1)在预测表皮生长因子受体(EGFR)/间变性淋巴瘤激酶(ALK)野生型进展期非小细胞肺癌(NSCLC)患者免疫治疗反应中的临床意义。方法 收集2017年6月至2019年2月于浙江省湖州市第一人民医院接受免疫治疗的91例EGFR/ALK野生型进展期NSCLC患者的血液样本,根据免疫治疗后的反应将其分为反应组(53例)和无反应组(38例)。提取两组治疗前血浆外泌体,通过实时荧光定量PCR检测两组exoDLEU1表达,采用logistic回归分析EGFR/ALK野生型进展期NSCLC患者免疫治疗反应情况的影响因素,绘制受试者操作特征(ROC)曲线评估血浆exoDLEU1水平对患者免疫治疗反应情况的预测价值。结果 透射电镜下可见囊泡具有圆形或椭圆形膜,直径为30~150 nm,原始浓度为6.6×10^(10)个粒子/ml,流式细胞仪检测及蛋白质印迹法结果显示,提取物含有外泌体标志物CD63、CD9、CD81、热休克蛋白70。实时荧光定量PCR结果显示,反应组治疗前血浆exoDLEU1水平低于无反应组,差异有统计学意义(P<0.05)。影响因素分析结果显示,血浆exoDLEU1表达水平是EGFR/ALK野生型进展期NSCLC患者免疫治疗无反应的独立影响因素(OR=6.119,95%CI:2.768~13.526,P<0.05)。ROC曲线分析显示,血浆exoDLEU1表达水平预测EGFR/ALK野生型进展期NSCLC患者免疫治疗反应情况的曲线下面积为0.900 (P<0.05)。结论 EGFR/ALK野生型进展期NSCLC患者免疫治疗前的血浆exoDLEU1水平可作为预测其治疗反应的指标,有助于在临床中筛选出免疫治疗更易获益的患者。 展开更多
关键词 血浆外泌体 淋巴细胞白血病缺失基因1 表皮生长因子受体/间变性淋巴瘤激酶野生型进展期非小细胞肺癌 免疫治疗反应
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角质细胞生长因子对人工流产术后子宫内膜的修复作用及对月经转归、卵巢排卵的影响
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作者 金立娟 户月 +3 位作者 王丽 杜杰 任海霞 王宏卫 《安徽医药》 CAS 2023年第9期1870-1873,共4页
目的探讨角质细胞生长因子(KGF)对人工流产术后子宫内膜的修复作用及对月经转归、卵巢排卵的影响。方法选取2019年12月至2020年12月在石家庄市人民医院行人工流产术的早孕妇女120例,将所有孕妇按随机数字表法分为观察组60例,对照组60例... 目的探讨角质细胞生长因子(KGF)对人工流产术后子宫内膜的修复作用及对月经转归、卵巢排卵的影响。方法选取2019年12月至2020年12月在石家庄市人民医院行人工流产术的早孕妇女120例,将所有孕妇按随机数字表法分为观察组60例,对照组60例,对照组采用玻璃酸钠治疗,观察组采用KGF治疗,观察并统计两组的阴道出血天数和月经复潮时间,采用彩色多普勒超声诊断仪对两组子宫动脉阻力指数、血流量、搏动指数、收缩末期血流峰值/舒张末期血流峰值(S/D)、平均流速血流动力学参数进行测评,采用腹部B超检查两组的子宫内膜厚度变化情况,统计两组的卵巢恢复排卵例数。B超检查两组的宫腔粘连程度。结果观察组阴道出血天数(4.62±0.23)d和月经复潮时间(28.12±2.06)d均短于对照组(6.23±0.55)d、(34.12±2.16)d(P<0.05);治疗后,对照组阻力指数、搏动指数、血流量、平均流速、S/D均显著降低(P<0.05),且观察组治疗后上述指标均高于对照组(P<0.05);观察组子宫内膜厚度(9.36±1.09)mm大于对照组(6.22±1.11)mm(P<0.05);观察组卵巢恢复排卵例数22例多于对照组6例(P<0.05);观察组宫腔粘连程度低于对照组(P<0.05)。结论KGF治疗可有效改善人工流产术后月经转归情况,稳定术后血流动力学,促进子宫内膜修复和卵巢排卵功能的恢复。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子 排卵 人工流产术 子宫内膜 月经转归
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