解冻液I温度设定对小鼠卵母细胞玻璃化冻融效果的影响

目的探讨预热至37℃的解冻液I和预热至室温(22℃)的解冻液I对小鼠卵母细胞玻璃化冻融效果的影响。方法对6周龄昆明系雌鼠进行促排卵,脱去颗粒细胞后选取形态良好的MII期卵母细胞,用含不同浓度DMSO+EG的磷酸盐缓冲液(5%DMSO+5%EG,10%DMSO+10%EG,20%DMSO+20%EG+30%蔗糖)对其进行玻璃化冷冻,储存2天后对小鼠卵子进行解冻复温。将卵子随机分为两组,一组投入预热至37℃的解冻液I(含30%蔗糖的磷酸盐溶液),另一组投入预热至室温(22℃)的相同浓度的解冻液I中,再分别移至预热至室温(22℃)的解冻液II、III和IV(分别含20%、10%、5%蔗糖的磷酸盐溶液),随后对两组卵母细胞的复苏率进行统计比较。结果共计对119枚小鼠卵子进行玻璃化冻融,其中61枚置于预热至37℃的解冻液I,有52枚存活良好,复苏率为82.25%(52/61),其余58枚置于预热至室温(22℃)的解冻液I进行解冻,有23枚存活良好,复苏率为39.66%(23/58),37℃组的复苏率显著高于室温(22℃)组(P<0.01)。结论虽然降低平衡时的温度可以减少高浓度玻璃化冷冻保护剂对卵子的毒性作用,但较快的升温速度可以帮助卵子快速通过-120℃^-35℃的危险阶段,而37℃的解冻液I环境较之室温(22℃)能更好地加速这一过程,避免重结晶对细胞的致命损伤。

不同冷冻方法和解冻液对猪精液冷冻效率的影响

采用三种不同的冷冻方法冷冻猪的新鲜精液,再分别用不同的解冻液在相同条件下同时解冻,对比解冻后精子的活力和顶体完整率,以优化猪精液冷冻方法.实验一:随机选取三头健康的有稳定受精能力的优良种公猪,采集新鲜精液,分别用干冰颗粒、液氮颗粒和液氮细管三种方法冷冻,用同样的方法解冻,对比解冻后精子的活力和顶体完整率;实验二:用不同的解冻液解冻经干冰颗粒法冷冻的精液,对比不同解冻液对精子活力的影响;实验三:以孤雌激活和鲜精受精为对照,验证经实验一和实验二选择出来的最优冷冻方法和解冻液处理后的精子的体外受精能力.实验一显示,干冰颗粒冷冻法冷冻的猪精液解冻后精子活力(0.23)略高于液氮颗粒法的精子活力(0.20),而二者均显著高于细管冻精法的精子活力(0.08)(P<0.05),液氮颗粒法的顶体完整率(54.7%)和细管法的顶体完整率(54.2%)无显著差异,但二者均显著低于干冰颗粒法的顶体完整率(58.0%)(P<0.05).实验二显示,Glucose-EDTA解冻液解冻后,精子活力(0.22)显著高于DPBS-BSA解冻液解冻后的精子活力(0.13)(P<0.05).实验三:经干冰颗粒法冷冻、Glucose-EDTA解冻液解冻的精液,体外受精后的囊胚发育率(17.6%)与鲜精体外受精囊胚率(17.9%)无显著差异,但二者均显著低于孤雌激活对照组的囊胚率(36.6%)(P<0.05).由此可知:干冰颗粒法冷冻结合Glucose-EDTA解冻液解冻是较为理想猪精液冷冻保存方法,经该方法冷冻、解冻的猪精液,体外受精后的胚胎发育率与鲜精没有显著差异.

大熊猫冷冻精液解冻速度和解冻液中添加Pentyoxyfilline对其解冻后活力的影响

建立大熊猫的精子库,进行远距离圈养大熊猫种群间的人工授精和遗传物质的转运,维持遗传多样性,是目前大熊猫遗传管理的优先方法。要成为最有效的工具,精子库保存的精子解冻后的活力必须很好。本文对大熊猫冷冻精液的解冻速度和解冻液中添加化学激活剂Pentyoxyfilline(PF)后的精子活力进行了试验。试验用的精液采自11只成年大熊猫,精液冷冻速度为每分钟-40℃～-100℃。试验Ⅰ:将冷冻精液放入3种不同温度的水浴中解冻:(1)22℃(慢速解冻);(2)37℃(中速解冻)(3)50℃(快速解冻)。将冷冻前精子活力(78 1±2 9%)和解冻后的平均精子活力进行比较,快速解冻后的精子活力(57 5±5 4%)显著地降低(P<0 05),而中速解冻的精子活力(67 5±3 1%)和慢速解冻的精子活力(73 33±2 1%)与冷冻前的活力接近。试验Ⅱ:使用中速解冻方法解冻精液后,分别加入最终浓度为0mM、1mM、5mM和10mM的PF,然后分别保温15min和24h。在PF(0mM、1mM、5mM和10mM)中分别孵育15min的解冻精子活力,运动状态,活率和顶体正常率在试验期的90min内都很相似(P>0 05)。在1mMPF中孵育24h的精子活力没有变化(P>0 05)。在5mM和10mMPF中孵育过的精子活力(5mM:24 0±4 7%;10mM19 5±3 6%)比没有加PF的对照组的精子活力(38 3±5 2%)显著地低(P<0 05)。而且。

磁化解冻液对牛冷冻精液品质的影响

近年来,磁效应在人类、医学及生物学上的应用日趋广泛,许多医学试验证明,磁场对机体某些疾患有治疗作用。安民等研究报道,特定电磁波(TDP)对哺乳动物及家禽(鸡)的繁殖生理具有一定的影响,用TDP处理牛精液,可提高其冻后精子活率。饮用磁化水对禽类的生长发育亦有促进作用。固定磁场属于特定的电磁场,为了探讨固定磁场对冷冻精液品质的影响,改善精液品质,本试验利用磁化杯作固定磁场,对解冻液进行磁化处理,观察磁化后的解冻液对精子活率和顶体完整率的作用。 材料和方法 3头乳用黑白花公牛,按常规方法采集精液,并经稀释、平衡后,滴冻成颗粒,保存于液氮瓶中备用。 解冻液的磁化:选用市售H—型强场磁化杯(350T,哈尔滨磁化材料厂出品)作固定磁场。

在绵羊冷冻精液解冻液中添加复合V_B提高冻精解冻后品质的研究

按照L9( 3 4 )正交表进行实验设计 ,将复合维生素B、亚硒酸钠维生素E、谷胱甘肽及抗坏血酸在绵羊冻精解冻液中进行单独或组合添加。 6号 ( 5 0 70 %± 4 3 2 % )和 7号解冻液的解冻后活率 ( 5 5 3 5 %± 2 2 0 % )除与 4号解冻液 ( 4 5 2 9%±4 11% )差异不明显外 ,均显著 (P <0 0 5 )或极显著 (P <0 0 1)高于其它解冻液。结果表明 :在解冻液中添加复合维生素B可明显提高冻精的解冻后活率。

RapidWarm Blast玻璃化解冻液对囊胚复苏的效果观察

目的观察在囊胚复苏周期中,RapidWarm Blast玻璃化解冻液对囊胚的复苏效果。方法回顾性分析2018年12月至2019年12月在安徽医科大学第一附属医院首次行囊胚复苏移植的655例患者临床资料,根据囊胚解冻液不同分A组357例及B组298例。A组采用传统Vitrification Media解冻液进行囊胚复苏,B组采用新型RapidWarm Blast解冻液复苏。比较两组囊胚复苏后整体存活率,解冻2 h后囊胚重扩张率、孵化率,囊胚种植率及临床妊娠率;同时比较两种解冻液对囊胚不同发育阶段(第5天囊胚、第6天囊胚)的重扩张率、孵化率及临床妊娠率的影响。结果两组囊胚复苏后的存活率、重扩张率、孵化率、临床妊娠率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);B组囊胚种植率(55.45%)高于A组(48.76%),差异有统计学意义(P<0.05)。两组中发育第5天的囊胚复苏2 h后重扩张率及孵化率均高于发育第6天的囊胚,差异均有统计学意义(P<0.05);两组间发育第5天的囊胚复苏2 h后重扩张率及孵化率比较,差异无统计学意义(P>0.05),B组发育第6天的囊胚复苏2 h后扩张率及孵化率均高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新型RapidWarm Blast解冻液用于囊胚玻璃化复苏,可获得与传统的Vitrification Media相似的临床结局,但新型解冻液对发育第6天囊胚的复苏效果更好,胚胎种植率更高。

维生素B_(12)解冻牛冷冻精液效果探析

用VB12液在35℃、40℃、70℃三种解冻温度下，解冻牛冷冻精液，并与Tris-果糖液和2．9％柠檬酸钠液作解冻效果比较。结果表明：三种解冻液解冻后精子的活力相近。经过保存后VB12液显著高于2.9％柠檬酸钠液（P＜0．05），而与Tris-果糖液相近。不同解冻液解冻后的精液作精子上游法测定，在第2、第3段中所含精子数，Tris-果糖液和2．9％柠檬酸钠解冻液解冻的每段递减30％～90％，而VB12则每段仅递减10％～20％，三种解冻温度解冻效果无显著差异（P＞0．05）。结果表明牛冷冻精液选用VB12为解冻液，既可延长精子存活时间，同时与其它稀释液结合使用可取得良好的互作效果，有利于提高受胎率。

中式解冻液解冻牛精液的受胎试验

中药（中式）解冻液１、２号和对照液２．９％柠檬酸钠液的一次受胎率及６０—９０天不发情率比较。

利用猪皮浸出液保存解冻后牛颗粒冷冻精液的研究

将猪皮浸出液（俗称猪皮胨）按一定的比例与一般的精液稀释液混合均匀，然后将牛的颗粒冷冻精液按一定稀释倍数稀释于此液中。利用猪皮胨的固态特性迫使精子停止运动，进而降低解冻后精子的代谢活动、达到延长精子存活时间而不丧失受精能力的目的。其中五号保护剂保存精液６０ｈ活力基本不变，六昼夜时活力下降到０．１。

介绍两种新的牛颗粒冻精解冻液

牛颗粒冻精解冻液与受胎率有着密切的关系,在这方面已有人做过有益的探索和试验。目前我国使用的冷冻精液基本上仍为颗粒冻精,估计这种状况在短期内仍然不会得到很快改变。因此研究和使用解冻后精子活力好,存活时间长,受胎率高的颗粒冻精解冻液,以便扩大输精点的有效半径,促进我国养牛业的迅速发展具有重要意义。特别是对于山区和交通不便的地区更是如此。

应用酸性解冻液输精对产犊性别的影响

本试验研究了应用 PH 值为6.0的酸性解冻液解冻颗粒精液,给牛输精配种对产犊性别的影响。试验结果表明:应用 PH 为6.0的酸性解冻液输精配种获得了60.2％(62/103)的产母犊率,39.8％(41/103)的产公犊率、使产母犊的比率比理论值(50％)提高了10.2％,而且不影响受胎率。

不同解冻程序对荣昌猪冷冻精液解冻效果的影响

为优化猪冷冻精液解冻程序,本研究使用3种解冻液(M、J和C)对荣昌猪冷冻精液进行解冻,检测冷冻精液在不同解冻温度(32、37、42、47、52℃)和不同解冻时间(10 s或20 s)解冻后的精子活率、精子活力、快速前进运动精子数和慢速前进运动精子数,并使用因子分析法评估不同解冻液最佳解冻程序。结果显示:解冻液M在保存指标和持续指标方面较优;解冻液J在即时指标和持续指标方面较优;解冻液C在持续指标方面较优。综合分析表明,解冻液M和解冻液J的最佳解冻程序为42℃水浴解冻20 s,解冻液C的最佳解冻程序为32℃水浴解冻20 s。

中药化解冻液研究

纯溶剂和纯化学药物合成的牛冻精解冻液，一直是性细胞保护液研究和应用领域中的传统模式。本文就细胞生存质量的显著提高，证实了中医药文化在这个领域应用的可能性和发展前景。

依葡柠解冻液对种公牛精子寿命及完整顶体率的影响

采用复方依葡柠解冻液 (EDTA+葡萄糖 +柠檬酸钠 ,试验组 )与常用的单方柠檬酸钠解冻液 (2 .9%柠檬酸钠 ,对照组 )对肉用种公牛颗粒冻精进行解冻对照试验。结果显示 ,解冻后精子的复苏率 ,试验组与对照组相差不大 (P >0 .0 5 ) ;常温 (18～ 2 0℃ )和低温 (5～ 7℃ )下再贮存 ,精子的存活时间和生存指数 ,试验组高于对照组 ,且差异显著 (P<0 .0 5 ) ;解冻后在 (38± 2 )℃水浴中孵育 3h检查精子的完整顶体率 ,试验组极显著高于对照组 (P<0 .0 1)。适用于水牛的良好解冻液依葡柠 ,用做牛 (肉用牛 )

磁化处理后的解冻液对牛冷冻精液质量的影响

通过利用H-型强场磁化杯作固定磁场,对黑白花种公牛的解冻液进行不同时间的磁化处理,发现解冻液经过45min磁化处理后,可以提高解冻后黑白花种公牛精子的活率、延长精子的存活时间。

布尔山羊精液保存技术研究 Ⅰ稀释液和解冻液的筛选

反复试验证明，维生素Ｂ１２注射液是理想的布尔山羊鲜精室温保存稀释液和冷冻精液解冻液；Ａ液和脱脂羊奶可用于４～５℃低温条件下精液保存，Ｇ液和Ｉ液是较好的冻精稀释液。但各种条件下的布尔山羊精液保存效果在很大程度上取决于原精质量。