解吸附时间对聚乳酸共混体系泡孔形貌的影响

研究了在超临界CO2发泡过程中解吸附时间对聚乳酸与丁二醇-己二酸-对苯二甲酸共聚酯(PBAT)的二元体系以及添加LAK粒子(硫酸盐)的三元体系泡孔形貌的影响。结果表明,随解吸附时间的延长,各材料平均泡孔尺寸均不同程度地增大,泡孔密度减小;PBAT引起了非均相成核,降低了Gibbs自由能,减小了PLA泡孔尺寸,增大了泡孔密度;LAK粒子引起了空穴非均相成核,效果则更为明显,尺寸最小,但刚泄压时CO2浓度最高,未能发泡。

基质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析缩合单宁的阳离子化问题

以单价金属离子Cs+和Na+作为离子化试剂,对3种缩合单宁进行基质辅助激光解吸附飞行时间(MALD I-TOF)质谱分析。加入Na+作为阳离子化试剂,能得到较高质量的质谱图。但由于实验通道中几乎不可能完全去除的K+的干扰而会高估棓儿茶酚/表棓儿茶酚单元的组成比例,从而影响对棓儿茶酚/表棓儿茶酚单元存在与否的判断;选择Cs+作为阳离子化试剂可以避免此问题,但在复杂的缩合单宁分析中,同样因为杂质离子Na+和K+的干扰而使得质谱图变得更复杂;未去离子处理直接对缩合单宁进行MALD I-TOF质谱分析与去离子并加入Cs+的处理比去离子并加入Na+能检测到更高聚合度的高聚物,检测到离子峰强度最高的聚合物随离子不同而不同。

基质辅助激光解吸附飞行时间质谱方法分析山竹果皮缩合单宁

在反射模式(Reflectron modes)下,去离子处理后,引入Cs+(CsCl,1.52g/L)作为阳离子化试剂,得到清晰的山竹果皮缩合单宁的MALDI-TOF质谱图。解析该质谱图能得到完整的山竹果皮缩合单宁的结构信息:山竹果皮缩合单宁是从三聚体(m/z999)到十一聚体(m/z3303)分布的多聚物,离子峰最强的为五聚体(m/z1575);同时存在3种结构单元:(表)儿茶素(C/EC)、(表)棓儿茶素(GC/EGC)和(表)阿福豆素(AC/EAC),且C/EC、AC/EAC和GC/EGC的离子峰强度依次降低,同时在四聚体(m/z1440)到七聚体(m/z2303)均存在棓酰基;从四聚体(m/z1285)到八聚体(m/z2436),不同的聚合物中普遍存在A型连接。本研究优化了获取植物缩合单宁结构信息的基质辅助激光解吸附飞行时间质谱方法。

基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱在临床病毒学中的应用

基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是一种新型的微生物鉴定技术,具有准确、快速、高通量等特点,目前在细菌和真菌的鉴定方面已比较成熟,但在病毒方面应用较少。本文从病毒的诊断、分型及耐药基因检测3个方面对MALDI-TOF MS在临床病毒学中的应用作一综述。

基质辅助激光解吸附电离-飞行时间串联质谱研究重组人促红细胞生成素一级结构

建立了生物质谱研究rhEPO一级结构的系列方法,包括分子量、唾液酸含量以及N-糖含量等糖基化性质的测定方法,并用于4种国产rhEPO样品的分析;在此基础上优化酶切条件,使测定的肽质量指纹谱(PMF)的覆盖率均达到98%,成功鉴定了4个样品中的全部N-糖基化位点以及对分子中两对二硫键进行了结构确证,测定4个样品分子量分别为27754.1±27.4Da、27941.4±23.2Da、27682.5±22.0Da和27914.7±22.5Da;唾液酸含量分别为5.0%、4.8%、5.6%和5.4%;糖含量分别为34.3%、34.7%、34.1%和34·6%。此外还对4种产品在O-连接糖型及N-连接糖型上的区别做了初步探讨。

应用表面增强激光解吸附离子化飞行时间质谱技术筛检博莱霉素肺纤维化大鼠血清蛋白标志物

目的鉴定博莱霉素肺纤维化大鼠模型血清差异表达蛋白,寻找肺纤维化疾病早期诊断标志物。方法48只雄性大鼠随机分为博莱霉素组和对照组,每组24只,分别于建模后7、14、28 d各取8只动物处死,取肺组织制作石蜡切片,苏木精-伊红和天狼星红染色,普通光学显微镜和偏振光显微镜观察肺纤维化反应;表面增强激光解吸附离子化飞行时间质谱和弱阳离子蛋白芯片检测血清样本,生物信息学软件分析获得的蛋白指纹图谱,鉴定差异蛋白表达。结果在博莱霉素组大鼠血清中找到4个差异表达的蛋白质,用生物信息学分析软件产生1个肺纤维化动物诊断模型,由质荷比分别为3 530.7、7 043.5、8 332.6和9 068.0的蛋白质组成,与对照组比较,其峰强度均显著升高。结论博莱霉素诱导的肺纤维化血清蛋白表达谱发现的4个差异表达蛋白有可能成为早期诊断博莱霉素肺纤维化大鼠模型的特异血清生物标志物。

基质辅助激光解吸附飞行时间串联质谱法测定rhEPO唾液酸含量及鉴定糖基化位点

Erythropoietin (EPO) is a glycoprotein with three N-glycosylation sites and one O-glycosylation sites. According to the reference, all of the N-glyco-chains were acid complex type. The amount of sialic acid in rhEPO was determined and two N-glycosylation sites on it were confirmed by matrix-assisted laser desorption time of flight-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-TOFMS) in this paper. The total amount of sialic acid in rhEPO accounts for 12.97%. Two N-glycosylation sites (Asn38,Asn83) were identified successfully.

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对分枝杆菌液体培养系统菌种鉴定的临床研究

目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养出的阳性培养物进行高通量、快速、准确的菌种鉴定,为临床早期、精准治疗提供病原学依据。方法选取我院Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960分枝杆菌快速液体培养的阳性培养物为研究对象,通过不同的孵育时间、不同大小的研磨珠处理、不同的破壁方式摸索出MALDI-TOF MS对Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960阳性培养物鉴定的"最优处理方法",并将所有结果与基因芯片法菌种鉴定做参照进行比对,鉴定不一致的结果通过基因测序确认。结果Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养报阳性后增加孵育时间可提高检出率及鉴定分值,同时使用0.5 mm的氧化锆珠研磨,使用超声震荡混匀处理,鉴定效果最佳。鉴定结果方面,液体系统报阳的420份阳性标本,基因芯片法鉴定结果为结核分枝杆菌占69.05%(290/420),非结核菌占28.81%(121/420),9例未鉴定出,未鉴定占2.14%(9/420),错误鉴定占0.95%(4/420),总鉴定率为97.86%(411/420);采用MALDI-TOF MS质谱鉴定420份阳性标本中鉴定出419例,其中结核分枝杆菌占69.05%(290/420),非结核占30.00%(126/420),星型奴卡菌0.48%(2/420),巴西奴卡菌占0.24%(1/420),1例未鉴定出,总鉴定率为99.76%。质谱鉴定分值≥2.0的400例占95.24%,分值在1.7~2.0的19例占4.52%,分值<1.7的1例占0.24%。结论本实验实现了Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养阳性培养物的直接质谱鉴定,缩短了培养鉴定的时间,将分枝杆菌鉴定到种水平,能区分出结核菌与非结核菌,同时也能将与分枝杆菌相似的奴卡菌鉴定出来,对临床疾病的鉴别诊断起到了积极的作用。

表面增强激光解析电离光谱技术分析人卵泡发育过程中蛋白质组学变化

目的应用蛋白质芯片和质谱技术,建立人成熟卵泡液及窦卵泡液的蛋白质表达指纹图谱,寻找在卵泡生长发育过程中起关键作用的蛋白质。方法采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术和弱阳离子交换蛋白质芯片检测48例人成熟卵泡液、21例窦卵泡液中的蛋白质变化,使用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的结果采用Ciphergen公司的Biomarker wizard和Biomarker Patterns System软件进行分析。结果成熟卵泡液组与窦卵泡液组蛋白质谱相比,有4种蛋白质在含量上有显著差异,2种蛋白质在成熟卵泡液组表达上调,2种蛋白质表达下降。结论成熟卵泡液与窦卵泡液蛋白质谱存在显著差异,差异蛋白可能与卵泡发育、卵子受精密切相关。

应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析宫颈鳞癌早期浸润蛋白质

目的探讨基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization ti me of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对宫颈鳞癌(squamous carcinoma of thecervix,SCC)组织切片直接分析,获取宫颈鳞癌早期浸润的分子标志物的有效性。方法利用超微量点样枪将化学基质直接点样到宫颈鳞癌组织切片上,然后利用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱直接扫描宫颈鳞癌组织切片,分析宫颈鳞癌组织蛋白质分子。结果获得的25种蛋白质质谱峰强度比较,差异有显著意义(P<0.05)。其中7种差异蛋白质有分类意义,其质/核(M/Z)分别为:m/z3433,m/z4786,m/z10092,m/z10835,m/z15114,m/z15854和m/z16345。差异蛋白质m/z3433,m/z15114,m/z15854在宫颈鳞癌鳞状上皮组织高度表达,可作为宫颈鳞癌早期诊断的标志蛋白;差异蛋白质m/z16345在宫颈鳞癌的间质组织高度表达,可作为宫颈鳞癌早期间质浸润和扩散诊断的标志蛋白。结论利用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术成功获取一组差异蛋白质。该差异蛋白组可望作为宫颈鳞癌早期诊断的标志蛋白。

基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术对痤疮患者痤疮丙酸杆菌的鉴定

目的了解基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术鉴定痤疮丙酸杆菌的效果。方法应用MALDI-TOF MS技术对痤疮患者皮损分离的91株菌株进行鉴定。结果 70株为痤疮丙酸杆菌,19株为其他厌氧菌或兼性厌氧菌(表皮葡萄球菌8株、颗粒丙酸杆菌3株、头状葡萄球菌2株、蜡样芽胞杆菌1株、产芽孢梭状芽孢杆菌1株、贪婪丙酸杆菌1株、克氏柠檬酸杆菌1株、毗邻颗粒链菌1株、结核硬脂酸棒状杆菌1株),2株无鉴定结果。结论 MALDI-TOF MS技术鉴定痤疮丙酸杆菌快速而准确,值得选用。

杨梅不同部位单宁含量与结构研究

对杨梅的叶、枝和树皮的总酚含量与可溶缩合单宁含量进行了测定,并利用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)详细研究了不同部位中缩合单宁的类型、聚合度及聚合物的分布情况。结果表明:树皮的总酚含量最高(43.56%),叶次之(34.69%),枝最低(18.53%);树叶的可溶缩合单宁含量最高(25.67%),皮次之(17.93%),枝最低(8.01%);3组分的缩合单宁都以(表)棓儿茶素-3-O-棓酸酯(EGCG/GCG)为基本结构单元的原翠雀定,且大部分聚合物的结构单元之间存在A型和B型两种连接方式,但其中叶和枝缩合单宁的聚合度要大于树皮。

不同品种茶叶单宁的含量与结构测定

测定了本山、黄旦和铁观音三个品种茶树成熟叶片的总酚及可溶缩合单宁含量,并通过基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)研究了茶叶缩合单宁的基本结构。结果显示,三种茶叶均具有较高的总酚含量,大约为200mg/g;三种茶叶的缩合单宁是以(表)儿茶素(EC/C)和(表)棓儿茶素(EGC/GC)为基本结构单元的均聚物和杂聚物,且大部分聚合物的结构单元之间存在A型和B型两种连接方式,其中本山和黄旦缩合单宁的最高聚合度要大于铁观音。

正常和退变腰椎间盘蛋白质的双向电泳和质谱鉴定

背景:近年来对于退变腰椎间盘组织蛋白质成分改变的研究取得了很大进展,但是对于正常和退变腰椎间盘整体蛋白质成分改变的分离和差异鉴定却鲜见报道。目的:建立正常和退变腰椎间盘蛋白质的双向电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,探讨腰椎间盘退变的生物学机制。设计、时间及地点:对比观察,于2007-06/2008-12在南方医科大学病理生理实验室完成。材料:由自愿者提供的正常和退变腰椎间盘组织各6例,年龄21～45岁,其中男9例,女3例;取材范围L3～L5。方法:氯化铯梯度离心去除正常和退变腰椎间盘组织蛋白多糖,通过固相pH梯度(IPG)等电聚焦和梯度聚丙烯酰胺双向电泳分离蛋白质,分析电泳图像,使用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱仪对差异蛋白质点进行分析鉴定。主要观察指标:正常腰椎间盘及退变腰椎间盘组织IPG等电聚焦双向凝胶电泳结果。结果:双向电泳显示正常和退变腰椎间盘蛋白质图谱差异显著,从中选取16个差异明显的位点进行质谱仪分析,确定了6种具有显著性意义的差异蛋白质。结论:双向电泳可有效地分离正常和退变腰椎间盘组织蛋白质,通过质谱仪鉴定可以确定其之间差异蛋白质的性质。

重组甘精胰岛素相关杂质的结构确认及质量分析

目的结合国际通用标准,通过对甘精胰岛素主要相关杂质的定性研究和来源分析,促进国内同类产品的质量提高。方法首先将提纯冻干的杂质回加到对照品中进行液相色谱定位,继而分析HPLC肽图,结合激光辅助基质解吸附飞行时间质谱测定的分子量及肽质量指纹图谱初步定性,再以小分子电泳、N-端测序及二级质谱进一步验证。结果主要相关杂质均为甘精胰岛素的类似物,是在酶切过程中产生的副产物,即为可预期的工艺相关杂质。结论该方法可对甘精胰岛素的主要相关杂质快速、经济、准确的定性,本实验对预期杂质的来源分析可为同类产品的杂质研究提供新颖的参考思路。

人椎间盘软骨细胞外基质小分子蛋白的双向电泳和质谱鉴定

目的初步研究双向电泳和质谱鉴定在人椎间盘的蛋白质组特性研究中的价值和作用．为进一步研究椎间盘疾病寻找有效途径。方法取人的正常椎间盘组织（包括纤维环和髓核），针对细胞外基厦分子蛋白进行蛋白萃取，通过氯化铯梯度离心去除蛋白多糖，通过固相pH梯度（IPG）等电聚焦和梯度聚丙烯酰胺双向电泳分别分离纤维环和髓核的蛋白质．分析电泳图像．使用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱仪对蛋白质点进行分析鉴定。结果双向电泳显示。纤维环和髓核的细胞外基质小分子蛋白无明显差异．纤维环和髓核中的小分子蛋白在pH3～10、分子量16～250kd范围内能被很好地分离。对各蛋白质点行质谱仪鉴定．分别确定了萁中相同的19种蛋白质。结论双向电泳可有效地分离准间盘组织中细胞外基质小分子蛋白，通过质谱仪鉴定可以确定其组成成分，为进一步研究椎间盘软骨细胞外基质小分子蛋白的功能及在准间盘病变中的改变和所起的作用打下基础。

应用RP-HPLC/TOF-MS技术识别肝癌血浆差异蛋白质

目的应用RP-HPLC／TOF-MS技术筛选肝癌血浆差异蛋白质。方法9例肝癌和8例正常组血浆采用Agilent高丰度蛋白质分离系统（multiple affinity removal system，MARS）洗脱白蛋白等高丰度蛋白质后，样品首先采用RP—HPLC法分离分析，然后采用基质辅助激光解吸飞行时间质谱鉴定差异蛋白质相对分子质量。结果肝癌血浆和健康志愿者血浆的RP-HPLC图谱中存在3组差异蛋白质，相对分子质量为（15～50）×10^3的蛋白质在健康志愿者中有较高表达，而相对分子质量为（50～90）×10^3的蛋白质在肝癌患者中有较高表达。结论RP—HPLC／TOF-MS技术可以发现肝癌发生发展过程中血浆蛋白表达谱质或量的变化。

胃癌患者血清比较蛋白质组学研究

目的应用蛋白质质谱分析方法寻找胃癌鉴定的生物标志物.方法应用美国CipherGen公司金属亲和表面(IMAC3)芯片和蛋白芯片仪检测38例胃癌患者、82例正常人血清中的蛋白质相对含量.结果 38例胃癌患者与82例正常人在质荷比为1 723～14 048Da间有18种血清蛋白质含量有显著差异.在学习模式下38例胃癌患者及82例正常人均被正确分组,准确率为100%(120/120),灵敏度和特异性分别为100%(38/38)、100%(82/82);在检测模式下38例胃癌患者中有31例被正确论断,82例正常人中有81例被正确分组,灵敏度和特异性分别为81.6% (31/38)、98.8%(81/82).结论该方法可快速、准确检测胃癌,灵敏度、特异性高.

急性心肌梗死病程不同时期患者血清蛋白质组学分析

目的 探讨蛋白质质谱分析对急性心肌梗死病程不同时期的鉴别意义。方法 应用美国CipherGen公司金属亲和表面(IMAC3)芯片和蛋白芯片仪检测153例心肌梗死患者血清标本(其中刚入院45例,3h标本12例,6h标本22例,9h标本24例,12h标本24例,24h标本16例,48h标本10例)中的蛋白质相对含量。结果 不同时期急性心肌梗死患者在质荷比为4kD^12kD间有10种血清蛋白质含量有显著差异。不同时期的患者均被正确判断,准确率为100%(153/153),灵敏度和特异性分别为100%(45/45)和100%(108/108)。结论 该方法可快速、准确检测各期急性心肌梗死,灵敏度、特异性高。

利用血清中蛋白质组构型鉴定Dukes A期结直肠癌

目的 通过对血清蛋白质组的质谱分析,寻找用于Dukes A期结直肠癌鉴定的蛋白质组构型。方法 随机取10例Dukes A期及68例Dukes B、C、D期结直肠癌患者的血清作为预备组,另取10例Dukes A期及68例Dukes B、C、D期结直肠癌患者的血清作为检测组。预备组血清与金属亲和表面(IMAC3)芯片结合后,用蛋白芯片仪读取数据,分析可得到用于区分Dukes A期和Dukes B、C、D期结直肠癌患者的树状分类规则,并用双盲法测试检测组以证实其准确性。结果 预备组中两类血清蛋白质在质荷比为8 320、8 604、8 867、15 872Da等4处含量有显著差异,得到树状分类规则,其分类准确率为97 4%(76/78),灵敏度为100%(10/10),特异性为97 1%(66/68);对检测组进行双盲检测,结果显示准确率为94 9%(74/78),灵敏度和特异性分别为100%(10/10)、94 1%(64/68)。结论 该方法可快速、准确检测Dukes A期结直肠癌,灵敏度、特异性高。