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解旋酶恒温基因扩增方法快速检测酸乳中醋化醋杆菌 被引量:3
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作者 朱华东 刘东 +3 位作者 贾昭斌 刘昊 刘帅 周巍 《食品安全质量检测学报》 CAS 2018年第14期3720-3724,共5页
目的建立解旋酶恒温基因扩增方法(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测酸乳中醋化醋杆菌的分析方法。方法以醋化醋杆菌的16S-23S rRNA ITS序列为目的基因,设计一对特异性引物,优化反应条件UvrD helicase、T4 ... 目的建立解旋酶恒温基因扩增方法(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测酸乳中醋化醋杆菌的分析方法。方法以醋化醋杆菌的16S-23S rRNA ITS序列为目的基因,设计一对特异性引物,优化反应条件UvrD helicase、T4 gp32的浓度,通过解旋酶恒温基因扩增方法直接检测酸乳中醋化醋杆菌,扩增产物通过电泳进行检测。结果 HDA法检测酸乳中醋化醋杆菌的特异性强,实验涉及的其他菌株均未发生扩增,只有醋化醋杆菌得到与设计序列长度一致的197 bp基因片段,方法检出限为3.6×10~1 CFU/g,实验条件优化后T4 gp32、UvrD helicase的终含量分别为4.0、0.15μg。结论该方法灵敏度较高,时间较短,为酸乳中醋化醋杆菌的检测提供了新的思路,同时也为其他食品污染菌的快速检测提供了借鉴意义。 展开更多
关键词 解旋酶恒温基因扩增方法 酸乳 醋化醋杆菌 检测
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快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的赖解旋酶恒温基因扩增方法的建立 被引量:2
2
作者 刘东 张捷 +2 位作者 朱华东 周巍 张岩 《乳业科学与技术》 2020年第3期12-16,共5页
建立赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的方法。选择葡萄糖杆菌ITS基因序列(基因号为KF896260.1)为目的基因,设计特异性引物,并优化反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp3... 建立赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的方法。选择葡萄糖杆菌ITS基因序列(基因号为KF896260.1)为目的基因,设计特异性引物,并优化反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的添加量,建立最优反应体系。采用建立的HDA体系对多种菌株进行扩增和电泳检测,验证方法特异性,通过HDA法直接检测发酵乳中的葡萄糖杆菌,并确定其检出限。结果表明:采用HDA法检测发酵乳中葡萄糖杆菌,反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的适宜添加量分别为0.10μg和5.0μg,扩增产物与设计序列长度(309 bp)一致,特异性良好,检出限为4.3×10^1 CFU/g。该方法用于检测发酵乳中葡萄糖杆菌的灵敏度高、耗时短。 展开更多
关键词 解旋酶恒温基因 发酵乳 葡萄糖杆菌 检测
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发酵乳中植物乳杆菌依赖解旋酶恒温基因扩增检测方法的建立 被引量:1
3
作者 张雅伦 李永波 +4 位作者 张涛 陈晨 张捷 周巍 张岩 《乳业科学与技术》 2023年第1期30-34,共5页
通过依赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)技术建立一种快速检测发酵乳中植物乳杆菌的方法。根据植物乳杆菌scrB基因序列(基因号为AJ579541.1)设计特异性引物,通过实验筛选出检测体系中UvrD解... 通过依赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)技术建立一种快速检测发酵乳中植物乳杆菌的方法。根据植物乳杆菌scrB基因序列(基因号为AJ579541.1)设计特异性引物,通过实验筛选出检测体系中UvrD解旋酶和T4 gp32蛋白的较优含量,达到最优反应条件。所建立的HDA方法通过人工添加植物乳杆菌确定检出限,通过多种菌株扩增验证方法特异性,通过扩增产物电泳和序列比对分析验证方法一致性和稳定性。结果表明:采用HDA法检测发酵乳中植物乳杆菌,反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32蛋白的适宜添加量分别为0.15μg和5.0μg,特异性良好,与涉及的其他菌株均未发生扩增,检出限为2.8×10^(1) CFU/g,扩增序列与设计序列长度(273 bp)一致且序列同源性为100%;本研究建立的方法可以快速检测发酵乳中植物乳杆菌,具有灵敏度高、操作简单、应用前景广等特点。 展开更多
关键词 依赖解旋酶恒温技术 发酵乳 植物乳杆菌 快速检测
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β型溶血性链球菌的变性泡介导的恒温扩增检测方法的建立
4
作者 史贇学 杨春梅 +5 位作者 吴雪莉 冉凌云 李敏婕 邓玲 孙家欣 姚华 《中国食品添加剂》 CAS 2024年第4期243-248,共6页
建立针对β型溶血性链球菌的变性泡介导恒温扩增检测方法,对检测方法进行完整的方法学评价试验。对检测方法的反应温度进行优化得到最适温度为60℃,在此基础上,以常见菌株特异性测试、稀释模板灵敏度测试及10组乳粉样本稳定性测试3方面... 建立针对β型溶血性链球菌的变性泡介导恒温扩增检测方法,对检测方法进行完整的方法学评价试验。对检测方法的反应温度进行优化得到最适温度为60℃,在此基础上,以常见菌株特异性测试、稀释模板灵敏度测试及10组乳粉样本稳定性测试3方面对方法进行方法学评价,并对特异性测试进行荧光可视化检测。方法学评价结果显示所建立的β型溶血性链球菌的变性泡介导恒温扩增检测方法的最快检测时间可达到30 min以内,5种常见的食源性致病菌特异性试验结果无误,灵敏度试验得到的荧光值趋势良好,100 ng/μL条件下最低荧光阈值时间最快,可达到30 min以内,3位实验员对该方法与国家标准方法的对比结果未出现异常和不符,可视化检测结果与荧光监测结果一致。该方法特异性、灵敏性、稳定性均良好。 展开更多
关键词 变性泡介导 恒温 溶血性链球菌 方法学评价
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婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌解旋酶恒温基因扩增检测方法的建立 被引量:7
5
作者 周巍 张薇 +5 位作者 刘亮 刘东 李永波 田浩 张岩 张志胜 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第4期155-158,共4页
目的:建立一种检测婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌的解旋酶恒温基因扩增方法。方法:根据阪崎克罗诺杆菌ITS基因设计特异性引物,优化解旋酶恒温基因扩增法反应条件UvrD helicase、T4 gp32的浓度,人工添加阪崎克罗诺杆菌确定检出限,多种致... 目的:建立一种检测婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌的解旋酶恒温基因扩增方法。方法:根据阪崎克罗诺杆菌ITS基因设计特异性引物,优化解旋酶恒温基因扩增法反应条件UvrD helicase、T4 gp32的浓度,人工添加阪崎克罗诺杆菌确定检出限,多种致病菌在建立的解旋酶恒温基因扩增体系中扩增验证特异性,电泳检测扩增产物。结果:解旋酶恒温基因扩增法检测婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌得到与设计序列长度一致的100 bp基因片段,检出限为10 CFU/g,优化反应条件UvrD helicase、T4 gp32的终浓度分别为0.1、5.0μg。结论:解旋酶恒温基因扩增法用于检测婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌的特异性强、灵敏度高、耗时短,为婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌的快速检测提供了新的方法。 展开更多
关键词 解旋酶恒温基因 婴儿配方乳粉 阪崎克罗诺杆菌 检测
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酸乳中葡糖醋杆菌赖解旋酶恒温基因扩增检测方法的建立 被引量:1
6
作者 唐心怡 刘波 +5 位作者 张涛 李永艳 张翠侠 王赞 章晶晶 周巍 《乳业科学与技术》 2017年第2期30-33,共4页
建立酸乳中葡糖醋杆菌的赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)检测方法。根据葡糖醋杆菌16S基因序列(基因号为HQ677466.1)设计特异性引物,并优化反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的浓度。通过HDA... 建立酸乳中葡糖醋杆菌的赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)检测方法。根据葡糖醋杆菌16S基因序列(基因号为HQ677466.1)设计特异性引物,并优化反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的浓度。通过HDA法直接检测酸乳中的葡糖醋杆菌,并确定其检出限,在建立的HDA体系中对酸乳中多种菌株进行扩增和电泳检测,验证方法的特异性。结果表明:用HDA法检测酸乳中葡糖醋杆菌,得到了与设计序列长度(101 bp)一致的基因片段,检出限为102 CFU/g,反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的适宜添加量分别为0.1μg和5.0μg。该方法用于检测酸乳中葡糖醋杆菌的灵敏度高、耗时短。 展开更多
关键词 解旋酶恒温基因 酸乳 葡糖醋杆菌 检测
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发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立 被引量:4
7
作者 王赞 李献 +5 位作者 王慧 许苗苗 张捷 刘帅 周巍 史国华 《乳业科学与技术》 2021年第4期6-10,共5页
建立依赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因,设计特异性引物,优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量,建立最优反应体系。通... 建立依赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因,设计特异性引物,优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量,建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌,扩增其产物后进行电泳检测,验证方法特异性。结果表明:采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好,优化后反应体系体积50μL时,UvrD解旋酶添加量为0.10μg,T4 gp32添加量为5.0μg,得到与设计序列长度(304 bp)一致的扩增产物,检出限为2.6×10^(2) CFU/g;该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求,具有较高的灵敏度、易操作,可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。 展开更多
关键词 依赖解旋酶恒温基因 发酵乳 沙门氏菌 快速检测 基础应用
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单核细胞增生李斯特氏菌依赖解旋酶DNA恒温扩增检测方法的建立 被引量:8
8
作者 王建广 雷质文 +7 位作者 石琰璟 付静芸 祝素珍 房保海 姜英辉 刘云国 张健 杨大伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期130-132,共3页
为建立单核细胞增生李斯特氏菌(Lm)的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法,本研究以Lm的iap基因为目的片段设计特异性引物,建立了可在65℃恒温扩增快速(90 min)检测Lm的HDA检测方法,分别对反应体系中的MgAc2、Bst聚合酶、UvrD解旋酶、dN... 为建立单核细胞增生李斯特氏菌(Lm)的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法,本研究以Lm的iap基因为目的片段设计特异性引物,建立了可在65℃恒温扩增快速(90 min)检测Lm的HDA检测方法,分别对反应体系中的MgAc2、Bst聚合酶、UvrD解旋酶、dNTPs以及引物等的浓度进行优化,进行了特异性和灵敏度试验,并与普通PCR方法进行了比较。结果表明,所建立起的检测法最低检测限为7.8×103 cfu/mL,灵敏度与普通PCR方法相当。Lm的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 单核细胞生李斯特氏菌 检测 依赖解旋酶DNA恒温基因
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赖解旋酶恒温基因扩增技术的原理、应用和展望 被引量:12
9
作者 刘洵 程天印 +1 位作者 常小斌 王小君 《长沙大学学报》 2007年第2期29-31,共3页
赖解旋酶恒温基因扩增方法(HDA法)是新近发明的一种简便、快速、高效的体外恒温基因扩增技术.该法依靠DNA解旋酶解开双链DNA、单链DNA结合蛋白(SSB)维持单链状态、DNA聚合酶催化靶片段的扩增.研究表明,HDA能扩增微生物基因组DNA、病原菌... 赖解旋酶恒温基因扩增方法(HDA法)是新近发明的一种简便、快速、高效的体外恒温基因扩增技术.该法依靠DNA解旋酶解开双链DNA、单链DNA结合蛋白(SSB)维持单链状态、DNA聚合酶催化靶片段的扩增.研究表明,HDA能扩增微生物基因组DNA、病原菌DNA、质粒DNA和cDNA等,从灵敏性、准确性和可操作性几方面看,该方法具有广阔的实用前景. 展开更多
关键词 解旋酶恒温基因 DNA解旋酶 单链DNA结合蛋白
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赖解旋酶恒温基因扩增技术的研究进展 被引量:2
10
作者 陈璐 沈建箴 《医学综述》 2010年第13期1932-1934,共3页
随着分子生物学研究领域的发展,赖解旋酶恒温基因扩增技术(HDA)作为一种简便、快速、高效的体外恒温基因扩增技术出现。HDA依靠解旋酶解开双链DNA、结合蛋白维持单链DNA状态、DNA聚合酶催化靶片段的扩增。可以用于微生物基因组DNA、病原... 随着分子生物学研究领域的发展,赖解旋酶恒温基因扩增技术(HDA)作为一种简便、快速、高效的体外恒温基因扩增技术出现。HDA依靠解旋酶解开双链DNA、结合蛋白维持单链DNA状态、DNA聚合酶催化靶片段的扩增。可以用于微生物基因组DNA、病原菌DNA、质粒DNA和cDNA等的扩增,该法具有广阔的实用前景。 展开更多
关键词 解旋酶恒温基因 DNA解旋酶 单链DNA结合蛋白
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基于CRISPR/Cas12a的叶酸代谢位点MTHFR基因C677T多态性检测方法的建立
11
作者 田石 安莉莎 +3 位作者 马瑶 金孝华 马旭 张璐 《生殖医学杂志》 CAS 2024年第6期785-791,共7页
目的开发一种基于CRISPR/Cas12a技术的叶酸代谢位点c.677(MTHFR C677T)的高效检测方法,以实现对C677T多态性的快速、准确分析。方法采用重组酶聚合酶扩增(RPA)结合CRISPR/Cas12a建立单管检测反应体系,建立人MTHFR基因C677T基因分型策略... 目的开发一种基于CRISPR/Cas12a技术的叶酸代谢位点c.677(MTHFR C677T)的高效检测方法,以实现对C677T多态性的快速、准确分析。方法采用重组酶聚合酶扩增(RPA)结合CRISPR/Cas12a建立单管检测反应体系,建立人MTHFR基因C677T基因分型策略;测试200例孕妇人群样本MTHFR基因C677T多态性,并与常规PCR产物测序结果进行一致率比较。结果基于CRISPR/Cas12a检测人MTHFR基因C677T多态性的检测方法结果准确、特异性好,与PCR产物测序结果具有高度一致性。结论建立的基于CRISPR/Cas12a检测技术的人MTHFR C677T基因分型方法简单、快捷、精准,为叶酸代谢位点MTHFR C677T基因型检测提供了新的途径,具有潜在的临床应用前景。 展开更多
关键词 人亚甲基四氢叶酸还原酶基因 多态性 CRISPR/Cas12a 恒温
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口蹄疫病毒解旋酶恒温扩增检测方法的建立 被引量:5
12
作者 金静维 马保华 +5 位作者 邱索平 凌彬冰 李贺 胡晓冰 曹永长 薛春宜 《贵州畜牧兽医》 2014年第5期1-5,共5页
针对FMDV编码3D蛋白(RNA聚合酶)的保守序列设计特异性引物,利用逆转录解旋酶恒温扩增技术(Reverse Transcription helicase-dependent isothermal amplification,RT-HDA)建立了口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)快速检测... 针对FMDV编码3D蛋白(RNA聚合酶)的保守序列设计特异性引物,利用逆转录解旋酶恒温扩增技术(Reverse Transcription helicase-dependent isothermal amplification,RT-HDA)建立了口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)快速检测方法。该方法可在65℃下,120 min内实现对口蹄疫病毒保守序列的大量扩增。该方法可检测到0.2 ng的FMDV核酸量,比普通RT-PCR高10倍;具有极高的特异性,除了能对FMDV核酸进行扩增外,对其他临床症状与口蹄疫类似的病毒,如水泡病病毒(SVDV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)和水泡性口炎病毒(VSV)的核酸,则不能扩增出目的片段。FMDV的RT-HDA检测方法灵敏度和特异性高,而且不需要昂贵的仪器设备,具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 逆转录解旋酶恒温 检测
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应用依赖解旋酶DNA恒温扩增技术检测副溶血性弧菌 被引量:10
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作者 石琰璟 王建广 +6 位作者 房保海 张健 祝素珍 刘云国 姜英辉 雷质文 杨大伟 《青岛科技大学学报(自然科学版)》 CAS 2011年第1期42-45,共4页
以副溶血性弧菌的tlh基因为目的片段设计特异性引物,成功建立了恒温条件下快速检测副溶血性弧菌的依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA)的检测法,进行了特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行了比较。该HDA检测方法最低检测限为19.9ng·... 以副溶血性弧菌的tlh基因为目的片段设计特异性引物,成功建立了恒温条件下快速检测副溶血性弧菌的依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA)的检测法,进行了特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行了比较。该HDA检测方法最低检测限为19.9ng·mL-1,与普通PCR方法相当。副溶血性弧菌的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,用普通水浴槽即可进行反应。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 检测 依赖解旋酶DNA恒温技术
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以tuf基因为靶标的5种16SrⅠ组植原体环介导恒温扩增技术 被引量:6
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作者 王圣洁 王胜坤 +5 位作者 林彩丽 于少帅 汪来发 朴春根 郭民伟 田国忠 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第8期54-63,共10页
【目的】建立一种能够特异性检测和鉴定16SrⅠ组植原体的环介导恒温扩增技术,实现16SrⅠ组植原体的快速检测。【方法】以植原体tuf基因作为靶标,通过序列比对,设计多组具有特异性的LAMP引物组,筛选出一套适用于16SrⅠ组植原体的特异性... 【目的】建立一种能够特异性检测和鉴定16SrⅠ组植原体的环介导恒温扩增技术,实现16SrⅠ组植原体的快速检测。【方法】以植原体tuf基因作为靶标,通过序列比对,设计多组具有特异性的LAMP引物组,筛选出一套适用于16SrⅠ组植原体的特异性检测体系。以16SrⅡ组、16SrⅤ组、16SrⅩⅨ组植原体样品按照此检测体系进行反应,来验证其特异性;同时将稀释后的感病组织样品同步进行PCR和LAMP检测,以确定其检测灵敏度。对来自不同省市的6份田间样品以及9份组培样品进行检测,以验证其检测的稳定性。【结果】16SrⅠ-LAMP在恒温63℃条件下40 min内完成扩增,能检测5种分别引起泡桐丛枝、苦楝丛枝、桑树萎缩、莴苣黄化和长春花绿变病的16SrⅠ组植原体,不能检测其他组植原体包括16SrⅡ组的花生丛枝、甘薯丛枝、臭矢菜丛枝、16SrⅤ组的枣疯病、红花槐丛枝、樱桃致死黄化和16SrⅩⅨ组的板栗黄化皱缩植原体。通过在反应液中加入钙黄绿素肉眼判断绿色为阳性结果,褐色为阴性结果,与用荧光定量设备进行判读扩增曲线的结果一致。相比于PCR检测,16SrⅠ-LAMP检测的灵敏度提高了8倍;16SrⅠ-LAMP能够快速检测出来自不同区域的田间泡桐发病样品、感病泡桐组培苗和嫁接传病脱毒苗。【结论】以tuf基因作为靶标,建立能同时检测5种16SrⅠ组植原体的环介导恒温扩增技术,具有高效、特异、操作简便、检测时间短及成本较低等优点,适合于基层和现场检测。 展开更多
关键词 植原体 环介导恒温 tuf基因 快速检测
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Potyvirus属成员基因组全序列的简并引物PCR和RACE扩增方法 被引量:30
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作者 陈炯 陈剑平 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期371-374,共4页
Based on multi-alignment of complete polyprotein amino acid sequences of genus Potyvirus,five degenerated primers were designedThey were Sprimer(5′-GGX AAY AAY AGY GGX CAZ CC-3′),pNIa(+)(5′-TNY TGG AAM CAY TGG A... Based on multi-alignment of complete polyprotein amino acid sequences of genus Potyvirus,five degenerated primers were designedThey were Sprimer(5′-GGX AAY AAY AGY GGX CAZ CC-3′),pNIa(+)(5′-TNY TGG AAM CAY TGG AT-3′),pCI2(+)(5′-GCX ACX AAX ATX ATX GAX AA-3′),pCI1(+)(5′-GTX GGX TCX GGX AAX TCX AC-3′)and pHC(+)(5′-TGY GAY AAY CAZ TTX GA-3′)(X=A,T,C or G:Y=T or C;Z=A or G;N=A or T;M=A,T or G)Using degenerated PCR and modified RACE methods,a protocol for determination of complete genome sequence of potyviruses was established and proved to be successful on five 展开更多
关键词 Potyvirus属成员 基因组分序列 PCR RACE 方法 马铃薯Y病毒属 简并引物 全序列测定 方法
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环媒恒温基因扩增法检测藤黄微球菌的研究 被引量:10
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作者 陈宇明 程天印 王晓君 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第6期407-409,共3页
目的建立藤黄微球菌的环媒恒温基因扩增检测方法。方法基于藤黄微球菌23S rRNA基因部分序列设计1套(共4条)能够识别6个区域的特异性引物;优化扩增条件;评估该方法的特异性与敏感性。结果用7个参考株和大肠埃希菌等8种其他临床病原菌检... 目的建立藤黄微球菌的环媒恒温基因扩增检测方法。方法基于藤黄微球菌23S rRNA基因部分序列设计1套(共4条)能够识别6个区域的特异性引物;优化扩增条件;评估该方法的特异性与敏感性。结果用7个参考株和大肠埃希菌等8种其他临床病原菌检验本检测法,成功地建立了环媒恒温基因扩增(LAMP)检测法。结论环媒恒温基因扩增法检测藤黄微球菌快速、灵敏高、特异性强。 展开更多
关键词 藤黄微球菌 检测 环媒恒温基因
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多黏菌素耐药基因mcr-1重组酶介导扩增方法的建立及应用 被引量:6
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作者 车勇良 陈秋勇 +4 位作者 陈如敬 吴学敏 王隆柏 刘玉涛 周伦江 《动物医学进展》 北大核心 2022年第8期46-49,共4页
根据多黏菌素耐药基因mcr-1的保守序列,设计合成一对重组酶介导扩增方法(RAA)特异性引物和一条FAM标记的荧光探针,优化扩增条件,建立了检测多黏菌素耐药基因mcr-1的RAA方法,验证其特异性和敏感性,并应用于临床检测。结果显示,建立的RAA... 根据多黏菌素耐药基因mcr-1的保守序列,设计合成一对重组酶介导扩增方法(RAA)特异性引物和一条FAM标记的荧光探针,优化扩增条件,建立了检测多黏菌素耐药基因mcr-1的RAA方法,验证其特异性和敏感性,并应用于临床检测。结果显示,建立的RAA方法只需21 min就能出结果,能特异性地检测多黏菌素耐药基因mcr-1,最低能检测出10~2的mcr-1阳性质粒拷贝数,也可很好地检测出临床样品中的mcr-1基因。4株临床分离大肠埃希氏菌株样品,有2株mcr-1基因阳性,2株为mcr-1基因阴性。 展开更多
关键词 多黏菌素 耐药基因 mcr-1 重组酶介导方法
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人感染H7N9禽流感病毒全基因组扩增与测序方法的建立 被引量:4
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作者 谢剑锋 赵琳 +10 位作者 张炎华 翁育伟 陈炜 王金章 何文祥 吴冰珊 黄萌 黄枝妙 朱颖 郑奎城 严延生 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期795-799,共5页
目的为了解人感染H7N9禽流感病毒基因特征从而更有效地防控疫情,需建立获得人感染H7N9禽流感病毒全基因序列的扩增和测序方法。方法采用鸡胚分离H7N9禽流感病毒,提取标本和毒株病毒RNA,自行设计引物,通过一步法RT-PCR扩增其全基因组片段... 目的为了解人感染H7N9禽流感病毒基因特征从而更有效地防控疫情,需建立获得人感染H7N9禽流感病毒全基因序列的扩增和测序方法。方法采用鸡胚分离H7N9禽流感病毒,提取标本和毒株病毒RNA,自行设计引物,通过一步法RT-PCR扩增其全基因组片段,纯化PCR产物后测定核苷酸序列,利用生物信息学软件拼接各节段序列并初步分析其特征。结果本研究中的引物能特异地扩增各基因的目的片段,通过序列拼接可以获得H7N9禽流感全基因组序列。经分析8个节段序列与近期国内流行的人感染H7N9禽流感病毒序列高度同源。结论该方法能有效地获得人感染H7N9禽流感病毒全基因组序列,可为进一步分析其基因特征奠定基础。 展开更多
关键词 H7N9禽流感 基因 与测序 方法
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食品和饲料中转基因植物FMV35S启动子环介导等温扩增检测方法的建立 被引量:4
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作者 邝筱珊 胡松楠 +3 位作者 游淑珠 成晓维 王小玉 冯家望 《安徽农业科学》 CAS 2014年第16期4999-5001,5017,共4页
[目的]建立FMV35S基因启动子环介导等温扩增的检测方法。[方法]建立一种检测食品和饲料中FMV35S转基因成分的环介导恒温扩增(LAMP)检测方法,并利用实时浊度法对该LAMP检测方法进行灵敏度、特异性和稳定性评价。[结果]该方法的检测限为0.... [目的]建立FMV35S基因启动子环介导等温扩增的检测方法。[方法]建立一种检测食品和饲料中FMV35S转基因成分的环介导恒温扩增(LAMP)检测方法,并利用实时浊度法对该LAMP检测方法进行灵敏度、特异性和稳定性评价。[结果]该方法的检测限为0.5%,特异性和稳定性良好。采用LAMP法与荧光PCR方法进行了实际样品对比检测,结果一致可靠。[结论]可采用LAMP法对食品和饲料中FMV35S转基因成分进行检测。 展开更多
关键词 食品 饲料 FMV35S基因 环介导恒温 检测
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猪圆环病毒2型RPA恒温扩增检测方法的建立及初步应用 被引量:3
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作者 黄超华 张全红 +4 位作者 曹琛福 王潇 林彦星 史卫军 花群义 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第7期46-49,I0005,共5页
利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA),以猪圆环病毒2型Cap基因的保守序列为靶序列设计并筛选出一组特异性的引物和探针,建立了快速检测猪圆环病毒2型核酸的RPA方法。试验结果表明,该方法特异性强,猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病病毒(PRV)... 利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA),以猪圆环病毒2型Cap基因的保守序列为靶序列设计并筛选出一组特异性的引物和探针,建立了快速检测猪圆环病毒2型核酸的RPA方法。试验结果表明,该方法特异性强,猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)核酸检测结果均为阴性,灵敏性高,最低可检出核酸浓度为0. 87×10-4ng/μL,简单快速,且重复性好。利用所建立的RPA方法对183份临床样品进行检测,结果与实时荧光PCR方法符合率为98. 9%。本研究为猪圆环病毒2型核酸的快速检测提供了一种新方法,尤其适合基层实验室或养猪场的快速检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 重组酶聚合酶恒温 检测方法建立
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