解毒三根汤调节肿瘤相关成纤维细胞抗结肠癌侵袭转移及其对α-SMA、Sirt1、Ki67的影响

[目的]建立小鼠结肠癌肝转移模型,探讨解毒三根汤通过调节肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)抗结肠癌侵袭转移的治疗作用及其对α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,Sirt1)、细胞增殖核抗原(nuclcar-associated antigen,Ki67)的影响。[方法]收集对数生长期的结肠癌细胞株(CT-26)和小鼠成纤维细胞(L929),将CT-26细胞及CT-26、L929 1:1混合液分别进行BALB/c雄性小鼠脾被膜下注射,建立结肠癌肝转移模型,分别为模型组和CAF组。造模7d后,将小鼠随机分为空白组、中药组,中药组给予解毒三根汤24g·kg-1灌胃,空白组则予生理盐水20m L·kg-1灌胃,2次/d,连续14d。观察肝、肺脏肿瘤生长情况和转移灶数量,免疫组化检测肝、肺脏的α-SMA、Sirt1、Ki67的表达。[结果]CAF空白组肝脏转移灶数量高于模型空白组,差异有统计学意义(P<0.05);CAF中药组肝脏转移灶数量低于CAF空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。肝脏免疫组化结果显示:CAF空白组的α-SMA、Ki67表达量高于模型空白组,差异有统计学意义(P<0.05);CAF中药组的α-SMA、Ki67表达量低于CAF空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。CAF空白组的Sirt1表达量低于模型空白组,差异有统计学意义(P<0.05);CAF中药组的Sirt1表达量高于CAF空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。肺脏免疫组化结果显示:CAF空白组的α-SMA、Ki67、Sirt1表达量高于模型空白组,差异有统计学意义(P<0.05);CAF中药组的α-SMA、Ki67、Sirt1表达量低于CAF空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]CAF能显著提高肝脏转移灶的数量,解毒三根汤能调控CAF降低肝脏转移灶,降低肝、肺α-SMA、Ki67表达,升高肝脏内Sirt1表达,降低肺脏内Sirt1表达。

解毒三根汤对结肠癌SW480细胞侵袭转移及AKT/GSK-3β信号通路的影响

目的探讨解毒三根汤抗结肠癌侵袭转移的可能作用机制。方法在结肠癌SW480细胞中建立蛋白激酶B (AKT)敲减和相应阴性的细胞稳定株。实验分为阴性对照组、阴性三根汤组、AKT敲减对照组、AKT敲减三根汤组。首先用终浓度为50 ng/ml表皮细胞生长因子诱导各组细胞48 h建立上皮间质转化(EMT)模型。再用6 g/L解毒三根汤干预阴性三根汤组和AKT敲减三根汤组48 h。通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞侵袭转移能力,采用Western blot法检测EMT相关标记物(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Occludin、Twist、Slug、Snail、ZEB1)及蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β(AKT/GSK-3β)信号通路相关蛋白表达。结果与阴性对照组比较,其余3组细胞12 h及24 h迁移距离均缩短,迁移及侵袭过膜细胞数均减少(P <0. 05);与AKT敲减对照组比较,AKT敲减三根汤组细胞12 h及24 h迁移距离缩短,迁移及侵袭过膜细胞数减少(P <0. 05)。与阴性对照组比较,其余3组细胞E-cadherin、Occludin上调,N-cadherin、Vimentin、Slug、Twist、Snail、ZEB1、AKT、GSK-3β下调(P <0. 05)。与AKT敲减对照组比较,AKT敲减三根汤组E-cadherin、Occludin上调,N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug、Twist、ZEB1、AKT、GSK-3β下调(P <0. 05)。结论解毒三根汤可能通过AKT/GSK-3β信号通路逆转结肠癌细胞的EMT,从而抗结肠癌侵袭转移。

解毒三根汤调控糖酵解逆转人结肠癌LOVO/5-FU细胞株耐药的机制

目的:探讨解毒三根汤联合5-FU对人结肠癌耐药细胞株LOVO/5-FU的逆转耐药作用,明确糖酵解在肿瘤耐药逆转中的作用。方法:采用药物持续接触浓度递增法建立LOVO/5-FU耐药细胞株。CCK-8法检测其耐药性,测定不同浓度解毒三根汤单用及与5-FU联用对细胞增殖抑制率的影响。Western Blot法检测PI3K/AKT/HIF-1α通路和caspase3表达量。结果:成功建立人结肠癌LOVO/5-FU耐药细胞株,IC50为(287.05±59.18)μg/mL,耐药倍数为43。解毒三根汤能明显抑制LOVO/5-FU细胞株的耐药性,并呈剂量依赖性。Western Blot显示解毒三根汤作用后,协同组的caspase3表达量有所增加,HIF-1α、AKT、P-AKT、PI3K、Glut1、HKⅡ蛋白表达量显著减少(P<0.05)。结论:解毒三根汤能显著逆转人结肠癌耐药细胞株LOVO/5-FU的耐药性,其机制可能与抑制PI3K/AKT通路的活化,诱导细胞凋亡,下调HIF-1α从而调控糖酵解实现的。