慢加急性肝衰竭“毒浊致病”学说的科学内涵及其代表方解毒化瘀Ⅱ方的临床应用

慢加急性肝衰竭“毒浊致病”学说是毛德文教授团队在急性肝衰竭“毒邪致病”学说基础上提炼而来。本文详细介绍慢加急性肝衰竭“毒浊致病”学说的形成、科学内涵及其对中医临床实践的指导意义,充分阐述慢加急性肝衰竭“毒浊致病”学说的科学性及其代表方解毒化瘀Ⅱ方治疗慢加急性肝衰竭的可行性及确切疗效。

解毒化瘀Ⅱ方对实验性暴发性肝衰竭大鼠的保护作用

目的:研究解毒化瘀Ⅱ方对硫代乙酰胺(TAA)所致暴发性肝衰竭大鼠的疗效。方法:SPF级Wistar大鼠204只,用皮下注射TAA造成大鼠实验性暴发性肝衰竭,随机分为空白对照组、模型对照组、解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组、安宫牛黄丸组、乳果糖组;造模前3 d开始灌胃给药,2次/d,间隔12 h,共给药5 d12 h;观察各组药物对大鼠存活率、肝功能、肾功能的影响。结果:造模后36 h,模型对照组存活率为32.5%,解毒化瘀Ⅱ方高剂量组、乳果糖组、安宫牛黄丸组分别为78%、60%、54%,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);解毒化瘀Ⅱ方各剂量组能降低肝衰竭大鼠血清的AST、ALT、ADA、TBIL、PT水平,提高ChE、GSH-ST的活力,并呈现量效关系,以高剂量组的治疗效果最为佳,其与乳果糖、安宫牛黄丸组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:解毒化瘀Ⅱ方能提高暴发性肝衰竭大鼠的存活率,减轻肝脏的损伤程度,改善肝脏的分泌、合成及解毒功能,其疗效机制有待明确。

扶正透邪解毒化瘀方对不同时间点老年肺炎大鼠炎症及免疫功能的影响

目的:探讨扶正透邪解毒化瘀方对多重耐药铜绿假单胞菌肺炎老年大鼠炎症反应与免疫功能的态影响。方法:将实验老年大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、西药对照组、中药组、中药提前给药组、中西医结合观察组,动态观察不同时间点各组老年大鼠炎症指标的变化及淋巴细胞增殖水平的变化。结果:中药提前给药组及中西医结合观察组疗效显著,中药组对感染早期的炎症水平改善明显;中西医结合观察组可使T淋巴细胞增殖能力趋于正常;中药提前给药组、中西医结合观察组能抑制感染后B淋巴细胞的增殖并使其趋于正常。结论:扶正透邪解毒化瘀方能够调节感染早期老年大鼠机体过度的免疫炎症反应,中西医结合治疗能够纠正多重耐药铜绿假单胞菌感染后紊乱的免疫状态,中药提前给药能够对多重耐药铜绿假单胞菌感染后的炎症反应及免疫紊乱起到一定的预防及治疗作用。

解毒化瘀Ⅱ方对慢加急性肝衰竭患者免疫重建的影响

目的评价解毒化瘀Ⅱ方治疗慢加急性肝衰竭(ACLF)的临床疗效及对免疫重建的影响。方法将112例患者随机分为对照组和观察组,每组各56例。对照组采用西医综合治疗措施;观察组在对照组的基础上加服解毒化瘀Ⅱ方,2组疗程均为8周。观察两组患者治疗前后细胞免疫[T淋巴细胞亚群(CD4^(+)、CD8^(+))、调节性T细胞(Treg细胞)、辅助性T细胞17(Th17)]和相关炎症因子[白细胞介素(IL)-2、IL-10、IL-17、转化生长因子β1(TGF-β1)]的变化,评价治疗前后终末期肝病模型(MELD)评分和慢性肝衰竭联盟-慢加急性肝衰竭预后(CLIF-CACLF)评分。结果(1)治疗后,两组患者T淋巴细胞CD4^(+)、Treg细胞水平和CD4^(+)/CD8^(+)比值升高(P<0.05),CD8^(+)、Th17水平和Th17/Treg比值降低(P<0.05),且治疗后观察组CD4^(+)、Treg细胞水平和CD4^(+)/CD8^(+)比值高于对照组,CD8^(+)、Th17水平和Th17/Treg比值低于对照组(P<0.05)。(2)治疗后,两组患者IL-2、IL-17和TGF-β1水平降低,IL-10水平升高(P<0.01);且治疗后观察组IL-2、IL-17和TGF-β1低于对照组,IL-10水平高于对照组(P<0.01)。(3)治疗后,两组患者MELD和CLIF-CACLF评分均降低(P<0.01),且治疗后观察组MELD和CLIF-CACLF评分均低于对照组(P<0.01)。(4)观察组临床总有效率为90.20%(46/51),高于对照组的75.00%(39/52)(χ^(2)=4.125,P<0.05)。结论解毒化瘀Ⅱ方联合西医综合治疗可调节ACLF患者免疫功能,促进免疫重建,减轻病情严重程度,临床疗效优于单纯西医治疗。

解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠肝细胞Bcl-2及细胞色素C表达的影响

目的通过观察解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠肝线粒体Bcl-2、细胞色素C表达的影响,探讨其抗肝衰竭的作用机制。方法以硫代乙酰胺(TAA)皮下注射复制急性肝衰竭大鼠模型,SPF级Wistar大鼠84只,随机分为空白组,模型组,解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组,安宫牛黄丸组,乳果糖组;造模前3d开始灌胃给药,共给药5.5d;采用WesternBlot法检测各组大鼠肝细胞线粒体Bcl-2表达及细胞色素C在肝线粒体和细胞质中的表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠肝线粒体内Bcl-2表达强度显著降低,细胞色素C在细胞质中的表达增强,在线粒体中的表达减弱;解毒化瘀Ⅱ方能提高急性肝衰竭大鼠肝线粒体内Bcl-2的表达,抑制细胞色素C从肝线粒体释放到细胞质中,并呈现剂量-效应关系。结论解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠肝细胞的保护作用机制有可能是通过增强肝细胞线粒体Bcl-2表达,抑制肝线粒体膜通透性转换孔开放,阻止细胞色素C释放到细胞质,抑制肝细胞凋亡的发生。

解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠TNF-α/TNFR1及Fas/FasL表达的影响

目的:研究解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠TNF-α/TNFR1及Fas/FasL表达的影响。方法:SPF级Wistar大鼠84只,随机分为空白组、模型组、解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组、安宫牛黄丸组、乳果糖组,以硫代乙酰胺(TAA)皮下注射复制急性肝衰竭大鼠模型,造模前3d开始灌胃给药,2次/d,间隔12h,共给药5.5d;采用ELISA法检测各组大鼠血清中TNF-α含量,Western blot法测定肝细胞TNFR1的表达量,免疫组化法检测Fas/FasL在各组肝细胞中分布的趋势及表达强度。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清中TNF-α含量升高,肝细胞TNFR1、Fas、FasL的表达均显著增强,差异有统计学意义(P<0.01),解毒化瘀Ⅱ方能降低血清TNF-α的含量,抑制肝细胞TNFR1、Fas/FasL的表达,呈现量效关系,并以解毒化瘀Ⅱ方高剂量组作用效果最佳。结论:解毒化瘀Ⅱ方抗肝衰竭的作用机制可能是通过干预TNF-α/TNFR1及Fas/FasL的表达,阻止死亡信号的转导,抑制肝细胞凋亡。

扶正透邪解毒化瘀方对多重耐药铜绿假单胞菌肺炎老年大鼠炎症损伤的影响

目的探讨扶正透邪解毒化瘀方对多重耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)肺炎老年大鼠不同时相炎症损伤的影响。方法将老年SD大鼠分为空白组、模型组、西药组、中药组、中药提前给药组、中西医结合治疗组,除空白组外使用经口气管插管法进行MDRPA肺炎造模,观察各组大鼠死亡保护率、生命延长率;在感染后不同时间点取大鼠血清及肺组织标本,应用ELISA试剂盒测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)水平,光镜下观察肺组织支气管、肺泡等结构;在感染后第3日取肺组织标本,电镜下观察各组肺组织超微结构。结果中药提前给药组和中西医结合治疗组可提高死亡保护率和生命延长率。中西医结合治疗组可明显降低MDRPA肺炎老年大鼠血清中促炎因子TNF-α水平,升高抑炎因子IL-10水平,其作用强度明显优于西药组,且可明显减少肺组织炎症细胞浸润和充血水肿,明显减轻肺泡结构的破坏。中药提前给药组可在炎症反应早期升高血清抑炎因子IL-10水平,降低促炎因子TNF-α水平。结论扶正透邪解毒化瘀方对老年MDRPA肺炎大鼠有着较高的死亡保护率和生命延长率,与头孢他啶联合治疗可纠正MDRPA感染后紊乱的炎症状态,减轻炎症损伤。中药提前给药可对MDRPA感染后造成的炎症损伤起到保护与治疗作用,对维持机体免疫稳态具有重要意义。

解毒化瘀Ⅱ方防治急性肝衰竭肝性脑病的实验机制研究

[目的]研究解毒化瘀Ⅱ方防治急性肝衰竭肝性脑病的作用机制。[方法]将84只大鼠随机分为7组:空白组、阳性对照组、解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组、乳果糖组、安宫牛黄丸组。检测各组大鼠血清血氨(NH3)、支链氨基酸(BCAA)、芳香氨基酸(AAA)水平,脑线粒体钠钾ATP酶(Na+-K+-ATPase)、钙镁ATP酶(Ca2+-Mg2+-ATPase)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、钙离子(Ca2+)含量。[结果]与模型组比较,解毒化瘀Ⅱ方能降低急性肝衰竭肝性脑病大鼠血清NH3的水平,恢复BCAA/AAA比值,提高脑线粒体Ca2+-Mg2+-ATPase、Na+-K+-ATPase、SOD的活力,抑制MDA生成,维持脑线粒体内Ca2+稳态,并以高剂量组最为显著。[结论]解毒化瘀Ⅱ方防治肝性脑病的机制可能与降低NH3、恢复BCAA/AAA比值、保护脑线粒体功能有关。

解毒化瘀Ⅱ方对HBV相关急性肝衰竭患者外周血Th17、Th1表达及临床疗效的影响

目的探讨解毒化瘀Ⅱ方对乙型肝炎病毒(HBV)相关急性肝衰竭患者外周血Th17、Th1表达及临床疗效的影响。方法选择2013年2月~2016年3月在广西中医药大学第一附属医院、广西中医药大学附属瑞康医院、田东县中医院治疗的118例HBV相关急性肝衰竭患者作为研究对象,根据随机数字表分为对照组和观察组,每组各59例。对照组患者采用西医常规治疗,观察组患者采用解毒化瘀Ⅱ方+西医常规治疗。治疗8周后,对两组患者临床疗效、生化指标及外周血Th17及Th1表达水平进行评估。结果观察组总有效率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组患者谷草转氨酶、丙氨酸氨基转移酶和总胆红素均低于对照组,凝血酶原活动度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组患者Th17、Th1细胞亚群比例低于对照组,观察组患者Th1/Th17值高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论解毒化瘀Ⅱ方可有效改善HBV相关急性肝衰竭患者肝功能,降低Th17及Th1表达水平,调节Th17/Th1,临床应用价值较高。

解毒化瘀Ⅱ方对大鼠急性肝衰竭模型肾脏的保护作用

目的:研究解毒化瘀Ⅱ方对大鼠急性肝衰竭模型肾脏的保护作用。方法:以硫代乙酰胺(TAA)皮下注射复制急性肝衰竭大鼠模型,SPF级W istar大鼠60只,随机分为空白组,模型组,解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组;造模前3天开始灌胃给药,2次/d,间隔12h,共给药5d12h;观察各组大鼠血清BUN、Cr水平,肾线粒体内MAO、Ca2+-Mg2+-AT-Pase、SOD活性及Ca2+、NO、MDA含量。结果:与模型组比较,解毒化瘀Ⅱ方能降低急性肝衰竭大鼠模型血清BUN、Cr水平,恢复肾线粒体内MAO、Ca2+-Mg2+-ATPase、SOD、NO的活性,抑制肾线粒体Ca2+内流及MDA生成,并呈量效关系,以高剂量组的作用效果最为显著。结论:解毒化瘀Ⅱ方对大鼠急性肝衰竭模型肾脏具有一定的保护作用。

解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠肝线粒体的保护作用

目的:研究解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠肝线粒体的保护作用,并从抗脂质过氧化探讨其作用机制。方法:采用皮下注射硫代乙酰胺(TAA)法复制暴发性肝衰竭大鼠模型,SPF级Wistar大鼠84只,随机分为空白组,模型组,解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组,安宫牛黄丸组,乳果糖组。造模前3天开始灌胃给药,2次/天,间隔12h,共给药5天12h;测定各组大鼠肝线粒的肿胀度、肝脏坏死面积及肝线粒体内MDA、SOD、GSH、NO。结果:模型组肝线粒体对外源性钙离子引发肿胀的敏感性下降、肝细胞大量坏死,肝线粒体内MDA含量急剧升高,SOD活性及GSH、NO含量显著下降,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);解毒化瘀Ⅱ方各组能提高肝线粒体对外源性钙离子引发肿胀的敏感性、减少肝脏坏死面积,抑制肝线粒体内脂质过氧化物MDA的生成,恢复SOD的活力及GSH、NO含量,并呈现量效关系。结论:在暴发性肝衰竭致病过程中,肝线粒体内的NO主要起保护性作用;解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭肝线粒体具有较强的保护作用,可能是通过拮抗脂质过氧化来实现。

解毒化瘀Ⅱ方治疗慢性重型肝炎30例

目的:观察解毒化瘀Ⅱ方治疗慢性重型肝炎的临床疗效。方法:将慢性重型肝炎30例患者随机分为对照组和治疗组各15例,对照组采用常规治疗:一般为护肝、降酶、新鲜血浆、白蛋白、改善肝脏微循环、抗病毒、维生素K1等对症支持治疗。治疗组在对照组治疗的基础上使用解毒化瘀Ⅱ方治疗,日2次,两组均以10 d为1个疗程,治疗3个疗程,观察2组治疗前后临床表现、血清总胆红素(TBil)及凝血酶原时间(PT)的变化以及并发症情况。结果:与对照组比较,治疗组患者血清总胆红素明显降低,凝血酶原时间缩短(P<0.01);治疗组有效率为86.67%,对照组有效率为66.67%,两组有效率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:解毒化瘀Ⅱ方治疗慢性重型肝炎疗效显著,可缩短患者病程。

中药解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠白细胞介素表达的影响

目的分析解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠白细胞介素（IL）表达的影响。方法将200只无特定病原体级雄性Wistar大鼠完全随机分为中药组、阳性药组、造模阳性组、空白组，各50只；中药组、阳性药组、造模阳性组腹腔注射D·半乳糖胺及皮下注射内毒素制备大鼠暴发性肝衰竭模型；中药组造模前5d灌胃给予解毒化瘀Ⅱ方，阳性药组造模前1h给予盐酸维拉帕米灌胃，造模阳性组和空白组造模前1h给予等量蒸馏水灌胃。采用免疫组织化学法检测肝细胞再生程度，采用定量聚合酶链反应法及蛋白质印迹法检测肝组织IL-2、IL-4、IL-10表达水平。结果空白组大鼠肝脏细胞中增殖细胞核抗原的表达量较高，造模阳性组明显低于空白组（503±103比3395±615），差异有统计学意义（P〈0．05）；而阳性药组、中药组大鼠中增殖细胞核抗原的表达量（2172±364、1577±288）高于造模阳性组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。空白组设为1．00，造模阳性组IL-2mRNA（21．06±1．03）和IL-10mRNA（2．68±0．48）表达水平明显增高（P〈0．05）；阳性药组和中药组IL-2mRNA（2．04±0．43、10．02±1．21）和IL。10mRNA（1．42±0．14、1．94±0．38）的表达水平低于造模阳性组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。造模阳性组IL-2和IL-10蛋白表达水平较空白组明显增高（0．71±0．12比0．22±0．07、0．55±0．15比0．30±0．04）（P〈0．05）；阳性药组和中药组IL-2蛋白（0．26±0．06、0．52±0．09）和IL-10蛋白（0．14±0．07、0．33±0．08）表达水平低于造模阳性组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论解毒化瘀Ⅱ方能有效降低大鼠肝组织IL-2及IL-10水平，切合肝衰竭的病因病机。

解毒化瘀Ⅱ方对实验性肝衰竭大鼠肝脏坏死面积及肝线粒体超微结构的影响

目的:研究解毒化瘀Ⅱ方对实验性暴发性肝衰竭大鼠肝脏坏死面积及肝线粒体超微结构的影响。方法:将84只Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组,中药安宫牛黄丸组,西药乳果糖组;除正常组外各组均用皮下注射硫代乙酰胺(TAA)造成大鼠实验性暴发性肝衰竭模型,观察各组大鼠造模后12h肝脏的大体结构、病理组织学改变、坏死面积及肝线粒体超微结构。结果:模型组肝细胞大量坏死,肝线粒体高度水肿、坏死;解毒化瘀Ⅱ方各组能改善肝细胞、肝线粒体的病理损伤程度,减少坏死面积,与模型组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01),并呈现出量效关系;解毒化瘀Ⅱ方高剂量组在减少坏死面积、改善肝线粒体超微结构作用上优于乳果糖组、安宫牛黄丸组(P<0.05或P<0.01)。结论:解毒化瘀Ⅱ方对肝衰竭大鼠肝细胞、线粒体具有较好的保护作用。

健脾解毒化瘀方联合英夫利昔单抗治疗克罗恩病患者疗效及对肠道菌群的影响

目的探讨健脾解毒化瘀方联合英夫利昔单抗对克罗恩病患者疗效及肠道菌群的影响。方法选取94例克罗恩病患者,使用随机数字表法分成观察组与对照组各47例。对照组给予英夫利昔单抗。在此基础上,观察组口服健脾解毒化瘀方联合英夫利昔单抗治疗。比较治疗前后两组患者主要中医证候评分、粪便中肠道菌群(双歧杆菌、乳酸杆菌、肠球菌、肠杆菌)数量、血清肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平。结果所有患者均顺利完成该次研究,无脱落病例。观察组总有效率95.74%(45/47),高于对照组[82.98%(39/47)],差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后两组腹痛拒按、腹泻急迫、腹胀、神疲乏力等证候积分降低,而且观察组积分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后两组血清TNF-α、CRP水平降低,而且观察组水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后两组双歧杆菌、乳酸杆菌数量升高,肠球菌、肠杆菌数量降低,而且观察组双歧杆菌、乳酸杆菌数量高于对照组,肠球菌、肠杆菌数量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论健脾解毒化瘀方联合英夫利昔单抗应用于克罗恩病整体疗效确切,促进腹痛等症状的缓解,减轻肠黏膜炎症状态,其作用可能与其显著纠正肠道菌群失衡、改善肠黏膜屏障功能有关。

益肾解毒化瘀方治疗慢性肾脏病合并动脉粥样硬化临床观察

目的:观察益肾解毒化瘀方对慢性肾脏病3~4期合并动脉粥样硬化患者的临床疗效。方法:选取符合纳入标准的脾肾气虚兼血瘀型慢性肾脏病3~4期合并动脉粥样硬化患者60例,随机分为两组各30例。对照组采用慢性肾脏病一体化治疗,治疗组在对照组基础上加用益肾解毒化瘀方。治疗12周后比较两组临床疗效。结果:治疗组临床总有效率为90.0%,明显高于对照组的76.7%(P﹤0.05);治疗后,治疗组Scr、BUN、Ccr、LDL-C、TG、RDW、CRP、UA、IMT水平改善程度均优于对照组(P﹤0.05),治疗组斑块面积、总证候积分均优于对照组(P﹤0.05)。结论:益肾解毒化瘀方治疗脾肾气虚兼血瘀型慢性肾脏病3~4期合并动脉粥样硬化患者可以有效改善患者肾功能及临床症状,降低RDW水平。

解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠肝组织TLR4蛋白及TBIL的影响

目的:探讨解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠肝组织Toll样受体4(TLR4)蛋白及总胆红素(TBIL)的影响。方法:将96只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型对照组、解毒化瘀Ⅱ方组,采用D-GalN+LPS联合制备大鼠急性肝衰竭模型,Western blot检测肝组织TLR4蛋白表达,并对TBIL含量进行测定。结果:急性肝衰竭大鼠肝组织TLR4与血清中TBIL表达显著增强,解毒化瘀Ⅱ方能明显降低肝衰竭大鼠肝组织TLR4蛋白及血清TBIL的表达,与模型对照组比较差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论:解毒化瘀Ⅱ方能降低急性肝衰竭大鼠肝组织TLR4蛋白表达及血清中TBIL水平,对肝细胞有一定的保护作用。

基于TLR4/JNK/NF-κB通路探讨凉血解毒化瘀方治疗慢加急肝衰竭的作用机制

目的探讨凉血解毒化瘀方对慢加急性肝功能衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)模型小鼠的治疗作用及其对受体Toll样受体4(TLR4)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)/核因子κB(NF-κB)通路的影响。方法采用四氯化碳、细菌脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)联合诱导法构建慢加急肝衰竭小鼠模型;生化分析检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)肝功能指标。肝组织病理学检查。荧光定量PCR检测肝组织白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、TLR4的mRNA表达。CCK8筛选凉血解毒化瘀方对Raw264.7细胞的干预浓度,酶联免疫吸附法检测巨噬细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β含量。蛋白免疫印迹法检测TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白(TLR4、NF-κB、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、p-ERK1/2、p-JNK、JNK)的表达。结果与ACLF模型组比较,凉血解毒化瘀方可降低血清ALT、AST、TBIL含量,减少肝组织细胞坏死、纤维化、炎症细胞浸润程度,及肝组织TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4的mRNA表达,并降低肝组织TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白表达。细胞实验进一步发现凉血解毒化瘀方可抑制巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL-1β分泌,下调TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白表达。结论凉血解毒化瘀方能有效改善ALCF小鼠肝功能、抑制其炎症反应的疗效,其机制与其下调TLR4/JNK/NF-κB通路有关。

凉血解毒化瘀方通过抑制cGAS-STING通路治疗小鼠慢加急性肝衰竭

目的基于cGAS-STING信号通路,研究中药凉血解毒化瘀方(LXJDHYF)治疗小鼠慢加急性肝衰竭(ACLF)的可能作用机制。方法30只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、凉血解毒化瘀方高剂量组、凉血解毒化瘀方低剂量组及cGASSTING信号通路特异性抑制剂H151组,6只/组。除空白组外,其余各组采用CCl4诱导形成肝硬化,后予以脂多糖联合D-氨基半乳糖腹腔注射急性攻击形成ACLF小鼠模型。取小鼠肝组织进行HE以及TUNEL染色,生化法测定血清ALT、AST及TBil水平以检测凉血解毒化瘀方对小鼠肝功能的影响。同时采用RT-qPCR测定凉血解毒化瘀方对小鼠骨髓巨噬细胞(BMDMs)β干扰素(IFN-β)、干扰素刺激基因15(ISG15)、白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平的影响;Western blotting分析凉血解毒化瘀方对BMDMs干扰素调节因子3(IRF3)及干扰素基因刺激因子(STING)蛋白磷酸化水平的影响;结合RT-qPCR检测ACLF小鼠肝组织中上述mRNA表达水平,ELISA法检测ACLF小鼠血清IL-6及TNF-α水平以观察凉血解毒化瘀方对cGAS-STING信号通路的作用。结果HE染色显示,凉血解毒化瘀方组肝细胞坏死及炎症浸润程度与模型组相比较轻,TUNEL染色提示凉血解毒化瘀方组凋亡阳性细胞比例低于模型组(P<0.001)。凉血解毒化瘀方组血清ALT、AST及TBil水平均低于模型组(P<0.001)。RT-qPCR结果表明,凉血解毒化瘀方能抑制BMDMs及小鼠肝组织IFN-β、ISG15、IL-6及TNF-α的mRNA表达(P<0.05)。Western blotting结果显示,随着凉血解毒化瘀方给药剂量增加,BMDMs细胞中IRF3及STING蛋白磷酸化水平降低(P<0.05),凉血解毒化瘀方组血清IL-6及TNF-α水平均低于模型组(P<0.05)。结论凉血解毒化瘀方能够改善ACLF小鼠肝功能,降低小鼠血清促炎细胞因子水平,其机制可能与抑制cGAS-STING通路过度激活有关。