解毒活血化浊方治疗痛风急性期25例临床观察

目的:观察自拟解毒活血化浊方治疗急性痛风的疗效。方法:将50例急性痛风患者随机分为观察组和对照组,每组各25例。对照组口服秋水仙碱;观察组口服解毒活血化浊方,疗程7天,观察治疗后两组疗效、血常规、血沉(ESR)、血尿酸(BUA)等指标的变化。结果:两组在总有效率、ESR等差异无统计学意义(P>0.05),但与对照组比较观察组有明显的降低血尿酸的作用(P<0.01)。结论:解毒活血化浊方是治疗风急性期痛的有效方剂且具有较好的降低血尿酸的作用。

化浊解毒活血方对慢性萎缩性胃炎伴随肠上皮化生患者PG、PGR、LI-CD的影响

目的探讨化浊解毒活血方对慢性萎缩性胃炎(CAG)伴肠上皮化生患者血清胃蛋白酶原(PG)、胃蛋白酶原比值(PGR)及胃黏膜中肝肠钙黏连蛋白(LI-CD)表达的影响。方法采用随机数字表法,将2016年1月—2017年12月在河北省中医院脾胃病科诊治的120例CAG伴肠上皮化生患者分为中药组和中成药组,每组60例。中药组口服化浊解毒活血方(1剂/d,分2次温服),中成药组口服摩罗丹(每次8丸,3次/d),2组疗程均为6个月。比较2组患者治疗前后胃镜像病情程度、病理(炎症、腺体萎缩、肠上皮化生)变化程度、血清PG水平、PGR和胃黏膜肠化生组织中LI-CD阳性表达情况。结果治疗后,2组胃镜像和炎症、腺体萎缩、肠上皮化生程度均较治疗前明显改善(P均<0.05),且中药组的改善情况均明显优于中成药组(P均<0.05)。治疗后,2组血清PGⅠ水平和中药组PGR均较治疗前明显升高(P均<0.05),2组血清PGⅡ水平和中成药组PGR与治疗前比较差异均无统计学意义(P均>0.05);治疗后中药组血清PGⅠ和PGⅡ水平均明显高于中成药组(P均<0.05)。治疗后,2组胃黏膜肠化生组织中LI-CD阳性表达平均光密度值均较治疗前明显降低(P均<0.05),且中药组明显低于中成药组(P<0.05)。结论化浊解毒活血方能有效改善CAG伴肠上皮化生患者的病理表现,可能与其提升血清PGI水平,下调LI-CD在胃黏膜的表达有关。

化浊解毒活血通络方联合通督调神针刺法治疗急性脑梗死疗效及NLRP3信号通路研究

目的观察化浊解毒活血通络方联合通督调神针刺法治疗急性脑梗死(ACI)的疗效,以及对患者神经功能和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体信号通路的影响。方法80例ACI患者采用随机数字表法分为两组,对照组采用化浊解毒活血通络方治疗,观察组采用化浊解毒活血通络方联合通督调神针刺治疗。观察两组疗效、神经功能、残疾程度、NLRP3炎性小体信号通路相关分子mRNA表达、炎症因子和氧化应激的差异。结果观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。两组治疗后中医证候积分、美国国立卫生院脑卒中量表(NIHSS)、改良RANKIN量表(mRS)评分,外周血单核细胞NLRP3 mRNA、凋亡相关点样蛋白(ASC)mRNA、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)mRNA表达,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)水平较治疗前降低(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)水平较治疗前增高(P<0.05)。观察组治疗后中医证候积分、NIHSS、mRS评分,外周血单核细胞NLRP3 m RNA、ASC mRNA、Caspase-1 mRNA表达,血清TNF-α、IL-6、MDA水平低于对照组(P<0.05),SOD水平高于对照组(P<0.05)。结论化浊解毒活血通络方联合通督调神针刺法可更有效抑制NLRP3炎性小体信号通路,缓解炎症反应和氧化应激,改善神经功能,减轻残疾程度,提高临床疗效。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠ZO-1和occludin表达的影响

目的观察化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤模型大鼠紧密连接蛋白ZO-1和occludin表达的影响,探讨其神经保护机制。方法以改进后的Zea-Longa线栓法制备局部梗死性脑缺血再灌注损伤模型,以Longa评分法进行神经功能缺损评分,光镜下观察脑组织形态改变,免疫组化法观察ZO-1和occludin的分布及表达,RT-PCR法评测其在各组大鼠缺血侧脑组织中表达量。结果免疫组化结果显示,与假手术组相比,模型组ZO-1表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,各用药组ZO-1的表达水平均有升高(P<0.05),其中以尼莫地平组和中药高剂量组最为明显。与假手术中相比,模型组occludin表达明显减弱(P<0.05),与模型组相比,各用药组occludin表达均有增加(P<0.05);中药低剂量组、中剂量组、高剂量组表达依次增加(P<0.05),高剂量组与尼莫地平组差别不明显(P>0.05)。RT-PCR法显示:与假手术组相比,模型组ZO-1及occludin表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,各用药组ZO-1及occludin的表达水平均有升高(P<0.05),其中以尼莫地平组和高剂量组最为显著。结论化浊解毒活血通络方可能通过增加ZO-1和occludin的表达、调节血脑屏障通透性等机制,发挥神经保护作用。

化浊解毒活血方对兔心肌梗死1周后瞬间外向钾电流跨壁异质性的影响

目的:探讨化浊解毒活血方对急性心肌梗死(AMI)1周后心外膜梗死边缘区心肌细胞瞬间外向钾电流(Ito)的影响。方法:采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立兔心肌梗死模型,30只兔随机分为3组:对照组,AMI组和化浊解毒活血方+AMI组。采用膜片钳技术研究化浊解毒活血方对左心室梗死边缘区心外膜(Epicardium,Epi)、心内膜(En-docardium,Endo)和中层(Midmycoardium,M)心室肌细胞的Ito密度的改变。结果:AMI组细胞的Ito电流密度明显降低,Epi与M、Endo之间差异较明显(P<0.01);化浊解毒活血方+AMI组使心外膜Ito电流密度进一步降低,三层细胞间无统计学意义(P>0.05)。结论:心肌梗死对Ito的跨壁异质性有明显影响;化浊解毒活血方减弱心肌梗死后Ito的跨壁异质性。

化浊解毒活血方治疗冠心病急性心肌梗死后心律失常40例

目的观察急性心肌梗死后心律失常患者在常规治疗的基础上加用化浊解毒活血方的临床疗效。方法将患者随机分为对照组(予常规治疗)和治疗组(予常规治疗及化浊解毒活血方),并应用24h动态心电图观察临床疗效。结果治疗组总有效率为92.50%,高于对照组的82.50%。结论在常规治疗基础上加用化浊解毒活血方可有效治疗急性心肌梗死后心律失常。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤小鼠血清IL-6和TNF-α水平的影响

目的:观察化浊解毒活血通络方对小鼠脑缺血再灌注损伤的局部炎症反应的影响。方法:将50只昆明小鼠随机均分为模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、尼莫地平组、假手术组。采用双侧颈总动脉结扎法合并尾端放血制造脑缺血再灌注模型。手术造模成功分别给予高、低剂量组化浊解毒活血通络方中药灌服。在治疗后用放免法检测各组小鼠血清中IL-6、TNF-α的表达水平。结果:化浊解毒活血通络方高剂量组小鼠中IL-6和TNF-α的表达水平明显低于模型组,与假手术组及尼莫地平组比较无统计学意义。结论:化浊解毒活血通络方可以抑制小鼠脑缺血再灌注损伤时炎症细胞因子的表达,减少白细胞的浸润,降低脑缺血再灌注损伤的程度。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠PKCδ、PKCθ和PKCε表达的影响

目的探讨化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠蛋白激酶(PK)Cδ、PKCθ和PKCε表达的影响及其神经保护机制。方法以改进后的Zea-Longa线栓法制造局部梗死性脑缺血再灌注模型。随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组,中药高剂量组、中剂量组、低剂量组,以Longa评分法进行神经功能评分,免疫组化法观察PKCδ、PKCθ和PKCε的分布及表达。Western印迹法评测其在各组大鼠缺血侧脑组织中的表达量。结果免疫组化结果显示:与假手术组相比,模型组PKCδ、PKCθ表达升高,PKCε表达降低(P<0.05),与模型组相比,各用药组PKCδ、PKCθ均降低,PKCε表达升高(P<0.05),其中以中药高剂量组及尼莫地平组较为明显(P<0.05)。Western印迹法显示:与假手术组相比,模型组PKCδ、PKCθ表达升高,PKCε表达降低(P<0.05),与模型组相比,各用药组PKCδ、PKCθ均降低,PKCε表达升高(P<0.05),其中以中药高剂量组及尼莫地平组较为明显(P<0.05)。结论化浊解毒活血通络方可能通过降低PKCδ、PKCθ的表达、上调PKCε的表达,降低CIRI的程度。

化浊解毒活血方治疗冠心病室性早搏51例

目的观察化浊解毒活血方加胺碘酮治疗冠心病室性早搏的临床疗效。方法将97例冠心病室性早搏患者随机分为两组,均予胺碘酮每次0.2g,每日2次口服,观察组同时服用化浊解毒活血中药。4周为1疗程。观察用药前后主要症状,24h动态心电图室性早搏数,尿常规,大便常规,肝肾功能,并观察服药前后不良反应。结果观察组与对照组中医证候疗效总有效率分别为94.12%和84.78%.,两组比较差异有统计学意义。结论采用化浊解毒活血方加胺碘酮治疗冠心病室性早搏疗效优于单纯使用胺碘酮。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠LPS及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:观察化浊解毒活血通络方对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的保护作用及对LPS及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:60只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、化浊解毒活血通络方低(TCM-L)、中(TCM-M)、高(TCM-H)剂量组,每组12只。Longa法结合既往研究经验制备永久性大脑中动脉梗塞大鼠模型。化浊解毒活血通络方低、中、高剂量组大鼠灌胃给予6.25、12.5、25 g/kg化浊解毒活血通络方,假手术与模型组灌胃给予2 ml生理盐水,给药后72 h检测大鼠神经功能缺失情况;HE染色观察脑、肠组织病理改变;TUNEL检测脑组织凋亡;TTC染色观察脑梗死面积;鲎试剂检测血清LPS浓度;ELISA检测血清DAO、脑组织IL-1β、TNF-α表达;Western blot检测脑组织TLR4、NF-κB、肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达;RT-PCR检测脑组织MyD88、IRAK、TRAF6 mRNA表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺失加重,脑梗死面积增大,脑组织细胞凋亡增加,血清DAO、脑组织IL-1β、TNF-α表达升高(P<0.05),血清LPS表达升高(P<0.05),肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达降低,脑组织TLR4、NF-κB、MyD88、IRAK、TRAF6蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,化浊解毒活血通络方各组大鼠神经功能缺失减轻,脑梗死面积减小,脑组织细胞凋亡减少,血清DAO、脑组织IL-1β、TNF-α表达降低(P<0.05),血清LPS表达降低(P<0.05),肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达升高,脑组织TLR4、NF-κB、MyD88、IRAK、TRAF6蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05),TCM-H组最为显著,血清LPS表达下降(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方可改善CIRI,其机制可能与降低LPS含量、保护肠道屏障、调控TLR4/NF-κB信号通路减轻炎症反应有关。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑水通道蛋白的影响

目的观察化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠脑水肿的治疗作用,并探索其改善脑水肿是否与调节水通道蛋白(aquaporin,AQP)的变化有关。方法选择健康清洁级成年雄性SD大鼠,采用随机数字表法随机分为假手术组和模型组。假手术组只将线栓插入10 mm即拔出。模型组采用大脑中动脉栓塞再灌注法造模。造模成功后再次随机分为模型组、化浊解毒活血通络方高剂量组、化浊解毒活血通络方低剂量组和尼莫地平组。化浊解毒活血通络方高剂量组和低剂量组于造模后连续3天分别给25 g/(kg·d)、6.25 g/(kg·d)灌胃,尼莫地平组于造模后连续3天给10 g/(kg·d)灌胃,模型组及假手术组连续3天接受等剂量生理盐水。大鼠脑缺血再灌注3天后解剖取材,采用改良神经功能缺损评分对大鼠进行神经功能评估;苏木精—伊红染色观察脑组织病理改变;TTC染色观察脑梗死体积;测干湿重比检测脑水肿;用蛋白免疫印迹法检测AQP-4、AQP-9蛋白的表达;逆转录聚合酶链式反应检测AQP-4、AQP-9mRNA表达。结果(1)与假手术组相比,模型组神经功能评分显著升高(P<0.01),病变侧脑组织变性坏死程度显著升高(P<0.05),脑梗死面积显著升高(P<0.05),脑组织含水量显著升高(P<0.05),脑组织AQP-4、AQP-9mRNA表达明显升高(P<0.05),脑组织AQP-4、AQP-9蛋白表达明显升高(P<0.05)。(2)与模型组相比,中药各组和尼莫地平组神经功能评分显著降低(P<0.05),中药各组和尼莫地平组病变侧脑组织变性坏死程度显著降低(P<0.05),中药各组和尼莫地平组脑梗死面积显著减小(P<0.05),中药各组和尼莫地平组脑组织含水量显著降低(P<0.05),中药各组和尼莫地平组脑组织AQP-4、AQP-9mRNA表达明显降低(P<0.05),中药各组和尼莫地平组脑组织AQP-4、AQP-9蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论化浊解毒活血通络方能显著改善脑水肿,其作用机制可能与抑制AQP4、AQP9的表达有关。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠氧化损伤和炎症因子的影响

目的:观察化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其抗氧化、抗炎性损伤的作用机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,中药高、中、低剂量组,每组10只。采用改良线栓法制备大脑中动脉阻塞/再灌注大鼠模型,造模24 h后,中药高、中、低剂量组给予相应浓度化浊解毒活血通络方灌胃,连续给药14 d,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水。观察各组大鼠一般情况,记录大鼠体质量;评定神经功能缺损程度;HE染色观察脑组织结构变化;免疫荧光检测梗死侧脑组织活性氧(ROS)含量;比色法检测大鼠血清中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠一般情况较差,取材前体质量显著下降(P<0.05),神经功能缺损评分显著升高(P<0.05),梗死侧脑组织有大量细胞变形、坏死、液化,伴有炎症细胞浸润,脑组织ROS荧光范围和强度明显增加,血清MDA、IL-1β和IL-18含量均显著升高(P<0.05),SOD活性显著降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组大鼠一般情况有所改善,取材前体质量显著增加(P<0.05),中药高剂量组神经功能缺损评分显著下降(P<0.05),各给药组脑组织病理状态有所改善,脑组织ROS荧光范围均有所减少,荧光强度均有不同程度的减弱,各给药组血清MDA含量均显著下降(P<0.05),中药高、中剂量组SOD活性显著提升(P<0.05),血清IL-1β和IL-18含量均显著下降(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方可能通过减少大鼠脑组织ROS含量和血清MDA含量,增加SOD活性,减少脑组织炎症细胞浸润和炎症因子IL-1β、IL-18的表达而发挥脑保护作用,且药物剂量与疗效总体呈现量效关系。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠模型血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:采用改良的线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型。采用PCR法检测缺血侧脑组织VEGF表达。结果:模型组VEGF表达含量高于假手术组(P<0.05);中药中、高剂量组VEGF表达含量均高于模型组(P<0.05);且中药高剂量组效果优于中药中剂量组(P<0.05);中药低剂量组VEGF表达含量与模型组相比无明显差异。结论:化浊解毒活血通络方可以明显促进脑缺血再灌注损伤大鼠模型VEGF的表达,存在一定的剂量相关性。

化浊解毒活血通络方对大鼠脑缺血再灌注损伤后Caspase-3表达的影响

目的:研究化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能评分及Caspase-3表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法:采用改良线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型。运用Longa法进行神经病学评分,用光镜观察脑组织形态学改变,用PCR法检测Caspase-3的表达。结果:模型组及各用药组均出现不同程度的神经功能缺损,模型组Caspase-3表达明显多于假手术组(P<0.05);与模型组相比,中药各组及阿司匹林组组织变性坏死程度轻、Caspase-3阳性细胞减少(P<0.05),中药高剂量组及阿司匹林组神经功能缺损评分显著降低(P<0.05);中药中、高剂量组和阿司匹林组效果优于中药低剂量组(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方可以通过抑制Caspase-3的阳性表达来抑制细胞凋亡,从而发挥其神经保护作用。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤小鼠血清IL-6和TNF-α水平的影响

目的观察化浊解毒活血通络方对小鼠脑缺血再灌注损伤的局部炎症反应的影响。方法将50只昆明小鼠按随机数字表法分为脑缺血再灌注损伤模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、尼莫地平组、假手术组，每组各10只，前四组采用线栓法制备小鼠右侧大脑中动脉脑缺血再灌注损伤模型。手术造模成功后脑缺血再灌注损伤模型组、假手术组灌服生理盐水，尼莫地平组灌服尼莫地平液（19．6g／kg·d^-1），中药高剂量组、中药低剂量组分别给予高（19．6g／kg·d^-1）、低剂量（9．8g／kg·d^-1）的化浊解毒活血通络方中药灌服。药物干预后用放免法检测各组小鼠血清IL-6、TNF-α的表达水平。结果与模型组[（219．29±39．28）pg／ml、（1．325±0．236）ng／m1]比较，中药高剂量组、中药低剂量组、尼莫地平组小鼠血清中IL-6[分别为（120．69±49．23）pg／ml、（173．97±49．03）pg／ml、（170．88±47．06）pg／m1]和TNF-α[分别为（1．086±0．178）ng／ml、（0．937±0．105）ng／ml、（1．092±0．184）ng／ml]的表达水平均明显降低（P均〈0．05）。中药高剂量组与假手术组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论化浊解毒活血通络方可抑制小鼠脑缺血再灌注损伤时炎症细胞因子的表达，减少白细胞的浸润。

基于16S rRNA测序的肠道菌群探讨化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠脑-肠轴的影响

目的:研究化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠肠道菌群的影响,探讨中药调控肠道微生物群进而恢复脑-肠轴平衡的机制。方法:将50只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,化浊解毒活血通络方高(25.0 g·kg^(-1)),中(12.5 g·kg^(-1)),低(6.25 g·kg^(-1))剂量组,每组10只。参照Longa法并结合既往研究经验制备大脑中动脉梗塞大鼠模型,缺血2 h后再灌注。于脑缺血再灌注损伤72 h检测大鼠神经功能缺损情况、脑梗死范围百分比;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠结肠闭锁小带蛋白-1(ZO-1),闭锁蛋白(Occludin)mRNA表达;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肠道组织、脑组织损坏程度;每组收集6只大鼠粪便进行16S rRNA测序;免疫组化、酶联免疫吸附测定试验(ELISA)检测肠道组织、外周血、脑组织调节性T细胞(Treg),辅助性T细胞17(Th17)的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损症状加重(P<0.05),脑梗死面积增加(P<0.05);与模型组比较,化浊解毒活血通络方高、中剂量组大鼠神经功能缺损症状明显减轻(P<0.05),脑梗死面积减少(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠结肠黏膜结构破坏,上皮细胞、杯状细胞结构不完整;与模型比较,化浊解毒活血通络方高、中剂量组大鼠结肠黏膜破坏较少,上皮细胞、杯状细胞结构完整。与假手术组比较,模型组大鼠Occludin,ZO-1 mRNA表达降低(P<0.05),与模型组比较,化浊解毒活血通络方高剂量组Occludin,ZO-1 mRNA水平均有所增加(P<0.05)。模型组与假手术组肠道菌群微生态结构存在差异,化浊解毒活血通络方高剂量组与假手术组组群落结果更相近。与假手术组比较,模型组大鼠肠道组织、外周血、脑组织Treg细胞表达下降,Th17细胞表达升高(P<0.05);与模型比较,化浊解毒活血通络方高、中剂量组大鼠肠道组织、外周血、脑组织Treg细胞表达升高,Th17细胞表达下降(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方可能通过调整肠道微生物的丰度和多样性,改善肠壁通透性,减少肠道Th17细胞迁移至缺血侧脑组织,减少炎症反应,进而减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体自噬相关蛋白PINK1和Parkin的影响

目的:研究化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及对线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导激酶1(PINK1)、Parkin的影响。方法:将48只雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组(化浊解毒活血通络方)、抑制剂组[3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制剂],每组12只。按照Longa法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,造模成功给药3 d后,行大鼠神经功能缺损评分,HE染色观察脑组织病理改变,TTC染色观察脑梗死体积,Western Blot检测脑组织PINK1、Parkin蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测脑组织中PINK1、Parkin mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分和脑梗死体积显著增加(P<0.05),病理损伤加重,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,中药组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积显著减少(P<0.05),病理损伤减轻,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组及中药组比较,抑制剂组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积显著增加(P<0.05),病理损伤加重,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠具有脑保护作用,其机制可能与上调线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin的表达相关。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠细胞自噬相关蛋白的抑制作用

目的:研究化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠细胞自噬相关蛋白的抑制作用。方法:50只SPF级SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、中药组、抑制剂组、中药+抑制剂组。采用线栓法制备大脑中动脉缺血/再灌注模型,假手术组仅分离血管不进栓,各组予相应干预。给药3 d后观察各组大鼠神经功能评分,TTC检测脑组织梗死面积,HE染色观察脑组织结构变化,透射电镜观察自噬小体超微结构,Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)、Beclin1、p62、Atg5的表达情况。结果:与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分显著升高(P<0.05),脑梗死面积显著增大(P<0.05),病理改变严重,电镜下自噬小体、自噬溶酶体清晰可见,LC3、Beclin1、Atg5表达显著升高(P<0.05),P62表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,中药组、抑制剂组和中药+抑制剂组神经功能缺损评分均显著降低(P<0.05),脑梗死面积显著缩小(P<0.05),脑组织病理状态有所改善,电镜下细胞核核膜轻度融合,自噬小体、自噬溶酶体可见但数量较少,LC3、Beclin1、Atg5表达显著降低(P<0.05),P62表达显著升高(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤有改善作用,可能与抑制细胞自噬,上调LC3、Beclin1、Atg5蛋白的表达,下调P62蛋白水平有关。

基于JNK信号通路调控细胞自噬探讨化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究化浊解毒活血通络方通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路调控神经细胞自噬减轻脑缺再灌注损伤的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组、大脑中动脉阻塞/再灌注(MCAO/R)组(模型组)、化浊解毒活血通络方(中药)组(25.0 g·kg^(-1))、JNK抑制剂SP600125(SP)组(5 mg·kg^(-1))、中药+SP组和JNK激动剂Anisomycin(Ani)组(15 mg·kg^(-1))6组。造模24 h后中药组和中药+SP组给予中药汤剂灌胃,连续给药3 d,其余各组灌胃等容积蒸馏水。神经功能评分评估神经功能缺损程度,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色确定脑梗死体积;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织结构变化;尼氏染色检测神经元损伤;原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡;透射电镜观察自噬小体超微结构;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑组织中微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)、自噬相关基因5(Atg5)、自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin1)、p62、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、JNK、磷酸化(p)-JNK和c-Jun的蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠脑组织中LC3A/B、Beclin1、p62、Atg5、Bcl-2、JNK、c-Jun mRNA表达量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高(P<0.05),脑组织梗死体积明显变大(P<0.05),海马区及其周围脑组织形成典型梗死表现,皮层有大量神经元细胞变性、坏死、液化、固缩和深染,有炎性细胞浸润,电镜下可见炎症细胞浸润,线粒体、溶酶体、自噬体和自噬溶酶体严重肿胀。细胞凋亡情况较重,TUNEL阳性细胞明显增加(P<0.05),脑组织内神经元核膜和核仁模糊,突起不连续,胞质尼氏体色浅且数量减少。Western blot结果显示大鼠脑组织LC3A/B、Beclin1、Atg5、JNK、p-JNK、c-Jun蛋白表达明显升高(P<0.05),p62和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),Real-time PCR结果显示LC3A/B、Beclin1、Atg5、JNK、c-Jun mRNA表达明显增加(P<0.05),p62、Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,中药组、SP组与中药+SP组大鼠神经功能缺损评分均明显降低(P<0.05),梗死体积明显缩小(P<0.05),脑组织病理状态均有所改善,尤以中药组改善明显;线粒体M嵴丰富,基本正常,内质网轻度扩张,高尔基体轻度肿胀,细胞核核膜轻度融合,溶酶体、自噬小体、自噬溶酶体可见,但数量较少,TUNEL阳性细胞明显减少(P<0.05),凋亡情况有所减轻,尤以中药组最为显著,脑组织神经元核仁、核膜可辨,胞浆尼氏体有一定程度的脱失,但较模型组明显减轻。Western blot结果显示中药组、SP组与中药+SP组LC3A/B、Beclin1、Atg5、JNK、p-JNK、c-Jun蛋白表达明显降低(P<0.05),中药组和SP组p62蛋白表达明显升高(P<0.05),中药组和中药+SP组Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。Real-time PCR显示中药组、SP组和中药+SP组大鼠脑组织LC3A、LC3B、Beclin1、Atg5、JNK、c-Jun mRNA表达明显降低(P<0.05),p62 mRNA表达明显增加(P<0.05);中药组和中药+SP组Bcl-2 mRNA表达明显增加(P<0.05)。Ani组评分明显升高(P<0.05),梗死体积显著增加,神经元细胞坏死情况加重,炎性浸润明显,神经元核膜融合、异型凸起,异染色质增加,边缘聚集,线粒体肿胀严重,内质网扩张,溶酶体增加,胞浆内囊泡增多,可见自噬体和自溶酶体,TUNEL阳性细胞增加(P<0.05),凋亡情况较重,尼氏小体数量明显减少,脱失较重,着色浅,核仁核膜模糊;Ani组Atg5、c-Jun、JNK mRNA表达增加(P<0.05),Beclin1、p62、Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.05)。与中药组和SP组比较,Ani组LC3A/B、Beclin1、Atg5、JNK、p-JNK、c-Jun蛋白表达明显升高(P<0.05),p62、Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05)。与中药组比较,SP组和中药+SP组大鼠脑组织JNKmRNA表达降低(P<0.05);Ani组LC3A、LC3B、Atg5、c-Jun、JNK mRNA表达增加(P<0.05),Bcl-2表达明显降低(P<0.05)。与SP组比较,Ani组Atg5、c-Jun、JNK mRNA表达明显升高(P<0.05),Beclin1、p62、Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方可上调LC3A/B、Beclin1、Atg5、JNK、p-JNK、c-Jun蛋白的表达,下调p62、Bcl-2蛋白表达;提高LC3A/B、Beclin1、Atg5、JNK、p-JNK、c-Jun mRNA表达,降低p62、Bcl-2 mRNA表达,表明化浊解毒活血通络方可通过JNK信号通路抑制自噬减少大鼠缺血/再灌注损伤。

中医综合疗法治疗慢性萎缩性胃炎160例

目的:观察穴位敷贴加服用中药治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的临床疗效。方法:将260例CAG患者随机分为两组:治疗组160例予穴位敷贴加服用化浊解毒、活血通络方,对照组100例予胃复春治疗。两组均3个月为1个疗程,治疗2个疗程。观察两组临床疗效及主要症状积分变化情况。结果:治疗组痊愈率43.1%,总有效率89.34%;对照组痊愈率20.0%,总有效率79.0%。两组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:穴位敷贴加化浊解毒活血通络方治疗CAG疗效确切,可供同行参考。