解毒活血复方对人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤血管生成及VEGF、MMP-2表达的影响

目的:观察解毒活血复方(肠复康,CFK)对人结肠癌Lo Vo细胞裸鼠移植瘤血管生成的抑制作用,并探讨其对STAT3、p STAT3及VEGF、MMP-2表达的影响。方法:采用裸鼠结肠癌原位种植转移模型,将荷瘤鼠50只随机分为5组,每组10只,种植后第1周开始,分别给予生理盐水(模型组)、5-FU(5-FU组)、CFK低剂量(CFK低剂量组)、CFK高剂量(CFK高剂量组)、5-FU与CFK联合应用(CFK+5-FU组),1次/d,共用4周。种植后第5周末处死动物,测量原位肿瘤瘤质、抑瘤率,免疫组化检测各组结肠癌组织中肿瘤微血管密度(MVD),Western blot法检测STAT3、p STAT3、VEGF和MMP-2蛋白表达。结果:高剂量组及CFK+5-FU组平均瘤质均显著低于模型组(P<0.05);CFK高剂量组、CFK+5-FU组平均瘤质均低于5-FU组(P<0.05);CFK高、低剂量组、CFK+5-FU组MVD均明显低于模型组和5-FU组,差异均有统计学意义(P<0.01);CFK高剂量组、5-FU组肿瘤组织中STAT3、p STAT3、VEGF及MMP-2蛋白的表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:解毒活血复方(CFK)可通过干预STAT3磷酸化,下调VEGF、MMP-2蛋白表达,从而抑制人结肠癌Lo Vo细胞裸鼠移植瘤血管生成。

温阳活血解毒复方对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究温阳活血解毒复方(WHJF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移及细胞管形成功能的影响,从细胞层面探讨该治疗动脉粥样硬化机制。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、温阳活血解毒复方低、中、高剂量组(剂量分别为10.35,31.05,93.15 g·kg^(-1)),于第4天首次灌胃2 h后采血制备含药血清,采用CCK8法、Transwell迁移实验、b FGF诱导细胞管形成实验分别观察含药血清对HUVECs增殖、迁移及细胞管形成功能的影响。结果温阳活血解毒复方含药血清对HUVECs的增殖有抑制作用,与空白对照组比较,低、中、高剂量组的含药血清对HUVECs的抑制率均明显升高(P<0.05),且两两比较差异有统计学意义(P<0.05),呈浓度依赖型。在迁移方面,温阳活血解毒复方组迁移细胞数减少,与空白对照组比较,高剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。在细胞管形成方面,与模型组比较,温阳活血解毒复方组细胞管数明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,低、高剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。结论温阳活血解毒复方含药血清可抑制HUVECs的增殖、迁移及细胞管形成,起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用;此外,其可能与b FGF产生协同作用,共同促进新生血管成熟,发挥稳定斑块的作用。

温阳活血解毒复方对人脐静脉内皮细胞VEGFs/VEGFRs通路的影响

目的研究温阳活血解毒复方(WHJF)对血管内皮生长因子(VEGFs/VEGFRs)信号通路的影响,从分子层面探讨其治疗动脉粥样硬化(AS)的机制。方法将SD大鼠随机分为空白对照组(C组)、温阳活血解毒复方低、中、高剂量组(L、M、H组,剂量分别为10.35、31.05、93.15 g·kg^(-1)),于第4天首次灌胃2 h后采血制备含药血清,采用免疫印迹法(Western Blot)及逆转录-聚合酶链式反应(q RT-PCR)法分别观察含药血清对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的VEGFs/VEGFRs信号通路中各信号分子及其基因表达的影响。结果温阳活血解毒复方含药血清对VEGFs/VEGFRs信号通路有抑制作用。在蛋白表达方面,与空白对照组比较,高剂量组中血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)和磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(pERK)的表达量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组中pERK的表达量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);通路中其他信号分子的表达量无明显减少,差异无统计学意义(P>0.05)。在基因表达方面,与空白对照组比较,温阳活血解毒复方组血管内皮生长因子亚型A、B(VEGFA、VEGFB)及血管内皮生长因子受体1、2(VEGFR-1、VEGFR-2)的mRNA表达量无明显减少,差异无统计学意义(P>0.05)。结论温阳活血解毒复方含药血清可能通过下调VEGFR-2及下游分子pERK的表达,对VEGFs/VEGFRs信号通路发挥抑制作用,从而直接影响细胞DNA合成功能,减少血管新生,起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用。

不同条件温阳活血解毒复方血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

【目的】探讨不同条件温阳活血解毒复方含药血清(YBTR)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖影响的差异。【方法】体外培养HUVECs细胞。含药血清制备:将32只SD大鼠(雌雄各半)随机分成生理盐水组及低、中、高剂量组(灌胃剂量分别为10.35、31.05、93.15 g·kg-1,每日2次)4组,分别在4个时间点(大鼠喂养第4天首次灌胃1 h、2 h后,第6天首次灌胃1 h、2 h后,以下分别用D3H1、D3H2、D5H1、D5H2表示)每组各取1只雌性大鼠和雄性大鼠采血制成含药血清。采用CCK8法观察各组含药血清对HUVECs增殖能力的影响。【结果】自不同性别大鼠和不同时间点采集的药物血清作用HUVECs后的细胞增殖抑制率比较,差异均有统计学意义(P性别=0.000<0.01,P时间=0.000<0.01),时间和性别的交互作用有统计学意义(P时间×性别=0.001<0.01),其中D3H2、D5H1随性别的不同而不同(PD3H2×性别=0.000<0.01、PD5H1×性别=0.002<0.01)。随着D3H2雌性含药血清剂量的增加,其对HUVECs的增殖抑制作用也逐渐增加,其组间比较差异有统计学意义(P<0.05),整体趋势呈浓度依赖性。在雌性大鼠中,不同浓度组的含药血清对HUVECs的增殖抑制作用,在D3H2达到峰值后均出现下降;而在雄性大鼠中,低、中剂量组含药血清在D5H1达到峰值,高剂量组则在D3H1达到峰值。【结论】选择雌性的大鼠在D3H2采血制备的温阳活血解毒复方含药血清对HUVECs的增殖抑制作用最佳。

清热活血解毒复方对体外培养HaCaT细胞增殖和凋亡的影响

目的观察中药清热活血解毒复方对人永生化角质形成细胞株(HaCaT)增殖、凋亡和细胞周期的影响,探讨其治疗银屑病可能的作用机制。方法将不同浓度的清热活血解毒复方水提物分别作用于体外培养的HaCaT细胞,采用CCK-8法检测药物对细胞增殖的抑制作用及药物的有效浓度;采用倒置显微镜观察药物处理前后细胞的形态学改变;流式细胞术检测细胞周期的变化及凋亡率。结果清热活血解毒复方以时间和浓度依赖性方式抑制HaCaT细胞增殖,作用24、48 h其半抑制浓度(IC50)分别为23.40、20.24 mg/m L。细胞形态学和流式细胞仪检测发现药物以浓度依赖性方式干扰细胞周期,诱导细胞凋亡,细胞分裂周期阻滞于G0/G1期。结论清热活血解毒复方可能通过抑制HaCaT细胞增殖、诱导凋亡、影响细胞周期而发挥治疗银屑病的作用。

解毒活血通络中药复方含药血清对人脐静脉内皮细胞LOX-1、TNF-α、ICAM-1表达的影响

目的:研究解毒活血通络中药复方防治动脉粥样硬化的作用机制及其效应靶点。方法:选取新西兰大耳白兔18只,随机分为3组,分别以生理盐水和解毒活血通络中药复方、阿托伐他汀连续灌胃7d,心脏采血,分离血清;体外培养人脐静脉内皮细胞,用脂多糖(LPS)刺激后,用含药血清干预,收集细胞,用Real-time PCR方法和Western Blot方法分别检测凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mRNA和蛋白表达、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA表达。结果:与空白对照组比较,用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起LOX-1 mRNA和蛋白、TNF-α、ICAM-1 mRNA的高表达(P<0.01),与模型组比较,用中药含药血清干预,显著抑制LOX-1mRNA和蛋白、TNF-α、ICAM-1 mRNA的高表达(P<0.01,P<0.05)。结论:解毒活血通络中药复方对LPS刺激后的人脐静脉内皮细胞具有保护作用,其机制与解毒活血通络中药复方对LOX-1、TNF-α和ICAM-1表达有抑制作用,减少单核细胞与血管内皮细胞黏附有关。

清热活血解毒复方(QHJD)对TNF-α诱导的HaCat细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究中药清热活血解毒复方(QHJD)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人永生化角质形成细胞株(Ha Cat)增殖和凋亡的影响,为治疗银屑病的可能作用机制提供依据。方法:体外培养Ha Cat细胞,将高、中、低(30,25,20 g·L^(-1))质量浓度的QHJD水提物分别作用于TNF-α诱导的Ha Cat细胞24 h,采用倒置显微镜观察QHJD水提物处理后的Ha Cat细胞形态学改变;采用CCK-8技术检测QHJD对TNF-α诱导的Ha Cat细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测QHJD对TNF-α诱导的Ha Cat细胞凋亡的影响;采用Western blot技术检测QHJD对TNF-α诱导的Ha Cat细胞B细胞淋巴瘤/白血病-xl(Bclxl),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达的影响;采用Real-Time PCR技术检测清热活血解毒复方对TNF-α诱导的Ha Cat细胞Bcl-xl,Bax mRNA表达的影响。结果:与空白组比较,QHJD各组细胞镜下单位面积的细胞均呈现数量减少,细胞体积缩小,细胞间连接变少或是消失,细胞间隙变大;QHJD各组均可抑制Ha Cat细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.05),其中QHJD中、高剂量组极显著(P<0.01);QHJD中、高剂量组可以促进Ha Cat细胞的凋亡,差异有统计学意义(P<0.05),其中高剂量组促进Ha Cat细胞凋亡更明显(P<0.01);QHJD各组Bax蛋白表达均有上升,差异有统计学意义(P<0.05);QHJD各组Bax mRNA表达均有上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:QHJD可能通过上调Bax蛋白和mRNA的表达,来诱导角质形成细胞的凋亡,进而抑制TNF-α诱导的Ha Cat细胞的增殖,以发挥治疗银屑病的作用。