解淀粉芽孢杆菌S27的鉴定、生物学功能测定及其对马铃薯病原真菌的拮抗作用研究

试验采用平板对峙法和Salkowski比色法测定了细菌S27的生物学功能,并对其进行了形态学及16SrDNA序列鉴定.结果表明:该菌对马铃薯枯萎病菌(Fusarium tricinctum),马铃薯丝核病菌(Rhizoctonia solani)和马铃薯炭疽病菌(Colletotrichum coccodes)都有良好的抑制作用,可致菌丝膨大,断裂及溶解等;该菌株在含有色氨酸和不含色氨酸的King培养基中分泌IAA的量分别为20.15和6.16 mg/L;能有效的溶解无机磷Ca3(PO4)2,其溶磷量为505.41mg/L.通过形态学与16SrDNA基因序列同源性分析,初步确定菌株S27为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).

解淀粉芽孢杆菌HAB-9的鉴定及对17株植物病原菌的拮抗作用

HAB-9是从槟榔树根际土壤中分离到的一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),该菌株对17株植物病原真菌有较好的拮抗作用。经16srDNA及生化特征测定,鉴定HAB-9菌株,应用对峙法测定了抑菌效果。结果显示,经16S rDNA鉴定,HAB-9菌株为B.amyloliquefacien;经生化特征测定,其革兰氏染色为阳性,M.R测定呈阴性,V-P测定为阳性,氧化酶测定为阴性,接触酶测定为阳性,淀粉水解试验发现具有解淀粉的功能;PDA平板对峙培养,发现HAB-9菌株对槟榔炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)等17株植物病原真菌的抑菌活性有较大差异,平均抑制率为60.82%;对槟榔炭疽菌(C.gloeosporioides)有较好的拮抗作用,其抑菌率为70.59%;效果最差的为黄瓜炭疽病菌(C.orbiculare),抑菌率为50.22%。从本实验结果可知,HAB-9菌株对多数病原炭疽菌有较强的抑制作用,具有潜在的应用价值。

两株解淀粉芽孢杆菌的鉴定及对抗多菌灵可可球二孢菌的拮抗作用

海南地区芒果蒂腐病主要由可可球二孢菌(Botryodiplodia theobromae)引起,从海南芒果上分离获得2株拮抗细菌(HBW和HBR),采用形态学、生理生化特性和分子检测等方法对菌种进行鉴定,通过离体活性测定法评估其对10种植物病原真菌的拮抗活性,并进一步比较了细菌悬液和无菌培养滤液对具有不同多菌灵抗性的可可球二孢菌株的抑菌效果。结果表明,拮抗细菌HBW和HBR均属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),对10种植物病原真菌均具有较强的抑制作用。HBW和HBR的细菌悬液和无菌培养滤液对具有不同多菌灵抗性的可可球二孢菌均有较好的抑制效果,且培养滤液的抑菌效果优于悬浮液。其中,20%的稀释滤液最高抑制率可达100%。由此表明,解淀粉芽孢杆菌HBW和HBR菌株具有较高的开发应用潜力。

拮抗香蕉枯萎病菌的解淀粉芽孢杆菌LX1菌株的鉴定及其抗菌蛋白基因的克隆

收集海南不同盐碱地的土样进行拮抗香蕉枯萎病菌的微生物分离,对具有较强抑菌作用的菌株进行形态特征、生理生化和分子鉴定,并克隆其抗菌蛋白基因。结果分离到1株具有较强抑制香蕉枯萎病菌能力的细菌LX1,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。抑菌实验发现LX1菌株的发酵上清液中粗蛋白有一定的抑菌作用,经过Sephacryl S-200HR柱层析、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析分离纯化了其中抑菌作用最强的抗菌蛋白。质谱鉴定结果表明,抗菌蛋白与B.amyloliquefaciens FZB42内切葡聚糖酶同源性最高。根据质谱结果克隆了该抗菌蛋白的编码基因,该基因的核苷酸和氨基酸序列与B.amyloliquefaciens FZB42的内切葡聚糖酶的核苷酸和氨基酸序列同源性分别达99%和100%。拮抗香蕉枯萎病菌的芽孢杆菌LX1可作为潜在的防治香蕉枯萎病的的生防制剂,其抗菌蛋白基因也可通过遗传工程应用于香蕉枯萎病的防治。

解淀粉芽孢杆菌BA-26抗菌物质分离及对灰葡萄孢抑菌作用研究

分析解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BA-26发酵液中抑菌物质存在情况,明确活性物质的抑菌效果,初步探索其抗植物病原真菌的作用机制。通过硫酸铵沉淀、大孔树脂吸附及反相高效液相色谱法(RP-HPLC),从菌株BA-26的发酵液中分离纯化抗菌物质;采用平板对峙法检测抗菌物质抑菌活性;用二倍稀释法测定各活性组分的最小抑菌浓度(MIC),并研究其对菌丝和孢子萌发的影响。从菌株BA-26发酵液中获得抗菌粗提物抑菌谱广,对立枯丝核菌等多种植物病原真菌有强抑制作用;分离纯化得到11个具有抑制真菌作用的活性组分;其中A6-19和A6-20组分对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)抑菌活性最强,最小抑菌浓度为7.81μg/mL;菌株BA-26产生的抗真菌活性物质能使灰葡萄孢菌丝生长受阻、膨大变粗、细胞膜破坏并能抑制其孢子萌发。明确了解淀粉芽孢杆菌BA-26菌株产抗菌物质情况,初步探究其抑菌作用机制,为抗菌物质在防治病原真菌等方面的应用奠定基础。

解淀粉芽孢杆菌对元胡霜霉病拮抗效果的试验研究

解淀粉芽孢杆菌对2年旱连作的元胡霜霉病的拮抗效果很好,每667 m^(2)做基肥施用2 kg剂量的益菌多可增产88%以上,元胡素含量提高5.26%。每667 m^(2) 3 kg为最佳经济剂量,可实现元胡的增产和提质。建议在生产中实践并推广应用。

解淀粉芽孢杆菌发酵液的抑菌活性及抗氧化作用

以尖孢镰刀菌黄瓜专化型病原菌为指示菌,利用平板对峙法、牛津杯法等方法,探究解淀粉芽孢杆菌SJ100001对尖孢镰刀菌的拮抗作用、SJ100001菌株抑菌活性成分的来源、SJ100001菌株发酵液的最佳发酵条件及其理化稳定性;通过DPPH自由基清除能力和还原力的测定,探究SJ100001菌株发酵液的抗氧化活性。结果表明,SJ100001菌株对尖孢镰刀菌具有高效的抑制作用,抑制率可达62.80%,其中SJ100001菌株发酵液抑菌率达到了38.11%,而菌体胞内可溶物的抑菌率仅0.61%,说明抑菌活性成分主要来源于菌株的次级代谢产物。利用马铃薯葡萄糖液体培养基发现,在180 r/min摇床中,37℃、恒温培养72 h为解淀粉芽孢杆菌SJ100001最佳的发酵条件,发酵液对尖孢镰刀菌作用48 h时达到最佳抑菌效果,抑菌率为54.65%。稳定试验表明,发酵液在pH=2~11时,抑菌率保持在50%以上,有较好稳定性,在pH=12~13时,抑菌率为0.41%,耐强碱性较弱;发酵液经121℃处理60 min或经不同蛋白酶处理后,抑菌率依旧在44%以上,且发酵液经连续紫外照射24 h后,抑菌率在30%以上,与对照组相比,抑制率没有显著下降,说明发酵液具有较强的理化稳定性。此外,SJ100001菌株的发酵液的DPPH自由基清除率IC_(50)=(0.065±0.05)g/L,并且具有较好的还原力。

解淀粉芽孢杆菌JSSW-LA的分离鉴定及对病原菌拮抗特性

为了筛选1株对水产病原菌具有拮抗作用的菌株,对菌株JSSW-LA进行生理生化鉴定、16S r DNA序列测定及系统发育树的构建,采用体外抑菌试验、共培养试验考察菌株JSSW-LA对多种水产病原菌的拮抗作用。经鉴定表明,菌株JSSW-LA为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),JSSW-LA对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)、温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、爱德华氏菌(Edwardsiella)、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)具有一定的抑制作用,其中对温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌抑制效果显著。共培养结果显示,低起始浓度的JSSW-LA(2.8×103CFU/m L)能够显著抑制温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌生长,高起始浓度的JSSW-LA(2.8×106CFU/m L)对5种致病菌均具有一定的抑制作用。结果表明,解淀粉芽孢杆菌JSSW-LA对水产中的常见致病菌具有较好的抑制作用,是1株拮抗性能优良的微生物菌株,在水产养殖中具有广阔的应用前景。

培养基对解淀粉芽孢杆菌ES-2菌株产抗菌脂肽的影响

【目的】研究培养基对解淀粉芽孢杆菌ES-2菌株产生抗菌脂肽的影响,为选择合适的产抗菌脂肽的培养基提供指导。【方法】通过HPLC技术对培养基中的碳、氮源对ES-2菌株抗菌脂肽组分的影响进行试验。【结果】改进的Landy培养基抗菌脂肽产量较高;葡萄糖是ES-2菌株产生脂肽的良好碳源,特别是对surfactin的产生有明显的促进作用;蔗糖和乳糖也是产生fengycin的良好碳源;L-谷氨酸和L-天门冬酰胺是抗菌脂肽产生的良好氮源;而不同的氨基酸组合并不有利于抗菌脂肽的产生;实验结果还显示,6种脂肪酸对抗菌脂肽的产生起到抑制作用。【结论】改进的Landy合成培养基是ES-2菌株产生脂肽适宜的培养基,在抗菌脂肽生产中向培养基中加入合适种类的糖和氨基酸十分重要。

水体碳氮比对芽孢杆菌、乳酸菌与弧菌生长、拮抗作用及菌体碳氮比的影响

从凡纳滨对虾养殖池塘中采集分离芽孢杆菌、乳酸菌与弧菌,并设置水体碳氮比分别为:C∶Nw=2、5、10、15、20共5个水平。在养殖环境营养水平下研究了芽孢杆菌、乳酸菌与弧菌的生长、拮抗作用及细菌菌体碳氮比(C∶NB)的变化。研究发现,较高的C∶Nw适合芽孢杆菌(C∶Nw=15)与乳酸菌(C∶Nw≥10)的生长,较低的C∶Nw适合弧菌(C∶Nw=5、10)的生长,并且当C∶Nw较高时芽孢杆菌与乳酸菌对弧菌的生长具有明显的拮抗作用。因此向养殖水体和饵料中添加碳源,将环境C∶N提高至超过10的水平不仅可以促进芽孢杆菌与乳酸菌的快速生长,而且可以有效抑制弧菌的繁殖。

解淀粉芽孢杆菌H15产抗菌肽的发酵条件优化和提取方法比较研究

以尖孢镰刀菌为指示菌,无菌滤液抑菌圈直径为考察指标,对解淀粉芽孢杆菌H15所产抗菌肽的发酵和提取条件进行优化。获得优化后的最佳培养基为L-1培养基,最佳培养条件为:接种量3%、初始pH 6.68、培养温度30.79℃、培养时间48.61 h、转速160 r/min。在此优化条件下,发酵液抑菌圈直径可高达25.21 mm,比优化前(16.40 mm)提高了53.48%。以4株玉米中携带的优势霉菌(草酸青霉、串珠镰刀菌、尖孢镰刀菌、黑曲霉)为指示菌,比较分析不同质量浓度硫酸铵沉淀和盐酸沉淀不同有机溶剂抽提对解淀粉芽孢杆菌H15抗菌肽提取的影响,结果均表明盐酸沉淀丙酮抽提法获得的抗菌肽活性最高。

小麦赤霉病拮抗性芽孢杆菌生防作用的研究

为探索小麦赤霉病生物防治的有效途径,对分离自中国东北嫩江小麦赤霉病流行地区小麦植株叶面和穗部的8株拮抗性芽孢杆菌进行了室内生物测定和田间小区防治试验。平板对峙培养、菌丝生长速率及孢子萌发测定等试验表明,8个菌株对小麦赤霉病菌的菌丝生长及孢子萌发均具有明显的抑制作用,其中以菌株B08的综合抑菌活性最强,其活菌体抑菌带宽达8.4mm,无菌发酵液稀释5倍处理后96h对菌丝生长抑制率为66.2%,处理分生孢子可使其完全丧失萌发能力,10倍稀释液可使孢子刚萌发的芽管膨大畸变而不能伸长,活体菌悬浮液和灭菌后的发酵液田间防效达59.5%~65.9%。发酵液热稳定性好,121℃、30min加压蒸气灭菌后仍保持良好的抑菌活性。研究结果说明,供试拮抗菌株作为小麦赤霉病的生防材料具有很好的开发应用前景。

一株产抗菌活性物质解淀粉芽孢杆菌的筛选及鉴定

从菜园土壤中分离筛选到1株产广谱抗菌活性物质的菌株K6,其抗菌活性物质对藤黄微球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、酿酒酵母、匍枝根霉和白色念珠菌均有抑制作用,其中对革兰氏阳性菌的抑菌作用最强,对霉菌的抑制作用相对较弱。通过形态特征、16SrDNA序列分析和系统发育分析,菌株K6与B.amyloliquefaciens位于同一簇群,同源性达99%,将其初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌。

枯草芽孢杆菌BS菌株和哈茨木霉TH-1菌株对棉花枯黄萎病菌的拮抗作用

棉花枯萎病和黄萎病(简称枯、黄萎病)均是棉花主要病害,且均属土壤传播的维管束病害,防治上有很大难度,目前主要采取选育选用抗病品种为主的综合治理措施。然而由于迄今尚缺乏理想的高抗丰产品种和有效药剂,且化学药剂对环境污染问题日益突出,生物防治日益受到重视。关于拮抗菌对棉花枯、黄萎病菌的生防作用已有一些研究,但同时针对棉花枯、黄萎病开展的研究则鲜有报道。鉴于安徽棉区两病混发,且以枯萎病为主,作者就枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS菌株和哈茨木霉(Trichoderma harzianum)TH-1菌株对棉花枯萎病菌和黄萎病菌的拮抗作用及其机制进行了研究,以期为开发兼治两病的生防制剂提供必要的试验依据。

枯草芽孢杆菌胞外蛋白酶突变株的筛选及其拮抗作用

从小麦根际土壤中分离到一株对多种植物病原真菌有拮抗作用且产蛋白酶的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis T2.经紫外线(UV)和硫酸二乙酯(DES)诱变处理,获得具有良好遗传稳定性的蛋白酶正负突变株.与出发菌株相比,培养48h的正突变株胞外蛋白酶活力提高108.5%,负突变株蛋白酶活力降低81·1%,而二者的几丁质酶和β-1.3-葡聚糖酶活力均无显著变化.正突变株对棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)的平板拮抗作用增强,其粗酶液可使该菌菌丝变形膨大成珠状、原生质浓缩,萌发的孢子芽管短且畸形膨大;负突变株对该菌的平板拮抗作用显著降低,粗酶液对该菌菌丝和孢子的形态无明显作用.表明提高生防芽孢杆菌胞外蛋白酶的活力可增强其拮抗病原真菌的能力.

枯草芽孢杆菌对畜禽常见致病微生物体外拮抗作用的研究

采用琼脂扩散法和混菌拮抗培养法,考察枯草芽孢杆菌对畜禽常见致病菌的体外抑制作用,结果表明:枯草芽孢杆菌对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌、肠炎沙门氏菌、奇异变形杆菌、痢疾志贺氏菌的生长均有一定的拮抗作用,对G+致病菌的拮抗作用优于G-致病菌比较小白鼠口服枯草芽孢杆菌制剂的效果,其能引起小白鼠肠道菌群变化,大肠杆菌数量降低。

解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其对嗜水气单胞菌抑制作用研究

本试验从鲫鱼肠道中分离到1株芽孢杆菌,经生物学特性测定及16SrRNA测序分析,鉴定该分离菌株为高产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌(命名为JX001)。对该分离菌进行嗜水气单胞菌体外抑菌试验,结果发现有明显的抑菌圈和抑菌带,说明该分离菌对嗜水气单胞菌具有较强的抑制作用,在养殖水中加入分离菌JX001可防止嗜水气单胞菌的暴发;同时分离菌JX001在生长代谢过程中产生大量的蛋白酶,可有效地促进蛋白质水解,用于蛋白质饲料的降解。

解淀粉芽孢杆菌X278菌株抗菌蛋白初步分析

为研究解淀粉芽孢杆菌X-278菌株所产抗菌蛋白的性质,通过饱和硫酸铵沉淀法提取X-278菌株蛋白粗提液,并对蛋白粗提液进行蛋白酶稳定性试验和热稳定性试验。结果表明,当硫酸铵饱和度为50%时,沉淀得到的X-278菌株蛋白粗提液对棉花黄萎病菌的抑菌作用最强,抑菌圈直径达18.9mm。蛋白粗提液对蛋白酶K敏感性最差,对胰蛋白酶最敏感;蛋白粗提液经40℃处理后抑菌活性最高,而121℃处理后抑菌活性最低,抑菌圈直径为13.6mm,为对照(常温处理)的72%。以上结果表明,X-278菌株粗蛋白的部分抗菌成分属于耐热物质,并且抗菌成分间存在性质上的差异。

一株香蕉枯萎病生防解淀粉芽胞杆菌的分离、鉴定及其拮抗物质研究

以致病力存在分化的香蕉枯萎病病原菌（Fusariumoxysporum f．sp．cubense）菌株群为靶标，从发病香蕉园香蕉根际土壤中分离获得一株芽胞杆菌R21g9，平板抑菌能力测定结果显示，R21g9不仅对香蕉枯萎病菌的不同菌株具有较强的抑制能力，还对西瓜枯萎病病原菌（Foxysporumf．sp．niveum）、芒果蒂腐病病原菌（BotryodiplodiatheobromaePat）和新月弯孢霉（Curvularialunata）等植物病原真菌有较强的抑制作用。利用生理生化和分子生物学方法对该菌开展鉴定研究，API系统将该菌鉴定为地衣芽胞杆菌（Bacilluslicheniformis）；利用16SrDNA序列开展的系统发育分析仅能确定该菌为枯草芽胞杆菌组成员，不能鉴定到种；利用gyrB基因序列开展的系统发育分析将R21g9鉴定为解淀粉芽胞杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）。拮抗机制研究结果显示，R21g9对真菌的作用方式为抑菌，抑菌物质存在于发酵上清中，可以被lO％～90％的硫酸铵沉淀。对硫酸铵沉淀的粗提物进行抑菌活性检测发现40％、50％、60％、70％和80％饱和度硫酸铵沉淀物具有强的抗菌活性，主要拮抗物质可以被50％饱和度硫酸铵盐沉淀．此沉淀物的抑菌率最高，可以达到95．65％。

内生解淀粉芽孢杆菌TB2菌株活性物质诱导辣椒果抗疫病的生化机理

利用内生解淀粉芽孢杆菌TB2菌株的活性物质喷施辣椒果后0、24、48、72 h接种辣椒疫霉病菌进行防治辣椒疫病试验,结果表明,TB2菌株的活性物质对辣椒果疫病的发生有一定控制作用,活性物质处理间隔24 h后再接种病菌,其防病效果得到显著提高。生化机制研究表明,TB2的活性物质处理可使辣椒果的可溶性蛋白含量、丙二(MDA)含量、超氧阴离子自由基(O.-2)产生速率及过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性发生显著变化。病菌处理的辣椒果,可溶性蛋白含量、MDA含量和O.-2产生速率及POD、SOD、过氧化氢酶(CAT)、苯丙氨酸氨解酶(PAL)活性均会显著升高,且其最大值高于活性物质处理果的相应最大值。活性物质和病菌共同处理的辣椒果,POD和PAL的活性可上升到高于病菌单独处理的峰值,但MDA含量和O.-2产生速率及SOD和CAT活性均较低,与对照的接近,表现出相对稳定状态。由此推断,TB2的活性物质诱导辣椒果抗疫病与POD、PAL等酶的活性相关。