解淀粉芽孢杆菌B235对花生根腐病的防治效果研究

利用功能微生物防治花生根腐病是一种环境友好、绿色高效的防控措施。本研究进行了盆栽及田间小区试验,观察花生根腐病的发病情况及解淀粉芽孢杆菌B235对镰孢菌的防治效果。病原菌接种试验结果表明:接种镰孢菌的花生种子出苗慢、主侧根短小、发病率高,出苗率最差的为混合F1和F2两株菌的处理,出苗率仅为28.2%。盆栽生防试验结果表明:与接种病原菌的处理组相比,接种生防菌B235后能显著提升花生的发芽率和出苗率,发芽率和出苗率均在60%以上,最高可分别达到68.5%和65.3%;根腐病病情指数显著降低,防治效果均达60%以上,最高可分别达69.5%和65.5%。小区试验结果表明:相较于对照处理组,生防菌处理组表现为出苗率高、根系发达;在开花期,发病率为4.5%,显著低于常规处理的6.7%和对照处理的10.5%;在成熟期,各处理组发病率差异明显,对照组花生镰孢菌根腐病发病严重,发生率达19.8%,生防菌B235处理组根腐病发生较轻,为5.0%,显著低于常规处理的7.3%,且增产显著;同时发现接种菌株B235对花生根际微生物群落结构及多样性也产生积极的影响。综上所述,生防菌B235能够显著降低根腐病的发生、促进花生生长和产量提升,且有利于保持土壤微生态,具有较强的推广应用前景。

解淀粉芽孢杆菌SQ-2对水稻的促生作用

【目的】对实验室分离筛选得到的一株解淀粉芽孢杆菌SQ-2进行促生特性研究,确定该菌株对水稻促生的浓度范围与作用机制,并分析接种菌株前后的土壤菌群结构。【方法】利用钼蓝比色法与固氮酶试剂盒对菌株SQ-2的溶磷能力及固氮酶活性进行检测。将10^(2)、10^(4)、10^(6)、10^(8)和3×10^(8)CFU/mL的菌悬液接种至水培与土培水稻中,分别培养14 d和20 d后测定其水培、土培水稻的根茎干鲜重、茎长与茎粗。采用苯酚-次氯酸钠比色法、茚三酮检测法与3,5-二硝基水杨酸比色法测定土培水稻土壤中脲酶、蛋白酶与蔗糖酶的活性。利用pH计电位法检测土壤pH值,用对应试剂盒检测土壤速效氮磷钾含量及酸性磷酸酶活性,并对接种3×10^(8)CFU/mL组的土培水稻土壤进行根际细菌群落结构分析。【结果】菌株SQ-2对磷酸三钙的溶解量为229.63 mg/L,固氮酶活性为55.07 U/L。与对照相比,接种菌悬液浓度在10^(4)CFU/mL时,水培水稻根的干、鲜重增长最为显著;在接种浓度为3×10^(8)CFU/mL时,土培水稻根茎的干、鲜重增长最为显著。随着接种菌悬液浓度的升高,上述土壤酶活性与速效氮磷钾浓度都有着不同程度的增加,而接种菌株3×10^(8)CFU/mL的土壤pH值则由原来的7.83降至7.26。接种菌株SQ-2改变了水稻根际土壤中的菌落构成,显著提高了土壤α多样性的Ace、Chao、Sobs与Shannon指数。【结论】解淀粉芽孢杆菌SQ-2对土培、水培水稻均有不同程度的促生效果。在土培实验中,能够通过提高土壤酶活性、速效氮磷钾水平及改变土壤菌群结构来起到促生作用,为细菌菌肥的研发提供了新的菌株资源。

解淀粉芽孢杆菌Cas02与菌核净复配协同防治烟草赤星病

为有效防控烟草赤星病,筛选生物菌剂与化学药剂协同抑制烟草赤星病菌的适宜复配比例,本研究采用菌丝生长速率法测定了40%菌核净与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)Cas02对烟草赤星病菌(Alternaria alternata)的生物活性,通过绘制生长曲线测定两者之间的相容性,并测定不同复配比例对烟草赤星病菌的联合毒力以及盆栽防效。结果表明40%菌核净与解淀粉芽孢杆菌Cas02单剂对烟草赤星病菌均有较高的毒力,EC_(50)值分别为4.86μg/mL和4.6×10^(7)cfu/mL。相容性试验表明Cas02对40%菌核净不敏感,两者可联合使用。其中V_(40%菌核净)∶V_(Cas02)=7∶3时对烟草赤星病菌的抑制增效作用最好,增效比率为1.32,实际抑菌率达到67.61%。盆栽试验结果表明,V_(40%菌核净)∶V_(Cas02)=7∶3时对赤星病的防效最好,防效达到74.12%,高于单剂处理。因此,在生产中建议将4.86μg/mL 40%菌核净和4.6×10^(7)cfu/mL解淀粉芽孢杆菌以7∶3比例混匀复配应用于烟草赤星病防治。

解淀粉芽孢杆菌BA-2原生质体的制备及纤维素酶高产突变菌株筛选

目的确认解淀粉芽孢杆菌BA-2(Bacillus amyloliquefaciens BA-2)原生质体制备的最佳条件,并对其菌株进行复合诱变筛选获得耐高温性状产纤维素酶菌株。方法通过探究菌龄、溶菌酶浓度、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂的pH、再生培养基类型和培养方式等考察原生质体制备与再生条件的影响因素,确定其最优条件。并用紫外线对原生质体进行诱变,获得的再生突变菌株作为出发菌株进行后续诱变处理,采用化学诱变剂硫酸二乙酯处理菌株,设置培养温度梯度筛选菌株。结果解淀粉芽孢杆菌BA-2原生质体制备的最优条件为菌龄8 h,溶菌酶质量浓度1.5 mg/mL,酶解时间65 min,酶解温度37℃,渗透压稳定剂pH 6.5。在此条件下,解淀粉芽孢杆菌原生质体的形成率为98.85%±0.26%,再生率为57.39%±0.76%。经过复合诱变获得突变菌株BA-DES4在培养温度55℃下酶活达到(76.58±1.19)U/mL,滤纸酶活较出发菌株BA-2提高24.5%。结论本研究获得了解淀粉芽孢杆菌BA-2原生质体制备的最佳条件,并通过复合诱变筛选获得耐高温性状产纤维素酶菌株BA-DES4,该菌株稳定性强、适应性好,具有开发成为工业化生产纤维素酶的微生物潜力,突变菌株产酶条件有待进一步研究,以满足于工业化生产的需求。

新农药解淀粉芽孢杆菌KN 527介绍

本文从研发背景、登记情况、产品信息、理化性质、毒性、环境生物安全性评价、作用机理、应用技术等方面对新农药解淀粉芽孢杆菌KN-527进行了介绍。

解淀粉芽孢杆菌MCZ-2对黄瓜种子萌发和幼苗生长生理的影响

为研究从茅苍术组培过程中分离出的解淀粉芽孢杆菌MCZ-2的促生作用,以韩研45-1黄瓜种子为试验材料,以清水为对照(CK),用不同浓度MCZ-2菌悬液(1.88×10^(9)、1.88×10^(8)、1.88×10^(7)、1.88×10^(6)、0.94×10^(6)CFU/mL,分别记作T1、T2、T3、T4、T5处理)对黄瓜种子进行浸泡、灌根处理,以明确不同浓度MCZ-2菌悬液对黄瓜种子发芽率、发芽指数和发芽势及对幼苗形态指标、生理特性的影响。结果表明,(1)不同浓度MCZ-2菌悬液对黄瓜种子发芽率的影响不明显,但与CK相比,T3、T4处理能够显著提高黄瓜种子的发芽势,对发芽指数影响不明显。(2)与CK相比,MCZ2菌悬液浸种可显著提高黄瓜幼苗的茎粗、根体积、叶面积和鲜重;灌根7、14、21 d后,MCZ-2菌悬液能够显著提高黄瓜幼苗的茎粗、根体积、叶面积、鲜重,且T3、T4、T5处理对黄瓜幼苗茎粗、根体积、叶面积、鲜重、干重等指标的影响尤为明显。(3)与CK相比,用MCZ-2菌悬液连续灌根可显著降低黄瓜幼苗的丙二醛含量,提高CAT、POD、SOD活性;灌根后21 d,T3、T4、T5处理的可溶性糖含量、类胡萝卜素含量明显高于对照,T3、T5处理的叶绿素含量显著高于对照,而T4处理的叶绿素含量与对照相比无显著差异。综上所述,解淀粉芽孢杆菌MCZ-2可以改善黄瓜幼苗的生理生化特征,进而促进幼苗生长,尤其是T4处理的促生效果最为明显,可为培育黄瓜高效壮苗、提高黄瓜产量和品质提供理论依据。

脂肽产生菌解淀粉芽孢杆菌HY2-1的发酵条件优化

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HY2-1系前期筛选到的产芬原素和表面活性素等脂肽类物质的海洋微生物。为提高菌株HY2-1脂肽类抑菌活性,以菌株抑菌圈直径为响应值,通过单因素和响应面试验设计对菌株HY2-1的发酵培养基碳氮源及发酵条件进行优化。结果表明,菌株HY2-1发酵培养基最佳碳氮源为可溶性淀粉80 g/L,酵母浸粉和蛋白胨(1∶1)10 g/L,最佳发酵条件为:装液量50 mL/250 mL,发酵时间48 h,接种量1%,转速200 r/min,在此条件下其发酵液对指状青霉的抑菌圈直径为(18.6±0.1)mm,较优化前(14.7±0.5)mm提高26.5%;该研究通过发酵培养基碳氮源及发酵条件优化,对提高菌株HY2-1脂肽抑菌活性效果显著。

解淀粉芽孢杆菌PB-1对灰葡萄孢的抑菌机理

为筛选灰葡萄孢(Botrytis cinerea)高效生防菌株,对解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株PB-1从抑菌谱、发酵液的抑菌作用、抗生素合成基因PCR检测、挥发性物质(VOC)的抑菌作用、离体叶片防效几个方面进行研究。研究结果表明,PB-1的抑菌谱较广,对8种供试植物病原菌菌丝生长均有抑制作用,其中对灰葡萄孢(B.cinerea)、新月弯孢霉(Curvularia lunata)、大斑凸脐蠕孢(Exserohilum turcicum)、禾谷镰孢(Fusarium graminearum)4种病原真菌具有较强的抑制作用,抑菌率分别为63.5%、70.7%、63.4%、56.0%。PB-1发酵液不仅对灰葡萄孢菌丝生长具较强抑制作用(20%浓度发酵液抑菌率达96.6%,受抑制菌丝肿胀扭曲、原生质外渗、分枝异常),而且对分生孢子萌发也具有强烈抑制作用。抗生素合成基因PCR检测发现,PB-1扩增出srfAB、ituA基因片段,这说明PB-1能够产生表面活性素(surfactin)、伊枯草菌素(iturins)脂肽类抗生素。PB-1挥发性物质对灰葡萄孢菌丝生长也具有明显抑制作用。此外,小白菜品种上海青离体叶片防病效果检测发现,PB-1能明显抑制灰葡萄孢的侵染。本研究结果表明,PB-1有作为植物灰霉病生物防治菌剂的潜力。

1株植物内生菌解淀粉芽孢杆菌的安全性评价

试验旨在评价1株从杜仲中分离的解淀粉芽孢杆菌的安全性。试验从菌株溶血性、氨基酸脱羧和明胶液化试验、抗菌药物敏感性、腹腔注射、经口灌胃、抑菌活性等进行安全性综合评价。腹腔注射试验分为腹腔注射组(1.0×10^(10)CFU/0.3 mL)和生理盐水组,一次性注射,连续观察5 d。经口灌胃试验分为高剂量组(1.0×10^(10)CFU/0.2 mL)、中剂量组(1.0×10^(9)CFU/0.2 mL)、低剂量组(1.0×10^(8)CFU/0.2 mL)和生理盐水组,每天灌胃1次,连续灌胃28 d。结果显示,腹腔注射和经口灌胃小鼠均健康存活,未见临床变化,试验期间体重正常增加,各组小鼠血常规、血清生化指标和脏器指数差异均不显著(P>0.05),解淀粉芽孢杆菌DZ01未发生易位,氨基酸脱羧和明胶液化试验均为阴性。解淀粉芽孢杆菌DZ01对所测的8种抗菌药物均表现敏感。除粪肠球菌和铜绿假单胞菌外,解淀粉芽孢杆菌DZ01上清液对其余6株指示菌均具有抑菌活性。研究表明,解淀粉芽孢杆菌DZ01具有较好的安全性。

培养基对解淀粉芽孢杆菌ES-2菌株产抗菌脂肽的影响

【目的】研究培养基对解淀粉芽孢杆菌ES-2菌株产生抗菌脂肽的影响,为选择合适的产抗菌脂肽的培养基提供指导。【方法】通过HPLC技术对培养基中的碳、氮源对ES-2菌株抗菌脂肽组分的影响进行试验。【结果】改进的Landy培养基抗菌脂肽产量较高;葡萄糖是ES-2菌株产生脂肽的良好碳源,特别是对surfactin的产生有明显的促进作用;蔗糖和乳糖也是产生fengycin的良好碳源;L-谷氨酸和L-天门冬酰胺是抗菌脂肽产生的良好氮源;而不同的氨基酸组合并不有利于抗菌脂肽的产生;实验结果还显示,6种脂肪酸对抗菌脂肽的产生起到抑制作用。【结论】改进的Landy合成培养基是ES-2菌株产生脂肽适宜的培养基,在抗菌脂肽生产中向培养基中加入合适种类的糖和氨基酸十分重要。

解淀粉芽孢杆菌Q-12抗真菌特性的研究

从土壤中分离到的解淀粉芽孢杆菌Q-12在生长过程中产生的抗菌活性物质,能够强烈抑制镰刀菌、曲霉、青霉、毛霉等能引起食品腐败的真菌。受到抑制的真菌菌丝生长速度明显变慢,并且菌丝的形态发生变化。Q-12的发酵液经过(NH4)2SO4沉淀得到的粗提产物对热稳定,121℃高压灭菌15 min仍能保持很高的活性,易溶于水及极性有机溶剂,经非极性有机溶剂萃取后,保留在水相的活性物质活性变化不大,在较宽的pH值范围内都具有很高的抗菌活性,并且对蛋白酶K、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶不敏感。

内生解淀粉芽孢杆菌TF28液体发酵条件研究

采用单因子和正交试验方法从碳氮源、培养温度、初始pH、通气量、接种量等方面对内生解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens TF28液体发酵条件进行优化。确定菌株TF28最佳培养基配方为:葡萄糖1%,牛肉膏0.5%,酵母膏0.3%,硫酸锰0.01%,碳酸钙0.5%;最佳发酵条件为:初始pH 7.5,培养温度30℃,发酵周期48 h,装液量:250 mL三角瓶装50 mL培养液,接种量2%,转数200 r·min-1。该项研究可为内生解淀粉芽孢杆菌应用奠定基础。

解淀粉芽孢杆菌BI_2的鉴定及其对黄曲霉的抑制作用

菌株BI2是从青贮玉米秸秆饲料中分离得到的一株革兰氏阳性芽孢杆菌.经16S rDNA序列分析,发现该菌株与解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens(NC_009725)的相似性达到99.6%;进一步结合Biolog及生理生化分析,将该菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌.以番茄叶霉病菌、黄瓜枯萎病菌等12种植物病原菌及部分霉菌、酵母、食品乳酸菌和人类致病细菌为指示菌进行抑菌实验.结果表明:BI2主要抑制丝状真菌,而对细菌无拮抗作用;BI2菌株生长36 h的上清液能明显抑制黄曲霉孢子萌发及其菌丝生长,抑制率分别达到67.4%和74.8%;而且该上清液经120℃高温处理20 min后对黄曲霉的抑制效果基本没有影响.

解淀粉芽孢杆菌S27的鉴定、生物学功能测定及其对马铃薯病原真菌的拮抗作用研究

试验采用平板对峙法和Salkowski比色法测定了细菌S27的生物学功能,并对其进行了形态学及16SrDNA序列鉴定.结果表明:该菌对马铃薯枯萎病菌(Fusarium tricinctum),马铃薯丝核病菌(Rhizoctonia solani)和马铃薯炭疽病菌(Colletotrichum coccodes)都有良好的抑制作用,可致菌丝膨大,断裂及溶解等;该菌株在含有色氨酸和不含色氨酸的King培养基中分泌IAA的量分别为20.15和6.16 mg/L;能有效的溶解无机磷Ca3(PO4)2,其溶磷量为505.41mg/L.通过形态学与16SrDNA基因序列同源性分析,初步确定菌株S27为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).

解淀粉芽孢杆菌BA-12可湿性粉剂研制及对核桃根腐病的防治效果

为获得对核桃根腐病具有优良防治效果的解淀粉芽孢杆菌BA-12可湿性粉剂,采用单因素法和正交试验法筛选出对菌株BA-12活性影响最小和悬浮率最佳的载体和助剂及其配比。可湿性粉剂的配方为解淀粉芽孢杆菌10%,载体高岭土30%,湿润剂十二烷基苯磺酸钠10%、分散剂三聚磷酸钠5%、保护剂腐殖酸2.5%。主要性能检测结果表明可湿性粉剂活菌含量为1×10~8 cfu/g,湿润时间为40 s,悬浮率为79%,pH 6.72,含水率2.61%。稳定性测定中,菌剂对温度、酸碱、紫外光耐受性强,30~45℃、p H 6~8、紫外照射20~30 min均对菌剂影响小。盆栽试验得到500~1000倍稀释的菌剂为防治核桃根腐病推荐使用浓度。

内生解淀粉芽孢杆菌TB2液体发酵条件的研究

采用单因素试验和正交试验对具有广谱拮抗作用的内生解淀粉芽孢杆菌TB2菌株的摇瓶发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明,最佳培养基组份为:玉米淀粉1.0%、豆粉1.0%、(NH4)2SO40.5%、MgSO4·7H2O0.1%、FeSO4·7H2O0.03%、K2HPO4·3H2O0.02%、KH2PO40.01%;培养条件为:初始pH值为7.5,温度35℃,接种量3%,装液量50mL/250mL三角瓶,摇床转速200r/min,发酵周期22～26h。优化条件下发酵水平活菌数达到8.52×1010cfu/mL。

解淀粉芽孢杆菌B10-26抑菌物质的稳定性研究与初步分离纯化

为了将解淀粉芽孢杆菌B10-26应用于植物病害的生物防治,以芝麻茎点枯病菌等13种病原菌为指示菌,采用含毒介质法检测生防菌发酵液的活性;对抑菌物质粗提物在不同温度和pH值条件下处理,采用牛津杯法检测活性;采用高效液相法对抑菌物质进行初步的分离纯化.结果表明,解淀粉芽孢杆菌B10-26发酵液对13种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用,对芝麻茎点枯病菌的抑菌率最高,达到91.67％.抑菌物质活性虽然随着温度的升高有所下降,但在121℃高温处理下,仍然产生11 mm的抑菌圈,说明其具有较高的热稳定性;在pH值2～10时,押菌活性没有明显变化,说明其具有较好的酸碱稳定性,但在碱性条件下活性较高.对抑菌物质的初步分离表明,B10-26发酵液中含有多种活性成分.

适于解淀粉芽孢杆菌BGP20菌体生长的培养基响应面优化

为获得解淀粉芽孢杆菌BGP20的低成本高效菌体生长培养基配方,利用响应面试验设计和摇瓶发酵对培养基各组分进行优化。根据单因素试验和Plackett-Burman设计试验结果确定了豆粕和玉米淀粉为主要因素。以发酵培养液菌体密度为响应值,利用Design-Expert软件的中心组合试验设计进行优化,并对预测值进行验证。结果表明:回归方程具有很好的拟合性,培养基最优配比为豆粕16.03 g/L、玉米淀粉6.30 g/L、MgSO4·7H2O 0.75 g/L、NaCl1.25 g/L、KH2PO40.75 g/L、痕量元素15 mL/L,获得BGP20发酵液菌体密度为1.86×109 CFU/mL,模型预测最高值为1.985×109 CFU/mL,验证实验结果为预测值的93.72%,说明该模型对实际生产具有指导意义。

解淀粉芽孢杆菌X278菌株抗菌蛋白初步分析

为研究解淀粉芽孢杆菌X-278菌株所产抗菌蛋白的性质,通过饱和硫酸铵沉淀法提取X-278菌株蛋白粗提液,并对蛋白粗提液进行蛋白酶稳定性试验和热稳定性试验。结果表明,当硫酸铵饱和度为50%时,沉淀得到的X-278菌株蛋白粗提液对棉花黄萎病菌的抑菌作用最强,抑菌圈直径达18.9mm。蛋白粗提液对蛋白酶K敏感性最差,对胰蛋白酶最敏感;蛋白粗提液经40℃处理后抑菌活性最高,而121℃处理后抑菌活性最低,抑菌圈直径为13.6mm,为对照(常温处理)的72%。以上结果表明,X-278菌株粗蛋白的部分抗菌成分属于耐热物质,并且抗菌成分间存在性质上的差异。

解淀粉芽孢杆菌BA-26抗菌物质分离及对灰葡萄孢抑菌作用研究

分析解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BA-26发酵液中抑菌物质存在情况,明确活性物质的抑菌效果,初步探索其抗植物病原真菌的作用机制。通过硫酸铵沉淀、大孔树脂吸附及反相高效液相色谱法(RP-HPLC),从菌株BA-26的发酵液中分离纯化抗菌物质;采用平板对峙法检测抗菌物质抑菌活性;用二倍稀释法测定各活性组分的最小抑菌浓度(MIC),并研究其对菌丝和孢子萌发的影响。从菌株BA-26发酵液中获得抗菌粗提物抑菌谱广,对立枯丝核菌等多种植物病原真菌有强抑制作用;分离纯化得到11个具有抑制真菌作用的活性组分;其中A6-19和A6-20组分对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)抑菌活性最强,最小抑菌浓度为7.81μg/mL;菌株BA-26产生的抗真菌活性物质能使灰葡萄孢菌丝生长受阻、膨大变粗、细胞膜破坏并能抑制其孢子萌发。明确了解淀粉芽孢杆菌BA-26菌株产抗菌物质情况,初步探究其抑菌作用机制,为抗菌物质在防治病原真菌等方面的应用奠定基础。