解淀粉芽孢杆菌HAB-6抑菌物质及其相关基因的分析

芽孢杆菌是重要的生防菌株,分析了解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HAB-6菌株的抑菌物质及其抑菌活性。采用特异性PCR和液质联用(LC-MS)等方法对HAB-6菌株的抑菌物质进行初步研究。通过对编码合成脂肽类抗生素的10个基因进行PCR扩增,分别得到与yndj、srf AB、itu D、fen D、itu C同源的基因5个;扩增编码合成脂肽类物质关键合成酶基因,得到与fen B、lpa-14、sfp、myc B、itu A同源的基因5个;LC-MS结果显示,HAB-6菌株能产生C14Iturin A、C17Iturin A、C13Surfactin A、C15Surfactin C等脂肽类化合物,但通过与病原真菌对峙抑菌活性检测,脂肽类物质没有抑制真菌活性。结果表明,HAB-6菌株具有脂肽类物质的合成基因和相关调控基因,代谢产生伊枯草菌素(iturin)、表面活性素(surfactin),但是酸沉淀提取得到的脂肽类物质不是HAB-6菌株抑制真菌的主要物质,其抑菌成分种类和代谢脂肽类物质的途径可能与已知的途径有所不同,有待进一步研究。

正交法优化解淀粉芽孢杆菌B1619水分散粒剂加工工艺

解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens生防菌株B1619对设施蔬菜土传病害有较好的防治效果。为了最大限度降低加工工艺对生物杀菌剂B1619水分散粒剂中含菌量的影响,作者通过单因子水平筛选和正交试验,对B1619水分散粒剂主要助剂配比和颗粒制备条件进行了优化。结果表明:3种主要助剂的最佳配比(质量分数)组合为:硅酸镁铝1.0%、萘磺酸盐甲醛3.0%、硫酸铵4.5%,优化后颗粒含菌量比初始含菌量提高了152.0%;最佳颗粒制备条件为:筛孔粒径1.5 mm、烘干温度65℃、烘干时间20 min,优化后颗粒含菌量比初始含菌量提高了160.0%。验证试验表明,加工工艺优化前B1619水分散粒剂颗粒的含菌量为2.50×108 cfu/g,优化后颗粒的含菌量为1.05×109 cfu/g,优化率为320.0%,优化效果十分显著。

海洋解淀粉芽孢杆菌GM-1变异菌株的特性及其抑菌作用研究

为了明确海洋解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）GM-1自发突变菌株的变异与抗菌作用的关系,进一步获得优良菌种,通过形态学观察、生理生化试验及16S r DNA和gyr B基因序列分析,对变异菌株GM-1-2特性进行分析;以8种植物病菌为供试菌,采用平板对峙法和牛津杯法分别测定变异菌株GM-1-2及其发酵液的抑菌作用;采用硫酸铵沉淀法对变异菌株产生的抑菌物质进行初步分析。结果发现,变异菌株GM-1-2的菌落形态、颜色、菌体大小与原始菌株GM-1存在明显差异,但其生理生化特性、16S r DNA和gyr B序列与解淀粉芽孢杆菌的同源性等均与原始菌株相同。变异菌株GM-1-2及其发酵液对小麦根腐病菌、棉花黄萎病菌、小麦赤霉病菌、大豆菌核病菌、小麦雪腐病菌、甘蓝枯萎病菌、斑点落叶病菌、黄瓜枯萎病菌的菌丝生长均有较强的抑制作用,且抑制作用明显高于原始菌株GM-1,其中菌株的抑菌带宽度提高了0.2-9.0 mm,无菌发酵液的抑制率提高了1.1%-153.7%。变异菌株的抑菌物质主要存在于硫酸铵沉淀中,沉淀后的上清液无明显的抑菌作用。以上结果表明,变异菌株GM-1-2的抑菌活性提高,其产生的抑菌物质与原始菌株存在差异,具有潜在的开发价值。

解淀粉芽孢杆菌BI_2的鉴定及其对黄曲霉的抑制作用

菌株BI2是从青贮玉米秸秆饲料中分离得到的一株革兰氏阳性芽孢杆菌.经16S rDNA序列分析,发现该菌株与解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens(NC_009725)的相似性达到99.6%;进一步结合Biolog及生理生化分析,将该菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌.以番茄叶霉病菌、黄瓜枯萎病菌等12种植物病原菌及部分霉菌、酵母、食品乳酸菌和人类致病细菌为指示菌进行抑菌实验.结果表明:BI2主要抑制丝状真菌,而对细菌无拮抗作用;BI2菌株生长36 h的上清液能明显抑制黄曲霉孢子萌发及其菌丝生长,抑制率分别达到67.4%和74.8%;而且该上清液经120℃高温处理20 min后对黄曲霉的抑制效果基本没有影响.

解淀粉芽孢杆菌MT323生防机制初探

为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)MT323菌株生防制剂的研发及生产应用提供理论依据,采用平板对峙法、二分隔平板法和不同指示培养基检测法相结合,研究MT323菌株的抑菌谱及生防机制。结果表明:MT323菌株对烟草赤星病菌、烟草黑胫病菌、石榴干腐病菌、黄连根腐病菌和高粱叶斑病菌等5种植物病原菌具有明显抑制作用,抑菌率分别为86.3%、87.4%、97.5%、69.5%和76.7%;其产生的挥发性物质(VOCs)对以上5种病原菌也具有一定的抑制效果,抑菌率分别为48.1%、52.2%、6.2%、12.9%和6.4%;VOCs对烤烟幼苗具有明显促生作用,对烤烟叶长、叶宽、株高和根长的促生效果较对照(添加MS培养基培养)分别提高97.3%、54.0%、22.2%和48.1%;菌株MT323具有良好的运动能力,可产生嗜铁素和磷酸酯酶等生防相关酶类物质。

一株产耐酸性α-淀粉酶菌株的鉴定及其酶学性质研究

随着现代淀粉工业的发展,寻找耐酸性新型α-淀粉酶成为研究热点。实验室分离到一株高产耐酸性α-淀粉酶菌株AF1。通过形态学观察法、生理生化特征与16Sr DNA序列分析鉴定出AF1菌株为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。对其酶学性质进行初步研究发现,该酶最适作用温度为75℃,p H为5.0;在温度60℃以下,p H 5.0~7.0范围内酶活比较稳定;Cu2＋对酶活有明显抑制作用,K＋、Li＋、Fe3＋则对酶活有轻微抑制作用,Na＋、Ca2＋、Ba2＋、Mg2＋和EDTA则对酶活没有明显影响。可见,本研究中的α-淀粉酶是一种不依赖于Ca2＋的耐酸性α-淀粉酶,在淀粉加工过程中,不仅不用加Ca2＋以维持酶的活性,同时可以不用p H调节,实现在弱酸性条件下淀粉液化和糖化同步进行,从而精简工序,节约成本。

生防菌株B9601-Y2对作物生长和产量的影响

为获知解淀粉芽孢杆菌植生性亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarium)菌株B9601-Y2在田间的促生长和增产应用效果,探讨其在农业生产中作为生物肥料的潜力,通过田间试验对解淀粉芽孢杆菌菌株B9601-Y2促进作物生长的效果进行验证。田间试验结果表明,接种菌株B9601-Y2能明显促进作物的生长发育,作物各项生长指标如出苗率、株高和单果质量等均有提高,更重要的是其能显著提高作物的经济学产量。黄瓜、番茄和玉米接种菌株B9601-Y2后,产量比对照分别提高9.5%～12.6%、18.9%～24.8%和7.3%～11.5%。

一株源于北派酱香白酒酿造环境中产淀粉酶细菌的筛选、鉴定及其特性研究

采用平板涂布法从酱香型白酒酿造环境(大曲、酒醅和窖泥)筛选产淀粉酶细菌菌株,通过菌落形态、细胞显微结构、生理生化特性和分子生物学方法对其进行鉴定,并对其生长特性及耐受性进行研究。结果表明,从酱香型白酒大曲中筛选得到一株产淀粉酶的细菌,编号为2-2,经鉴定菌株2-2为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。菌株2-2能够在25~45℃和pH 5~9范围内生长良好,属于乙醇高耐受性菌株,在乙醇体积分数为12%时仍能生长,并具有较高的NaCl和葡萄糖耐受性,最高耐受质量分数分别为15%和70%。菌株2-2在高粱酶解液中能产生酱香型白酒中的多种重要风味物质,如苯乙醇、糠醇3-羟基-2-丁酮、2,5-二甲基吡嗪和乙烯基愈创木酚等,是酱香型白酒酿造中重要的功能菌株。

聚乙烯醇降解菌HK1菌株鉴定与降解特性

[目的]鉴定聚乙烯醇降解菌HK1并研究其降解特性。[方法]以一株能以聚乙烯醇为唯一碳源生长的细菌HK1为出发菌株,通过形态观察和生理生化试验对其进行鉴定,研究其对几种实验室常用抗生素的抗性,并通过摇瓶试验研究其降解特性。[结果]经鉴定,该菌确定为解淀粉芽孢杆菌属细菌,30℃、180 r/min摇床培养后,对培养基中PVA(1 g/L)的降解率达36.26%。HK1降解PVA的环境最优条件如下:温度为30℃,底物浓度为1 g/L,pH 8.0,酵母粉添加量为2 g/L。[结论]研究结果为系统研究该菌株提供了参考。

海洋解淀粉芽孢杆菌GM-1菌株发酵液抗菌谱及稳定性测定

[目的]研究海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株GM-1发酵液的抗菌谱及稳定性。[方法]以10种植物病原菌为供试菌,生长速率法测定GM-1菌株发酵液的抗菌谱;以油菜菌核病菌为指示菌,生长速率法测定发酵液在不同条件下的稳定性。[结果]GM-1菌株发酵液对供试的10种植物病原菌具有较好的抑制作用,抗菌范围较广,其中对葡萄白腐病菌(Coniella diplodiella)和小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)的抑菌率均达85%以上;其发酵液的抗菌作用有较好的热稳定性,在光照和紫外线照射下稳定性较好,在pH值6～8的条件下抗菌作用稳定,对蛋白酶不敏感。[结论]GM-1菌株具有广谱抗菌活性和较强的稳定性。

1株烟草青枯病生防细菌的分离与鉴定

采用系列稀释法和平板涂布法从黔江烟区土壤中分离得到细菌菌株87株,经平板对峙法初筛得到1株对烟草青枯病病原菌有强烈拮抗作用的细菌,再通过滤纸片法验证其提取物对烟草青枯病病原菌有强烈的抑制作用,对该菌株进行全细胞脂肪酸分析,初步判断该菌为芽孢杆菌。16S rDNA分析结果表明,该菌为解淀粉芽孢杆菌。

解淀粉芽胞杆菌HAB-6抑菌活性成分的分析

为明确解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens HAB-6菌株的抑菌活性物质,采用平板对峙法检测其对17种植物病原真菌的拮抗能力,通过硫酸铵沉淀法、酸沉淀法、有机溶剂萃取法提取HAB-6菌株的活性物质,并检测其稳定性。结果表明：解淀粉芽胞杆菌HAB-6菌株对17种植物病原真菌均具有良好的抑菌活性,抑制率可达45.48%-72.20%;不同提取方法中仅正丁醇粗提物有抑菌活性,在5 mg/m L浓度下抑菌圈直径达21.49 mm;正丁醇粗提物经紫外线照射120 min后,抑菌活性为对照的78%,而经100℃高温处理后抑菌活性仍为对照的91%,表明HAB-6菌株的活性物质具有较好的热稳定性;但不耐强酸强碱,其适宜的p H为5.0-9.0。正丁醇粗提物可抑制芒果炭疽病菌孢子萌发和菌丝生长,能有效抑制芒果炭疽病菌对芒果果实的侵染。表明HAB-6菌株抑菌谱广,其正丁醇提取物具较强的抑菌活性和较好的稳定性,具有良好的开发应用前景。

海洋细菌GM-1-1产芽孢发酵培养基和摇瓶发酵条件优化

【目的】优化海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)GM-1-1的产芽孢发酵培养基和摇瓶发酵条件,为该菌株的开发和应用提供理论依据。【方法】以GM-1-1菌株发酵液中的细菌总数和芽孢产率为检测指标,采用单因素和正交试验对该菌株产芽孢发酵培养基和摇瓶发酵条件进行优化;GM-1-1菌株发酵完成后喷雾干燥制成菌粉,加入不同助剂制成有效含量为1010CFU/g的可湿性粉剂用于水稻纹枯病田间防治试验。【结果】GM-1-1菌株产芽孢最佳发酵培养基配方为麦麸0.75%、花生饼粉2.5%、CaCO30.05%;最佳发酵条件为pH 7,温度30℃,250 mL三角瓶装液量60 mL,接种量8%,转速200 r/min,培养时间54 h。优化后GM-1-1菌株发酵培养基的细菌总数和芽孢产率分别达7.40×109个/mL和89.42%。田间防治试验结果表明,GM-1-1可湿性粉剂对水稻纹枯病的防治效果最高可达82.06%。【结论】优化后的培养基和发酵条件可有效提高GM-1-1菌株的细菌总数和芽孢产率,且培养基成本低、来源广泛。GM-1-1可湿性粉剂对水稻纹枯病有较好的防治效果,可用于生产菌剂并推广应用。

解淀粉芽孢杆菌HZM9菌株发酵液的抑菌谱及稳定性测定

【目的】将前期分离到的1株具有高效植物促生作用和生物防治作用的解淀粉芽孢杆菌HZM9开发为可以进行田间应用的菌剂。【方法】首先以10种土传病害病原菌为指示菌,用生长速率法测定了HZM9菌株发酵液对各病菌的抑制作用;又以榉树枯萎尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)为指示菌,测定了发酵液在不同条件下的稳定性。【结果】供试的10种土传病害病原菌经菌株HZM9发酵液处理后,菌丝生长均受到明显的抑制,特别是对尖孢镰刀菌和大豆菌核(Sclerotinia sclerotiorum)的抑菌率均达90%左右。菌株HZM9发酵液有很好的热稳定性,温度升至80℃后其抑菌作用变化十分微弱,抑菌率仍然保持在80%以上;100℃处理30 min抑菌率会下降到66.55%,100℃处理120 min,抑菌率仍能达到58.78%;在普通光照和紫外线照射后可以保持稳定的抑菌活性,在pH 5~9和蛋白酶的处理后抗菌活性也很稳定;在4℃下可以持续储藏150 d。【结论】HZM9具有广谱抑菌活性和很好的稳定性,能够适用于土传病害的生物防治。

一株产纤维素酶细菌B4的鉴定及发酵条件优化

从堆肥中筛选到一株高活性纤维素酶产生菌B4,通过观察菌株的形态、研究生理生化特征和分析16SrDNA序列,对菌株进行种的鉴定;以单因素和正交实验相结合筛选菌株的最佳产酶发酵条件。结果表明:菌株B4为革兰氏阳性菌,菌体呈长杆状、芽孢椭圆中生,经16S rDNA序列比对分析鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。最佳固体发酵培养基为:玉米芯粉25 g、七水硫酸镁0.1 g、氯化钙0.1 g、土温200.6 g、麸皮8 g、蛋白胨0.5 g、硫酸铵0.2 g、氯化钠0.6 g、土温800.2 g、磷酸二氢钾0.5 g、糖蜜0.5 g、水125 mL;最佳理化发酵条件为:温度34℃、pH 6.0、接种量1.5%(OD_(600)=1.0)。在最佳条件下发酵24 h,发酵最高酶活达18.74 U/g。通过研究可为纤维素酶制剂研究和开发提供菌株来源。

抑制番茄青枯病拮抗菌株的田间生防效果

对抑制番茄青枯病的拮抗菌株W12(枯草芽孢杆菌)和W118(解淀粉芽孢杆菌)进行田间生防效果试验,结果表明,施用拮抗菌株处理3次,番茄青枯病的田间防治效果达到43.0%,并且能改善番茄植株根标土壤微生物区系,减少病原菌的数量。

清香型白酒乳酸利用菌的筛选及鉴定

利用透明圈法,从清香型白酒大曲中筛选出两株可以产生透明圈的菌株B4-1和B36-1。通过对两株菌株进行16S r RNA基因测序鉴定,并构建系统发育树,结合生理生化试验结果,最终确定两菌株均为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。单一碳源发酵及葡萄糖-乳酸混合发酵试验结果表明,在葡萄糖存在的情况下菌株B4-1和B36-1的乳酸利用量分别为1.91 g/L和1.26 g/L,符合乳酸利用菌的筛选特征。因此两株菌均可以作为清香型白酒的乳酸利用菌。

利用豆制品废水发酵枯萎病拮抗菌Pb-4条件研究

利用豆制品生产过程中的废水(黄浆水)对枯萎病拮抗菌Pb-4菌株的发酵培养基及其发酵条件进行优化。通过单因素试验筛选Pb-4菌株黄浆水培养基中的碳源;设置因素水平为L_(18)(3~5)正交试验,对Pb-4菌株黄浆水培养基中最佳碳源和无机盐成分进行筛选和优化,确定发酵培养基配方;通过响应面优化试验对Pb-4菌株的发酵温度、p H和接种量进行优化。结果显示,通过筛选确定玉米粉为黄浆水培养基的最佳碳源;优化后的发酵培养基配方为:1 000 m L黄浆水中添加玉米粉30 g、(NH_4)_2SO_4 2g、Mg SO_4 1.5 g、CaCO_3 1.5 g和FeSO_4 0.3 g;优化后的发酵条件为:温度36.3℃、p H7.4、接种量5%、摇瓶培养40 h。在此优化条件下,发酵菌数可达42.8×10~8 CFU/m L、最大生物量OD_(660)值为0.393,与预测理论最大值0.390 2相吻合。优化后的发酵培养基能够替代蛋白胨、酵母粉和葡萄糖等常规培养基,具有简单、廉价和环保等特点,可作为微生物菌剂规模化生产的原料。

苹果病原真菌拮抗菌HMQAU140045的分离与鉴定

为开发苹果病原真菌生防菌剂,采用稀释分离法、生长速率法、平板对峙法等从土壤中筛选出对苹果腐烂病(Cytospora mandshurica)、轮纹病(Botryosphaeria dothidea)、斑点落叶病(Alternaria mali)具有明显拮抗作用的菌株,并根据其形态、生理生化特征、16S rDNA序列分析等进行鉴定。结果表明,菌株HMQAU140045抑菌效果显著,对3种苹果病原真菌菌丝生长和孢子萌发均有显著抑制作用,经其无菌发酵滤液处理后,病原菌菌丝畸形,分支增多,局部膨大,分生孢子不萌发或萌发产生的芽管畸形肿大成球状泡。鉴定结果表明该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。

红树内生细菌RS261菌株防治辣椒疫病的初步研究

The endophytic Bacillus amyloliquefaciens strain RS261 is a biological agent isolated from the leaf of Rhizophora stylosa.The efficacy of RS261 strain on control of capsicum phytophthora blight caused by Phytophthora capsici was studied by seed socking,root drenching and fruit spraying.The results showed that good biocontrol efficacy was achieved.It indicated that biocontrol with endophytic bacteria was an atternative and potential methed to control the capsicum seedlings and fruits phytophthora blight.