解淀粉芽孢杆菌B235对花生根腐病的防治效果研究

利用功能微生物防治花生根腐病是一种环境友好、绿色高效的防控措施。本研究进行了盆栽及田间小区试验,观察花生根腐病的发病情况及解淀粉芽孢杆菌B235对镰孢菌的防治效果。病原菌接种试验结果表明:接种镰孢菌的花生种子出苗慢、主侧根短小、发病率高,出苗率最差的为混合F1和F2两株菌的处理,出苗率仅为28.2%。盆栽生防试验结果表明:与接种病原菌的处理组相比,接种生防菌B235后能显著提升花生的发芽率和出苗率,发芽率和出苗率均在60%以上,最高可分别达到68.5%和65.3%;根腐病病情指数显著降低,防治效果均达60%以上,最高可分别达69.5%和65.5%。小区试验结果表明:相较于对照处理组,生防菌处理组表现为出苗率高、根系发达;在开花期,发病率为4.5%,显著低于常规处理的6.7%和对照处理的10.5%;在成熟期,各处理组发病率差异明显,对照组花生镰孢菌根腐病发病严重,发生率达19.8%,生防菌B235处理组根腐病发生较轻,为5.0%,显著低于常规处理的7.3%,且增产显著;同时发现接种菌株B235对花生根际微生物群落结构及多样性也产生积极的影响。综上所述,生防菌B235能够显著降低根腐病的发生、促进花生生长和产量提升,且有利于保持土壤微生态,具有较强的推广应用前景。

新农药解淀粉芽孢杆菌Xl 96-3介绍

本文从登记情况、产品信息、理化性质、毒理学、环境生物安全性评价、产品特点与作用机理、应用技术等方面对新农药解淀粉芽孢杆菌Xl 96-3进行介绍。

解淀粉芽孢杆菌PB-1对灰葡萄孢的抑菌机理

为筛选灰葡萄孢(Botrytis cinerea)高效生防菌株,对解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株PB-1从抑菌谱、发酵液的抑菌作用、抗生素合成基因PCR检测、挥发性物质(VOC)的抑菌作用、离体叶片防效几个方面进行研究。研究结果表明,PB-1的抑菌谱较广,对8种供试植物病原菌菌丝生长均有抑制作用,其中对灰葡萄孢(B.cinerea)、新月弯孢霉(Curvularia lunata)、大斑凸脐蠕孢(Exserohilum turcicum)、禾谷镰孢(Fusarium graminearum)4种病原真菌具有较强的抑制作用,抑菌率分别为63.5%、70.7%、63.4%、56.0%。PB-1发酵液不仅对灰葡萄孢菌丝生长具较强抑制作用(20%浓度发酵液抑菌率达96.6%,受抑制菌丝肿胀扭曲、原生质外渗、分枝异常),而且对分生孢子萌发也具有强烈抑制作用。抗生素合成基因PCR检测发现,PB-1扩增出srfAB、ituA基因片段,这说明PB-1能够产生表面活性素(surfactin)、伊枯草菌素(iturins)脂肽类抗生素。PB-1挥发性物质对灰葡萄孢菌丝生长也具有明显抑制作用。此外,小白菜品种上海青离体叶片防病效果检测发现,PB-1能明显抑制灰葡萄孢的侵染。本研究结果表明,PB-1有作为植物灰霉病生物防治菌剂的潜力。

产抗菌脂肽解淀粉芽孢杆菌wxy-b3的抑菌活性及其分离鉴定

脂肽(LPs)是芽孢杆菌非核糖体多肽合成酶系产生的次级代谢产物,因广谱抑菌、低耐药性、可生物降解、安全低毒,被视为安全健康的抗菌分子.本研究从植物碱蓬中分离得到具有较好抑菌活性的4株内生细菌和7株内生真菌,其中菌株wxy-b3具有较广谱抑菌活性.经PCR扩增脂肽合成基因及TLC分析初步确定其为产脂肽菌株,经形态学观察、生理生化实验和16S rDNA PCR将该菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).本文将为菌株wxy-b3的开发应用提供了理论基础.

1株植物内生菌解淀粉芽孢杆菌的安全性评价

试验旨在评价1株从杜仲中分离的解淀粉芽孢杆菌的安全性。试验从菌株溶血性、氨基酸脱羧和明胶液化试验、抗菌药物敏感性、腹腔注射、经口灌胃、抑菌活性等进行安全性综合评价。腹腔注射试验分为腹腔注射组(1.0×10^(10)CFU/0.3 mL)和生理盐水组,一次性注射,连续观察5 d。经口灌胃试验分为高剂量组(1.0×10^(10)CFU/0.2 mL)、中剂量组(1.0×10^(9)CFU/0.2 mL)、低剂量组(1.0×10^(8)CFU/0.2 mL)和生理盐水组,每天灌胃1次,连续灌胃28 d。结果显示,腹腔注射和经口灌胃小鼠均健康存活,未见临床变化,试验期间体重正常增加,各组小鼠血常规、血清生化指标和脏器指数差异均不显著(P>0.05),解淀粉芽孢杆菌DZ01未发生易位,氨基酸脱羧和明胶液化试验均为阴性。解淀粉芽孢杆菌DZ01对所测的8种抗菌药物均表现敏感。除粪肠球菌和铜绿假单胞菌外,解淀粉芽孢杆菌DZ01上清液对其余6株指示菌均具有抑菌活性。研究表明,解淀粉芽孢杆菌DZ01具有较好的安全性。

解淀粉芽孢杆菌SQ-2对水稻的促生作用

【目的】对实验室分离筛选得到的一株解淀粉芽孢杆菌SQ-2进行促生特性研究,确定该菌株对水稻促生的浓度范围与作用机制,并分析接种菌株前后的土壤菌群结构。【方法】利用钼蓝比色法与固氮酶试剂盒对菌株SQ-2的溶磷能力及固氮酶活性进行检测。将10^(2)、10^(4)、10^(6)、10^(8)和3×10^(8)CFU/mL的菌悬液接种至水培与土培水稻中,分别培养14 d和20 d后测定其水培、土培水稻的根茎干鲜重、茎长与茎粗。采用苯酚-次氯酸钠比色法、茚三酮检测法与3,5-二硝基水杨酸比色法测定土培水稻土壤中脲酶、蛋白酶与蔗糖酶的活性。利用pH计电位法检测土壤pH值,用对应试剂盒检测土壤速效氮磷钾含量及酸性磷酸酶活性,并对接种3×10^(8)CFU/mL组的土培水稻土壤进行根际细菌群落结构分析。【结果】菌株SQ-2对磷酸三钙的溶解量为229.63 mg/L,固氮酶活性为55.07 U/L。与对照相比,接种菌悬液浓度在10^(4)CFU/mL时,水培水稻根的干、鲜重增长最为显著;在接种浓度为3×10^(8)CFU/mL时,土培水稻根茎的干、鲜重增长最为显著。随着接种菌悬液浓度的升高,上述土壤酶活性与速效氮磷钾浓度都有着不同程度的增加,而接种菌株3×10^(8)CFU/mL的土壤pH值则由原来的7.83降至7.26。接种菌株SQ-2改变了水稻根际土壤中的菌落构成,显著提高了土壤α多样性的Ace、Chao、Sobs与Shannon指数。【结论】解淀粉芽孢杆菌SQ-2对土培、水培水稻均有不同程度的促生效果。在土培实验中,能够通过提高土壤酶活性、速效氮磷钾水平及改变土壤菌群结构来起到促生作用,为细菌菌肥的研发提供了新的菌株资源。

解淀粉芽孢杆菌Ba33对烟草的促生及抗TMV作用

从烟田土壤中分离得到解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）Ba33菌株。5叶期三生NN烟（Nicotiana tabacum var．samsun NN）喷施Ba33发酵液3次后再接种TMV（烟草花叶病毒），与喷清水对照相比，能显著降低枯斑数量，枯斑抑制率为67．8％。于4～6叶期普通烟草（Nicotiana tobacum L．）NC89烟苗接种TMV前后分别用Ba33发酵液、NB培养基或清水连续灌根3次，观察到Ba33发酵液灌根处理的烟苗鲜重、最大叶长和叶宽均高于清水对照处理，叶色浓绿，长势良好；接种TMV10d后进行实时荧光定量PCR检测．Ba33发酵液灌根处理的植株新叶中RNA含量低于清水对照和NB培养基灌根处理。认为Ba33具有拮抗TMV、促进烟草生长的作用．是具有潜在应用价值的生防菌株．

解淀粉芽孢杆菌HZ-6-3的筛选鉴定及其防治番茄灰霉病效果的评价

采用平板对峙法,从银杏组织分离的内生细菌菌株中筛选对灰葡萄孢菌抑菌活性较好的菌株,其中菌株HZ-6-3的抑制作用最强,抑制率为79.06%。通过菌落形态观察、生理生化特征、16S rRNA基因序列和gyrA基因分析将菌株HZ-6-3鉴定为解淀粉芽孢杆菌。抑菌谱测定结果显示,该菌株对其他8种植物病原真菌均具有不同程度的拮抗作用。该菌株可产生蛋白酶、果胶酶、β-1,3-葡聚糖酶和淀粉酶;能够显著抑制病原菌的菌丝生长,使菌丝生长扭曲,细胞膨大、形成串状泡囊结构等畸变。利用盆栽试验测定了该菌株对番茄灰霉病的防控效果,结果显示1×108 CFU·mL^-1的预防效果和治疗效果最高,可达81.12%和70.45%。上述结果显示菌株HZ-6-3具有作为生物制剂的潜能。

解淀粉芽孢杆菌BW-13培养基和培养条件优化

为了提高解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens BW-13抗真菌活性物质的产量,本实验首先用单因素研究不同碳源,氮源和微量元素对BW-13产生抗真菌活性物质的影响,并使用均匀设计法对培养基进行优化.结果表明:玉米粉和低浓度的Mn2+对BW-13产生抗真菌活性物质的促进效果明显.最佳培养基配方和发酵条件为:玉米粉32g/L,蛋白胨9g/L,氯化锰5mg/L,初始发酵pH 5.0,装液量30mL,接种量为4%,培养温度28℃,摇床转速200r/min,培养时间144h.优化后5μL BW-13发酵液抑菌圈提高到28.5mm,比优化前提高了28.94%.

解淀粉芽孢杆菌BW-13产生的抗真菌物质特性研究与初步分离纯化

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BW-13发酵滤液对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和植物病原真菌灰霉(Botrytis cinerea)均具有显著的抑制活性,并具有热稳定性好、对紫外线照射和蛋白酶处理不敏感、在pH 3～9范围内稳定,尤其在酸性条件下基本不丧失活性的特点.通过发酵液预处理,活性炭吸附,D293强碱性季铵型阴离子交换树脂柱层析,对解淀粉芽孢杆菌BW-13产生的抗真菌物质进行了初步分离纯化.高效液相色谱(HPLC)分析显示分离得到的抗真菌物质在220nm处有单一的活性峰.

解淀粉芽孢杆菌LC03的分离及其芽孢漆酶性质研究

为获得性能优良的细菌漆酶,利用含铜富集培养基从森林土壤中分离到一株具有较好漆酶活性的细菌菌株LC03,经生理生化实验和16SrDNA序列分析鉴定为解淀粉芽孢杆菌。该菌株培养6d后的芽孢漆酶活性最高,可达48.5U/g。菌株LC03的芽孢漆酶氧化底物2,2'-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)和丁香醛连氮的最适pH值分别为3.8和6.8,以丁香醛连氮为底物时的最适反应温度为60℃。该芽孢漆酶具有较好的稳定性,经70℃处理10h或pH9.0条件下放置10d仍能保持漆酶活性,同时对抑制剂SDS和EDTA具有一定的抗性。Li+、Na+、Mg2+、Ca2+、Ba2+、Al3+对漆酶活性有促进作用,Ag+、Mn2+、Hg2+、Co2+对其抑制作用比较明显。解淀粉芽孢杆菌LC03的芽孢漆酶在高温和碱性条件下优良的稳定性为其在工业废水处理等领域的应用奠定基础。

解淀粉芽孢杆菌HRH317抗菌蛋白发酵条件优化及其稳定性研究

本文以抑菌圈直径为指标,采用单因素实验和响应面法对解淀粉芽孢杆菌HRH317菌株产抗菌蛋白的发酵条件进行优化。得到最佳发酵条件为:初始p H为7.0的NB培养液,接种量4%,37℃下振荡培养24 h,转速为200 r/min。在此条件下抗菌蛋白的抑菌圈直径达21.85 mm,结果表明该抗菌蛋白具有良好的抑菌效果。稳定性研究结果表明:蛋白在40~80℃、p H2~11稳定,对蛋白酶K有一定耐受性。

解淀粉芽孢杆菌HRH_(317)抑菌物质发酵条件的优化

该试验研究解淀粉芽孢杆菌HRH_(317)抑菌物质的发酵条件。首先采用单因素试验研究发酵时间、温度、初始pH、接种量及菌龄、摇床转速、装液量对发酵液抑菌活性的影响,然后采用正交设计对这7个因素进行筛选,分析极差结果确定接种菌龄、接种量、发酵时间为影响抑菌圈大小的3个关键因素,在此基础上,采用Box-Behnken设计及响应面进行分析,在发酵温度37℃、初始p H7.0、摇床转速150 r/min、装液量30 mL/100 mL条件下,确定菌株HRH317抑菌物质的最佳发酵条件为接种菌龄21 h、接种量3.8%、发酵时间25.5 h。拟合试验模型结果显示,抑菌活性物质的抑菌圈直径大小从未优化前的18.63 mm提高至22.95 mm,抑菌圈大小增加23.19%。

解淀粉芽孢杆菌Y-S-Y12菌株对人参锈腐病的生防作用

为了探明杨树内生解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens菌株Y-S-Y12对人参锈腐病的生防作用,进行室内外抑菌防治试验。结果显示,室内抑菌率达到95.13%;菌株的发酵浓缩液对菌丝生长抑菌率为69.41%。Y-S-Y12菌株的发酵浓缩液(含活菌)田间对锈腐病的防效达到75.79%,人参Panax ginseng苗成活率比对照增加了51.82%,小区人参产量比对照增加了154.73%。Y-S-Y12菌株及其发酵浓缩液对6种植物病原菌(Cylindrocarpon destructans,Alternaria brassicicola,Botrytis cinerea,Rhizoctonia solani,Cytospora chrysosperma,Fusarium moniliforme)菌丝生长均具有较强的抑制作用;并且在较广的温度和p H值范围内均具有较强的抑菌作用,其中20℃、p H6.18条件下的抑菌作用最强。

大豆疫霉生防菌解淀粉芽孢杆菌JDF3的鉴定

分离获得1株细菌JDF3,它能有效地抑制大豆疫霉菌丝的生长和孢子囊的形成。该菌株对细极链格孢、小麦全蚀病菌和西瓜炭疽病菌的抑制率高于70%。盆栽结果显示细菌JDF3对大豆疫病的防治率为70.7%。菌株形态特征、18项生理生化和gyrB基因测序结果鉴定菌株JDF3为解淀粉芽孢杆菌。

抗苹果树腐烂病解淀粉芽孢杆菌TS-1203的抑菌活性物质稳定性及抑菌谱测定

【目的】研究将抗苹果树腐烂病解淀粉芽孢杆菌TS-1203开发成高效低毒生防制剂的潜力.【方法】采用生长速率法测定解淀粉芽孢杆菌TS-1203的生长曲线和抑菌活性物质稳定性.【结果】解淀粉芽孢杆菌TS-1203生长曲线呈"S"型,13h后进入对数生长,43h后趋于稳定期;物理因素光照、温度与紫外照射对抑菌活性物质影响不大,只有当温度与紫外照射时间分别为100℃、60s时,其粗提液对苹果树腐烂病菌(Valsa mail)抑菌率显著下降,与对照达到显著差异水平(P<0.05);化学因素中,只有强酸强碱,金属离子为Mg^(2+)时,其抑菌率显著下降,与对照达到显著差异(P<0.05);不同饱和度硫酸铵对粗提液抑菌率影响也不明显;粗提液抑菌谱测定发现其对多种病原菌有抑制作用,其中对立枯丝核菌和链格孢抑菌率均达80%以上.【结论】解淀粉芽孢杆菌TS-1203粗提液有良好的稳定性,且抑菌谱广.

葡萄糖显著促进解淀粉芽孢杆菌合成纳米硒的机制研究

为了探究葡萄糖促进解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BB61合成纳米硒(SeNPs)的机制,研究了不同浓度葡萄糖对菌体生长、SeNPs合成以及相关基因表达水平的影响。结果表明:在亚硒酸钠胁迫下,B.amyloliquefaciens BB61的nfsA、trxA和trxB基因表达水平极显著上调(P<0.01),且具有显著剂量效应(P<0.05),namA基因表达水平虽也显著上调,但剂量效应并不显著;此外,亚硒酸钠的出现和浓度升高还会导致tcyC、tcyA、gabD、zwf、nhaC、fdhF、KSO-RS02125和KSO-RS17170等基因的表达水平显著上调,这些基因分别参与亚硒酸盐的转运、糖代谢、电子链传递和SeNPs的分泌。以0.5 g/L亚硒酸钠为底物时,LB培养基中添加20 g/L葡萄糖对促进菌体蛋白和SeNPs的合成最佳,72 h时SeNPs转化率为72.33%(对照为53.25%),上述基因表达水平均显著上调。综上,硫氧还蛋白还原系统(TrxA、TrxB)和亚硝酸还原酶(NfsA)可能对于高浓度亚硒酸钠环境下SeNPs的转化更为关键;LB培养基中适当添加葡萄糖可显著提高SeNPs合成过程中各关键酶基因的表达水平和SeNPs的转化效率。

解淀粉芽孢杆菌CMN1308对栗实病原菌的诱导抗性

为探明CMN1308的作用机制,为其开发应用提供理论依据,采用接种培养和酶活测定的方法,研究其对扩展青霉、腐皮镰刀菌、栗疫菌和黑曲霉等4种主要栗实致病菌的抗生作用;并在此基础上,以过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）酶活性及丙二醛（MDA）含量的变化作为指标,研究解淀粉芽孢杆菌CMN1308对扩展青霉的诱导抗性。结果表明：解淀粉芽孢杆菌CMN1308原液、菌悬液和滤液对4种栗实致病菌均具有不同程度的防治效果。其中,解淀粉芽孢杆菌CMN1308原液的防治效果最好,4种病菌的发病率仅为28.3%-50%。解淀粉芽孢杆菌CMN1308能够显著增强栗实的POD和PPO酶活性,降低MDA含量,提高栗实对扩展青霉的抵抗力。

解淀粉芽孢杆菌JK-JS3杀线活性物质的分离与结构分析

利用酸碱沉淀法分离提纯解淀粉芽孢杆菌JK-JS3分泌的杀线活性物质,获得具有杀线活性的水溶液,通过气质联用方法对其化合物的结构进行分析和鉴定,从该杀线组合物中共鉴定出3种化合物,分别为5-甲基-1-苯基-6H-1,3,5-三嗪-2-硫酮、2,2-二甲基-N-苯丙硫代酰胺和樟脑醛缩氨脲。对3种化合物在SciFinder数据库中进行专利和文献检索,未检索到上述化合物具有杀松材线虫活性的报道。

解淀粉芽孢杆菌CM3培养基及发酵条件优化

为了提高解淀粉芽孢杆菌CM3的抑菌活性,对菌株的培养基组分和发酵条件进行了优化研究。采用单因素试验对菌株菌CM3的所需碳源、氮源、无机盐、培养基初始pH、接种量、培养时间和培养温度进行了筛选,并用正交设计试验对培养基组成以及培养条件进行了优化。结果表明,最终优化后的培养基组分为:玉米粉2%,豆粕0.5%,鱼粉0.5%,NaCl 0.1%;最佳发酵条件:pH值7.0,接种量5%,培养时间48 h,培养温度31℃;在优化后,拮抗细菌CM3的发酵液抑菌圈直径可达到37.58 mm,比优化前提高了22.7%。