葛根蛋白酶解物大孔树脂吸附工艺优化及其体外抗氧化活性研究

目的:优化大孔树脂吸附葛根蛋白酶解物工艺及其抗氧化活性研究。方法:采用Box-Behnken响应面法确定大孔树脂吸附葛根蛋白酶解物最佳工艺。以维生素C为对照,测定最佳工艺下纯化前后葛根蛋白酶解物的抗氧化活性。结果:大孔树脂的最佳吸附—解吸工艺为上样液质量浓度10.0 mg/mL,洗脱液流速2.6 mL/min,洗脱液乙醇体积分数74%,纯化后葛根蛋白酶解物含量提升至37.19%。大孔树脂纯化后的葛根蛋白酶解物对DPPH自由基、ABTS+自由基、羟自由基的清除率均强于吸附前的。结论:大孔树脂纯化后的葛根蛋白酶解物抗氧化效果良好,可以作为一种潜在的蛋白多肽应用于食品中。

海带酶解物对生长育肥猪生长性能、肉品质和肠道形态的影响

本试验旨在研究海带酶解物对生长育肥猪生长性能、肉品质和肠道健康的影响。选取体重[(45.3±7.5)kg]相近的生长猪200头,随机分为5组(每组5个重复,每个重复8头猪):对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加5、10、15和25 kg/t海带酶解物的试验饲粮,试验期84 d。结果表明:与对照组相比,1)饲粮中添加10 kg/t的海带酶解物组试验全期料重比显著降低(P<0.05),第29~56天平均日增重显著提高(P<0.05);2)饲粮中添加15 kg/t的海带酶解物显著提高了育肥猪屠宰后背最长肌的红度(a∗)值(P<0.05);3)饲粮中添加15和25 kg/t海带酶解物组育肥猪空肠和回肠的绒毛高度显著增加(P<0.05)。由此可见,在饲粮中添加海带酶解物可以改善生长育肥猪生长性能、肉品质和肠道形态;基于本试验结果,生长育肥猪饲粮中海带酶解物的推荐添加量为10~15 kg/t。

海藻酶解物对大黄鱼生长和肠道菌群结构的影响

为明确海藻酶解物饲喂大黄鱼的应用效果及对肠道菌群的影响,2022年11—12月在福建宁德海域使用添加0.5%复合海藻酶解物和0.5%海带酶解物的自配饲料饲养网箱养殖的大黄鱼8周,测定大黄鱼的存活率和平均增重,并采用NovaSeq PE250方案对肠道内容物进行16S rDNA扩增子测序,分析肠道菌群组成和特定菌群的相对丰度。结果显示:0.5%的复合海藻酶解物或0.5%的海带酶解物均可显著提高大黄鱼的存活率和平均增重(P<0.05);肠道菌群分析显示0.5%复合海藻酶解物组大黄鱼肠道中扩增子序列变体(ASVs)达1353种,以厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidota)、梭杆菌门(Fusobacteriota)和放线菌门(Actinobacteriota)为主,而0.5%海带酶解物组大黄鱼肠道中ASVs仅242种,各样本中以厚壁菌门和脱硫杆菌门(Desulfobacterota)为主,变形菌门相对丰度较低,均与对照组(749个ASVs,各样本中菌门相对丰度无规律)有较大差异;基于KEGG的肠道菌群功能分析显示在淀粉和蔗糖代谢、谷胱甘肽代谢、磷酸转移酶系统、氰基氨基酸代谢、亨廷顿病和其他糖降解上3组存在显著差异(P<0.05);进一步分析发现,0.5%复合海藻酶解物增加了大黄鱼肠道菌群α多样性并提高了拟杆菌属及丁酸合成相关细菌的相对丰度,而0.5%海带酶解物则降低了大黄鱼肠道菌群α多样性,但可抑制肠道中假单胞菌属细菌的生长,且体外培养试验证实褐藻寡糖可极显著抑制变形假单胞菌生长(P<0.01)。综上可知,本试验制备的2种海藻酶解物可调节大黄鱼形成不同的肠道菌群结构,并均可促进大黄鱼的健康和生长,该结果可为大黄鱼海藻类饲料添加剂的开发和通过调整大黄鱼肠道菌群改善大黄鱼健康和生长的饲料添加剂研发提供数据参考。

鲣鱼降尿酸肽酶解物的制备、分析及稳定性研究

探讨鲣鱼降尿酸肽的制备工艺及其特性。以黄嘌呤氧化酶(XO)抑制活性、水解度为指标,在优化降尿酸肽酶解工艺的基础上,对酶解物的分子质量、氨基酸组成及稳定性等特性进行分析。结果表明,中性蛋白酶为制备鲣鱼降尿酸肽的最适蛋白酶,经单因素和响应面优化试验,确定了最优工艺条件为温度40℃,酶解pH 7.1,酶添加量10400 U/g,酶解时间4 h,料液比1∶5(g/mL)。在此条件下,制备的酶解物其XO抑制率和水解度分别为(83.91±0.16)%,(38.67±0.39)%,得率为(18.24±1.02)%。分子质量分布及氨基酸分析表明,制备的降尿酸酶解物以小分子肽为主,分子质量小于1 ku的组分占比91.9%,且疏水氨基酸占比较高,达49.61%。所制备的降尿酸酶解物对热、酸碱以及Ca2+、Mg2+、AI3+、K+、Na+、NH+等离子具有较好的稳定性,添加Zn2+、Cu2+可显著增加酶解物XO抑制活性,而Fe2+、Fe3+的存在显著降低其抑制活性。此外,酶解物在胃肠模拟消化环境下比较稳定,经体外肠模拟消化后,其XO抑制活性显著增强。本研究为鲣鱼资源的高附加值利用提供一定的理论基础。

大米蛋白酶解物—黄原胶纳米载体的制备及性质研究

目的:提高疏水性生物活性物质的水溶性和稳定性。方法:利用大米蛋白酶解物(RPH)和黄原胶(XG),以疏水性模型活性物质姜黄素(Cur)为输送对象,构建了RPH-XG-Cur纳米输送体系,测定并分析纳米粒子的包封效果、稳定性、抗氧化性以及形成机制。结果:RPH-XG-Cur纳米粒子的姜黄素包封率为78.40%,粒径74.78 nm,多分散指数0.36,Zeta电位-27.93 mV,添加黄原胶可显著提高纳米粒子的包封性能以及pH和离子强度稳定性;傅里叶红外光谱和荧光光谱分析表明氢键、静电相互作用和疏水相互作用均参与纳米粒子的形成。结论:RPH-XG纳米体系具有作为疏水性生物活性物质纳米输送载体的应用潜力。

葛根蛋白及其酶解物的体外抗氧化活性和功能特性

以葛根为原料,采用碱提法提取葛根蛋白,对其进行酶解,研究不同蛋白酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶)对葛根蛋白的酶解效果及其酶解物的抗氧化活性和功能特性,并与葛根蛋白进行对比。3种蛋白酶对葛根蛋白的酶解效果及其酶解物抗氧化特性研究结果表明,碱性蛋白酶酶解物水解度和蛋白回收率最佳,并具有良好的体外抗氧化活性。功能特性研究结果表明,与葛根蛋白相比,3种葛根蛋白酶解物的溶解性、持油性和起泡性均有不同程度提升,但持水性、起泡稳定性、乳化性及乳化稳定性均有所下降。其中碱性蛋白酶酶解物的功能特性最优,pH值为5时,溶解度达98.43%;温度为60℃时,持油性达4.23%;pH值为6时,起泡性达106%。结果表明,碱性蛋白酶酶解效率高,且适合用于提高葛根蛋白抗氧化活性及功能特性。

核桃粕酶解物抑制脂质积累的机制

利用分化的3T3-L1脂肪细胞和高脂饮食(HFD)诱导的肥胖C57BL/6小鼠模型,研究核桃粕酶解物的抗肥胖作用。采用油红O脂肪染色法检测脂肪细胞脂质积累情况,采用试剂盒检测细胞甘油三脂(TG)、甘油(Gly)和游离脂肪酸(FFA)含量,采用实时荧光定量PCR(PCR RT-qPCR)检测脂肪合成相关基因(mRNA)的表达水平。结果表明,核桃粕酶解物显著降低脂肪细胞内脂滴聚积,显著降低脂肪细胞内TG和FFA的含量,增加细胞上清液中Gly含量,同时核桃粕酶解物显著降低脂肪细胞中脂肪合成相关基因PPAR-γ和C/EBPαmRNA表达水平;当核桃粕酶解物的质量浓度达到50μg/mL时,TG和FFA分别降低了40.14%和39.50%,Gly水平增加了35.12%;PPAR-γ和C/EBPα的mRNA表达水平分别降低了31.42%和55.25%。此外,核桃粕酶解物显著降低HFD小鼠的体质量、脂肪组织质量和食物摄入量。研究表明,核桃粕酶解物可以抑制3T3-L1脂肪细胞脂质积累,其作用机制与抑制脂质合成相关基因表达相关。此外,其还具有抑制HFD脂质积累的作用。

哈蟆油酶解物激活MAPK/ERK信号凋亡途径修复皮质酮诱导HT-22细胞损伤作用

为研究哈蟆油(Oviductus Ranae,OR)对海马神经元细胞保护作用机制,该研究通过皮质酮(Corticosterone,CORT)诱导HT-22细胞损伤模型探究哈蟆油酶解物对小鼠海马神经元细胞(HT-22)细胞损伤模型的保护作用及其作用机制。采用CORT与HT-22细胞共同培养建立HT-22细胞损伤模型,给予哈蟆油酶解物再次孵育,将ERK信号通路抑制剂PD98059加入HT-22细胞中。采用MTT法、Hochest 33258染色、流式细胞术、Western blot技术检测HT-22细胞凋亡情况和相关蛋白表达以及MAPK/ERK信号通路蛋白表达。结果显示高水平CORT能够诱导HT-22细胞损伤,哈蟆油酶解物能够使CORT诱导的HT-22细胞活力提升62.5%~87.5%,凋亡比例降低50%~70%。哈蟆油酶解物能够上调BCL-2、P-ERK1/2蛋白表达,同时下调BAX、Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达。上述结果表明,高水平CORT是通过抑制MAPK/ERK信号通路促进凋亡的发生从而诱导HT-22细胞损伤,哈蟆油酶解物能够通过激活MAPK/ERK信号通路调节BLC-2、BAX、Caspase-3、Caspase-9凋亡相关蛋白的表达进而抑制凋亡的发生减轻神经元损伤,该作用机制为哈蟆油发挥抗抑郁作用的关键途径之一。

酶法制备瓜尔胶水解物的体外酵解特性分析

为研究不同分子量的瓜尔胶(guar gum,GG)水解物对肠道菌群的影响,以瓜尔胶为原料,通过酶解法制备3种不同分子量的瓜尔胶水解物(guar gum hydrolysate,GGH),其分子量分别为32.41 kDa(GGH-1)、10.15 kDa(GGH-2)和5.89 kDa(GGH-3),采用猪结肠消化物构建体外酵解模型,研究GG及其水解产物的体外酵解特性。结果表明:在酵解过程中,GG和3种GGH的分子量逐渐降低,总糖含量显著降低,还原糖含量先增后减。酵解体系的pH值均显著降低(P<0.05),GGH-1显著促进总短链脂肪酸、乙酸、丁酸的生成,GGH-3显著促进丙酸的生成。GG和不同分子量的GGH均可以提高乳杆菌属和梭菌属的相对丰度,抑制链球菌属的增长,其中GGH-3对肠道菌群组成的影响最为显著。

牛骨髓蛋白及其碱性蛋白酶酶解物的功能特性比较

该研究通过水提法提取牛骨髓蛋白(Bovine Bone Marrow Protein,BBMP),采用碱性蛋白酶制备牛骨髓蛋白酶解物(Bovine Bone Marrow Alkaline Protease Hydrolysate,BBMP-AH),测定两者的氨基酸含量,同时比较分析结构特征、理化性质以及抗氧化活性。结果表明,BBMP-AH蛋白含量高于BBMP,BBMP-AH必需氨基酸和疏水性氨基酸含量明显的增加;紫外和红外光谱图谱表明,BBMP及BBMP-AH均显出典型的蛋白吸收峰且酶解后蛋白质二级结构发生了明显的变化;理化性质试验结果表明,BBMP及BBMP-AH的等电点在pH值6左右,远离等电点时,具有较好的理化特性,酸碱性条件下理化性质显著改善。与原蛋白相比,酶解物最高溶解性提高到94.40%、乳化性为1.24 m^(2)/g、乳液稳定性为116.33%,持水性为3.94 g/g,持油性略有降低;BBMP-AH的抗氧化活性显著强于BBMP,均具有较强的DPPH•、•OH、O_(2)^(-)•、ABTS^(+)•清除能力和总还原能力。综上,酶解处理能够改善牛骨髓蛋白理化性质,提高其抗氧化能力,延伸开发应用范围。

茶叶籽粕蛋白酶解物的抗氧化及抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

【目的】提取茶叶籽粕蛋白,并比较其经不同蛋白酶酶解后的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制率,进而评估将其作为新型生物活性肽生产原料的可行性。【方法】首先通过碱提酸沉法获得茶叶籽粕蛋白粗提物,再分别以碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解;比较各酶解物的DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、总还原力和α-葡萄糖苷酶抑制率的差异。【结果】采用碱提酸沉法(0.1 mol·L^(-1) NaOH提取、1 mol·L^(-1) HCl调整pH至3.5)制备的茶叶籽粕蛋白粗提物,其得率为7.7%,蛋白纯度27.6%。酶解物活性评价结果显示,碱性蛋白酶酶解物对DPPH自由基清除率最高,其IC_(50)(半数抑制浓度)为80.17μg·mL^(-1);对ABTS自由基清除率最高,其IC_(50)为123.79μg·mL^(-1);总还原力最强,为0.458;浓度为1 mg·mL^(-1)时对α-葡萄糖苷酶抑制率较强,为93.12%。【结论】采用碱性蛋白酶酶解茶叶籽粕蛋白粗提物,其酶解物具有开发成抗氧化和抑制α-葡萄糖苷酶生物活性肽的潜力。

白茶蛋白酶解物的抗氧化与α-葡萄糖苷酶抑制力研究

【目的】提取和酶解制备白茶蛋白生物活性肽,并探讨其抗氧化能力和α-葡萄糖苷酶抑制率,为白茶综合利用提供理论依据。【方法】以寿眉白茶为原料,采用碱提酸沉法获得白茶蛋白粗提物,再分别以碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和复配酶进行酶解,比较各酶解物的DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、总还原力和α-葡萄糖苷酶抑制率差异。【结果】采用碱提(0.3 mol·L^(-1)NaOH)酸沉(pH=3.0)法获得白茶蛋白粗提物,其纯度46.6%,得率7.1%。酶解物的活性评价结果显示,木瓜蛋白酶酶解物浓度为200μg·mL^(-1)时对DPPH自由基清除率最大,为86.8%;4种蛋白酶酶解物对ABTS自由基清除能力相当;复配酶酶解物浓度为1000μg·mL^(-1)时总还原力最大,为0.930;中性蛋白酶酶解物浓度为1000μg·mL^(-1)时对α-葡萄糖苷酶抑制力最强,为97.8%。【结论】使用中性蛋白酶、复配酶和木瓜蛋白酶,有望开发具备抗氧化能力与α-葡萄糖苷酶抑制力的白茶蛋白活性肽。

圆鮀鲣暗色肉蛋白酶解物的抗疲劳作用

采用行为学和生化指标研究圆鮀鲣暗色肉蛋白酶解物(DMPH)的抗疲劳作用,并且与暗色肉粗酶解物(DMH)进行比较,初步推测其中主要的抗疲劳活性物质。结果表明,DMPH中粗蛋白含量显著高于DMH(p<0.05),DMPH的氨基酸总浓度高于DMH。DMH和DMPH均能显著延长小鼠力竭游泳时间和减少小鼠肝糖原的消耗(p<0.05),能显著降低小鼠血浆乳酸和尿素氮含量(p<0.05),而且还可显著提高小鼠体内抗氧化酶的活力(p<0.05)。DMH和DMPH均具有抗疲劳作用且无显著性差异(p>0.05),而且DMPH中粗蛋白和氨基酸含量高于DMH,初步推断暗色肉中蛋白质水解产生的多肽和氨基酸是酶解物中主要的抗疲劳活性物质。

辣椒秸秆腐解物化感作用的研究

以粉碎腐解的辣椒秸秆为材料研究其对自身的化感作用．按照植株干重：田园土重为1：100、3：100和5：100不同比例进行盆栽试验．结果表明，腐解物中的化感物质导致辣椒植株生长减缓．在60d时测定，植株高度、茎粗、地上和地下部分干重等生物量下降了0．0374～0．0646、0．0020～0．0097、0．0050～0．0355、0．0916～0．3584，光合指标叶面积、叶绿索含量减小了0．0016～0．0251、0．0043～0．0242；在120d时，腐解物中的化感物质抑制程度增加，但与对照比较均未达到显著水平．腐解物中的化感物质对辣椒根系活力、根系保护酶（SOD、POD、CAT）活性的抑制及MDA生成量、相对电导率的促进均随着处理含量加大、处理时间延长，化感作用加强，化感效应范围为0．0163～0．6507，明显高于其对生长指标的化感效应．

巴马火腿酶解物中呈味肽的分离纯化及其结构研究

采用SephadexG-15凝胶色谱柱分离得到巴马火腿酶解物9个组分,结合感官分析和电子舌测定得出呈味组分为G-15-P2-E2。用半制备RP-HPLC制备此组分中G-15-P2-E2-r1、G-15-P2-E2-r2,并结合串联质谱分析,得出G-15-P2-E2-r1组分可能的氨基酸序列为Leu-Ser-Glu-Arg-Tyr-Pro(LSERYP,LP6)或Asn-Gly-Lys-Glu-Thr(NGKET,NT5),G-15-P2-E2-r2组分可能的氨基酸序列为Pro-Asp-Leu-Pro-Asn-Thr(PDLPNT,PT6)经合成后电子舌测定发现Leu-Ser-Glu-Arg-Tyr-Pro的呈味特性与火腿酶解物呈味特性相近。

草莓根系分泌物和腐解物中的酚酸类物质及其化感作用

采用高效液相色谱(HPLC)检测草莓根系分泌物和腐解物中酚酸类物质,并对这两类物质中对羟基苯甲酸、邻苯二甲酸、丁香酸、香草酸、阿魏酸和苯甲酸的含量进行了检测。在草莓的根系分泌物醇(水)提液中均只检测到了含量相对较高的对羟基苯甲酸;根系腐解物醇提液和水提液中分别检测到6种和5种酚酸,其中邻苯二甲酸含量较高;6种酚酸中对羟基苯甲酸对草莓组培苗生长的抑制作用最强。

大豆分离蛋白酶解物清除羟自由基作用的研究

用比色法测定了大豆分离蛋白(SPI)酶解物对羟自由基的清除作用。结果表明,SPI酶解物对Fenton体系产生的·OH自由基有清除活性。SPI经木瓜蛋白酶水解15min,其酶解物清除能力已达最大值,为56.5%;经SephadexG-50凝胶柱分离,所得肽段各组分间的清除活性存在明显差异;用SDS-PAGE凝胶电泳测定各组分的分子量,结果显示分子量在11.355KD～5.154KD的肽段清除能力最强,达60.4%。

酪蛋白酶解物体外抗氧化作用的研究

采用正交试验设计,以羟自由基清除率为衡量指标,筛选三种蛋白酶水解酪蛋白的最佳条件。试验结果表明,木瓜蛋白酶最佳酶解条件为pH7.5,酶浓度8%,温度45℃,反应时间90min,羟自由基清除率为71.28%,与同浓度维生素C、维生素E的清除率差异均不显著(p>0.05);枯草杆菌蛋白酶(As1.398)最佳酶解条件为pH7.0,酶浓度2%,温度50℃,反应时间90min,羟自由基清除率为68.60%;胃蛋白酶最佳酶解条件为pH1.4,酶浓度6%,温度37℃,反应时间30min,羟自由基清除率为66.53%。试验发现,不同的酪蛋白酶解物都有抗脂质过氧化作用,最大抑制率为59.28%。

超滤对芸豆蛋白酶解物抗氧化活性的影响

采用超滤法从芸豆蛋白酶解物中初步分离纯化抗氧化活性肽。研究超滤系统主要参数对膜通量的影响,确定最优的超滤条件和膜清洗方法,并对超滤前后酶解物的相对分子质量分布、氨基酸组成及抗氧化活性进行比较。结果表明:采用改性聚醚砜平板超滤膜在室温,酶解液质量分数2.5%,pH6.5和压力0.25MPa条件下的分离纯化效果较好;超滤能有效去除酶解液中相对分子质量较大的组分,相对分子质量2000～1000D及1000D以下的组分分别从11.38%和12.64%提高到32.83%和45.91%,其抗氧化活性也得到明显提高。

棉秆腐解物的化感作用及其主要化学成分分析

将棉秆接种少量根际土,35℃下恒温腐解60h后,用1:1的丙酮、乙酸乙酯混合液浸提(V:W=5:1)5d并浓缩,对所得浸膏进行生物测定,并用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析其中的化学成分。结果表明,棉秆腐解后对棉花种子萌发及幼苗生长产生化感作用,在0.5g.L-1、1.0g.L-1、1.5g.L-1的腐解物浓度下,对棉花种子萌发大体表现出"低促高抑"的化感作用;对棉花幼苗生长影响较大,0.5g.L-1的浓度即有明显的抑制作用(P<0.01),表现为根系活力减弱、叶绿素含量降低、幼苗鲜重与苗高降低,抑制强度随腐解物浓度增大而增强,浓度达1.5g.L-1时棉苗死亡。腐解物浓度从低到高,植株体内SOD和POD酶活性呈现先升后降的趋势,高浓度下MDA含量增加。腐解物中含有4-羟基-4-甲基-2-戊酮(27.31%)、邻苯二甲酸二丁酯(7.87%)、棕榈酸(6.69%)、双(1-甲基丙基)-琥珀酸甲酯(6.40%)、亚油酸(5.43%)等24种主要成分,其中多种为常见化感物质。