解离-增强时间分辨荧光免疫分析法检测HBVM的临床应用

解离-增强时间分辨荧光免疫分析法(DELFLA)是以三价稀土原子铕(Eu3+)作为示踪物代替HRP等标记抗原或抗体,在免疫反应完成后加入特殊的增强液,将铕从标记抗原或抗体解离下来并与增强液中的组分形成具有强烈荧光螯合物,根据稀土原子螯合物的光谱特点,用时间分辨荧光分析仪测定免疫反应最终产物的荧光强度,根据荧光强度判断反应体系中被测物浓度,从而达到定量分析的目的.本文以DELFLA法分别检测5份不同浓度的HBVM标准品和58份病人血清,与常规酶联免疫法(ELISA)进行对照,现将结果报告如下.

丙肝病毒抗体检测运用时间分辨荧光分析法和酶联免疫法的应用价值观察

研究分析时间分辨荧光分析法和酶联免疫法于丙肝病毒抗体检测中应用效果。方法 丙型肝炎行丙肝病毒抗体检测患者2022年1月至同年12月选取521例,运用时间分辨荧光分析法和酶联免疫法做丙肝病毒抗体检测,检测作用做比对分析。结果 时间分辨荧光分析法对于丙肝病毒抗体检出率与酶联免疫法丙肝病毒抗体检出率比对无差异(P>0.05),丙肝病毒抗体检出情况与金标准比对,时间分辨荧光分析法较酶联免疫法准确率、灵敏度较高,优于酶联免疫法(P<0.05)。结论 丙肝病毒抗体检测,时间分辨荧光分析法行检测,对于丙肝病毒抗体有较高,且检测精准度、灵敏度良好。

时间分辨荧光免疫分析法间接测定雌二醇

以氯磺酰基噻吩甲酰三氟丙酮 ( CTTA)为铕 ( Eu)的螯合剂 ,羊抗鼠 ( SAM)的 Ig G为二抗 ,用 SAM- Ig G- CTTA- Eu作标记二抗 ,建立了以竞争抑制为基础的时间分辨荧光免疫分析测定游离雌二醇 ( E2 )的新方法。同均相方法相比灵敏度有很大提高 ,测定雌二醇 ( E2 )的线性范围为 2 .5～ 2 0 0 pg/m L,检测限为 2 .5 pg/m L。这一方法可望用于 E2

时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎血清标志物的分析方法性能验证

目的建立时间分辨荧光免疫检测法的方法学性能验证方案和试验方法。方法采用新波ANYTEST2000时间分辨荧光免疫分析仪和雅培AxSYM免疫发光分析仪测定乙型肝炎病毒血清标志物(HBV-M)各项目,分析前者的检测精密度、准确度、交叉污染率、灵敏度、测量范围、临床可报告范围、生物参考区间及抗干扰性能,分析两者检测结果间的相关性。结果 ANYTEST2000时间分辨荧光免疫分析仪检测HBV-M各项目的精密度、准确度、交叉污染率、灵敏度、测量范围、临床可报告范围、生物参考区间均符合国际公认质量要求。血清中一定浓度的三酰甘油、总胆红素或血红蛋白对部分HBV-M项目产生不同程度的干扰。ANYTEST2000与AxSYM检测HBV-M各项目结果间差异无统计学意义(P>0.05),且具有良好的相关性。结论 ANYTEST2000分析仪测定HBV-M的主要分析性能验证结果与厂商规定的分析性能基本一致。本研究所建立的分析仪性能验证方案和方法有助于提高仪器的检测质量。

TgAb时间分辨荧光免疫分析间接测定法的建立及临床应用

目的建立甲状腺球蛋白抗体(TgAb)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)间接检测法。方法用Tg抗原包板,用铕(Eu3+)标记兔抗人IgG做标记物,间接法TRFIA检测人血清中的TgAb。结果 TgAb-TRFIA的灵敏度为1.0 IU/ml;批内变异系数(CV)为3.1%～3.6%,批间CV为3.3%～3.6%;平均回收率为101.6%;热稳定性好;与电化学发光分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.8945;与临床结果高度相关。结论本法建立的TgAb-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测,有助于甲状腺疾病的临床诊断。

时间分辨荧光免疫分析方法的光谱研究

时间分辨荧光免疫分析法是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物 ,标记蛋白质、激素、抗体、核酸探针或生物活性细胞 ,待反应体系 (如 :抗原抗体免疫反应、生物素亲合反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等 )发生后 ,用时间分辨荧光技术测定反应体系中分析物的浓度 ,达到定量分析的目的。它之所以能够继放射性同位素标记、酶标记、化学发光、电化学发光后成为一种更新、更灵敏的检测方法 ,主要取决于它所用标记物三价稀土离子螯合物独一无二的物理及化学性质。主要报导了对使用的长寿命荧光团Eu3 + 螯合物的光谱研究结果 ,时间分辨技术及荧光增强技术的原理。实验表明 :选择 336～ 337nm的激发波长 ,有利于Eu3 + 的配位二酮体的激发及能量转移。

血清透明质酸时间分辨荧光免疫分析法的反应条件优化及其临床应用

目的优化血清透明质酸（HA）时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）的反应条件,并探讨其临床应用价值。方法采用TRFIA检测血清中HA的含量,确定参与HA-TRFIA的各反应成分的浓度。结果最佳反应条件为包被浓度10 mg/L、HA结合蛋白（HABP）1∶500稀释、铕标记HA（Eu^3＋-BSA-HA）1∶200稀释。敏感性为5.17μg/L,批内变异系数（CV）为2.21%-3.78%,批间CV为3.73%-5.40%,平均回收率为100.4%。该法HA测定值与放射免疫测定值显著相关,且与临床结果一致。结论本研究建立的血清HA-TRFIA是一种灵敏准确的分析方法,适合临床应用。

溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响

目的探讨溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响。方法收集30例未发生溶血的血清标本,利用低渗溶血法分别制备轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本各10例;采用时间分辨免疫荧光分析法分别测定各组标本溶血前(0h)和溶血后0.5、2、18h的胰岛素浓度;通过配对t检验、重复测量数据的方差分析对溶血程度和时间对胰岛素浓度检测结果的影响进行分析。结果轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本之间胰岛素浓度检测结果比较差异无统计学意义(P>0.05);随着溶血时间的延长,胰岛素浓度呈明显下降趋势,0.5、2、18h检测结果与0h检测结果相比,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论溶血程度对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素浓度的影响不明显,但溶血时间则对测定结果具有较为明显的影响;标本溶血和溶血时间均为影响胰岛素浓度检测结果的重要因素。

化学发光免疫分析法和时间分辨免疫荧光法定量检测不同浓度HBsAg的对比分析

目的以雅培全自动化学发光免疫分析法(CMIA法)为标准,探讨时间分辨免疫荧光法(TRIFA)检测血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的准确性和可行性,以便基层医院普遍开展此项目,为抗病毒个体化的策略及疗效的预测提供依据。方法分别用CMIA法和TRIFA法对157份乙型肝炎病毒(HBV)感染患者的血清进行检测,对于HBsAg滴度超过检测上限的样本,采用稀释液手动稀释后,再进行定量分析。将HBsAg水平分为4组:≤100 IU/mL、101~1 000 IU/mL、1 001~20 000 IU/mL、>20 000 IU/mL,分析两种方法阳性标本定量相关性。结果两种方法的直线回归方程为:Y=2.323X-896.3,相关系数r=0.943,P<0.001。以CMIA法检测值为参考,分为4组进行分析,结果显示在检测低浓度HBsAg样本时,TRIFA数值较CMIA法偏低,而高浓度样本以CMIA法检测值偏高。两种试剂在检测不同浓度的HBsAg均有较好的一致性(均P<0.05),其中以浓度在1 001~20 000 IU/mL时相关性最好。结论两种试剂在HBsAg定量检测上的准确性基本相当,定量相关性以检测值在1 001~20 000 IU/mL之间最佳。TRIFA成本低廉、易操作,更适于基层医院使用,具有广泛的应用前景。

甲状腺过氧化物酶抗体间接时间分辨荧光免疫分析法的建立及临床应用

目的建立甲状腺过氧化物酶（TPO）抗体间接时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）。方法用TPO抗原包板,用铕（Eu^3＋）标记兔抗人IgG做标记物,建立检测人血清TPO抗体的间接TRFIA。结果TPO抗体-TRFIA的敏感性为1.0 IU/mL;线性范围达1 000 IU/mL;批内变异系数（CV）为3.1%-3.6%,批间CV为3.3%-3.6%;平均回收率为98.89%;与电化学发光分析法（ECLIA）比对,相关系数达0.983 2;与临床诊断高度相关。结论本研究建立的TPO抗体-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测方法,有助于甲状腺疾病的临床诊断。

用国产时间分辨荧光免疫分析仪建立检测抗CCP抗体的TrFIA法

目的用国产时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)仪建立TrFIA法检测IgG类抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP-IgG抗体)。方法以人工合成的环瓜氨酸肽作为抗原包被微孔板,异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合铕(Eu3+-DTTA)标记鼠抗人IgG单克隆抗体,建立TrFIA法,分析CCP抗原包被浓度和Eu3+标记抗体最适用量,测定Eu3+标记抗体的标记率,用国产TrFIA仪进行检测,绘制标准曲线并分析本法的线性范围、精密度、特异性,计算回收率。对比分析建立的TrFIA法和欧蒙公司的ELISA法结果的一致率。结果本法CCP抗原的最适包被浓度为5μg/mL,最适Eu3+标记抗体稀释度为1∶1 000;平均每个鼠抗人IgG分子上连接10.27个Eu3+;标准曲线为Y=1.162X+2.819,相关系数(r2)=0.998;批内和批间CV分别为4.8%～5.6%和5.9%～7.6%;平均回收率为97.4%(96.5%～98.6%);用本法检测抗核抗体和抗CCP抗体无交叉反应;与ELISA比对试验结果,两法一致率为96.8%(90/93),Kappa值=0.95。结论建立的TrFIA法敏感性高、特异性好,可为抗CCP抗体的检测提供一种新的选择。

全自动时间分辨荧光免疫分析系统EASYCUTA分析方法性能验证

目的建立时间分辨荧光免疫的方法学性能验证方案和实验方法。方法参考CNAS-CL02:《医学实验室质量和能力认可准则》(ISO 15189:2012)对医学实验室检测系统性能评价的相关要求,结合实际工作需求,设计实验验证方案,并对全自动时间分辨荧光检测仪EASYCUTA测定乙肝五项,TP-Ab,HCV-Ab,HIV-Ab的精密度、正确度、线性分析测量范围、可检测极限、参考区间、分析灵敏度,抗干扰能力,交叉污染,方法学对比等进行验证和评价,并将检测结果与厂商(苏州新波公司)提供的性能指标进行比较。结果 EASYCUTA全自动时间分辨荧光检测系统检测HBV-M,TP,HCV,HIV项目的精密度、正确度、分析测量范围、可报告范围、参考区间、分析灵敏度、抗干扰能力、交叉污染,等均符合国际公认质量要求。方法学比对中,乙肝五项与Rochee601的阴阳性符合率>95%、K值评级为"优"。术前四项(HBsAg、TP、HCV、HIV)与Abbott i2000的阴阳性符合率>95%、K值评级为"优"。方法学对比合格。结论 EASYCUTA全自动时间分辨荧光检测仪测定乙肝五项,TP-Ab,HCV-Ab,HIV-Ab的主要分析性能验证结果与厂商说明书提供的分析性能一致,能够满足临床要求。本研究对规范医学实验室建设以及提供仪器检测质量具有重要的意义。

脂血标本对时间分辨荧光免疫分析法测定游离雌三醇水平的影响

目的探讨脂血标本对时间分辨荧光免疫分析法检测游离雌三醇水平的影响。方法收集男性呈正常和乳糜样外观的不同水平脂血标本,与不同水平的游离雌三醇定值血清混匀,制成混合血清,用时间分辨荧光分析法测定其游离雌三醇水平以评价不同乳糜样和正常外观脂血标本对游离雌三醇水平的影响。结果对于乳糜样外观标本,轻度脂血可使游离雌三醇水平增高,中度及高度脂血则使游离雌三醇水平降低,且对游离雌三醇水平的影响十分接近。外观正常的中度脂血对游离雌三醇水平无显著干扰。结论乳糜样外观脂血对时间分辨荧光分析法测定游离雌三醇存在不同的影响,进而影响唐氏筛查的准确度。

HBeAg-时间分辨荧光免疫分析法的初步临床应用

本文探讨HBeAg时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)的临床应用价值。采用铕离子标记,建立双抗体夹心的HBeAgTRFIA,并对224例乙肝患者和30名正常人血清进行检测。结果表明,HBeAgTRFIA法的灵敏度为0.006NCU/mL,乙肝患者血清HBeAg检出率为41.1%,显著高于ELISA法(P<0.05),与MEIA法相比较无显著差异(P>0.05)。HBeAgTRFIA法是一种灵敏度高、特异性强和重复性好的检测技术,对提高临床检测水平、指导临床治疗、监测方面有实用价值。

抗弓形虫IgM抗体时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步应用

目的采用时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）建立高灵敏的抗弓形虫（TOX）IgM抗体的检测方法。方法采用二抗间接法建立抗TOX IgM抗体的TRFIA。结果方法的批内和批间变异系数（CV）分别为1.9%和3.8%,敏感性为0.4 U/mL,可测范围为0.4-200 U/mL,20%、50%和80%的有效剂量（ED20、ED50和ED80）分别为36.3、88.2和147.8 U/mL。检测健康体检人员的血清,标本的测定值为（5.3±2.3）U/mL,建议阳性阈值为10 U/mL。结论抗TOX IgM抗体的TRFIA敏感性高、稳定性好,在优生优育及器官移植上具有很好的应用前景。

时间分辨荧光免疫分析法检测血清HBsAg的临床价值——附328份样本检测结果

目的：了解时间分辨荧光免疫分析法（time-resolved fluoroimmunoassay，TR-FIA）检测血清HBsAg的临床价值。方法：比较TR-FIA和微粒子酶免疫分析法（microparicle enzyme immunoassay，MEIA）对血清标本HBsAg的检测情况，结果：328份血清标本中，MEIA检出291例HBsAg阳性，阳性率为88．7％（291／328）；TR-FIA检出289例HBsAg阳性，阳性率为88．1％（289／328），两种方法HBsAg阳性检出率比较差异无统计学意义。以MEIA检测结果为标准，TR-FIA的敏感度为99％，特异度为100％，准确度为99％，假阴性率为0．7％。MEIA和TR-FIA分别在1：8092-1：64和1：8092-1：4稀释范围内呈良好的线性关系。定值准确度试验和可靠性评价显示TR-FIA定量准确，重复性好，结果可靠。结论：TR-FIA与MEIA定量检测HBsAg的敏感度、特异度、准确度和线性范围相当，且定值准确性高，具有重复性好、结果可靠的优点。随着仪器及试剂的国产化，检测费用的降低，TR-FIA在HBV标志物的检测中有着广泛的应用前景。

时间分辨荧光免疫分析仪的临床实验方法和评价方案

时间分辨荧光免疫分析技术是一种利用稀土离子及其螯合物作为示踪剂的灵敏度高、线性范围宽、应用范围广的非放射性标记免疫分析技术。研制了一种性能稳定的时间分辨荧光免疫分析仪,为了进一步将这一先进超微量物质检验技术推广于临床应用,根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)制订的临床评价方案,选择放射免疫分析法、化学发光免疫分析法以及PerkinElmerLifeSciences公司的AutoDELFIA-1235全自动时间分辨荧光免疫分析仪作为比较方法,提出了三套检验时间分辨荧光免疫分析仪性能的临床实验方法和评价方案。并利用其中的一套方案进行了实验,结果表明这些方案可操作性强,结果可信,经济适用,可作为同类医疗检验仪器进行临床实验的参考。

NSE时间分辨荧光免疫分析法的建立

采用夹心法建立神经元特异烯醇化酶（NSE）时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）来测定血清中NSE的含量。以NSE单克隆抗体E1包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3＋及标记NSE单克隆抗体E7,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液。采用平衡饱和法建立NSE-TRFIA,数据采用双对数函数数据处理程序处理。本方法的连续批内和批间CV分别为2.4%和4.8%,平均回收率为102.6%,灵敏度为0.31ng/mL,可测范围为0.31～320ng/mL,ED20、ED50和ED80分别为20.72ng/mL、57.23ng/mL和157.25ng/mL。本方法与AFP、CEA均无交叉反应。Eu3＋标记抗体-20℃保存8个月免疫反应基本无损失,同批试剂连续8个月应用分析结果稳定。临床应用检测结果与E170所测值高度相关。实验结果表明,本文所建立的NSE-TRFIA的灵敏度、特异性、准确度等均符合临床应用要求。

时间分辨荧光免疫分析法检测产志贺毒素大肠杆菌

目的基于时间分辨荧光免疫分析技术,建立高灵敏性、高特异性的产志贺毒素II(StxⅡ)大肠杆菌(STEC)全自动超微量检测方法。方法以StxⅡ单克隆抗体S1D8包被96孔板,采用双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+标记StxⅡ单克隆抗体S2C4,以β-二酮体为主的增强液为发光增强系统。建立StxⅡ双抗体夹心时间分辨荧光免疫分析法,并其对特异性、检出限、健全性进行评估。结果建立以StxⅡ为靶标的时间分辨荧光免疫法检测STEC法,检出限为0.023μg/L,与产StxI的STEC无交叉反应;平均回收率为98.95%,批内、批间CV分别为3.5%和4.7%。该方法灵敏性和特异性分别为100.0%和97.4%,阳性预测值和阴性预测值各是92.6%和100.0%,误诊率和漏诊率则分别是2.6%和0,假阳性率和假阴性率分别是2.6%和0。TRFIA检测StxⅡ毒素的诊断符合率为98.1%;约登系数为0.974,Kappa检验u系数为0.95。结论 StxⅡ时间分辨荧光免疫分析法灵敏度高、稳定性好,具有很好的临床应用前景。