解离素-金属蛋白酶蛋白家族的基础与临床意义

目前已发现的 34种解离素 金属蛋白酶蛋白 (ADAMs)是一类具有解离素和金属蛋白酶样活性的膜蛋白。ADAMs分子结构中金属蛋白酶区水解释放的金属蛋白酶可分解多种基质蛋白 ,而其分子中的解离素区及半胱氨酸富含区的水解产物则表现出抑制细胞黏附与移动的功能。ADAMs及其释放的多种特异性生长因子参与了肿瘤、关节炎、动脉粥样硬化、哮喘和早老性痴呆等多种疾病的发生与发展。

蛇毒解离素的结构特征及其与生物学活性的关系

目前已从蛇毒中分离出 80余种解离素多肽,根据其结构及来源可分为五大类,即短链、中链、长链解离素、金属蛋白酶P Ⅲ的类解离素区释放的解离素以及二聚体解离素。不同解离素的分子结构共同点包括RGD活性中心、半胱氨酸残基配对形成的二硫键、RGD三肽的C 端和N 端的氨基酸序列以及解离素多肽分子的C 末端。这些结构决定了解离素的抑制血小板聚集、抑制细胞粘附以及血管形成等生物学活性。

蛇毒解离素抗肿瘤研究进展

细胞膜表面受体在疾病中的作用越来越受到关注,整合素就是其中之一,它在机体内通过在细胞与细胞之间、细胞与细胞外基质之间发挥黏附作用从而影响多种疾病的发生。蛇毒具有多种抗肿瘤活性成分,其中解离素的研究近年来较为深入。解离素特异性地针对整合素的黏附作用,在抗血栓、抗肿瘤等方面发挥作用,本文就蛇毒解离素的种类、抗肿瘤活性及机制、临床应用等作一综述。

宫腔粘连组织中解离素-金属蛋白酶15、17的表达

目的研究宫腔创伤微环境中解离素-金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase,ADAM)家族成员ADAM-15、17的表达,探讨宫腔粘连(intrauterin adhesion,IUA)的分子生物学机制。方法选择就诊于宁夏医科大学总医院经宫腔镜诊断为IUA的68例(IUA组)及同期主因"不孕症"行宫腔镜检查为正常宫腔的18例患者(对照组)为研究对象,IUA组根据粘连轻、中、重程度分为IUA-I(n=28)、IUA-II(n=22)和IUA-III(n=18)级,Western blot和real-time PCR方法分别检测IUA组粘连组织以及对照组子宫内膜中的ADAM-15、ADAM-17的mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比,ADAM-15和ADAM-17蛋白水平及RNA转录水平都显著升高(P<0.05),IUA组间比较,ADAM-15和ADAM-17蛋白水平及RNA转录水平在IUA-III级中升高最为明显,其表达水平与宫腔粘连的严重程度具有相关性。其表达水平与宫腔粘连的严重程度具有相关性。结论 ADAM-15和ADAM-17在宫腔粘连的病理形成过程中具有重要的调节作用,可能成为宫腔粘连治疗及预后判断的分子生物学指标。

蛇毒解离素对肿瘤侵袭、转移的影响

解离素是蛇毒中的一类活性蛋白质,因含特异性RGD(精-甘-天冬氨酸,Arg-Gly-Asp)或KGD(赖-甘-天冬氨酸,Lys-Gly-Asp)基序,可阻断细胞膜表面的整合素与其配体结合,具有抑制血小板聚集、影响细胞迁移和抑制血管生成等作用,从而在多个环节遏制肿瘤细胞的侵袭和转移。

蛇毒解离素抗肿瘤血管生成的研究

血管生成是肿瘤细胞生长、浸润、转移过程中的一个重要环节。肿瘤血管不仅为肿瘤细胞生长提供了充足的营养,而且为肿瘤细胞的转移提供了通道。通过抑制肿瘤血管形成,切断肿瘤细胞的营养供应,可抑制其生长并能减少肿瘤浸润转移的机会。蛇毒解离素抗肿瘤的研究是当前蛇毒研究的热点之一,本文就近年来蛇毒解离素抗肿瘤血管生成方面的研究进展予以综述。

基因沉默解离素-金属蛋白酶17(ADAM17)对高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞通透性、增殖、迁移以及蛋白表达的影响

目的探讨基因沉默解离素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17)对高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞(human retinal microvascular endothelial cells,HRMECs)通透性、增殖、迁移以及蛋白表达的影响。方法将HRMECs分为4组:正常组(5 mmol·L^(-1)D-葡萄糖)、高糖组(25 mmol·L^(-1)D-葡萄糖)、NC(siRNA阴性对照)+高糖组和siADAM17(ADAM17 siRNA)+高糖组。ADAM17表达采用实时定量PCR和蛋白印迹法检测;辣根过氧化酶法检测HRMECs通透性;CCK-8和Brd U检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移;蛋白印迹法检测p-EGFR、p-ERK和MMP9表达水平。结果与正常组相比,高糖组ADAM17蛋白表达水平显著升高(P<0.01),NC+高糖组与高糖组相比无明显差异(P>0.05);与NC+高糖组比较,siADAM17+高糖组ADAM17蛋白表达水平显著下调(P<0.05)。沉默ADAM17可降低高糖环境下HRMECs的通透性。沉默ADAM17可抑制高糖介导的细胞增殖。Transwell实验结果显示,各组相对迁移的细胞数分别为高糖组(157.00±7.93)个、NC+高糖组(169.00±10.12)个、siADAM17+高糖组(121.00±9.28)个、正常组(110.00±8.25)个。沉默ADAM17可抑制高糖介导的细胞迁移。siADAM17+高糖组较NC+高糖组p-EGFR、p-ERK和MMP9蛋白表达显著减少(均为P<0.01)。结论基因沉默ADAM17可能通过EGFR、ERK、MMP9通路降低高糖诱导的细胞通透性并抑制细胞增殖和迁移。

甲醛对肝脏miRNA122及其下游解离素-金属蛋白酶10和血清应答因子的影响

目的:探讨甲醛对小鼠肝脏miRNA122及其下游解离素-金属蛋白酶10(a disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)和血清应答因子(serum response factor,SRF)的影响.方法:将40只♀昆明小鼠随机分为3个甲醛染毒组(低浓度组、中浓度组和高浓度组)和1个对照组,每组10只.染毒组每日上午9:00腹腔注射不同浓度的甲醛溶液,对照组注射等量的生理盐水.30 d后,实时定量PCR检测(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)法检测4组小鼠肝脏组织mi RNA122的表达情况;免疫组织化学法检测4组小鼠肝脏组织ADAM10和SRF的表达情况.结果:对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组小鼠肝脏miRNA122的相对表达量分别是0.99±0.005、0.94±0.074、0.72±0.062和0.38±0.091,各组之间有明显差异(F=22.988,P<0.01).与对照组相比,甲醛可明显降低肝脏中mi RNA122的表达,且呈浓度依赖关系;染毒组中ADAM10和SRF的表达均明显高于对照组(H=21.484,P=0.000;H=31.566,P=0.000).mi RNA122相对表达量与ADAM10及SRF阳性表达率均呈负相关(r=-0.975,P=0.025;r=-0.799,P=0.02).结论:甲醛染毒可以明显降低肝脏中mi RNA122的表达,且呈浓度依赖关系;并可能通过增加ADAM10、SRF蛋白的异常表达进而诱发肝癌.

一种新的蛇毒解离素同系物的分离

为发现新的具有生物活性的蛇毒蛋白，以我国华南地区富有的蝮蛇蛇毒为分离样品源，采用高效液相色谱，从中分离出一种新的解离索同系物——AHP-4，建立了快速分离纯化蛇毒蛋白的方法。结构确认的结果表明，AHP-4的相对分子质量为7554 Da，是由一条多肽链组成的蛋白质，N-端第1～15位的氨基酸序列为GEECDCGSPANPCCD。经GeneBank protein-protein BLAST检索及人工检索，在已知蛋白质N-端第1～15位氨基酸序列中，未发现与AHP-4氨基酸结构完全相同的蛋白质。AHP-4N端第1～5位氨基酸序列与5种解离素中的氨基酸序列具有高度同源性，表明AHP-4是一种新的解离素同系物。

一种新的含有Arg-Gly-Asp三肽序列蛇毒解离素的分离纯化及生物活性研究

蛇毒是一种具有特殊药理活性的物质,其含有一系列能拮抗整合素的小分子多肽,称之为解离素。解离素可以阻断整合素依赖性血小板聚集、肿瘤生长和肿瘤转移等活性。从江浙短尾蝮蛇毒(Gloydius brevicaudus venom, GBV)中分离纯化出含有精氨酸、甘氨酸和天门冬氨酸即RGD序列(Arg-Gly-Asp)的解离素,并鉴定其理化性质,测定其生物活性。应用Superdex 75凝胶过滤色谱,从江浙短尾蝮蛇粗毒中分离蛋白峰,参照Born方法对分离成分进行活性筛选,活性成分蛋白峰再通过Sephadex G-25凝胶过滤、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换色谱和Lichrospher C18反相色谱纯化分离得纯品; SDS-PAGE (Tris-Tricine系统)凝胶电泳及高效液相色谱分析活性成分的纯度; Bradford法测定蛋白浓度;凝胶成像法及质谱法测定其相对分子质量;盘状等电聚焦电泳测定等电点; Rick方法测定蛋白酶活力;自动电位滴定测定磷脂酶A活力;氨基酸测序结果用BLAST程序进行同源性比较; Born方法测定其对血小板聚集的影响。结果显示,粗毒经Superdex 75色谱分离后,获得7个蛋白峰,其中Ⅳ峰有抑制血小板聚集活性,以光密度计算该峰得率约占粗毒的10%;该组分用Sephadex G-25凝胶色谱纯化得主蛋白峰1个,得率约为57.2%; HiPrep DEAE Sepharose FastFlow16/10柱进一步纯化,得到8个蛋白峰,经鉴定第4峰暂定名为:GBV-Ⅳ4,它具有抑制血小板聚集作用,得率约为1.2%;经HPLC和SDS-PAGE证实为单一组分,相对分子质量约为7.442 kDa,等电点为6.3,蛋白酶活力及磷酯酶A_2活力均为0。GBV-Ⅳ4对ADP、凝血酶诱导的血小板聚集的IC_(50)分别为0.339和0.577μg·mL^(-1)。综上,从江浙短尾蝮蛇毒中分离得到一个含有RGD三肽序列的解离素GBV-Ⅳ4,具有抑制血小板聚集的活性。

解离素-金属蛋白酶10在胃癌组织中的表达及其与浸润转移及预后的关系

解离素-金属蛋白酶10（ADAM10）是一种跨膜金属蛋白,通过调节Notch、上皮细胞型钙黏蛋白（E-cadhefin）、表皮 生长因子（EGF）、表皮生长因子受体2（erbB2）和炎性细胞因子,参与肿瘤的形成和炎性疾病的发病.研究表明,ADAM10可能是肿瘤和炎性疾病的一个潜在治疗靶点.ADAM10在肝癌、前列腺癌、基底细胞癌、结肠癌和口腔鳞状 上皮细胞癌组织中高表达,并在肿瘤的形成过程中起重要作用.为了明确ADAM10在胃癌组织及非肿瘤胃黏膜组织中 的表达情况及其与胃癌临床病理学指标、患者预后的关系,本研究应用免疫组化分析了ADAM10在胃癌组织中的表达情况.

解离素金属蛋白酶9的研究进展

解离素金属蛋白酶9(ADAM9)属于I型跨膜糖蛋白,是ADAM家族中的重要一员,其独特结构和生物学功能成为近年来研究的热点。ADAM9参与多种疾病的发生发展过程,其在各种恶性肿瘤中的表达升高。此外,ADAM9还参与受精、肌生成、神经发生和细胞间的相互作用等生理过程。

消瘀止血方对迁延期下肢深静脉血栓形成患者非活性菱形蛋白2/解离素金属酶17信号通路表达的影响

目的:研究迁延期下肢深静脉血栓患者非活性菱形蛋白2(iRhom2)/解离素金属酶17(ADAM17)信号通路相关分子的表达变化及消瘀止血方的疗效及作用机制。方法:67例迁延期下肢静脉血栓患者均服用消瘀止血方,另选健康体检者50人作为正常对照组,治疗周期均为60 d。观察治疗前后症状、体征变化,彩色多普勒检查股静脉、腘静脉及小腿静脉丛再通情况。采用Western Blot法检测患者治疗前后及正常对照组的iRhom2/ADAM17信号通路相关分子蛋白表达水平。结果:迁延期下肢深静脉血栓形成患者iRhom2,ADAM17蛋白表达水平明显高于正常组(P<0.01);pro-ADAM17与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。消瘀止血方治疗60 d后,患者疼痛、皮肤色泽、肿胀及浅静脉怒张均有明显改善;iRhom2及ADAM17蛋白表达明显下降,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:促炎信号通路iRhom2/ADAM17参入了迁延期下肢深静脉血栓形成的病理过程;消瘀止血方治疗迁延期下肢深静脉血栓形成的疗效机理之一,可能是通过调节iRhom2/ADAM17信号通路异常表达,降低患者血小板黏附功能这一关键靶点而实现的。

解离素-金属蛋白酶17在恶性胸腔积液中的变化及其临床应用价值的研究

目的研究解离素-金属蛋白酶17(ADAM17)在恶性胸腔积液中的表达情况,探讨其在恶性胸腔积液中的诊断价值。方法收集35例恶性胸腔积液患者和57例良性胸腔积液患者样本,收集患者一般资料,通过ELISA法测量胸腔积液中ADAM17水平。结果ADAM17在恶性胸腔积液组与良性胸腔积液组中的含量分别为346.8(125.6~681.8)pg/ml和97.7(78.2~132.6)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.001);ROC曲线分析ADAM17检测的灵敏度为63%,特异度为95%,AUC为0.837,最佳cut-off值为308.76 pg/ml。ADAM17与CEA、CYFRA 21-1、总蛋白、葡萄糖以及乳酸脱氢酶存在相关性(P<0.05),与钠、钾、氯以及年龄无相关(P>0.05)。良性胸腔积液组中,ADAM17与各项指标均无相关(P>0.05)。结论ADAM17可作为良、恶性胸腔积液鉴别诊断的生物学标志物。

整合素及其拮抗剂的研究进展

整合素为细胞黏附分子家族的重要成员之一,参与调节细胞的增殖、分化、黏附、迁移等过程,而整合素拮抗剂能竞争性抑制整合素与其配体的结合,发挥着负向调节作用。该文就各类整合素及其拮抗剂的生物学特性、对不同疾病的研究价值进行了综述。

非创伤性股骨头坏死患者ADAM17介导的凝血酶受体水解活性研究及加味青娥丸对其的干预效应

目的观察加味青娥丸对非创伤性股骨头坏死(ONFH)患者解离素金属酶17(ADAM17)介导的凝血酶受体水解活性的影响,探讨加味青娥丸治疗缺血性ONFH的机制。方法招募临床诊断为非创伤性ONFH患者60例,随机分为治疗组及对照组,治疗组给予加味青娥丸及补钙治疗,对照组给予模拟剂及补钙治疗,2组疗程均为6个月,2组患者适当限制运动及负重,另招募60例健康体检者作为健康组。抽取2组患者治疗前后及健康组静脉血,采用ELISA法检测受试者血浆中ADAM17表达水平;流式细胞仪检测受试者凝血酶受体GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ和GPⅠbα的表达,同步观察患者治疗前后髋关节功能评分(Harris评分)及髋部X摄片影像学变化,比较3组上述指标的差异。结果非创伤性ONFH患者ADAM17表达水平明显低于健康组;GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ和GPⅠbα高于健康组。治疗6月后,治疗组ADAM17显著高于对照组,GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ和GPⅠbα表达水平显著低于对照组;治疗组髋关节Harris评分优于对照组;2组髋部X摄片影像学无明显差异。结论中药加味青娥丸方提高非创伤性ONFH患者低于正常的ADAM17含量,调节其介导的凝血酶受体水解活性,可能是本方治疗非创伤性ONFH患者的疗效机制之一。

结直肠癌患者肿瘤组织及血清ADAM10的表达

目的:检测结直肠癌患者肿瘤组织和血清中解离素金属蛋白酶10(ADAM10)的表达,分析其与结直肠癌发生、发展及临床病理特征间的联系。方法:应用免疫组织化学SP法检测59例结直肠癌组织、30例结直肠息肉组织及30例正常对照人群肠黏膜中的ADAM10的表达情况,采用双抗体夹心ELISA方法检测上述3组人群血清中的ADAM10表达水平。结果:结直肠癌患者组织和血清中ADAM10的表达水平显著高于结直肠息肉组和正常对照人群(P<0.001);伴随着肿瘤Duke分期的增加,结直肠癌患者组织和血清中ADAM10表达水平进行性升高。癌组织和血清中的ADAM10表达水平和结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、组织类型无关(P>0.05),而与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、肿瘤远处转移、Duke分期有关(P<0.01)。结论:ADAM10在结直肠癌患者癌组织和血清中高表达,且和结直肠癌的重要临床病理特征相关,在结直肠癌的诊断中具有一定的临床应用价值。

基于iRhom2/ADAM17信号通路探讨益气活血方治疗出血性血小板病患者的作用机制

目的观察益气活血方治疗出血性血小板病患者的临床疗效,基于iRhom2/ADAM17信号通路探讨其作用机制。方法选取100例出血性血小板病患者随机分为中药组与西药组,另选50例健康者作为正常对照组。中药组50例采用益气活血方治疗,西药组50例采用肾上腺色腙片治疗。治疗8周后,比较2组患者治疗后的止血疗效及血小板聚集恢复率;比较2组患者治疗前后及正常对照组的血浆非活性的菱形蛋白(iRhom)2、解离素金属酶(ADAM)17和pro-ADAM17蛋白表达水平。结果中药组患者止血疗效为84.78%,显著高于西药组的44.68%(P<0.05)。中药组患者血小板聚集率恢复率为71.74%,显著高于西药组的6.38%(P<0.05)。治疗前,中药组与西药组患者iRhom2与ADAM17蛋白表达水平明显高于正常对照组(P<0.05)。治疗8周后,中药组iRhom2与ADAM17蛋白表达水平较治疗前明显下降,且中药组显著低于西药组(P<0.05)。结论采用益气活血方治疗出血性血小板病患者可显著改善血小板聚集、提升止血效率。iRhom2/ADAM17信号通路参与了出血性血小板病的病理过程,调控iRhom2/ADAM17信号通路可能是益气活血方治疗出血性血小板病的作用靶点之一。

出血性蛇毒诱导血管内皮细胞凋亡的研究进展

出血性蛇毒中含有多种能专一性诱导血管内皮细胞凋亡的组分,如金属蛋白酶/解离素蛋白家族和L-氨基酸氧化酶。本文介绍了诱导血管内皮细胞凋亡的出血性蛇毒组分以及相关的分子机制。