解聚素-金属蛋白酶17和上皮生长因子受体在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的探讨解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）和上皮生长因子受体（EGFR）在人脑胶质瘤的表达及临床意义。方法回顾性分析同济大学附属第十人民医院（以下简称＂我院＂）2011年1月~2013年11月收治的并行外科手术治疗的人脑胶质瘤患者38例,选择同期在我院行外科手术治疗脑外伤患者15例为对照组。采用免疫组织化学法和Western blot法检测胶质瘤组织中ADAM17和EGFR蛋白的表达,并分析其与人脑胶质瘤恶性程度的相关性。结果人脑胶质瘤中ADAM17和EGFR表达较对照组明显增多（P〈0.05）,且随着恶性程度的提高,表达逐渐增多,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ADAM17和EGFR在人脑胶质瘤细胞内均有表达,且随着肿瘤恶性程度的增高而增加,提示ADAM17和EGFR在人脑胶质瘤的发生过程中可能起重要的作用,其水平高低与胶质瘤的恶性程度具有一定相关性。

血浆解聚素-金属蛋白酶8可辅助诊断老年慢性阻塞性肺疾病患者的病情严重程度

目的:探讨血浆解聚素-金属蛋白酶8(ADAM8)水平在老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期(AECOPD)诊断和病情评估中的价值。方法:收集229例老年COPD患者的临床资料,其中稳定期记为COPD组(98例),急性加重期记为AECOPD组(131例),参照2019年修订的《慢性阻塞性肺疾病全球创议》指南,根据患者病情的综合评估情况分为A、B、C、D组。同时选取无慢性呼吸系统疾病的老年健康体检者40例为对照组。比较各组的基线资料、动脉血气、肺功能指标以及血浆ADAM8水平,分析血浆ADAM8与各指标的相关性以及对COPD急性加重的诊断价值。结果:血浆ADAM8水平在对照组、COPD组、AECOPD组,以及A、B、C、D组中均依次升高,任意2组间比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。血浆ADAM8水平与白细胞计数、中性粒细胞与淋巴细胞比值、红细胞分布宽度、纤维蛋白原、D-二聚体以及PaCO_(2)呈显著正相关(P=0.000),与嗜酸性粒细胞计数、PaO_(2)、第1秒用力呼气量/用力肺活量(FEV_(1)/FVC)及第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_(1)%pred)呈显著负相关(P=0.000)。血浆ADAM8水平诊断AECOPD的最佳临界值为114.47 ng/mL,曲线下面积为0.881,敏感度为77.00%,特异性为88.90%,约登指数为0.659,95%置信区间为0.834~0.929。结论:老年COPD患者血浆中ADAM8水平明显升高,是评估COPD严重程度以及急性加重期的辅助指标。

解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）在胃癌中的表达及意义

目的研究解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法收集60例手术切除的胃癌组织和20例正常胃黏膜组织，采用免疫组化sP法检NI]ADAM17在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达情况，分析ADAM17在胃癌中的表达与胃癌患者临床病理特征的关系。利用脂质体介导的ADAM17-shRNA转染人胃癌细胞SGC-7901，采用实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot检测转染沉默效率；以CCK-8细胞增殖实验、Transwell小室试验观察通过抑制ADAM17基因表达对人胃癌细胞增殖及侵袭的影响。结果ADAM17蛋白在胃癌组织中表达阳性率为78．33％，在正常胃黏膜组织中表达阳性率为15．00％，差异具有统计学意义（P〈0．01）。胃癌患者ADAM17蛋白阳性表达与肿瘤浸润深度、TNM肿瘤分期有明显相关性，而与患者的年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移情况无关。SGC-7901细胞成功转染特异性ADAM17-shRNA后，通过RT-PCR和Western blot检测显示，ADAM17基因的表达水平明显抑制；同时SGC-7901细胞增殖侵袭能力也明显下降，与未转染组和阴性对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论ADAM17在胃癌组织中呈高表达，ADAM17-shRNA通过脂质体转染人胃癌细胞SGC．7901抑制ADAM17蛋白产物表达后，细胞增殖侵袭能力明显下降，提示ADAM17基因在胃癌进展过程中可能起到重要作用。

肺鳞状细胞癌中解聚素-金属蛋白酶17下调对自然杀伤细胞杀伤作用的影响

目的:探讨肺鳞状细胞癌中解聚素-金属蛋白酶17(Human A disintegrin and metalloprotease 17,ADAM17)下调对自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK)杀伤作用的影响。方法:体外培养人NCI-H520细胞株,分为正常对照组(未转染)、阴性对照组(转染nonsense siRNA)和ADAM17下调组(转染ADAM17 siRNA)。qRT-PCR和Western blotting检测各组细胞ADAM17 mRNA和蛋白表达。制备NK细胞,加入各组NCI-H520细胞中,Western blotting检测各组细胞γ干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)、颗粒酶B(Granzyme B,GraB)、穿孔素(Pore-forming protein,PFP)蛋白表达。结果:与正常对照组相比,阴性对照组ADAM17 mRNA和蛋白表达无明显差异,ADAM17下调组ADAM17 mRNA和蛋白表达减少(P<0.01);与正常对照组相比,阴性对照组NCI-H520细胞生存率无明显差异,ADAM17下调组NCI-H520细胞生存率降低(P<0.01);与正常对照组相比,阴性对照组IFN-γ、GraB、PFP蛋白表达均无明显差异,ADAM17下调组IFN-γ、GraB、PFP蛋白表达上调(P<0.01)。结论:肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞中ADAM17下调能增强NK细胞的杀伤作用。

miR-145通过调控解聚素-金属蛋白酶17对MCF-7乳腺癌细胞的影响

目的MicroRNA-145(miR-145)在乳腺癌中低表达,文章通过研究miR-145与ADAM17、EGFR的关联,探究miR-145对乳腺癌MCF-7细胞的调控作用。方法将MCF-7乳腺癌细胞分成3组,即转染组(转染miR-145 mimics)、对照组(未经转染)、无义序列组(转染无意义miRNA的无义序列)。利用MTT、Transwell、实时定量荧光PCR(qPCR)技术分别检测3组MCF-7乳腺癌细胞的增殖能力、侵袭能力及转染miR-145后的表达量。利用qPCR及蛋白印迹法检测3组乳腺癌MCF-7细胞中ADAM17、EGFR mRNA和蛋白水平。结果qPCR检测的结果提示miR-145相对表达量在转染组(13964.33±1265.30)明显高于对照组(1.00±0.05)和无义序列组(1.03±0.15),差异有统计学意义(P<0.01);转染组ADAM17 mRNA的表达量(1.71±0.08)明显高于对照组(1.00±0.07),差异有统计学意义(P<0.01)。与24、48、72 h无义序列组比较,转染组MCF-7抑制率明显升高(P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示,转染组穿膜细胞数[(56.20±2.17)个/视野]较对照组[(92.80±3.90)个/视野]、无义序列组[(91.80±4.97)个/视野]明显下降(P<0.01)。蛋白印迹实验得出结果,转染组细胞中ADAM17、EGFR的蛋白含量较对照组、无义序列组显著下降(P<0.01)。结论miR-145作用于ADAM17-EGFR信号通路,从而抑制乳腺癌MCF-7细胞系增殖、侵袭。

缺氧条件下沉默解聚素-金属蛋白酶17基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的探讨在缺氧条件下靶向针对解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)基因的短发夹RNA(sh RNA)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用机制。方法针对ADAM17基因设计具有特异性ADAM17-sh RNA,经电穿孔转染MCF-7细胞。依据细胞培养条件(常氧和缺氧)和细胞转染因素(空白PBS、转染无义序列ADAM17-sh NC、转染ADAM17-sh RNA),实验分为常氧对照组、常氧sh NC组、常氧sh RNA组、缺氧对照组、缺氧sh NC组和缺氧sh RNA组。通过充入1%氧O_2、5%二氧化碳CO2和94%氮N2的混合气体培养箱模拟缺氧环境,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)、i CELLigence系统、流式细胞仪检测MCF-7细胞的ADAM1基因的表达水平、细胞生长曲线、增殖活性和细胞周期。结果靶向针对ADAM17基因的ADAM17-sh RNA在缺氧条件下可以有效沉默人乳腺癌MCF-7细胞ADAM17基因的表达(缺氧sh RNA组2^(-△△CT)=0.55±0.16)。从而导致MCF-7细胞生长速度减慢,细胞增殖能力降低,细胞周期延缓。结论 ADAM17sh RNA和缺氧存在协同作用,共同抑制肿瘤细胞的增殖。

解聚素-金属蛋白酶17在锯齿状结直肠癌中的表达及其意义

目的检测ADAM17在锯齿状结直肠癌组织和正常组织中的表达,初步探讨ADAM17在锯齿状癌变途径中的作用机制。方法回顾性分析2016年4月至2018年4月期间我院行结肠镜或手术所取得的病理标本120例,其中结直肠癌组织60例,正常结直肠黏膜组织60例,采用RT-PCR和免疫组化法检测ADAM17在结直肠癌及正常结直肠黏膜组织中的表达情况,分析ADAM17在结直肠癌组织中的表达和临床病理特征之间的关系。结果在结直肠癌组织中ADAM17表达的阳性率为75.0%(45/60),在正常黏膜组织中ADAM17的阳性率为21.7%(13/60),差异具有统计学意义(P <0.001)。ADAM17主要表达在细胞内和基底外侧质膜上。在正常结肠黏膜中,ADAM 17在隐窝上皮细胞、血管、黏膜肌和固有肌细胞中表达。结直肠癌组织中ADAM17的相对表达量显著高于正常黏膜组织(0.65±0.2和0.29±0.1,P <0.001)。ADAM17在结直肠癌组织中的表达水平与肿瘤浸润深度(P <0.001)、血管侵犯(P=0.001)、淋巴侵犯(P=0.001)、远处转移(P=0.001)相关。结论 ADAM17在结直肠癌中高表达,并与肿瘤的浸润深度、血管侵犯、淋巴转移以及远处转移密切相关。表明ADAM17可能是结直肠癌的一个有前途的治疗靶点和预测性生物标记物。

解聚素-金属蛋白酶在人脑胶质瘤的表达及其临床意义

目的探讨解聚素-金属蛋白酶-17（ADAM17）在人脑胶质瘤的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测人脑胶质瘤组织中ADAM17蛋白的表达，并分析其与胶质瘤恶性程度的关系。结果ADAM17在人脑胶质瘤中表达增多，且随着恶性程度的提高，表达也进一步增多。正常人脑组织中ADAM17呈微量表达（以弱阳性表达为主），人脑胶质瘤组织中ADAM17的表达增强，其中低度恶性组表达以阳性为主[75％（18／24）]，另有1例为强阳性；高度恶性组以强阳性表达为主[82．1％（23／28）]。结论ADAM17在人脑胶质瘤中表达增强，且随着恶性程度的增加，表达也逐渐增强，提示ADAM17可能在胶质瘤的发生、发展中发挥着一定的作用。

解聚素-金属蛋白酶17及表皮生长因子受体在食管鳞状细胞癌中的表达及其意义

目的 探讨解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）与表皮生长因子受体（EGFR）在人食管鳞状细胞癌（ESC）组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系.方法 选择2013年1月至2017年12月合肥市第三人民医院66例ESC患者术后病理组织石蜡标本,采用免疫组织化学法检测66例ESC组织及33例癌旁组织中ADAM17与EGFR蛋白的表达,分析二者与临床病理特征的关系,采用Kendall法分析二者表达的相关性.结果 ESC组织中ADAM17与EGFR蛋白的阳性表达率均高于癌旁组织[68.2％（45/66）比33.3％（11/33）,χ^2=10.874,P=0.001;66.7 ％（44/66）比39.4％（13/33）,χ^2=6.699,P=0.01].ADAM17蛋白、EGFR蛋白的表达与ESC病理TNM分期、浸润深度及有无淋巴结转移有关（χ^2值分别为4.797、4.890、6.089;8.790、8.766、10.154,均P＜0.05）.ADAM17蛋白的表达与EGFR蛋白表达呈正相关（rs=0.368,P＜ 0.05）.结论 ADAM17和EGFR在人ESC组织中呈高表达,且二者在肿瘤发生、发展中存在相互作用.二者联合检测可能有助于ESC转移程度的判断及预后评价.

解聚素-金属蛋白酶17缺失对鼻咽癌细胞活性氧产生及线粒体功能的影响

目的探讨解聚素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloprotease 17,ADAM17)缺失对鼻咽癌细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生及线粒体功能的影响。方法将3组ADAM17基因干扰质粒ADAM17 shRNA及空质粒ADAM17-shRNA-NC转染鼻咽癌细胞株(CNE1),RT-PCR及Western blot法检测干扰效率,选择干扰效果最好的shRNA进行后续试验。CCK-8法检测各组细胞增殖能力;克隆形成试验检测细胞生长情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况和线粒体膜电位变化;荧光显微镜检测细胞线粒体氧化损伤产物ROS水平;丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)试剂盒检测细胞氧化应激标志物MDA和SOD含量;Western blot法检测细胞线粒体损伤标记物Bax/Bcl-2、cleaved-caspase 9/caspase 9、cleaved-caspase 3/caspase 3、c-Myc的表达。结果ADAM17-shRNA2组干扰效果最好。与shRNA-NC组相比,ADAM17-shRNA2组细胞的增殖速率明显下降(t=8.964,P=0.036);形成的集落数明显减小(t=10.351,P=0.014);细胞凋亡数量明显增加(t=11.25,P=0.008);细胞内代表ROS水平的荧光强度明显增强;线粒体膜电位明显下降(t=9.233,P=0.013);SOD含量明显降低(t=7.233,P=0.034),MDA含量明显升高(t=7.415,P=0.038);细胞中Bax/Bcl-2、cleaved-caspase 9/caspase 9、cleaved-caspase 3/caspase 3的水平均明显升高(t分别为8.985、9.021和7.789,P分别为0.023、0.011和0.031),c-Myc蛋白表达水平明显减少(t=10.352,P=0.004)。结论干扰ADAM17基因表达通过促氧化诱导SOD水平下降,MDA水平升高,进而缓解细胞膜的氧化损伤;同时促进细胞线粒体ROS表达水平,降低线粒体膜电位,体外抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

解聚素-金属蛋白酶17-短发卡RNA转染骨髓间充质干细胞对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的探讨解聚素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloteinase 17,ADAM17)-短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用。方法设计4个针对ADAM17以重组慢病毒为载体的shRNA序列(ADAM17-hsa-297,ADAM17-hsa-1508,ADAM17-hsa-1658,ADAM17-hsa-1864)及1个阴性对照(LV10-NC),应用qPCR的方法筛选抑制率最佳的ADAM17-shRNA,实验分为3个组,即转染组、无意义序列组和对照组,按常规步骤提取RNA,进行逆转录以及扩增。用qPCR方法检测混合培养后ADAM17mRNA基因的表达,用MMT法测定人乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力并进行统计学分析。结果对照组、无意义序列组和转染组24 h的吸光度值分别是0.270±0.040、0.250±0.035和0.185±0.080,组间比较差异有统计学意义(F=3.854,P=0.045),对照组与无意义序列组比较差异无统计学意义(P>0.05),对照组与转染组比较差异有统计学意义(P<0.05),无意义序列组与转染组差异无统计学意义(P>0.05);对照组、无意义序列组和转染组48 h的吸光度值分别是0.500±0.057、0.494±0.086和0.311±0.007,组间比较差异有统计学意义(F=19.42,P<0.001),转染组与对照组、无意义序列组比较差异均有统计学意义(P均<0.05),对照组与无意义序列组比较差异无统计学意义(P>0.05);对照组、无意义序列组和转染组72 h的吸光度值分别是0.720±0.150、0.713±0.174和0.558±0.071,组间比较差异无统计学意义(F=2.61,P=0.106)。结论ADAM17-shRNA转染的BMSC可以抑制24 h和48 h人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,同时72 h人乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力有下降趋势。

基质金属蛋白酶研究进展

炎症是众多疾病的共同病理过程,炎症反应的程度与疾病的临床预后息息相关。基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）作为一组蛋白水解酶类,在胚胎的发育、器官的重塑乃至炎症过程中起重要作用。近年来,随着基础研究的不断深入,

亚慢性铝暴露对大鼠脑内视黄酸受体α调节解聚素和金属蛋白酶-10分泌酶的影响

[目的]探索铝对视黄酸受体α(RARα)调节解聚素和金属蛋白酶-10(α-ADAM10)分泌酶机制的影响。[方法]取40只健康雄性SD大鼠,按体质量随机分为4组:溶剂对照(生理盐水)、低剂量组(Al3+0.4 mg/kg·d)、中剂量组(Al3+0.8 mg/kg·d)和高剂量组(Al3+1.2 mg/kg·d),腹腔注射染毒,每连续5 d,休息2 d,共2月。处死大鼠,分别取大脑皮质和海马,保存于-80℃。采用石墨炉原子吸收法检测各组铝含量,Western blot法检测RARα和α-ADAM10分泌酶的表达。[结果]随着染毒剂量的增加,各组大鼠脑皮质、海马中铝的蓄积量均明显上升;与0.0 mg/kg组相比,0.4 mg/kg及以上浓度致α-ADAM10表达明显下降(P<0.05),呈剂量-效应关系;与0.0 mg/kg组相比,0.4 mg/kg及以上浓度致皮质RARα表达呈明显下降趋势(P<0.05)且呈剂量-效应关系,而海马RARα表达仅1.2 mg/kg剂量组明显低于其他组且有统计学差异(P<0.05)。[结论]大鼠经铝亚慢性染毒后,铝可能通过抑制RARα途径,从而进一步使α-ADAM10分泌酶受到抑制,影响其在脑内的表达。

ADAM17-siRNA对MCF-7人乳腺癌细胞增殖的影响

目的利用RNAi使解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)基因沉默,观察AD-AM17 mRNA在人MCF-7乳腺癌细胞中的表达及其对细胞增殖的影响。方法利用脂质体介导ADAM17-siRNA转染MCF-7细胞,采用实时荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)检测ADAM17 mRNA表达的水平;MTT法检测细胞增殖的活性;流式细胞仪检测细胞周期。结果 ADAM17 mRNA在MCF-7细胞中高表达,转染特异性ADAM17-siRNA后,其表达显著被抑制,同时MCF-7细胞增殖能力也明显下降,细胞进入S和G2/M期的比例降低,绝大多数细胞停留在G0/G1期。结论 ADAM17-siRNA可通过脂质体有效转染MCF-7人乳腺癌细胞,转染后的MCF-7细胞增殖能力明显下降,这种作用与阻止癌细胞进入增殖周期有关。

ADAM17与HER-2在乳腺癌中表达的意义及相关性

目的探讨解聚素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17)和原癌基因人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)在乳腺癌中的表达及相关性,探索新的乳腺肿瘤标记物。方法采用免疫组化法检测ADAM17和HER-2在正常乳腺组织及乳腺癌中的表达情况,并分析其表达与临床病理关系。结果 ADAM17和HER-2在正常乳腺组织中的表达以阴性为主,少部分呈弱阳性表达;而在乳腺癌中表达增高,以阳性表达为主,且强阳性占大部分,差异有统计学意义(P<0.05),两者在乳腺癌中的表达存在正相关性。ADAM17与HER-2表达水平与乳腺癌患者的年龄及肿瘤大小无关,而与腋窝淋巴结转移有关。结论 ADAM17和HER-2在乳腺癌中的表达增高,且两者的表达水平均可反映癌细胞的淋巴结转移能力,因此ADAM17可成为一个乳腺癌靶向治疗的新靶点。

ADAM17对前列腺癌细胞TGF-α、EGFR的表达影响

目的探讨前列腺癌DU145细胞中解聚素—金属蛋白酶17(ADAM17)与转化生长因子α(TGF-α)活化的关系。方法培养前列腺癌DU145细胞,将细胞分为对照组、NC组、ADAM17-siRNA组、联合组。ADAM17-siRNA组、联合组均转染ADAM17 siRNA,NC组转染非ADAM17相关的阴性序列siRNA,对照组不转染。联合组转染72 h后加入TGF-α20μg/L干预。待NC组、ADAM17-siRNA组转染72 h后,收集对照组、NC组、ADAM17-siRNA组细胞,采用Western blot法检测ADAM17、表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化EGFR(p EGFR)蛋白表达,采用ELISA法检测TGF-α蛋白水平。取对照组、ADAM17-siRNA组及联合组TGF-α干预15 min后的上清液,采用Western blot法检测EGFR、p EGFR蛋白表达。结果ADAM17-siRNA组ADAM17、p EGFR、TGF-α蛋白均低于对照组及NC组(P均<0.05)。对照组、NC组、ADAM17-siRNA组间EGFR表达差异无统计学意义(P均>0.05)。联合组p EGFR蛋白表达高于对照组及ADAM17-siRNA组(P均<0.05)。对照组、ADAM17-siRNA组、联合组间EGFR蛋白表达差异无统计学意义(P均>0.05)。结论前列腺癌DU145细胞中ADAM17的表达与TGF-α及EGFR有关,ADAM17可能通过活化TGF-α进而激活p EGFR表达。

ADAM17、EGFR和Ki-67在脑胶质瘤中的表达及意义

目的探讨解聚素-金属蛋白酶(ADAM17)、表皮生长因子受体(EGFR)和Ki-67在胶质瘤中的表达及其临床意义。方法选取2010年1月~2013年12月承德医学院附属医院收治的69例患者的手术切除标本,其中脑外伤手术减压的脑组织9例为对照组,I^II级恶性胶质瘤23例为低度恶性组,III^IV级恶性胶质瘤37例为高度恶性组;采用免疫组化法检测ADAM17、EGFR和Ki-67在3组标本中的表达情况,并分析ADAM17、EGFR和Ki-67与脑胶质瘤恶性程度的相关性及三者之间表达的相关性。结果 ADAM17、EGFR和Ki-67在正常对照组中不表达或弱阳性表达,ADAM17、EGFR和Ki-67在低度恶性组中阳性表达率分别为56.5%(13/23)、39.1%(9/23)和26.1%(6/23),ADAM17、EGFR和Ki-67在高度恶性组中阳性表达率分别为94.6%(35/37)、73.0%(27/37)和86.5%(32/37)。随着恶性程度的提高,ADAM17、EGFR和Ki-67的阳性表达率均显著增高(P<0.01)。相关性分析表明ADAM17和EGFR、Ki-67和ADAM17及Ki-67和EGFR之间比较差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论 ADAM17、EGFR和Ki-67与脑胶质瘤的恶性度密切相关,三者联合检测有助于胶质瘤恶性程度分级的判断。

血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平预测急性肺栓塞严重程度及预后的价值

目的探讨血浆信号肽-CUB-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE-1)、A解聚素和金属蛋白酶及血小板反应蛋白基序-9(ADAMTS-9)及血管生成素-2(ANG-2)水平预测急性肺栓塞(APE)严重程度及预后的价值。方法选取收治的APE患者121例,依据CT肺动脉栓塞指数(PAOI)分为轻度组34例(PAOI<30%)、中度组45例(30%≤PAOI≤50%)和重度组42例(PAOI>50%),根据APE患者预后情况分为预后良好组86例和预后不良组35例。采用酶联免疫吸附法测定血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平。应用多元logistic回归分析影响APE预后不良的危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平对APE预后不良的预测价值。采用Pearson相关分析血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平与心功能指标的相关性。结果预后不良组血浆SCUBE-1[(24.63±11.70)ng/mL vs.(10.17±5.12)ng/mL]、ADAMTS-9[(47.50±13.25)ng/mL vs.(24.28±7.63)ng/mL]及ANG-2[(15.38±6.27)ng/mL vs.(4.15±1.52)ng/mL]水平均明显高于预后良好组(P<0.001)。APE患者病情越重,血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平越高,重度组>中度组>轻度组(P<0.001)。多元logistic回归分析显示,PAOI、CRP、cTnI、BNP、D-二聚体、SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平升高是影响APE预后不良的危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2三项联合预测APE预后不良的曲线下面积最大(0.931,95%CI:0.868~0.996),其准确度为88.4%。相关分析显示,APE患者血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平与CRP、cTnI、BNP、D-二聚体及PAOI均呈正相关(P<0.05)。结论血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平升高与APE严重程度和预后不良有关,是APE预后不良的危险因素,三项联合对APE预后不良有较好的预测价值。

转染ADAM17-shRNA的骨髓间充质干细胞对MCF-7乳腺癌细胞增殖能力的影响

目的探讨解聚素-金属蛋白酶17-shRNA(ADAM17-shRNA)转染的SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)与MCF-7共培养后,对MCF-7人乳腺癌细胞增殖能力的影响。方法体外培养SD大鼠的BMSC,将实验分为3组,转染组:转染ADAM17-shRNA的BMSC与MCF-7细胞共培养。无意义序列组:转染空载体的BMSC与MCF-7细胞共培养;对照组:BMSC与MCF-7细胞共培养;利用激光共聚焦检测慢病毒Lentivirus-ADAM17-shRNA-RFP介导的RFP在BMSC中的表达情况,利用Western blot方法定量检测ADAM17蛋白的表达情况,用MTT法检测MCF-7的增殖能力。结果无意义序列组与对照组ADAM17蛋白的表达水平差异无统计学意义(P>0.05);转染组ADAM17蛋白的表达水平明显低于对照组及无意义序列组,差异有统计学意义(P<0.05)。无意义序列组的MCF-7细胞增殖率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);转染组的MCF-7细胞增殖率明显低于无意义序列组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ADAM17-shRNA转染的SD大鼠BMSC对MCF-7人乳腺癌细胞的增殖能力有显著的抑制作用,为后续以BMSC为载体,利用shRNA靶向抑制ADAM17的动物实验提供进一步的理论基础和实验依据。

ADAM17-shRNA转染的骨髓间充质干细胞对裸鼠乳腺癌移植瘤生长的影响

目的:探讨转染解聚素-金属蛋白酶17-shRNA(a disintegrin and metalloprotease 17-shRNA,ADAM17-shRNA)的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenehymal stem cells,BMMSC)对乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤的抑制效果。方法:全骨髓贴壁法分离并培养3周雄性SD大鼠的BMMSC,利用慢病毒介导的ADAM17-shRNA转染BMMSC。30只裸鼠建立MCF-7乳腺癌移植瘤模型,种植肿瘤细胞14 d后建模成功。按照数字表法随机分成对照组(注射等量PBS)、BMMSC组(注射1×10~6/ml BMMSC)和转染组(注射1×10~6/ml转染ADAM17-shRNA的BMMSC),每组10只。在种植细胞第15天开始经尾静脉注射BMMSC进行抑瘤实验(0.1 ml/只,每3 d给药1次,共计5次),观察裸小鼠移植瘤的生长情况;抑瘤实验16 d后处死裸鼠。利用Real-time PCR法检测移植瘤组织ADAM17 mRNA表达,Western blotting法检测移植瘤组织ADAM17蛋白表达。结果:抑瘤实验16 d时,对照组、BMMSC组移植瘤体积明显高于转染组[(787.15±25.95)、(767.02±28.98)vs(361.89±19.75)mm^3,均P<0.01];BMMSC组、转染组抑瘤率明显高于对照组(2.57%、53.89%vs 0.00%,均P<0.05)。对照组、BMMSC组ADAM17 mRNA的表达水平明显高于转染组(1.00±0.01、0.97±0.08 vs 0.30±0.09,均P<0.05);对照组、BMMSC组ADAM17蛋白表达水平明显高于转染组(0.70±0.09、0.68±0.02 vs 0.45±0.05,均P<0.05)。结论:ADAM17-shRNA通过BMMSC介导可将ADAM17靶向归巢至裸鼠乳腺癌移植瘤并发挥抑瘤作用。