低温淀粉酶菌种分离纯化与发酵生产研究

通过对滨州黄河三角洲地区的样品中微生物的采集,经过选择性培养基分离获得了4株产葡萄糖淀粉酶较高的菌株:Bz11、Bz25、Bz38、Bz73,其在20℃可以产生较高活性的淀粉酶,与报道菌株降低10℃左右,经过复筛最终选择产酶相对较高的Bz38作为研究对象,通过平板菌落观察、显微镜细胞观察,碳源发酵与同化试验、26Sr DNA分子生物学鉴定,最终确定Bz38为解脂亚罗酵母菌(Yarrowia lipolytica)。在掌握菌株生长规律的基础上,选择碳源(葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇)、氮源(牛肉膏、酵母膏、蛋白胨、尿素、酪蛋白胨、硫酸铵)单因子、菌株淀粉酶活达到960 U/m L,为全面应用葡萄糖淀粉酶奠定了坚实的力量基础,也极大的丰富了本地区对微生物种质资源的开发和利用。

蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶的表面展示及酶学性质分析(英文)

【目的】蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶催化1分子蔗糖上的果糖基转移到另一个蔗糖分子上,形成1-蔗果三糖和葡萄糖。在低聚果糖中,1-蔗果三糖益生素活性最高。本研究将该酶展示在酵母菌细胞表面上,并用于1-蔗果三糖的制备。【方法】将来自莴苣的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶基因克隆到用于酵母细胞表面展示的表达载体上,并在解脂亚罗酵母菌中进行异源表达,表达的酶展示在该细胞表面上,然后以蔗糖为底物,研究表面展示的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶的性质。【结果】免疫荧光实验结果表明蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶已展示在酵母菌的细胞表面上,高效液相色谱结果表明酵母表面展示的该酶具有转移酶的催化活性。该酶的最适作用温度、最适作用p H分别为45°C和7.5;该酶的催化活性受Zn2+和Cu2+的抑制,受Ca2+激活;该酶重复使用7次后,酶活下降50%。表面展示的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶和3%蔗糖混合后在40°C条件下孵育30 min后,所产1-蔗果三糖含量最高为20.8 mmol/L。【结论】蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶在解脂亚罗酵母菌中得到成功表达,并展示在其细胞表面上,生化研究表明该重组蛋白具有果糖基转移酶活性,且催化蔗果三糖的生成。表面展示的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶作为一种全细胞催化剂能够用于1-蔗果三糖的制备。