微波辐射条件下米糠中解脂酶活性的研究

以新鲜米糠为原料,研究了微波辐射对米糠中解脂酶活性的影响。实验结果表明,微波辐射具有很好的降低米糠中解脂酶活性的作用,并随着微波功率的增大,辐射时间的延长,解脂酶活性变得更低。实验条件下,微波处理250g米糠的最佳条件为:高火处理,辐射时间为8min,物料含水12%～14%。经过处理,米糠可安全贮藏一个月,米糠油酸值增加值小于25mgKOH/g。

烟色红曲霉耐热解脂酶的形成及特性

烟色红曲霉(Monacus fulginosus)M-101菌株经麦麸固态培养生成耐热脂肪酶和酯酶。产酶的适宜条件为:培养温度30℃,初始pH 3.0—3.5,麸曲初始含水量75％。培养4—5天后,脂肪酶活力可达207u/g,酯酶活力达14.6u/g。粗酶试验表明,脂肪酶和酯酶的最适反应温度为50℃,脂肪酶最适反应pH为6.0。酯酶最适反应pH为6.8。酯酶耐热性略高于脂肪酶,在55℃处理1小时和45℃处理24小时,两种酶活力基本不变。

不同金属离子对米糠解脂酶活性影响的研究

实验用CaCl2溶液从脱脂米糠中提取解脂酶,经(NH4)2SO4沉淀后,获得粗酶。用分光光度法测定了六种不同的金属离子对酶活力的影响,实验结果表明,在浓度为0.01mol/L时,Zn2+、Fe2+、Mg2+等金属离子对米糠解脂酶起激活作用,Ca2+、Ba2+、Cu2+等离子对酶活性起抑制作用。当离子浓度在0.001mol/L到0.1mol/L之间变化时,随着离子浓度的增加,Ca2+、Ba2+、Cu2+三种金属离子会使酶的活性逐渐降低;而Zn2+、Fe2+、Mg2+三种金属离子浓度在0.001~0.02mol/L的变化范围内,酶活性随着离子浓度的升高而逐渐升高,在0.02~0.1mol/L的变化范围内,酶活性随着离子浓度的升高而逐渐降低。

利用解脂酶减少纸浆厂生产中的树脂障碍

利用解脂酶减少纸浆厂生产中的树脂障碍沉积在纸机抄纸网或热风气翼上的树脂将会降低产品质量，并有损于生产工艺流程。减少树脂的形成的任一种方法可避免停机和降低生产成本。在未加工处理的木材中，树脂是在薄壁细胞里和纤维表面上。树脂的成份决定了树脂沉积的数量，并...

黄瓜CsGDSL脂解酶基因的克隆与表达分析

GDSL脂解酶是影响角质层发育的重要基因,克隆黄瓜GDSL脂解酶基因,并分析其表达模式,旨在为黄瓜角质层发育及黄瓜果实光泽的研究奠定基础。根据黄瓜基因组数据库中的参考序列,对黄瓜GDSL脂解酶基因进行克隆,并进行生物信息学分析。利用qRT-PCR技术明确该基因在黄瓜各组织部位中的表达情况。以6份光泽性不同的黄瓜为材料,对该基因序列进行克隆,以明确该基因在不同光泽性黄瓜中的作用。对黄瓜GDSL脂解酶基因启动子进行克隆并分析其作用元件。参照黄瓜基因组数据库设计扩增引物进行PCR扩增,获得CsGDSL基因,CDS长度1059 bp,编码352个氨基酸,二级结构以无规卷曲(45.45%)与α-螺旋(33.24%)为主;该基因在进化过程中较为保守,与甜瓜CmGDSL亲缘关系最为紧密;在黄瓜花后3 d的子房中表达量较开花0 d的子房高;在6个品种中CsGDSL基因CDS序列保守;CsGDSL基因与逆境胁迫、激素及光等具有响应。获得了CsGDSL脂解酶基因,明确了其在黄瓜不同组织部位中的表达情况,该基因在不同材料中较为保守,由此推测,黄瓜CsGDSL可能影响黄瓜果皮光泽。

金属离子对米糠解脂酶活性影响的研究

实验用CaCl2溶液从脱脂米糠中提取解脂酶,经(NH4)2SO4沉淀后,获得粗酶。用分光光度法测定了6种不同的金属离子对酶活力的影响,实验结果表明,在浓度为0.01mol/L时,Zn2+、Fe2+、Mg2+等金属离子对米糠解脂酶起激活作用,Ca2+、Ba2+、Cu2+等离子对酶活性起抑制作用。当离子浓度在0.001mol/L到0.1mol/L之间变化时,随着离子浓度的增加,Ca2+、Ba2+、Cu2+3种金属离子会使酶的活性逐渐降低;而Zn2+、Fe2+、Mg2+3种金属离子浓度在0.001～0.02mol/L的变化范围内,酶活性随着离子浓度的升高而逐渐升高,在0.02～0.1mol/L的变化范围内,酶活性随着离子浓度的升高而逐渐降低。

Leptin对猪原代脂肪细胞脂解及其关键脂酶mRNA表达的影响

Leptin是由脂肪组织分泌的内源因子,在调节机体能量平衡过程中起重要作用。Leptin促进脂解的研究由来已久,但其作用机理尚不完善。本研究旨在通过系统检测关键脂酶mRNA的表达变化来探讨Leptin促进脂解的分子机理。运用形态学观察、油红O染色和RT-PCR鉴定培养的猪原代脂肪细胞;甘油测定试剂盒和游离脂肪酸(FFA)测定试剂盒分别检测甘油和FFA的释放;半定量RT-PCR检测关键脂酶mRNA的表达。结果显示:100nmol/L的Leptin可显著上调ATGL、TGH-2、HSL、MGL和LPLmRNA的表达(P<0.01),但同时下调PerilipinmRNA的表达(P<0.01);Leptin呈浓度依赖性促进甘油的释放(P<0.01),但对FFA的释放影响不显著(P>0.05)。以上结果提示,Leptin可能主要通过上调ATGL、MGL、LPL和下调Perilipin的表达促进猪原代脂肪细胞的脂解;同时推测,FFA释放的相对稳定可能是由Leptin通过上调UCPs的表达而增加FFA的消耗引起的。

UHT乳中脂解酶活性的测定

UHT处理不能完全钝化乳中的脂解酶 ,分解乳及乳制品中的脂肪 ,从而产生酸败并减弱产品的乳香味。采用琼脂糖扩散法对UHT乳中的脂解酶活性进行测定 ,发现酶活性大小随产品贮存时间的延长呈现无规律性变化 。

水稻种子中脂解酶活性的初步研究

以粳稻Ｈ１２９为材料，对稻米的脂解酶进行了研究。水稻脂解酶主要位于胚芽及盾片部分，它含有数种性质不同的同功酶；灭菌与不灭菌水稻脂解酶活性的变化曲线不一致；与前人的研究结论相反，我们在未萌发或休眠的米糠部分未检测出脂解酶活性。

茶树脂氢过氧化物裂解酶基因CsiHPL1的克隆及表达

根据茶树基因CsiHPL1的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR方法从茶树品种龙井43'中克隆了CsiHPL1序列,并分析了CsiHPL1在生物和非生物胁迫下的诱导表达情况及亚细胞定位。结果表明,CsiHPL1包含一个1 476 bp的最大开放阅读框,编码491个氨基酸,预测为13-HPL基因。Real-Time PCR分析结果表明,CsiHPL1的表达受到茶尺蠖取食、机械损伤和茉莉酸的诱导;构建了CsiHPL1与绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组表达载体,经农杆菌瞬时转化烟草叶片,利用激光共聚焦显微镜在叶绿体中观察到GFP荧光,表明CsiHPL1编码的蛋白质为叶绿体蛋白质。

脂氢过氧化物裂解酶基因对生菜遗传转化的研究

枸橘(Ponarus trifoliata)是一类含植物气味成分较高的植物。从枸橘中分离气味物质合成的关键基因—脂氢过氧化物裂解酶(hydroperoxide lyase,HPL)基因,并构建35S启动子驱动下的表达载体,通过农杆菌介导的方法将其导入生菜中,经PCR和Southern杂交检测。结果显示:有数十个阳性植株,且经RT-PCR和Northern杂交鉴定HPL基因可在生菜中正常转录。

油茶脂氢过氧化物裂解酶基因的克隆与序列分析

以油茶近成熟种子为材料,根据油茶EST文库中已知的脂氢过氧化物裂解酶EST序列,利用3’RACE与5’RACE技术,克隆到脂氢过氧化物裂解酶的全长cDNA序列。该基因全长1648bp,,包含一个1476bp开放阅读框长,编码491个氨基酸,5’与3’非编码分别为52bp、121bp。预测该蛋白相对分子量为54.7779KDa,等电点为6.77,是个叶绿体转运肽,N端包含有22个疏水氨基酸残基组成的序列,不仅具有转运肽富含的丝氨酸,还含有大量转运肽中很少存在的脯氨酸。多序列比对发现油茶脂氢过氧化物裂解酶核苷酸序列与茶的相似性达到96%,因此将该基因命名coHPL。

玳玳花瓣脂氢过氧化物裂解酶基因cDNA的克隆及原核表达

以玳玳花瓣为材料,采用RT-PCR和RACE技术,克隆了玳玳HPL基因cDNA全长,全长为1 776 bp,其中包含52 bp的5′非编码区,224 bp的3′非编码区,1 500 bp的编码区(编码499个氨基酸,分子量为55.7 ku)。将该HPL基因cDNA编码区的核苷酸序列及所推导的氨基酸序列与其他植物的HPL基因cDNA序列进行比较,推断玳玳花瓣HPL属于13-HPL类。通过PCR扩增得到了玳玳HPL基因组全长。测序结果显示玳玳HPL基因中包含1个长2 374 bp的内含子。将分离出来的玳玳HPL基因cDNA的编码区序列插入pET-15b载体上构建原核表达载体,在细菌BL21细胞中进行原核表达。结果表明:该编码区片段可在原核细胞中大量表达,其表达产物分子量大小约为55 ku,与13-HPL蛋白的分子量55.7 ku相符。本研究为下一步利用HPL基因cDNA进行遗传转化研究奠定基础,将为花卉香味的遗传改良提供一条新途径。

植物的脂氢过氧化物裂解酶

介绍植物脂氢过氧化物裂解酶(HPL)的生化性质以及相关的分子生物学特性和生理功能的研究进展,并对其在植物遗传改良中的应用前景作了评述。

棉花种子碱性脂解酶的特性

通过对棉花种子脂解酶特性的研究,发现棉花种子脂解酶有显著的碱性特性,不能水解甘油棕榈酸三酯,并具有较好的稳定性。它在耐热性、对金属离子及去污剂等的反应上与其它脂解酶基本相似。

海藻酸钠明胶及戊二醛协同固定化苋菜脂氢过氧化物裂解酶

采用海藻酸钠明胶协同包埋、同时使用戊二醛交联制备固定化苋菜脂氢过氧化物裂解酶,考察了海藻酸钠、明胶浓度、CaCl2浓度、交联剂戊二醛浓度及交联时间等因素对固定化脂氢过氧化物裂解酶的影响;比较了固定化酶与游离酶的酶学性质。结果表明,制备固定化脂氢过氧化物裂解酶的最优条件为:海藻酸钠、明胶浓度分别为1.25%和0.5%,CaCl2浓度为8%,戊二醛浓度为1%,交联时间为20 min。固定化酶的最适温度、最适pH略有提高;温度稳定性、pH稳定性及贮藏稳定性显著提高。

脂解酶

本文综述了脂解酶(只述及水解脂肪酸甘油酯所需的酶)的来源、生产(包括菌种的选择、培养基和培养条件的确定及酶的分离精制)及其性质。

马铃薯脂氢过氧化物裂解酶cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),以马铃薯幼叶总RNA为模板,扩增出1443bp的脂氢过氧化物裂解酶(HPL)cDNA(GenBank登录号GQ281583),将该基因片段克隆到表达载体PET-22b(+)上并转化到E.coliBL21(DE3),得到重组菌E.coliBL21(PET-22b-HPL),以0.5mmol/LIPTG诱导该重组菌过量表达目的蛋白(HPL),SDS-PAGE显示,重组HPL分子量为54ku。经紫外分光光度法检测,重组HPL的比酶活约为0.12U/mL。

米糠中脂酶酶学性质的研究

米糠是一种巨大的可再生利用的资源。但米糠在贮运 ,制油过程中很容易酸败 ,导致品质变劣 ,主要是由于米糠中含有极其活泼的解脂酶。用CaCl2 溶液从脱脂米糠中提取解脂酶 ,经 (NH4 ) 2 SO4 沉淀后 ,获得粗酶 ,用分光光度法测定其活力。解脂酶的酶学性质研究结果表明 :该酶的最适作用温度约为 35℃左右 ,最适pH值为 7.5～ 8.0。脂酶在温度低于 4 0℃ ,pH值为 5～ 9时稳定 ,在 70℃处理 60min或 80℃处理30min后基本完全失活 ;