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一种贻贝酰胺酶型肽聚糖识别蛋白的分子特征及功能分析
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作者 阳宗欣 王昊东 +6 位作者 何志巧 肖文慧 杨子霖 张晓林 何建瑜 严小军 廖智 《水生生物学报》 北大核心 2025年第2期116-128,共13页
从厚壳贻贝(Mytilus coruscus)鳃组织中鉴定到一种新型贻贝肽聚糖识别蛋白(Peptidoglycan recognition protein,PGRP)分子,为探讨其在贻贝先天免疫系统中的作用,对其开展了序列分析,表达模式,亚细胞定位,原核重组表达及表达产物的功能... 从厚壳贻贝(Mytilus coruscus)鳃组织中鉴定到一种新型贻贝肽聚糖识别蛋白(Peptidoglycan recognition protein,PGRP)分子,为探讨其在贻贝先天免疫系统中的作用,对其开展了序列分析,表达模式,亚细胞定位,原核重组表达及表达产物的功能验证研究。研究结果表明,厚壳贻贝新型PGRP由438个氨基酸残基组成。序列中含典型肽聚糖识别蛋白/酰胺酶(PGRP/Amidase)结构域,属于酰胺酶型PGRP。该蛋白在厚壳贻贝各组织中呈组成型表达特征。微生物胁迫可明显上调PGRP表达量,其响应速度和表达量上调幅度对不同微生物胁迫具有差异。利用原核重组表达技术成功表达出可溶性重组厚壳贻贝PGRP。对表达产物的功能验证结果表明,重组厚壳贻贝PGRP蛋白表现出明显的抑菌活性、细菌凝集活性和对PGN的酰胺酶活性,上述活性均具有锌离子依赖性。亚细胞定位分析结果表明,该PGRP分子主要定位于细胞核内。上述结果为深入了解厚壳贻贝的免疫识别机制奠定了基础。 展开更多
关键词 肽聚糖识别蛋白 荧光定量PCR 原核重组表达 免疫 厚壳贻贝
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Holliday交叉识别蛋白是肾透明细胞癌的潜在预测和预后生物标记物
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作者 张华华 拓庆银 +1 位作者 冯芸 韩继明 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2347-2358,共12页
目的探讨Holliday交叉识别蛋白(HJURP)在肿瘤发生、进展及免疫治疗中的作用。方法采用TCGA、GTEx、SangerBox和TIMER 2.0数据库等生物信息学方法分析HJURP在各类癌症中的表达水平及其与预后、临床分期和免疫细胞浸润的关联。利用LinkedO... 目的探讨Holliday交叉识别蛋白(HJURP)在肿瘤发生、进展及免疫治疗中的作用。方法采用TCGA、GTEx、SangerBox和TIMER 2.0数据库等生物信息学方法分析HJURP在各类癌症中的表达水平及其与预后、临床分期和免疫细胞浸润的关联。利用LinkedOmics数据库分析肾透明细胞癌(KIRC)中HJURP的相关基因及其潜在功能。通过免疫组织化学分析、Western blotting和qRT-PCR实验验证HJURP在KIRC中的表达,并设计靶向HJURP的小干扰RNA,评估其对KIRC细胞增殖、迁移能力的影响。结果HJURP在包含KIRC的26种肿瘤组织中表达升高(P<0.05),且与包括KIRC的5种肿瘤患者的预后呈负相关(P<0.05)。HJURP的表达水平与肿瘤的临床分期及免疫细胞浸润密切相关。在KIRC中,HJURP表达升高(P<0.0001),且与TNM分期(P<0.05)、Stage分期(P<0.01)及免疫细胞浸润呈正相关。基因本体论功能分析结果显示:HJURP在生物学过程中主要富集于生物调节和代谢过程等;在细胞组分方面主要富集于细胞膜与细胞核等;在分子功能方面主要富集于蛋白质结合和离子结合等。组织和细胞水平实验显示,HJURP在KIRC中高表达(P<0.001),且沉默HJURP抑制KIRC细胞的增殖与迁移(P<0.01)。结论HJURP可作为KIRC预后和免疫治疗的预测因子,并在KIRC细胞的恶性行为中发挥促进作用。 展开更多
关键词 Holliday交叉识别蛋白 泛癌 肾透明细胞癌 增殖 迁移
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沙田柚自交花柱中识别蛋白的免疫金定位 被引量:15
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作者 薛妙男 李义平 +1 位作者 张杏辉 杨继华 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期59-61,共3页
应用免疫金标记抗体技术检测了沙田柚自花授粉后 1~ 3d花柱 1/2处通道细胞中识别蛋白定位分布 ,表明金颗粒依次定位于内质网 ,高尔基体、纤维壁 ,证实沙田柚花柱1/2处通道细胞中金颗粒分布的变化与花粉管在花柱中生长受阻位点和时间一... 应用免疫金标记抗体技术检测了沙田柚自花授粉后 1~ 3d花柱 1/2处通道细胞中识别蛋白定位分布 ,表明金颗粒依次定位于内质网 ,高尔基体、纤维壁 ,证实沙田柚花柱1/2处通道细胞中金颗粒分布的变化与花粉管在花柱中生长受阻位点和时间一致。 1/2花柱通道细胞纤维壁上的糖蛋白是沙田柚不亲和反应的识别位点。 展开更多
关键词 柑桔类 沙田柚 自交不亲和 花柱 识别蛋白 免疫金标记
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昆虫先天免疫的肽聚糖识别蛋白的研究进展 被引量:6
4
作者 许平震 张美蓉 +2 位作者 钱平 吴阳春 张国政 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第23期13962-13964,13968,共4页
先天免疫系统的激活是通过一系列高度保守的模式识别受体识别病原体相关分子模式。肽聚糖识别蛋白家族是重要的模式识别受体,从昆虫到人类均高度保守,可识别肽聚糖和含肽聚糖的细菌,在先天免疫和获得性免疫应答中发挥重要的识别和调节... 先天免疫系统的激活是通过一系列高度保守的模式识别受体识别病原体相关分子模式。肽聚糖识别蛋白家族是重要的模式识别受体,从昆虫到人类均高度保守,可识别肽聚糖和含肽聚糖的细菌,在先天免疫和获得性免疫应答中发挥重要的识别和调节功能。 展开更多
关键词 先天免疫 肽聚糖 肽聚糖识别蛋白 模式识别受体蛋白
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肽聚糖识别蛋白研究进展 被引量:7
5
作者 韦嵩 宋晓玲 +1 位作者 李赟 李海兵 《动物医学进展》 CSCD 2007年第1期61-64,共4页
肽聚糖识别蛋白(PGRPs)是一类可识别肽聚糖和含肽聚糖的细菌的模式识别受体,在天然免疫应答中发挥着重要的识别和调节功能。机体通过有限的模式识别受体迅速识别大量不同的病原微生物,进行及时有效的初步防御。近年来,学者们对昆虫和哺... 肽聚糖识别蛋白(PGRPs)是一类可识别肽聚糖和含肽聚糖的细菌的模式识别受体,在天然免疫应答中发挥着重要的识别和调节功能。机体通过有限的模式识别受体迅速识别大量不同的病原微生物,进行及时有效的初步防御。近年来,学者们对昆虫和哺乳动物PGRPs已有一定程度的研究,成功地克隆出多个PGRPs基因。对肽聚糖识别蛋白的认识,揭开了天然免疫系统研究的新篇章,对于了解整个免疫系统的反应机制有重要意义。文章就PGRPs基因、结构、表达、功能及进化等方面做了简述。 展开更多
关键词 肽聚糖识别蛋白 基因 表达 功能 进化
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非洲爪蟾短型肽聚糖识别蛋白基因的克隆与鉴定 被引量:3
6
作者 齐志涛 高谦 +2 位作者 黄贝 昌鸣先 聂品 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期922-926,共5页
采用生物信息学方法首次对非洲爪蟾短型肽聚糖识别蛋白(xePGRP-S)基因进行了克隆,并对其在胚胎发育和成年爪蟾各组织中的表达状况进行了分析。xePGRP-ScDNA全长720bp,开放阅读框为549bp,编码182个氨基酸。序列比对显示xePGRP-S与其他物... 采用生物信息学方法首次对非洲爪蟾短型肽聚糖识别蛋白(xePGRP-S)基因进行了克隆,并对其在胚胎发育和成年爪蟾各组织中的表达状况进行了分析。xePGRP-ScDNA全长720bp,开放阅读框为549bp,编码182个氨基酸。序列比对显示xePGRP-S与其他物种PGRP-S的序列相似性在42.4%—50.5%之间。RT-PCR显示在非洲爪蟾胚胎发育至3d时可以明显检测到xePGRP-S的表达,之后呈持续性表达,且在所检测的心、肝、脾、肺、肾、肠和胃这7种组织器官中呈组成型表达。 展开更多
关键词 非洲爪蟾 肽聚糖识别蛋白 克隆 同源性 组织表达
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鲍配子识别蛋白的研究 被引量:4
7
作者 刘慧慧 李太武 +1 位作者 苏秀榕 黄滨 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期104-109,共6页
配子相互作用的生化机制对于进一步阐明生殖过程具有重要作用 ,它是深入了解细胞内识别的理想体系。精卵细胞相互作用包括一系列的步骤 ,开始于精子与卵细胞外被的接触 ,终止于两性细胞的融合及精子核进入卵细胞质中 ,而精卵细胞的识别... 配子相互作用的生化机制对于进一步阐明生殖过程具有重要作用 ,它是深入了解细胞内识别的理想体系。精卵细胞相互作用包括一系列的步骤 ,开始于精子与卵细胞外被的接触 ,终止于两性细胞的融合及精子核进入卵细胞质中 ,而精卵细胞的识别具有建立于各自性细胞表面成分基础上的种的特异性 ,鲍则是研究精卵识别的好材料。鲍精子在发生顶体反应时释放出两种蛋白质———细胞溶素 (lysin)和 1 8ku糖蛋白 (sp1 8) ,其中的细胞溶素与其卵黄膜上的受体紧密结合 ,并利用非酶反应在卵黄膜上穿一个小孔 ,整个精子则从此孔穿过卵黄膜与卵细胞融合 ;sp1 8释放后则覆盖到精子细胞膜表面 ,起到溶解卵细胞脂质体的作用 ,即sp1 8介导精、卵细胞膜的融合。鲍卵细胞膜上存在细胞溶素受体 ,它是大的不分支的糖蛋白分子 ,占据了卵黄膜 3 0 %的组分 ,可以专一性地与细胞溶素相结合。这些配子识别蛋白共同进化且速度很快 ,其中细胞溶素和 1 8ku糖蛋白通过正向选择进化 ,而细胞溶素受体进行协同进化。 展开更多
关键词 配子 识别蛋白 杂交机理
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无脊椎动物模式识别蛋白研究进展 被引量:8
8
作者 梁虹 王安利 王维娜 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期156-159,共4页
对非己的识别是免疫反应的第一步,模式识别蛋白与微生物表面分子模式的识别和结合触发一系列免疫反应,包括吞噬、包裹和酚氧化酶原级联等。本文就脂多糖结合蛋白、肽聚糖结合蛋白、-β1,3-葡聚糖结合蛋白、脂多糖葡聚糖结合蛋白和血素... 对非己的识别是免疫反应的第一步,模式识别蛋白与微生物表面分子模式的识别和结合触发一系列免疫反应,包括吞噬、包裹和酚氧化酶原级联等。本文就脂多糖结合蛋白、肽聚糖结合蛋白、-β1,3-葡聚糖结合蛋白、脂多糖葡聚糖结合蛋白和血素等五种模式识别蛋白的结构、免疫功能和作用机制进行了综述。 展开更多
关键词 模式识别蛋白 无脊椎动物 免疫调节
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昆虫肽聚糖识别蛋白研究进展 被引量:8
9
作者 陈康康 吕志强 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期969-978,共10页
在脊椎动物和非脊椎动物中,识别非己是天生免疫反应中的第一步。肽聚糖是细菌细胞壁的必需成分,属于进化上保守的微生物表面病原相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP),可以被模式识别蛋白(pattern recognition pro... 在脊椎动物和非脊椎动物中,识别非己是天生免疫反应中的第一步。肽聚糖是细菌细胞壁的必需成分,属于进化上保守的微生物表面病原相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP),可以被模式识别蛋白(pattern recognition proteins,PRRs)如肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)识别。在昆虫的天生免疫系统中,有些PGRPs能够利用细菌独有的肽聚糖识别入侵细菌,并将细菌入侵信号传递给下游的抗菌肽(antimicrobial peptide,AMP)合成途径,启动抗菌肽基因的转录及合成;PGRPs对肽聚糖的识别也会启动酚氧化酶原途径的激活,引起黑化反应。有些具有酰胺酶活性的PGRPs可以促进吞噬作用;有些可以抑制抗菌肽合成以减弱过度免疫反应带来的损伤。还有一些PGRPs作为效应因子直接作用于细菌将细菌杀死。本文主要从昆虫PGRPs作为识别受体(recognition receptor)、调节子(regulator)和效应因子(effector)3个方面进行了综述,并分析了目前PGRPs研究中仍不清楚的问题和未来研究的方向。 展开更多
关键词 昆虫 天生免疫 肽聚糖 病原相关分子模式 肽聚糖识别蛋白
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肽聚糖识别蛋白 被引量:7
10
作者 吕成伟 陈政良 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第B06期88-90,共3页
天然免疫系统通过一系列高度保守的模式识别受体识别病原体相关分子模式。肽聚糖识别蛋白家族是重要的模式识别受体 ,从昆虫到人类均高度保守 ,可识别肽聚糖和含肽聚糖的细菌 ,在天然免疫和获得性免疫应答中发挥重要的识别和调节功能。
关键词 肽聚糖识别蛋白 天然免疫 模式识别受体
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黄粉虫β-1,3-葡聚糖识别蛋白的分离纯化及部分生物学功能 被引量:3
11
作者 张嵘 张景海 +2 位作者 LEE Bok Luel 赵明沂 王金春 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期27-32,共6页
采用中性盐沉淀、凝胶层析等常规方法纯化黄粉虫Tenebrio molitor血淋巴中的β-1,3-葡聚糖识别蛋白,并对其在酚氧化酶原激活系统中的作用进行了初步的研究。结果表明:黄粉虫血淋巴的β-1,3-葡聚糖识别蛋白的分子量约为70kDa,主要分布于... 采用中性盐沉淀、凝胶层析等常规方法纯化黄粉虫Tenebrio molitor血淋巴中的β-1,3-葡聚糖识别蛋白,并对其在酚氧化酶原激活系统中的作用进行了初步的研究。结果表明:黄粉虫血淋巴的β-1,3-葡聚糖识别蛋白的分子量约为70kDa,主要分布于血浆中。纯化的β-1,3-葡聚糖识别蛋白只能特异性地识别β-1,3-葡聚糖而不能识别肽聚糖。在β-1,3-葡聚糖所诱导的酚氧化酶原的激活过程中,随着酚氧化酶原激活程度的提高,内源性β-1,3-葡聚糖识别蛋白的含量逐渐减少。抗β-1,3-葡聚糖识别蛋白多克隆抗体对黄粉虫血淋巴中由β-1,3-葡聚糖所诱导的酚氧化酶活性起抑制作用,且该抑制作用呈现一种剂量依赖性的趋势。上述结果有助于深入了解β-1,3-葡聚糖对黄粉虫血淋巴酚氧化酶原激活系统的激活作用。 展开更多
关键词 黄粉虫 β-1 3-葡聚糖识别蛋白 分离纯化 生物学功能 酚氧化酶原激活系统 先天性免疫
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哺乳动物肽聚糖识别蛋白抗菌作用及其机制的研究进展 被引量:2
12
作者 郭睿 王银 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期236-240,共5页
哺乳动物肽聚糖识别蛋白(PGRPs)是一类可识别肽聚糖的免疫激活分子,具有抗菌活性。它的抗菌机制与其他抗菌肽明显不同。最新研究发现,哺乳动物PGRPs通过与肽聚糖结合,激活在细菌中识别胞浆外错误折叠蛋白质分子的CssR-CssS或CpxA-CpxR... 哺乳动物肽聚糖识别蛋白(PGRPs)是一类可识别肽聚糖的免疫激活分子,具有抗菌活性。它的抗菌机制与其他抗菌肽明显不同。最新研究发现,哺乳动物PGRPs通过与肽聚糖结合,激活在细菌中识别胞浆外错误折叠蛋白质分子的CssR-CssS或CpxA-CpxR双部件系统,最终导至细菌死亡。文中总结了肽聚糖识别蛋白的抗菌作用及其机制的相关研究进展。 展开更多
关键词 肽聚糖识别蛋白 杀菌 CssR-CssS
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先天免疫系统中肽聚糖识别蛋白研究进展 被引量:2
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作者 徐鑫 刘忠渊 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第10期94-98,共5页
先天免疫系统是机体最原始的抵御外源病原体侵染的防护机制,普遍存在于脊椎动物与无脊椎动物体内。肽聚糖识别蛋白(PGRPs)是一类可识别肽聚糖和含肽聚糖的细菌的模式识别受体,在先天免疫应答中发挥着重要的识别和调节功能。对肽聚糖识... 先天免疫系统是机体最原始的抵御外源病原体侵染的防护机制,普遍存在于脊椎动物与无脊椎动物体内。肽聚糖识别蛋白(PGRPs)是一类可识别肽聚糖和含肽聚糖的细菌的模式识别受体,在先天免疫应答中发挥着重要的识别和调节功能。对肽聚糖识别蛋白的认识,对于了解先天免疫系统的反应机制有重要意义。论文根据近年来的研究进展对先天免疫系统中PGRPs的结构、功能、信号通路以及PGRPs与肽聚糖的相互作用进行了综述。 展开更多
关键词 先天免疫 肽聚糖识别蛋白 信号通路 免疫耐受
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鲍配子识别蛋白的进化 被引量:1
14
作者 刘慧慧 李太武 苏秀榕 《浙江海洋学院学报(自然科学版)》 CAS 2004年第2期140-143,共4页
在鲍的繁殖过程中,配子的识别表现出种的特异性,精子顶体泡内的细胞溶素(lysin)可以专一性地在卵黄膜上钻一个孔,精子便从此孔进入与卵细胞相互融合,完成受精。Lysin通过正向选择定律快速进化,而卵膜上的细胞溶素受体(VERL)为lysin的分... 在鲍的繁殖过程中,配子的识别表现出种的特异性,精子顶体泡内的细胞溶素(lysin)可以专一性地在卵黄膜上钻一个孔,精子便从此孔进入与卵细胞相互融合,完成受精。Lysin通过正向选择定律快速进化,而卵膜上的细胞溶素受体(VERL)为lysin的分化提供了选择压力,它是一个自由重复的序列,进行协同进化,这种协同进化可以解释精子lysin的快速适应性进化,并提供了一种可理解的分子机制来解释种特异性的繁殖鲍新种的产生。 展开更多
关键词 配子识别蛋白 细胞溶素 精子 繁殖 进化
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小鼠长型肽聚糖识别蛋白的组织分布 被引量:1
15
作者 何智 张丽芸 陈政良 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期364-367,共4页
采用RT-PCR、Northern blot以及免疫组织化学技术研究小鼠长型肽聚糖识别蛋白(mPGRP-L)在体内的表达情况。RT-PCR显示,mPGRP-L mRNA在肝脏、肾脏表达,在心、肺、脾、胸腺不表达;Northern blot结果表明,mPGRP-LmRNA在肝脏组织强表达,在... 采用RT-PCR、Northern blot以及免疫组织化学技术研究小鼠长型肽聚糖识别蛋白(mPGRP-L)在体内的表达情况。RT-PCR显示,mPGRP-L mRNA在肝脏、肾脏表达,在心、肺、脾、胸腺不表达;Northern blot结果表明,mPGRP-LmRNA在肝脏组织强表达,在脾脏和肾脏弱表达,在脑、心、肺、胃、骨骼肌、睾丸、胸腺、小肠不表达。组织切片免疫组织化学分析发现,肝、肾组织呈阳性结果,其余组织(心、脾、肺、脑、气管、胃、子宫、大肠、肌肉、小肠、膀胱)为阴性。本工作为研究mPGRP-L分子的生物学功能提供了重要的线索。 展开更多
关键词 小鼠长型肽聚糖识别蛋白 组织分布 RT-PCR NORTHERN BLOT 免疫组化
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唾液酸与唾液酸识别蛋白研究进展 被引量:1
16
作者 沈清清 田洪 +2 位作者 陈红惠 刘芳 田雪琪 《文山学院学报》 2013年第6期20-23,共4页
唾液酸(sialic acid)是广泛存在于生命系统中的一类蛋白类物质,近年来因其在生物学研究及生物制药领域的重要价值成为了研究热点。文章综述了唾液酸的特性、唾液酸识别蛋白的种类、唾液酸与唾液酸识别蛋白结合所产生的生物学效应等方面... 唾液酸(sialic acid)是广泛存在于生命系统中的一类蛋白类物质,近年来因其在生物学研究及生物制药领域的重要价值成为了研究热点。文章综述了唾液酸的特性、唾液酸识别蛋白的种类、唾液酸与唾液酸识别蛋白结合所产生的生物学效应等方面的最新研究进展。 展开更多
关键词 唾液酸 识别蛋白 糖链 细胞 结合
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小金蝠蛾幼虫β-1,3-葡聚糖识别蛋白βGRP1基因的分子特征与生物信息学分析 被引量:1
17
作者 贺元川 罗昌树 +1 位作者 游华建 陈仕江 《安徽农业科学》 CAS 2021年第19期95-98,101,共5页
[目的]探索冬虫夏草寄主昆虫小金蝠蛾幼虫的β-1,3-葡聚糖识别蛋白βGRP1基因的结构特征与进化关系。[方法]通过PCR法克隆获得小金蝠蛾幼虫βGRP1基因的编码序列,并采用Protparam、NetPhos 2.0 Server cDNA、MEGA等软件分析βGRP1蛋白... [目的]探索冬虫夏草寄主昆虫小金蝠蛾幼虫的β-1,3-葡聚糖识别蛋白βGRP1基因的结构特征与进化关系。[方法]通过PCR法克隆获得小金蝠蛾幼虫βGRP1基因的编码序列,并采用Protparam、NetPhos 2.0 Server cDNA、MEGA等软件分析βGRP1蛋白的理化特征和进化分析。[结果]小金蝠蛾幼虫βGRP1基因编码序列1593 bp,推断可编码530氨基酸组成的蛋白,该蛋白为分泌型蛋白,含有20个氨基酸的信号肽,包含2个功能结构域,该结构域与葡聚糖的识别密切相关;同源分析和分子系统进化树分析表明,鳞翅目昆虫中的βGRPs基因家族分为4个进化分枝,其中小金蝙蝠蛾与勾蝠蛾为单独的一个进化分枝,小金蝠蛾幼虫βGRP1进化较钩蝠蛾早,介于I型和Ⅲ型分支。[结论]该蛋白具有识别β-1,3-葡聚糖的结构域,并可能通过丝氨酸磷酸化激活酚酶源级联系统,启动免疫,为进一步探索βGRP1蛋白的免疫功能奠定基础。 展开更多
关键词 冬虫夏草 小金蝠蛾 β-1 3-葡聚糖识别蛋白 先天免疫
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黄颡鱼长型肽聚糖识别蛋白(pfPGRP-L)原核表达和多克隆抗体的制备
18
作者 杨竹青 钟烈鹏 +3 位作者 刘毅 王自蕊 熊六凤 隗黎丽 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期723-728,共6页
为进一步研究肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)在先天性免疫应答中的生物学功能,在前期克隆黄颡鱼长型肽聚糖识别蛋白(pfPGRP-L)c DNA全长的基础上,根据pfPGRP-L基因中高亲水性区域序列设计特异性引物扩增出... 为进一步研究肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)在先天性免疫应答中的生物学功能,在前期克隆黄颡鱼长型肽聚糖识别蛋白(pfPGRP-L)c DNA全长的基础上,根据pfPGRP-L基因中高亲水性区域序列设计特异性引物扩增出编码序列,将该基因片段克隆到p GEX-4T-1质粒,构建重组表达载体。SDS-PAGE电泳检测该目的蛋白大小约为51 ku,与理论值大小符合,回收蛋白并纯化,与弗氏佐剂等量混合后注射新西兰大白兔制备多克隆抗体,用ELISA和Western blotting分别检测该抗体,结果显示:抗体效价可达1∶256 000,且有特异性条带,表明pfPGRP-L的多克隆抗体制备成功。此外,Western blotting检测黄颡鱼不同组织pfPGRP-L蛋白的表达,发现在鳃、胸腺、肝脏、肾脏、头肾、脾脏、血液和肠道等不同组织中都有目的条带,而在脾脏和肠道中表达更强。为pfPGRP-L的抗菌作用和功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 长型肽聚糖识别蛋白 原核表达 多克隆抗体 黄颡鱼
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皱纹盘鲍肽聚糖识别蛋白的表达及免疫功能特性
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作者 乔琨 郑春花 +5 位作者 陈贝 苏永昌 郝华 许旻 蔡水淋 刘智禹 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期947-955,共9页
为研究皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)肽聚糖识别蛋白HdhPGRP-SC2-like的免疫功能特性,利用RACE技术克隆了HdhPGRP-SC2-like基因的全长cDNA序列,采用实时荧光定量PCR(qPCR)分析了HdhPGRP-SC2-like基因的组织分布特征,通过原核表达获... 为研究皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)肽聚糖识别蛋白HdhPGRP-SC2-like的免疫功能特性,利用RACE技术克隆了HdhPGRP-SC2-like基因的全长cDNA序列,采用实时荧光定量PCR(qPCR)分析了HdhPGRP-SC2-like基因的组织分布特征,通过原核表达获得了重组蛋白rHdhPGRP-SC2-like,并对其酰胺酶活性及免疫特性进行了验证。结果表明:HdhPGRP-SC2-like基因的cDNA全长为938 bp,开放阅读框为780 bp,编码260个氨基酸,包含保守的PGRP结构域和Ami_2结构域;HdhPGRP-SC2-like属于短型PGRP,与软体动物近缘物种PGRP具有高度相似性;qPCR分析显示,HdhPGRP-SC2-like mRNA在皱纹盘鲍各组织中均有表达,其中,鳃中表达量最高,外套膜、消化腺中表达量次之,腹足和血细胞中表达量较低;进一步构建原核表达载体pET-28a(+)-HdhPGRP-SC2-like,经诱导表达、分离纯化获得重组蛋白rHdhPGRP-SC2-like,该蛋白具有肽聚糖结合活性,且在Zn2+存在的情况下显示出酰胺酶活性。研究表明,HdhPGRP-SC2-like能够结合细菌肽聚糖成分,在机体抵御入侵细菌等免疫防御中发挥重要作用。 展开更多
关键词 皱纹盘鲍 肽聚糖识别蛋白 酰胺酶活性 免疫防御 细菌结合
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眼斑拟石首鱼肽聚糖识别蛋白2的基因克隆与组织表达特性
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作者 毛勇 王军 +2 位作者 张之文 丁少雄 苏永全 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期850-857,共8页
采用同源克隆技术获得了眼斑拟石首鱼(Sciaenops ocellatus)的肽聚糖识别蛋白2基因(命名为So-pglyrp2).So-pglyrp2的cDNA全长1 729 bp,含有1个1 446 bp的开放阅读框,编码的482 aa前体蛋白带有1个21 aa信号肽;So-pglyrp2基因由4个外... 采用同源克隆技术获得了眼斑拟石首鱼(Sciaenops ocellatus)的肽聚糖识别蛋白2基因(命名为So-pglyrp2).So-pglyrp2的cDNA全长1 729 bp,含有1个1 446 bp的开放阅读框,编码的482 aa前体蛋白带有1个21 aa信号肽;So-pglyrp2基因由4个外显子和3个内含子构成.序列比对分析表明,So-pglyrp2存在1个保守的PGRP结构域,其氨基酸序列与已报道的脊椎动物pglyrp2的同源性最高,一致性为57.1%~82.8%.RT-PCR分析表明,So-pglyrp2基因在肝脏强烈表达,在性腺、肠和胃组织弱表达,在其他组织不表达.研究结果为阐明鱼类pglyrp2基因结构、了解低等脊椎动物pglyrp2的进化地位、探讨鱼类pglyrp2的免疫学功能奠定了坚实的基础. 展开更多
关键词 肽聚糖识别蛋白2基因 基因克隆 MRNA表达 眼斑拟石首鱼
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