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非洲菊花瓣总RNA提取方法的改进 被引量:46
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作者 张玉进 孟祥春 +1 位作者 潘瑞炽 王小菁 《植物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期722-726,共5页
利用异硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒 (RNeasyPlantMiniKit)提取非洲菊 (Gerberahy brida)花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,在RNA沉淀后 ,再次加入适量变性液 ,冻融 2次 ,再加热至 45℃使RN... 利用异硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒 (RNeasyPlantMiniKit)提取非洲菊 (Gerberahy brida)花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,在RNA沉淀后 ,再次加入适量变性液 ,冻融 2次 ,再加热至 45℃使RNA完全溶解 ;试剂盒提取时 ,适当延长各提取步骤的离心时间 ,并增加DEPCH2 O溶解RNA的时间。通过以上操作方法的改进可排除多糖的干扰 ,得到高质量的总RNA。为进一步利用Northern杂交技术研究非洲菊中花色素苷基因的表达 ,进行花色改良提供了方便、有效的实验手段。 展开更多
关键词 非洲菊花瓣 异硫氰酸胍一步法 rna提取试剂 rna 提取方法 改进
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不同植物组织RNA提取方法的比较分析 被引量:30
2
作者 王杰 王全 +4 位作者 田娜 王瑜 王爱香 张克中 崔金腾 《北京农学院学报》 2015年第1期76-80,共5页
不同的植物组织都有较优化RNA提取方法。本文针对蜡质的红掌叶片、含糖较多的百合花瓣、含色素较多的万寿菊花瓣,使用改良CTAB法、Trizol法、快速RNA提取试剂盒法提取RNA,比较提取效果,以确定适合几种植物组织的最优RNA提取方法。结果表... 不同的植物组织都有较优化RNA提取方法。本文针对蜡质的红掌叶片、含糖较多的百合花瓣、含色素较多的万寿菊花瓣,使用改良CTAB法、Trizol法、快速RNA提取试剂盒法提取RNA,比较提取效果,以确定适合几种植物组织的最优RNA提取方法。结果表明:改良CTAB法提取的红掌叶片总RNA,Trizol法提取的百合花瓣总RNA和万寿菊总RNA,28SRNA和18SRNA条带都较清晰,且28SRNA亮度较18SRNA明亮,效果较好,部分RNA提取试验中5SRNA也较明亮,说明提取的总RNA有部分降解,但总RNA质量符合后续试验要求。RT-PCR检验符合上述结论。 展开更多
关键词 rna提取 改良CTAB TRIZOL rna提取试剂
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茶梅花瓣总RNA提取方法的比较和分析 被引量:14
3
作者 吴田 蓝增全 《中国农学通报》 CSCD 2013年第28期129-133,共5页
总RNA的纯度和完整性对植物分子生物学实验至关重要,为了探索更适合茶梅花瓣总RNA的提取方法,本研究分别利用CTAB多级沉淀法、改良的异硫氰酸胍法、改良的热硼酸法、Trizol法和EASY spin植物RNA提取试剂盒法等5种方法提取茶梅花瓣总RNA... 总RNA的纯度和完整性对植物分子生物学实验至关重要,为了探索更适合茶梅花瓣总RNA的提取方法,本研究分别利用CTAB多级沉淀法、改良的异硫氰酸胍法、改良的热硼酸法、Trizol法和EASY spin植物RNA提取试剂盒法等5种方法提取茶梅花瓣总RNA,并进行了对比分析。结果发现EASY spin植物RNA提取试剂盒法是最为简单、快速、高效的方法,该方法得到的RNA条带在琼脂糖凝胶上有清晰的28S、18S和5S 3条带,且超微量分光光度计测量的A_(260/280)、A_(260/230)均在允许范围内,表明该方法得到的RNA完整、质量高。CTAB多级沉淀法得到的RNA质量次之。本研究为今后有效开展茶梅分子生物学研究提供技术便利,并为其他花卉植物RNA的提取提供必要的参考。 展开更多
关键词 茶梅 花瓣 改良 多糖 rna提取试剂
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枣花蕾总RNA提取方法的比较 被引量:5
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作者 冯延芝 袁德义 +3 位作者 张琳 龙洪旭 许靖诗 刘敏 《经济林研究》 北大核心 2012年第2期88-90,共3页
为了探究枣花蕾总RNA提取的最优方法,以沾化冬枣的花蕾为材料,利用改良CTAB法、Trizol法和2种RNA提取试剂盒(PureLinkTMRNA小提试剂盒和北京奥莱博生物技术有限公司提供的植物RNA提取试剂盒)分别提取花蕾的总RNA,并对RNA浓度和电泳图谱... 为了探究枣花蕾总RNA提取的最优方法,以沾化冬枣的花蕾为材料,利用改良CTAB法、Trizol法和2种RNA提取试剂盒(PureLinkTMRNA小提试剂盒和北京奥莱博生物技术有限公司提供的植物RNA提取试剂盒)分别提取花蕾的总RNA,并对RNA浓度和电泳图谱进行比较分析,利用奥莱博生物技术有限公司提供的植物RNA提取试剂盒法可提取到纯度较高,完整性好的总RNA,并可用于Northern杂交、cDNA文库构建和半定量RT-PCR等分子生物学试验。 展开更多
关键词 枣花蕾 rna提取 改良CTAB法 TRIZOL法 rna提取试剂
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草莓果实总RNA提取方法的比较 被引量:6
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作者 张卿 刘帅 +2 位作者 邢宇 曹庆芹 秦岭 《中国农学通报》 2015年第31期146-149,共4页
为建立草莓果实总RNA的提取方法,针对草莓成熟果实中富含多糖、多酚和色素等次级代谢物质,总RNA提取难度大的特点,比较改良的EASYspin植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法提取草莓果实中总RNA的质量。通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪... 为建立草莓果实总RNA的提取方法,针对草莓成熟果实中富含多糖、多酚和色素等次级代谢物质,总RNA提取难度大的特点,比较改良的EASYspin植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法提取草莓果实中总RNA的质量。通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(Nano Drop 2000)检测2种方法提取总RNA的浓度、纯度及完整性等。改良的EASYspin植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法都能够完成草莓果实总RNA的提取,电泳检测在28S和18S处呈2条清晰的条带,OD260/OD280值和OD260/OD230值均在2.0左右;改良的EASYspin植物RNA提取试剂盒法成本较高,且提取总RNA质量劣于改良的CTAB法,但是EASYspin植物RNA提取试剂盒法操作简便,安全可靠,节省时间。通过RT-PCR验证,2种方法所获得的草莓果实总RNA质量较好,可达到分子生物学试验对RNA质量的要求。 展开更多
关键词 草莓 rna提取 rna提取试剂 改良的CTAB法
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红花花冠总RNA提取方法的筛选研究 被引量:1
6
作者 康亚兰 裴瑾 +4 位作者 刘薇 罗静 刘维 陈翠平 吴清华 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2014年第A02期313-316,331,共5页
筛选一种红花花冠总RNA提取方法。采用植物总RNA提取试剂盒法、传统佰烈法、改良Trizol法提取红花花冠总RNA。凝胶电泳、RT-PCR、紫外分光光度法检测三种方法提取所得总RNA,并将筛选得到的方法应用于红花愈伤组织总RNA的提取。改良Tri... 筛选一种红花花冠总RNA提取方法。采用植物总RNA提取试剂盒法、传统佰烈法、改良Trizol法提取红花花冠总RNA。凝胶电泳、RT-PCR、紫外分光光度法检测三种方法提取所得总RNA,并将筛选得到的方法应用于红花愈伤组织总RNA的提取。改良Trizol法提取得到的红花花冠总RNA凝胶电泳检测可见清晰的三条带,RT-PCR结果凝胶电泳检测可见清晰的一条带,紫外分光光度法检测符合要求,其余两种方法均不符合要求。改良Trizol法应用于红花愈伤组织总RNA提取,检测结果均符合要求。改良Trizol法可用于红花花冠总RNA提取,提取所得红花花冠总RNA可用于后续分子生物学实验。 展开更多
关键词 红花花冠 rna提取 植物总rna提取试剂 传统Trizol法 改良Trizol法
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刺参组织总RNA提取的研究 被引量:1
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作者 吉成龙 孙国华 +2 位作者 杨建敏 孙孝德 刘爱英 《水产养殖》 CAS 2010年第1期25-28,共4页
利用Trizol法和两种RNA提取试剂盒对刺参的肠、呼吸树、纵肌、体壁等不同组织总RNA进行了提取。综合分析结果表明,F试剂盒提取刺参组织总RNA的效果较其他两种方法而言方法最适宜,能获得纯度高、污染少,而且无降解的高质量总RNA。刺参的... 利用Trizol法和两种RNA提取试剂盒对刺参的肠、呼吸树、纵肌、体壁等不同组织总RNA进行了提取。综合分析结果表明,F试剂盒提取刺参组织总RNA的效果较其他两种方法而言方法最适宜,能获得纯度高、污染少,而且无降解的高质量总RNA。刺参的肠组织富含RNA,且质地较软容易研磨彻底,是提取总RNA的最佳组织,可获得量大、质优的总RNA。 展开更多
关键词 刺参 rna rna提取试剂 TRIZOL法
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草珊瑚叶片总RNA提取方法及效果的比较研究 被引量:2
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作者 沈少炎 谢德金 +4 位作者 吴玉香 荣俊冬 何天友 陈礼光 郑郁善 《浙江林业科技》 北大核心 2016年第5期40-44,共5页
采用CTAB法、CTAB-LiCl法、CTAB-Trizol法、Trizol法、天根RNA提取试剂盒及百泰克RNA提取试剂盒提取草珊瑚(Sarcandraglabra)叶片总RNA,并通过微量紫外分光光度计、电泳检测等对提取的结果进行了分析比较。结果表明:CTAB-LiCl法和天... 采用CTAB法、CTAB-LiCl法、CTAB-Trizol法、Trizol法、天根RNA提取试剂盒及百泰克RNA提取试剂盒提取草珊瑚(Sarcandraglabra)叶片总RNA,并通过微量紫外分光光度计、电泳检测等对提取的结果进行了分析比较。结果表明:CTAB-LiCl法和天根RNA提取试剂盒比较适合提取草珊瑚叶片的总RNA。这两种方法提取的总RNA的完整性和纯度较高,无明显的蛋白质及其他杂质污染,OD260/OD280的值在1.9~2.1,OD260/OD230在2.0~2.4。获得质量高、完整性好、纯度高的总RNA,为后续构建cDNA文库以及相关基因的克隆提供了试验基础。 展开更多
关键词 草珊瑚 rna提取 CTAB-LiCl法 天根rna提取试剂
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β-巯基乙醇对不同时期芒果剪口芽总RNA质量的影响 被引量:1
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作者 殷德松 宋静武 +4 位作者 齐贝贝 陈莹莹 周玲 赵凯 彭磊 《中国农学通报》 2017年第10期83-86,共4页
芒果剪口芽中富含多酚,由于多酚易被氧化,且难以与核酸分离,导致总RNA提取困难。为提取适于芒果实时荧光定量PCR分析的高质量RNA,通过在华越洋超快新型植物RNA提取试剂盒的细胞裂解液中加入适量的β-巯基乙醇,研究β-巯基乙醇对芒果剪... 芒果剪口芽中富含多酚,由于多酚易被氧化,且难以与核酸分离,导致总RNA提取困难。为提取适于芒果实时荧光定量PCR分析的高质量RNA,通过在华越洋超快新型植物RNA提取试剂盒的细胞裂解液中加入适量的β-巯基乙醇,研究β-巯基乙醇对芒果剪口芽总RNA提取质量的影响。试验结果表明,在细胞裂解液中加入300μLβ-巯基乙醇,可以排除多酚、色素等杂质的干扰,获得条带完整、质量较好的总RNA样品。RT-PCR实验结果进一步表明,此方法提取的RNA完全适于后续分子生物学试验研究。 展开更多
关键词 剪口芽 多酚 rna提取试剂 β-巯基乙醇
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土壤宏转录组RNA的提取方法评价 被引量:3
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作者 赵俊 莫永亮 贾仲君 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期724-743,共20页
【目的】比较手工法和试剂盒法提取土壤RNA对原核微生物多样性的影响,评价两种方法研究土壤宏转录组的技术偏好性。【方法】针对黑龙江海伦砂质黑壤土、江苏滨海黏心夹砂土、江西鹰潭第四纪红黏土不同母质发育形成的三种水稻土,采用手... 【目的】比较手工法和试剂盒法提取土壤RNA对原核微生物多样性的影响,评价两种方法研究土壤宏转录组的技术偏好性。【方法】针对黑龙江海伦砂质黑壤土、江苏滨海黏心夹砂土、江西鹰潭第四纪红黏土不同母质发育形成的三种水稻土,采用手工和试剂盒法分别获得微生物总RNA,利用高通量测序原核微生物16S r RNA多样性,通过紫外分光和琼脂糖凝胶电泳分析RNA质量,比较手工和试剂盒法提取RNA对水稻土原核微生物群落的影响规律。【结果】三种水稻土中试剂盒提取RNA的纯度皆高于手工法,但RNA提取总量不一致。试剂盒提取黑龙江和江苏水稻土的RNA总量高于手工法,而手工法提取的江西水稻土RNA总量高于试剂盒法。高通量测序发现土壤类型而不是RNA提取方法决定了原核微生物多样性指数和群落结构。3个水稻土共检测到27门和409属,两种RNA提取方法偏好性提取了19门和181属,这些门和属占水稻土微生物总丰度平均值分别为40.4%和44.4%。与手工提取RNA相比,试剂盒法发现11个微生物门的丰度显著偏高(P<0.05),但仅有Armatimonadetes门在三种水稻土同时存在专一偏好性;手工法提取也发现11个微生物门的丰度显著高于试剂盒法,并且仅有Firmicutes门在三种水稻土中同时存在专一偏好性。在微生物属水平,三种水稻土中均发现试剂盒法偏好性提取了2属,而手工法偏好性提取了5属。进一步针对72个优势微生物属(丰度>0.1%且同时存在于三种水稻土),发现其占所有微生物丰度80%强,且48属的变化规律与RNA提取方法无关。例如,手工法提取水稻土好氧甲烷氧化菌的规律为:黑龙江(1.68%)>江西(0.90%)>江苏(0.59%),而试剂盒法也得到一致结果,黑龙江(0.52%)>江西(0.18%)>江苏(0.13%)。【结论】两种RNA提取方法本身的特异偏好性较小。三种水稻土27门409属中,仅有2门7属可能存在方法本身的专一偏好性,即在三种水稻土中,这些微生物均被试剂盒法或手工法特异性偏好提取,占所有原核微生物门和属比例仅为7%和1%左右。此外,针对同一水稻土,手工和试剂盒法提取RNA的总量、纯度、微生物相对丰度明显不同,在原核微生物门和属的分类水平,约70%的门和22%的属的丰度具有统计显著性差异,但两种RNA提http://journals.im.ac.cn/actamicro取方法均能反映优势微生物类群在三种水稻土中的变异规律,土壤类型对原核微生物多样性的影响远大于RNA提取方法本身的偏好性。未来原核微生物宏转录组研究中,应优先考虑科学问题及其实验处理可能导致的微生物组及其转录差异,结合微生物RNA提取特点,最大限度地发挥宏转录组技术优势。 展开更多
关键词 原核微生物 宏转录组 水稻土 试剂盒rna提取 手工rna提取 16S Rrna
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紫肉甘薯块根总RNA提取方法的评价 被引量:7
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作者 李霞 王欣 +4 位作者 后猛 刘亚菊 闫会 李强 马代夫 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期165-170,共6页
紫肉甘薯块根富含多糖、多酚、淀粉、蛋白质和色素等物质,会影响紫肉甘薯块根总RNA的提取。本研究对五种不同的RNA提取方法进行比较,分析各自的优缺点,并对所得总RNA的浓度和纯度进行测定。研究结果表明,改良CTAB法和华越洋试剂盒提取... 紫肉甘薯块根富含多糖、多酚、淀粉、蛋白质和色素等物质,会影响紫肉甘薯块根总RNA的提取。本研究对五种不同的RNA提取方法进行比较,分析各自的优缺点,并对所得总RNA的浓度和纯度进行测定。研究结果表明,改良CTAB法和华越洋试剂盒提取法均能提取出浓度、纯度较高的RNA,且RNA可用于反转录,并扩增出Ib Tub A基因的特异条带,能够进行后续实验分析,其中华越洋试剂盒提取法操作更加快捷和方便。另外三种提取方法都存在一些弊端,所提取RNA质量略差,不能达到后续实验的要求。增加去色素环节可以有效去除色素,三个不同色素差异品种的提取结果较为一致。 展开更多
关键词 紫肉甘薯 rna提取 改良CTAB法 良Trizol法 rna提取试剂
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火炬松总RNA提取方法的比较 被引量:7
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作者 毛积鹏 祝文娟 +1 位作者 王博 黄少伟 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期2031-2035,共5页
植物总RNA提取的传统方法有很多种,如CTAB法,TRIzol法和SDS法。为了方便快捷的提取出高质量的植物总RNA,目前越来越多的植物总RNA提取的试剂盒被开发了出来,但不同的提取方法对不同植物组织的RNA提取效果不一。为了筛选出适合火炬松总RN... 植物总RNA提取的传统方法有很多种,如CTAB法,TRIzol法和SDS法。为了方便快捷的提取出高质量的植物总RNA,目前越来越多的植物总RNA提取的试剂盒被开发了出来,但不同的提取方法对不同植物组织的RNA提取效果不一。为了筛选出适合火炬松总RNA的提取方法,本研究以火炬松的韧皮部和较老的针叶为材料,比较了改良的CTAB法、Column Plant RNAout 2.0提取试剂盒、E.Z.N.A.TMPlant RNA Kit、Hi Pure Plant RNA Mini Kit、EASYspin Plus Plant RNA Kit和Mag Zol TM Reagent法提取总RNA的效果,结果表明:改良CTAB法对韧皮部和针叶均有最好的提取效果。Mag Zol TM Reagent法和EASYspin Plus Plant RNA Kit没能提取到完整的RNA,其他试剂盒的提取效果均不十分理想。 展开更多
关键词 火炬松 rna提取 rna提取试剂 改良CTAB法
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基于Kingfisher Flex系统树木叶片RNA的提取方法比较及优化 被引量:3
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作者 何佳悦 王莉 +6 位作者 贾翠蓉 朱显亮 王亚琴 翁启杰 周长品 甘四明 李发根 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期3009-3017,共9页
随着林木功能基因组学的发展,如何快速高效地提取高质量的核酸变得越来越重要。本研究基于Kingfisher Flex全自动磁珠提取纯化系统,以细叶桉叶片为材料,利用5种磁珠法RNA提取试剂盒(A/B/C/D/E)比较提取RNA的质量和纯度,筛选出试剂盒C为... 随着林木功能基因组学的发展,如何快速高效地提取高质量的核酸变得越来越重要。本研究基于Kingfisher Flex全自动磁珠提取纯化系统,以细叶桉叶片为材料,利用5种磁珠法RNA提取试剂盒(A/B/C/D/E)比较提取RNA的质量和纯度,筛选出试剂盒C为最佳试剂盒。在试剂盒C默认提取程序基础上,利用正交设计L9(34),研究Kingfisher Flex全自动磁珠提取纯化系统上不同洗涤速度、洗脱速度及时间等机器参数对提取RNA的浓度和纯度的影响。正交试验结果表明,对提取RNA的浓度和纯度影响最大的机器参数是洗涤速度,正交试验最优程序组合下提取RNA的纯度稍优于试剂盒C,但是得率仅为试剂盒C的1/3,综合比较后确认试剂盒C默认程序为提取细叶桉叶片RNA的最优提取程序。另外利用试剂盒C也分别对降香黄檀、大果紫檀、油楠、檀香、黑木相思和柚木这六个树种的叶片RNA进行提取,结果表明提取出的RNA均满足cDNA建库以及转录组测序实验的要求。本研究建立了Kingfisher Flex全自动磁珠提取纯化系统上树木叶片RNA的高效提取方法,对树木叶片高通量RNA提取有重要的应用价值,并为其他树种在提取RNA程序上对相关参数进行优化和设置提供了参考。 展开更多
关键词 Kingfisher Flex系统 树木叶片 rna提取 磁珠法rna提取试剂
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