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HPV16型免疫胶体金诊断试纸条的制备 被引量:3
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作者 胡仁建 蔡家利 +5 位作者 徐佳缘 张贵 梁晓媛 李夏庆 郭萍 郑洋 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 2010年第2期34-39,共6页
建立一种快速、准确、简便检测高危型人乳头瘤病毒16型的胶体金诊断试纸条,以用于宫颈癌的早期筛查。用柠檬酸三钠还原法制备了酒红色的30 nm胶体金颗粒,胶体金颗粒标记的单抗的实际标记量为6μg/mL。选用了2种稳定剂BSA和PEG20000获得... 建立一种快速、准确、简便检测高危型人乳头瘤病毒16型的胶体金诊断试纸条,以用于宫颈癌的早期筛查。用柠檬酸三钠还原法制备了酒红色的30 nm胶体金颗粒,胶体金颗粒标记的单抗的实际标记量为6μg/mL。选用了2种稳定剂BSA和PEG20000获得了稳定的金标抗体溶液。实验结果表明:第7种样品垫处理液和第7种结合垫处理液处理样品垫和结合垫组装的试纸条效果最好;试纸条检测HPV16E6蛋白为阳性,检测HPV16L1蛋白为阴性。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 宫颈癌 胶体金 单克隆抗体 多克隆抗体 试纸条.
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逆转录环介导等温扩增联合横向流动试纸条快速检测草鱼(Ctenopharyngodon idellus)呼肠孤病毒(GCRV)的研究 被引量:1
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作者 郝贵杰 林锋 +6 位作者 陈智慧 黄小红 潘晓艺 袁雪梅 徐洋 姚嘉赟 沈锦玉 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期183-191,共9页
草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)是一种双链分节段RNA病毒,是引起草鱼出血病的(hemorrhage of grass carp)的病原,目前临床上较为流行的为基因I型和II型GCRV。本研究利用逆转录环介导等温扩增技术(reverse transcription loop... 草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)是一种双链分节段RNA病毒,是引起草鱼出血病的(hemorrhage of grass carp)的病原,目前临床上较为流行的为基因I型和II型GCRV。本研究利用逆转录环介导等温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)进行核酸扩增,通过横向流动试纸条方法(lateral flow dipstick,LFD)进行可视化检测,分别建立了可应用于基因I型和II型GCRV快速检测的RT-LAMP-LFD技术。该技术以基因I型和II型GCRV第六基因为检测靶标,分别设计了2对特异性引物(其中,上游内引物由生物素biotin标记)和1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针。结果表明,RT-LAMP最适反应温度为63oC,扩增时间为40min,从核酸扩增到LFD结果判读仅需50min。利用RT-LAMP-LFD可特异性检出基因I型和II型GCRV,而对鲤疱疹病毒II型(Cy HV-2)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、嗜水气单胞菌等鱼类常见病原的核酸检测结果为阴性,而且两种基因型RT-LAMP-LFD方法只能检测本基因型GCRV,特异性良好。该方法最低可检测到1.19pg的基因I型GCRV的RNA,1.88pg基因II型GCRV的RNA,其灵敏度分别比相应的RT-PCR方法高2个数量级和1个数量级。对实际样品的检测结果表明,两种基因型RT-LAMP-LFD方法检测GCRV与普通RT-PCR扩增并测序的结果一致。因此,该方法可快速、特异地检测出GCRV,而且操作简单,费用低且耗时短,不需特殊仪器设备,有望成为GCRV现场检测的常规技术手段。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP) 横向流动纸条(LFD) 特异性 灵敏度
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试纸条快速筛查献血者ALT经济效益分析 被引量:7
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作者 杨丙辛 李五升 刘玉振 《中国误诊学杂志》 CAS 2004年第9期1428-1428,共1页
关键词 纸条/经济学 供血者 丙氨酸转氨酶/经济学 丙氨酸转氨酶/血液
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香鱼格留虫(Glugea plecoglossi)环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测方法的建立 被引量:2
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作者 康晋伟 金晶磊 +4 位作者 段丽君 周燕 苗亮 周前进 陈炯 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1501-1512,共12页
我国的养殖香鱼正面临着严重的香鱼格留虫(Glugea plecoglossi)感染。本研究联合运用环介导等温扩增技术(LAMP)和横向流动试纸条(LFD)的检测技术,建立了快速便捷地检测G.plecoglossi的LAMP-LFD方法。该方法以G.plecoglossi的β微管蛋白... 我国的养殖香鱼正面临着严重的香鱼格留虫(Glugea plecoglossi)感染。本研究联合运用环介导等温扩增技术(LAMP)和横向流动试纸条(LFD)的检测技术,建立了快速便捷地检测G.plecoglossi的LAMP-LFD方法。该方法以G.plecoglossi的β微管蛋白基因为检测靶标,在其保守区域设计并筛得6条特异性引物(其中上游内引物用生物素标记),进行LAMP反应,产物再与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的特异性探针杂交,在LFD上进行结果判断。结果表明,LAMP-LFD方法能够特异性地检出G.plecoglossi,对梅氏新贝尼登虫、刺激隐核虫、肝肠胞虫阳性的虾组织、派氏异尖线虫、内弯宫脂线虫、鳗弧菌香鱼分离株、杀香鱼假单胞菌,以及香鱼组织等的检测均呈阴性。优化后,LAMP的反应条件为65℃反应45min,与探针杂交的条件为65℃反应5min,加之5min的显色时间,整个检测时程为55min。利用该方法能够检测到2.0fg/μL的含β微管蛋白的质粒DNA,针对G.plecoglossi基因组DNA的检测灵敏度为14.0pg/μL;能够从感染强度达到100个虫体/克的香鱼肝组织中稳定地检测到虫体。该方法可在简单的恒温加热设备(如水浴锅)中完成核酸扩增和探针杂交,无需昂贵的仪器装置。综上,香鱼格留虫LAMP-LFD方法操作便捷、灵敏度高、特异性好、检测快速,而且设备依赖性低,完全适合于基层检测的需求。 展开更多
关键词 香鱼格留虫(Glugea plecoglossi) β微管蛋白 环介导等温扩增技术(LAMP) 横向流动纸条(LFD) 检测
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适用于RPA-LFD技术检测对虾肝胰腺DNA样品的快速制备试剂研究
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作者 姚梦丽 白昌明 +1 位作者 王崇明 辛鲁生 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2024年第4期166-174,共9页
为摆脱常规核酸样品提取步骤繁琐、耗时等问题,实现真正的现场快速检测,本研究致力于研制和优化一种对虾肝胰腺中DNA样品的核酸快速制备试剂,即核酸释放剂,适用于重组酶聚合酶扩增技术(recombinasepolymeraseamplication,RPA)与侧向流... 为摆脱常规核酸样品提取步骤繁琐、耗时等问题,实现真正的现场快速检测,本研究致力于研制和优化一种对虾肝胰腺中DNA样品的核酸快速制备试剂,即核酸释放剂,适用于重组酶聚合酶扩增技术(recombinasepolymeraseamplication,RPA)与侧向流层析试纸条技术(lateralflow dipstick, LFD)结合的RPA-LFD技术检测。实验优选20~100 mmol/L Tris-HCl、50~250 mmol/L KCl、0.01%~0.10%十二烷基硫酸锂(LDS)、0.5%~2.0%聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)、1~5mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EGTA2Na)、0.5~5.0 mmol/L牛血清白蛋白(BSA)、1~5 mg/mL明胶、0.01%~0.10%海藻糖、1%~5%甜菜碱等配制成核酸释放剂。以对虾肝肠孢虫(Enterocytozoonhepatopenaei,EHP)阳性样本和阴性样本对核酸释放剂各组分间配比进行优化,采集绿豆大小的对虾肝胰腺组织加入100μL核酸释放剂,100℃加热3 min,取上清液进行RPA-LFD反应,测试各组分不同浓度配比;并以对虾急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND)阳性样品及阴性样品作为检测模板对优化后核酸释放剂再次验证。结果显示,核酸释放剂的各组分最佳配比为100 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L KCl、0.02%LDS、0.5%Triton X-100、1 mmol/L EGTA2Na、0.05%海藻糖、1 mg/mL明胶、0.5 mmol/L BSA、2%甜菜碱。RPA-LFD方法检测可显著区分阳性和阴性样品。本研究优化的核酸释放剂,适用于RPA-LFD检测对虾肝胰腺病原DNA样品的制备,有效避免了常规DNA样品繁琐、耗时的制备步骤,极大地提高了核酸水平病原检测效率。 展开更多
关键词 核酸释放剂 重组酶聚合酶扩增(RPA) 侧流层析纸条(LFD) 虾肝胰腺 病原快速检测
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鲤浮肿病毒RAA-LFD检测方法的建立 被引量:6
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作者 吕晓楠 徐立蒲 +4 位作者 张文 曹欢 王小亮 王姝 王静波 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期263-267,共5页
为建立一种简便、快捷的现地检测鲤浮肿病毒(CEV)的方法,本研究联合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,在优选的RAA下游引物和探针的5’端分别进行Biotin和FAM标记,通过RAA反应时间和温度等条件的优化,建立了可用于CEV现地检... 为建立一种简便、快捷的现地检测鲤浮肿病毒(CEV)的方法,本研究联合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,在优选的RAA下游引物和探针的5’端分别进行Biotin和FAM标记,通过RAA反应时间和温度等条件的优化,建立了可用于CEV现地检测的RAA-LFD方法。该检测方法在34℃~40℃恒温反应10 min即可实现对CEV目的基因片段的有效扩增;与其它常见水生动物疫病病原DNA无交叉反应;RAA扩增产物可以直接对LFD经肉眼观察结果,该方法对标准质粒pEASY-CEVP4a的最低检测限为6拷贝/μL,与荧光定量PCR灵敏度相当;组内和组间重复性试验表明该方法具有良好的重复性和稳定性;采用该方法和荧光定量PCR对60份临床样本同时进行检测,二者的阳性符合率为96.08%。本研究建立的RAA-LFD检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好、操作方便,可用于CEV的临床快速检测。 展开更多
关键词 鲤浮肿病毒(CEV) 重组酶介导扩增(RAA) 侧向流纸条(LFD) 快速检测
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MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA平行检测日本血吸虫抗体效果比较
7
作者 刘群 陈仕明 +3 位作者 黄进 蔡爱玲 周明莉 姜昌富 《长江大学学报(自然科学版)》 CAS 2012年第2期37-38,44,共3页
目的:评价磁微粒分离酶联免疫法(MPAIA)、日本血吸虫抗体检测试纸条(DIGFA)、间接红细胞凝集试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)平行检测日本血吸虫抗体效果。方法:采用MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA,分别对荆州市血吸虫病专科... 目的:评价磁微粒分离酶联免疫法(MPAIA)、日本血吸虫抗体检测试纸条(DIGFA)、间接红细胞凝集试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)平行检测日本血吸虫抗体效果。方法:采用MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA,分别对荆州市血吸虫病专科医院每日收集的血吸虫病检查血清标本进行平行检测,并对检测结果进行统计分析。结果:对医院1321例标本,采用MPAIA与DIGFA、IHA、ELISA进行平行检测,阳性率分别为36.34%、27.93%、33.23%和20.29%,差别有统计学意义(P<0.01),MPAIA阳性率高于其他3种方法。结论:MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA平行检测血吸虫血清抗体的阳性检出率较为符合,MPAIA适用于临床检验和现场调查。 展开更多
关键词 磁微粒分离酶联免疫法(MPAIA) 日本血吸虫抗体检测纸条(DIGFA) 间接红细胞凝集验(IHA) 酶联免疫吸附验(EuSA) 日本血吸虫 抗体
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基于PCR和LFS技术的掺假豌豆成分快速检测
8
作者 王凯 屈玮 +2 位作者 姚帮本 徐建国 姚丽 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2022年第11期1575-1579,共5页
文章运用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和侧向流试纸条(lateral flow strip,LFS)相结合方法,以豌豆特异性基因为参照对绿豆食品中掺入豌豆成分进行定性分析。实验对退火温度、修饰引物浓度和镁离子浓度进行优化,并在最... 文章运用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和侧向流试纸条(lateral flow strip,LFS)相结合方法,以豌豆特异性基因为参照对绿豆食品中掺入豌豆成分进行定性分析。实验对退火温度、修饰引物浓度和镁离子浓度进行优化,并在最优PCR条件下进行特异性和灵敏度检测。结果表明,在退火温度为59℃,修饰引物加入量为0.20μmol/L,镁离子加入量为1.75 mmol/L条件下,PCR扩增效果最好,掺假检测限为0.5%,最低可检测豌豆DNA量为0.12 ng。该方法特异性高、操作简单快速,依靠视觉观察就能得出定性结果。 展开更多
关键词 绿豆产品 豌豆掺假 聚合酶链式反应(PCR) 侧向流纸条(LFS)
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Colloidal Gold Strip-NASBA Technique for Rapid Detection of Shigella 被引量:1
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作者 Ni Xiumei Wei Xiaotang Jiangyinghui 《International Journal of Technology Management》 2014年第9期121-123,共3页
An isothermal amplification assay for the detection of Shigella based colloidal gold strip detection is developed. The primers designed corresponded to the ipaH gene of Shigella .The sensitivity of the colloidal gold ... An isothermal amplification assay for the detection of Shigella based colloidal gold strip detection is developed. The primers designed corresponded to the ipaH gene of Shigella .The sensitivity of the colloidal gold strip-NASBA method in this study was 6.3 x 101cfu/ml. The specificity of the detection system was detected and the result showed that the NASBA method could distinguish Shigella from other germs. 展开更多
关键词 Colloidal gold strip NASBA SHIGELLA
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鲤疱疹病毒Ⅱ型RAA-LFD检测方法的建立 被引量:4
10
作者 王姝 吕晓楠 +4 位作者 徐立蒲 张文 王静波 王小亮 曹欢 《检验检疫学刊》 2020年第3期1-4,共4页
为了建立一种简便、快捷的现地检测鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)的方法,本文联合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,在优选的RAA下游引物和探针的5’端分别进行生物素(Biotin)和荧光(FAM)标记,通过对RAA反应时间和温度等条件的优化... 为了建立一种简便、快捷的现地检测鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)的方法,本文联合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,在优选的RAA下游引物和探针的5’端分别进行生物素(Biotin)和荧光(FAM)标记,通过对RAA反应时间和温度等条件的优化,建立了可用于现地检测CyHV-2的RAA-LFD方法。该检测方法在34℃~40℃恒温下反应10 min即可实现对CyHV-2目的基因片段的有效扩增,与其他常见水生动物疫病病原脱氧核糖核酸(DNA)无交叉反应,RAA扩增产物可直接用LFD肉眼观察,对标准质粒pUC57-CyHV-2的最低检测限为8拷贝/μL,比普通聚合酶链式反应(PCR)灵敏度高出10倍。组内和组间重复性试验表明该方法有良好的重复性和稳定性,使用该方法对45份临床样本进行检测,与普通PCR结果符合率为95%。本文建立的RAA-LFD检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好、操作方便,可用于CyHV-2的临床快速检测。 展开更多
关键词 鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2) 重组酶介导扩增(RAA) 侧向流纸条(LFD)
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Development of a colloidal gold-based immunochromatographic strip for rapid detection of Rice stripe virus 被引量:3
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作者 De-qing HUANG Rui CHEN +3 位作者 Ya-qin WANG Jian HONG Xue-ping ZHOU Jian-xiang WU 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2019年第4期343-354,共12页
Rice stripe virus(RSV) causes dramatic losses in rice production worldwide. In this study, two monoclonal antibodies(MAbs) 16E6 and 11 C1 against RSV and a colloidal gold-based immunochromatographic strip were develop... Rice stripe virus(RSV) causes dramatic losses in rice production worldwide. In this study, two monoclonal antibodies(MAbs) 16E6 and 11 C1 against RSV and a colloidal gold-based immunochromatographic strip were developed for specific, sensitive, and rapid detection of RSV in rice plant and planthopper samples. The MAb 16E6 was conjugated with colloidal gold and the MAb 11C1 was coated on the test line of the nitrocellulose membrane of the test strip. The specificity of the test strip was confirmed by a positive reaction to RSV-infected rice plants and small brown planthopper(SBPH), and negative reactions to five other rice viruses, healthy rice plants, four other vectors of five rice viruses, and non-viruliferous SBPH. Sensitivity analyses showed that the test strip could detect the virus in RSV-infected rice plant tissue crude extracts diluted to 1:20 480(w/v, g/mL), and in individual viruliferous SBPH homogenate diluted to 1:2560(individual SPBH/μL). The validity of the developed strip was further confirmed by tests using field-collected rice and SBPH samples. This newly developed test strip is a low-cost, fast, and easy-to-use tool for on-site detection of RSV infection during field epidemiological studies and paddy field surveys, and thus can benefit decision-making for RSV management in the field. 展开更多
关键词 Monoclonal antibody Colloidal gold-based immunochromatographic strip Rice stripe virus RICE Small brown planthopper
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