抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及金标试纸检测方法的建立

以BSA-CAP-HS免疫Balb／C小鼠,用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞,体内诱生腹水法制备cAP mAb,并鉴定其免疫学特性;依据胶体金免疫层析试验(GICA)原理,以CAP mAb 为金标抗体,研制CAP残留快速检测金标试纸(CAP-Strip),并对其性能进行测定。结果表明,筛选出了3株杂交瘤细胞,其中最好的4F9-B2株间接ELISA效价细胞培养上清为1:1 280,腹水为1:640 000,亲和常数(Ku)为 1．84×1010 L/mol,对CAP的半数抑制浓度(IC50)为0．88μg/L,与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应(CR%)为150%,与其他酰胺醇类和抗菌素类药物无交叉反应;CAP-Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit拟合曲线,目测检测限为0．5μg/L;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100％;可见CAP-Strip具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于CAP残留的快速检测,具有较高的推广应用价值。

基于Android平台的母乳成分多指标试纸检测软件的设计

目的:设计一款基于Android平台的母乳成分多指标试纸检测软件,以精准显示母乳成分检测结果。方法:采用Java语言编写模块程序,分别设计图像采样模块、数据计算模块和数据显示模块。通过拍摄蛋白质、糖类和钙成分的试纸图片,运用提取图像灰度值和提取红绿蓝(RGB)亮度两种不同的图像处理方法进行分析计算,得到所测母乳中蛋白质、糖类和钙成分含量。结果:Android系统的电子设备安装母乳成分多指标试纸检测软件后,利用电子设备拍摄试纸图像,用软件进行图像处理和数学计算,分析显示成分浓度含量。可以通过软件自动启用的拍照功能获取反应后的试纸图像,显示最终的母乳成分含量,减少了人工肉眼测量的误差,提高母乳成分检测的准确性。结论:基于Android平台母乳成分多指标试纸检测软件,通过选择所需要的处理方法对得到的图像进行处理和数据计算,使检测结果更加精准。

高亲和力克伦特罗单克隆抗体的研制及免疫试纸检测方法的建立

重氮化法将克伦特罗(CL)偶联于BSA合成免疫抗原BSA-CL,戊二醛法(GA)合成包被抗原OVA-CL,用BSA-CL免疫Balb/C小鼠。细胞融合技术建立高亲和力CL单克隆抗体(CLmAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备CLmAb,并测定其亲和性。依据胶体金免疫层析试验(GICA)原理,应用CLmAb研制CL残留快速检测免疫试纸(CL-Strip),并测定其性能。结果表明,筛选出16株杂交瘤细胞,其中亲和力最高的为3C12-6H6,亲和常数(Ka)为1.76×1010L/mol。CL-Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,目测检测限为0.5μg/L;其敏感性与竞争ELISA试剂盒和GC/MS相当,符合率为100%。CL-Strip具有具有敏感、特异、快速、简便的特点,可推广应用于CL残留的快速检测。

超分支滚环扩增试纸检测对虾黄头病毒

依据对虾黄头病毒（Yellow head virus,YHV）的非结构蛋白N基因序列,设计特异的锁式探针（Padlock probe,PLP）、检测探针及引物,建立YHV超分支滚环扩增（Hyper-branched rolling circle amplification,HRCA）检测试纸。灵敏度实验显示,YHV HRCA检测试纸能检测出的最低模板量为101拷贝,是RT-PCR灵敏度的100倍。特异性实验结果表明,该试纸能够特异性地对YHV进行检测。利用该检测试纸对进出口80批次虾样本进行检测,并将检测结果与常规RT-PCR相比较,结果显示,YHV HRCA检测试纸灵敏度方面优于常规RT-PCR方法,且操作简便、结果直观易读。

快速检测试纸检测肉类食品安全

目的建立检测肉类食品安全的快速检测方法。方法使用快速检测试纸检测肉类掺假,以及肉类中残留的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺与沙丁胺醇。结果使用猪肉检测快速检测试纸,检测羊肉中掺加的猪肉,掺加猪肉的比例为0.75%~25%,可以检出。使用胶体金检测仪结合快速检测试纸,检测肉类中添加的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺与沙丁胺醇,盐酸克伦特罗的平均添加回收率在110%左右,莱克多巴胺的平均添加回收率为90%~120%,沙丁胺醇的平均添加回收率在110%左右。结论快速检测试纸适合对肉类食品安全进行现场快速筛查。

免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验对猪瘟免疫效果的评估对比

当前国内对猪瘟抗体水平检测方法有ELISA检测法、猪瘟正向间接血凝法以及免疫金标试纸检测法。前两种方法虽然都具有微量、特异、准确的优点,但需要比较完备的实验仪器和经验丰富的技术人员,且检测时间较长。而金标试纸条是新开发的一种全新猪瘟抗体检测方法,检测一个样品只需8～15min,操作简便、快速、直观、结果容易判定,但其应用检测结果的准确性尚待求证。鉴于这种情况,开展了免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验两种检测方法的比较研究[1]。结果表明,免疫金标试纸检测与猪瘟正向间接血凝试验的结果基本符合,试验结果可靠。

免疫层析试纸检测技术在猪病诊断中的应用

对免疫层析试纸检测技术在猪病诊断中的应用进行了介绍,以期为养殖户提供参考。

用试纸检测废水中砷

用试纸检测废水中砷江苏省吴江市松陵第一中学（２１５２００）徐锋在人们的生产、日常生活中，尤其在环境保护监测中，常常涉及到水的处理，而测定水样的成份，则是首先碰到的问题．一般说来，水的温度、ｐＨ值和Ｃａ２＋、Ｍａ２＋、等离子的浓度测定是较简单的；但是其...

酶联免疫吸附试剂盒与免疫金标快速检测试纸检测PRRS抗体的比较

应用美国IDEXX公司生产的PRRS抗体ELISA试剂盒和PRRS抗体免疫金标试纸同时检测12份猪血清,阳性率均为41.67％(5/12)。二种试剂都具有微量、特异、准确的优点。前者需要有酶标仪等仪器,试验时间长,成本高,但能用准确的数字表达抗体水平;后者不需要特殊仪器设备,试验时间短,成本低,适用于基层兽医站、养猪场使用。

试纸检测食物有害残留 几分钟出结果

可视化快速检测试纸的问世突破了制约食品安全监管能力的技术瓶颈，降低了检测成本，使监管从事后处理变为现场反应。

荧光定量检测试纸检测饲料中呕吐毒素

本研究建立了饲料中呕吐毒素荧光定量检测方法。饲料样品经70%甲醇溶液提取,过滤后,用0.01MpH7.4PBS复溶,结果表明,呕吐毒素在0.5~8毫克/公斤浓度范围内线性关系良好,r2=0.999。以配合饲料、浓缩饲料、预混料为添加基质,其回收率在80%~120%,检出限为500ppb。结论显示,本方法灵敏度高,操作简单,结果准确,可满足饲料中呕吐毒素的分析检测。

荧光定量检测试纸检测饲料中黄曲霉毒素B1

研究建立了饲料中黄曲霉毒素B_1荧光定量检测方法。饲料样品经70%甲醇溶液提取,过滤后,用0.01 mol·L^-1pH 7.4 PBS复溶,结果表明,黄曲霉毒素B1在5~80μg·mL^-1浓度范围内线性关系良好,r^2=0.998。以配合饲料、浓缩饲料、预混料为添加基质,其回收率在80%~120%,检出限为5μg·mL^-1。结果显示,本方法灵敏度高,操作简单,结果准确,可满足饲料中黄曲霉毒素B1的分析检测。

污水中十二烷基磺酸钠快速检测试纸的研制

基于结晶紫与十二烷基磺酸钠在pH为7.00的缓冲溶液下发生反应,建立了一种十二烷基磺酸钠的快速检测试纸来判断污水中是否含有阴离子表面活性剂。结果发现,当浸渍1 mg/L结晶紫溶液的试纸和pH为7.00的缓冲溶液混合时(结晶紫溶液与缓冲溶体积比是3∶1)显色更明显;十二烷基磺酸钠浓度与显色深浅呈正比。该十二烷基磺酸钠检测试纸的检测最低值为0.05 mg/L,最高值为2 mg/L。配制样品测定结果的相对误差范围为1.167%~4.233%,表明该方法具有良好的准确性。

猪轮状病毒胶体金检测试纸条的研制及应用

【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线。通过优化胶体金溶液最适pH、标记抗体和检测抗体的最佳使用量,制备PoRV胶体金检测试纸条;对试纸条的灵敏度、敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评价。通过检测50份猪粪便样品,计算试纸条与RT-PCR方法的符合率,最后采用试纸条进行1249份临床样品的测定。【结果】经优化后试纸条的最佳参数如下:胶体金溶液最佳pH为8.0,标记抗体4G5和检测抗体5G4最佳使用量分别为14.4μg/mL和1 mg/mL。试纸条能检测出1∶2000稀释的PoRV OSU株(G5型)病毒液,灵敏度为104.5TCID50/mL,且检测PoRV G9、G3和G4型毒株均为阳性。检测猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)、猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)均为阴性。批内和批间重复性、稳定性良好。检测50份猪粪便样品,与RT-PCR方法的阳性符合率为97.5%(39/40),阴性符合率为100%(10/10),总体符合率为98%(49/50)。检测2022年在河南、山西省猪场收集的临床样品1249份,阳性检出率为5.2%。【结论】本研究制备的PoRV胶体金检测试纸条具有良好的敏感性、特异性和重复性等优点,与RT-PCR方法的符合率较高,可用于规模化猪场PoRV的快速检测。

恙虫病东方体混合重组抗原应用于胶体金免疫层析试纸条的制备及效价检测

胶体金免疫层析试纸条具有携带方便、操作简单且敏感性、特异性高等特点,近年来开始广泛应用于疾病的诊断。为了实现对恙虫病的快速检测,笔者利用双抗原夹心法,以胶体金标记恙虫病东方体56 kDa混合重组蛋白,56 kDa混合重组蛋白和兔抗恙虫病东方体多克隆抗体分别喷在检测线及质控线上,制备了用于检测恙虫病东方体抗体的胶体金免疫层析试纸条。本研究制备的胶体金试纸条检测限为61 ng/mL,和疟疾、伤寒、血吸虫、出血热以及斑点热等阳性血清无交叉反应,特异性达90%(54/60),检测的敏感性为91.96%(103/112),在4℃下可稳定保存6个月。本试纸条能够应用于人体血清中恙虫病东方体总抗体的检测。

牛妊娠相关糖蛋白6快速检测试纸条的制备及应用

奶牛妊娠的早期诊断至关重要,妊娠相关糖蛋白6(PAG6)是母体胎盘组织分泌至外周循环中的特异蛋白质,因此,本研究致力于制备牛妊娠相关糖蛋白6快速检测试纸条。制备牛妊娠相关糖蛋白6多克隆抗体,将其稀释后加样至NC膜上,通过固定和封闭制备出一种可检测boPAG6的快速检测试纸条,在试纸条上加入待检血清进行孵育后洗涤,再加入二抗孵育后洗涤,最后加入显色液显色后进行快速检测。标准化快速检测试纸条是将抗体用PBS稀释成10μg/mL点样至NC膜上,在37℃温箱中固定抗体30 min,经5%的脱脂奶粉封闭后制成。待检血清滴加至试纸条后,在37℃温箱中孵育1 h后,进行洗涤和二抗孵育,最后在DAB显色试剂盒作用下显色3 min即可判定。临床检测的初步应用表明,在未孕与怀孕奶牛的混合血清中仍然可以判定是否怀孕,快速检测试纸条特异性强;血清在稀释3200倍的最低检测限时,快速检测试纸条的敏感性良好;而且该结果与ELISA的符合率在80%之上。试验重复性良好,并能在4℃和-20℃条件下保存2周。建立了一种奶牛早期妊娠诊断的快速检测试纸条并应用于初步的妊娠诊断。

桑蚕丝素蛋白快速检测试纸的制备及应用

“垂衣裳而天下治”,服饰在中华文明发展中起着重要作用,而丝织品作为最珍贵的纺织品之一,更是有着源远流长的历史。然而历经千百年的降解和老化,丝织品文物在出土时已难以辨别形貌,对后续取样鉴别及保护造成了巨大的困难。为解决这一现场检测难题,本文通过设计丝素蛋白单克隆抗体,结合胶体金免疫层析技术制备了桑蚕丝素蛋白快速检测试纸。该试纸可以专一识别桑蚕丝素蛋白,其最低检测限可以达到0.5μg/mL,为考古现场丝绸文物的快速检测提供了一种灵敏、精确、高效的分析手段。

试纸法检测蛋白质在高中生物学实验中的应用

“检测生物组织中的蛋白质”实验,是高中生物学课程中实验教学的重要内容。本文利用简易、灵敏的蛋白质快速检测试纸,来检测生物组织中的蛋白质。能有效地激发学生的创新潜能,培养学生的探究思维和实践能力,树立生命观念。

重组酶聚合酶扩增核酸试纸条快速检测诺如病毒方法的建立与应用

旨在建立快速检测GⅠ型诺如病毒的方法与快速检测GⅡ型诺如病毒的方法。分别以GⅠ型NoV特异性保守序列作为靶序列设计并合成RPA引物Nov-GⅠ-F、Nov-GⅠ-R与探针Nov-GⅠ-probe、以GⅡ型NoV特异性保守序列作为靶序列设计并合成RPA引物Nov-GⅡ-F、Nov-GⅡ-R与探针Nov-GⅡ-probe,利用RPA检测试剂盒建立RPA扩增体系,并通过核酸检测试纸条对扩增产物进行分析鉴定。通过检测不同拷贝数的重组GⅠ型NoV阳性质粒对GⅠ型NoV快速检测方法的灵敏度进行评价,通过检测不同拷贝数的重组GⅡ型NoV阳性质粒对GⅡ型NoV快速检测方法的灵敏度进行评价,并与普通PCR方法和实时荧光PCR方法进行比较;以星状病毒、MS2噬菌体基因组、人轮状病毒和人腺病毒重组质粒作为模板对GⅠ型NoV快速检测方法与GⅡ型NoV快速检测方法的特异性进行评价;应用建立的两种方法对市场上采集的20份食品样品进行GⅠ型NoV检测与GⅡ型NoV检测。GⅠ型NoV快速检测方法与GⅡ型NoV快速检测方法检测到最低质粒拷贝数均为101 copies/μL,且两种检测方法对其余病毒均具有良好特异性;对于从市场采集的潜在携带NoV的食品样品进行检测,结果均为阴性。本研究建立的针对GⅠ型NoV快速检测方法与GⅡ型NoV快速检测方法相较于普通PCR与实时荧光PCR具有检测时间短、特异性强、灵敏度高以及检测操作简单快捷的优点,更适用于市场流通领域食品及医学检测等现场快速检测的应用。