以检测为基础的高校转基因试验基地安全管理研究

转基因技术对选育高产、高品质的作物品种和全球粮食安全具有重要贡献。我国高度重视农业转基因技术的研究和发展,但转基因仍然存在一定的环境风险,需要被严格监管。高校转基因试验基地是开展转基因技术及其应用研究的重要平台。该文从转基因植物的种植现状及其潜在风险出发,以浙江大学为例详细介绍了以转基因检测为基础的全方位监管溯源流程,包括从种子—幼苗—果实—秸秆—土壤残留根系等不同阶段的取样检测,提出了以检测为基础的高校转基因试验基地安全监管方式。

转基因鱼试验湖浮游生物群落DNA多态性与物种组成关系

采用RAPD和PCR-DGGE指纹技术对转基因鱼试验湖的浮游生物群落DNA多态性进行了研究,并探讨了DNA多态性与物种组成的关系.结果显示:(1)形态学分类共鉴定到44种/类浮游生物:其中藻类13种,原生动物11种,轮虫16种,枝角类和桡足类各2种.多甲藻(Peridinium sp.)、球形砂壳虫(Difflugia globulosa)、螺形龟甲轮虫(Keratella cochlearis)和针簇多肢轮虫(Polyarthra trigla)4个物种在各个站丰度相对较高.(2)RAPD扩增共获得128条长度在200-1200bp的谱带,多态率为61.7%,特异性谱带占总谱带的19.5%.(3)PCR-DGGE指纹分析共获得87条扩增谱带,其中原核生物谱带相对较多(50条),真核生物谱带较少(37条),多态率分别为86%和64.9%.尽管形态学鉴定和DNA指纹分析都表现出较高物种多样性,但其相似性聚类却有差别:物种组成聚类中B、C站聚为一类,D、E站聚为一类,A站独为一类;两种DNA指纹分析聚类结果显示C、D、E三站聚为一类,A、B聚为一类.综上所述,在对浮游生物群落的研究中,形态学方法与DNA指纹技术不显著对应,后者能揭示更丰富的物种多样性,但毫无疑问三种方法可以从不同方面表征群落结构.这将为进一步研究湖泊浮游生物群落结构和功能关系奠定坚实的基础.

长春花碱3和24h处理TK6细胞TK基因突变试验比较研究

[目的]比较用长春花碱对人淋巴母细胞TK6处理3h和24h的诱变性。[方法]用长春花碱对TK6细胞分别进行3h和24h染毒处理,用微孔板法进行TK基因突变试验。计算TK6细胞的接种效率(PE)、相对存活率RS、相对悬浮增值率RSG、总的相对增长率RTG、突变频率MF。[结果]在3h处理条件下,随长春花碱浓度的增加,RS、RTG和RSG等均降低,中、高剂量水平已表现出明显的细胞毒性,但各剂量水平的MF与溶剂对照比较差异均有统计学意义(P﹤0.05);在24h处理条件下,其MF随VBL浓度的增加而增加,并有一定的剂量-反应关系。[结论]较长时间处理对于长春花碱等细胞周期依赖性的毒物是必要的。

转基因鱼试验湖浮游生物群落DNA指纹与理化因子的关系

对转基因鱼试验湖7个采样点的浮游生物群落进行了PCR-DGGE指纹分析,并进而探讨了DNA指纹与理化因子的关系。结果表明:(1)PCR-DGGE指纹图谱中共含104谱带,其中原核谱带58条,真核谱带46条,其多态性位点分别为87.9%和82.6%。(2)各站点的理化因子中,Ⅰ站的TP含量最高(0.10mg/L),TN含量在Ⅲ站最高(0.34mg/L),且各站点波动较大,Ⅴ站的透明度最低(63.00cm);NO3-N、NH4-N、pH、DO、COD及电导率在各站点变化不大。基于原核生物图谱的相似性聚类分析表明,浮游生物群落Ⅵ和Ⅶ、Ⅳ和Ⅴ、Ⅱ和Ⅲ相似度分别较高,Ⅰ站有别于其它各站,单独为1枝;基于真核生物图谱的聚类分析显示,Ⅰ、Ⅱ站聚为1枝,Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ依次相聚后与Ⅲ站聚为另1大枝,Ⅰ、Ⅱ站与Ⅲ站相距较近;理化因子的主成分分析结果与之基本吻合。因此,浮游生物群落DNA多态性与环境理化因子是密切相关的,这类资料的积累将为在分子水平上建立水质预测预报体系奠定基础,为评价转基因鱼生态安全性提供依据。

汽油和甲醇两种燃料的汽车尾气的TK基因突变试验比较

甲醇燃料极有希望成为更清洁的汽油替代品,然而有关甲醇燃料汽车尾气对健康影响的研究报道极少,更未见对甲醇和汽油两种燃料汽车尾气的遗传毒性进行比较研究。为此本课题在同样的车型,同样的工况条件下采集了甲醇尾气和汽油尾气,选用L 5 178Y细胞Thymidine kinase(TK)基因突变试验,在同样的剂量范围进行了两种尾气的遗传毒性检测,并与微核试验和彗星试验的结果进行了比较。结果显示,在33～133ml/ m l范围内,汽油尾气的遗传毒性强于甲醇尾气,但是甲醇尾气的细胞毒性强于汽油尾气;与微核试验和彗星试验比较证实,L 5 178Y细胞TK基因试验检测基因突变更加灵敏。

几种检测麻风菌的基因扩增试验的比较研究

对检测麻风菌用的几种PCR方法进行了比较研究。这些PCR以编码麻风菌65KD、36KD、18KD、groEL和16S rRNA的基因为基础。比较用的指标是敏感性、特异性、简易快速和节省试剂,结果显示以编码麻风菌65KD抗原的基因为基础的PCR(此法原为Woods报告,后经我们优化改良)为最实用,其检测下限为10～100条麻风菌,与其它已知的分枝菌无交叉反应,用单对引物,仅需30个循环,以2.5～3个小时就能完成实验,且用料仅为其它常用反应体系的1/2,敏感性高、特异性强,简单、快速、价廉,故适于推广应用。

用tk基因突变试验评价长春新碱和秋水仙碱的遗传毒性

目的评价有丝分裂抑制剂长春新碱和秋水仙碱的遗传毒性,并比较短期和长期tk基因突变试验的检出灵敏度.方法用长春新碱和秋水仙碱对小鼠淋巴瘤细胞分别进行3h及24h染毒,用微孔板法进行tk基因突变试验,计算相对悬浮生长、接种效率、相对存活率、相对总生长及突变频率等指标,并比较短期和长期处理的结果.结果两种受试物3h处理均未出现明显的阳性反应,而24h连续处理后,两种受试物均能诱导tk基因突变频率增高,诱发突变频率分别为自发突变频率的1.6～4.8倍和2.1～6.2倍,呈阳性结果.结论长春新碱和秋水仙碱在长期处理试验中能诱导tk基因突变,而在短期处理试验中未发现明显诱变性,即长期处理能提高tk基因突变试验的检出灵敏度.

转基因鱼试验湖泊铜锈环棱螺种群动态及次级生产力

2008年2月至2009年1月对转基因鱼试验湖泊铜锈环棱螺的种群生态学进行了周年研究。铜锈环棱螺的平均密度和生物量分别为28.96个/m2和17.33 g/m2,丰度最高值出现在4月(34.29个/m2和54.51 g/m2),其次为12月(25.1个/m2和36.18 g/m2)。试验湖泊中铜锈环棱螺在4—7月繁殖,种群中含有4个年龄组,其中2008年龄组占绝对优势。铜锈环棱螺壳长-体重方程为:lg Ww=2.8791×lg SL-3.4227,使用瞬时生长法测算试验湖泊铜锈环棱螺的周年生产量,带壳湿重为12.72g.m-.2a-1,去壳干重为0.74 g.m-.2a-1,P/B系数为0.42。估算试验湖泊2005年至2009年铜锈环棱螺生产量(去壳干重)分别为2.24,2.49,1.50和0.74 g.m-.2a-1。多元逐步回归分析显示总氮对铜锈环棱螺的次级生产量有显著影响,转基因鲤的捕食压力也可能是影响铜锈环棱螺生产量的重要因素。

基因型同质试验单元较少的几种设计

根据特种设计的基本原理 ,介绍了用混杂设计、平衡不完全区组设计以实施基因型同质试验单元较少而处理数较多的试验。这两种设计的基本特点是采用混杂的原理缩小不完全区组的大小 ,使较少的基因型同质试验单元可安排一个不完全区组所需的处理。并各列举了 1个畜牧方面的试验演示其分析过程。

用TK基因突变试验评价葛根素的抗诱变性

背景与目的:用TK6人类淋巴母细胞TK基因突变试验评价葛根素的抗诱变性。材料与方法:设溶剂对照组、5μg/ml甲基磺酸甲酯(MMS)组、5μg/mlMMS分别加葛根素25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的各试验组、5μg/mlMMS+100μg/mlVitC对照组,共6组。按上述分组加入葛根素与MMS处理4h后测定第0d的平板接种效率(PE0)、第3d的平板接种效率(PE3)、细胞悬浮生长率(RSG)和总突变频率(TMF)。结果:100μg/ml葛根素剂量组能显著降低MMS诱导的TK基因突变频率。结论:在本实验条件下,葛根素在较高剂量范围可抑制MMS诱导的TK6细胞TK基因突变,有潜在的开发应用前景。

麻风菌16s rRNA基因扩增试验的建立

以编码麻风菌（ＭＬ）１６ｓｒＲＮＡ种特异性片段的基因为扩增靶，建立了检测麻风的基因扩增试验。本法特异性高，可重复性好。

绿色荧光蛋白转基因小鼠用作hprt基因突变试验动物模型的研究

目的:探讨绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠用作hprt基因突变试验动物模型的可能性。方法:用乙基亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱导GFP转基因小鼠和普通小鼠基因突变,比较诱导后两种小鼠的嗜多染红细胞微核率变化情况。再观察GFP小鼠细胞克隆对GFP转基因小鼠hprt基因的DNA和mRNA序列进行验证,并对GFP转基因小鼠hprt突变克隆外显子1和外显子9进行了双向测序。结果:ENU诱导后GFP转基因小鼠和普通小鼠的微核率变化趋势相同。GFP转基因小鼠的微孔培养物比普通小鼠的微孔培养物易于确认,且降低了假阳性率和假阴性率。GFP转基因小鼠的hprt基因是完整的,与普通小鼠相比未见明显差异。GFP转基因小鼠hprt基因6个突变克隆外显子1的序列均与野生型小鼠细胞的序列一致,3个突变克隆外显子9的序列中有2个发生了A∶T→T∶A颠换。结论:ENU诱导的GFP转基因小鼠突变模型良好,GFP转基因小鼠可用作小鼠淋巴细胞hprt基因突变试验的动物模型,准确性高且试验难度低。

用TK基因和HGPRT基因突变试验检测人参皂甙Rg1的抗诱变性

[目的]用TK基因和HGPRT基因突变试验评价人参皂甙Rg1的抗诱变性,为其进一步的开发利用提供资料。[方法]用人参皂甙Rg10.391、3.125、25、200μg/ml与阳性致突变物甲基磺酸甲酯(MMS)5μg/ml同时处理TK6细胞4h,采用微孔板法检测tk和hgprt两个位点突变频率。[结果]随受试物剂量的增加,人参皂甙Rg1拮抗MMS诱变性的作用增大,表现在tk和hgprt两个位点突变频率均较MMS组降低,差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]人参皂甙Rg1具有拮抗MMS诱导的tk基因和hgprt基因突变的作用;TK6细胞可用于TK基因和HGPRT基因突变的同时检测,但TK基因突变试验比HGPRT基因突变试验更为敏感。

用TK基因和HGPRT基因突变试验检测人参皂甙Re的抗诱变性

背景与目的:用TK基因和HGPRT基因突变试验评价人参皂甙Re的抗诱变性,为其进一步的开发利用提供资料。材料与方法:设人参皂甙Re12.5、25、50、100μg/ml分别与致突变物甲基磺酸甲酯(MMS)5μg/ml同时处理TK6细胞的实验组,同时设溶剂对照组(1DMSO),阳性诱变对照组(MMS5μg/ml)和抗诱变阳性对照组(VitC+MMS),各组处理TK细胞4h后,采用微孔板法检测TK和HGPRT两个位点的突变频率。结果:随着剂量的增加,人参皂甙Re拮抗MMS诱变性的作用增大,表现在TK和HGPRT两个位点突变频率均较阳性诱变对照组降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:人参皂甙Re具有拮抗MMS诱导的TK基因和HGPRT基因突变的作用;TK基因突变试验比HGPRT基因突变试验更为敏感。

用TK基因突变试验评价大蒜素的抗诱变性

[目的]用TK6人类淋巴母细胞的TK基因突变试验评价大蒜素的抗诱变性,为大蒜素抗诱变作用及其可能机制的研究提供毒理学依据,并为TK基因突变试验在抗诱变性检测方面的应用及推广积累资料。[方法]设溶剂对照组、5μg/ml MMS组、5μg/ml MMS+大蒜素0.1μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml试验组、5μg/ml MMS+100μg/ml VitC对照组。分别采用同时处理和后处理两种方法测定PE0、PE3、RS和TFT。[结果]大蒜素在两种处理条件下均能显著降低MMS诱导的TK基因突变频率,并呈较好的量效关系,两种处理条件的作用强度差异无统计学意义。[结论]在本实验条件下,大蒜素可抑制MMS诱导的TK6细胞TK基因突变,有很好的开发应用前景。

Pig-a基因突变试验研究进展

建立灵敏可靠的遗传毒性试验方法是全面充分评价化学物质致突变性的必要保障。近年来,一种基于Pig-a基因的新型基因突变试验成为研究热点,该方法具有灵敏度高,成本低,与其他遗传毒性试验整合潜力高,减少动物使用等优点,有望成为未来评估体内基因突变的新方法。本文就Pig-a基因突变试验的研究与应用进展进行综述。