大鼠皮肤类过敏试验的方法学研究及适用性考察

目的研究大鼠皮肤类过敏试验方法的适用性和可靠性，对中药注射剂潜在的类过敏反应进行检测和评价。方法以C48／80为工具药物，对可能影响大鼠皮肤类过敏试验的灵敏度和可靠性因素进行比较研究，优选最佳试验条件，选用Tween80、内毒素、中华眼镜蛇毒素、天花粉蛋白注射液、痰热清注射液和血塞通注射液进行考察和应用。结果大鼠皮肤类过敏反应试验方法最佳条件为：采用胰岛素注射器（口径0．33mm）进行药物注射，50-100pL／点，给药后立即尾静脉注射0．5％伊文思蓝染液1mL，15min时颈动脉放血处死大鼠，剪取背部皮肤处理。采用该方法，Tween80、内毒素、中华眼镜蛇毒素、天花粉蛋白注射液均呈现一定的诱导大鼠皮肤出现蓝斑的能力，痰热清注射液给予临床剂量无蓝斑出现。血塞通注射液，临床剂量虽可引起大鼠皮肤蓝斑，但不排除与因其本身的药效作用干扰所致。结论该方法操作简便，试验周期短，需用药量少，检测敏感性高，结果重复性好，但易受药物本身特性干扰而出现假阳性。

大鼠皮肤类过敏试验的组织学机制

目的探索大鼠皮肤类过敏试验的组织学机制。方法大鼠背部脊柱两侧分别皮内注射C48/80、吐温-80、碘海醇注射液、紫杉醇注射液、注射用血塞通(冻干)、喜炎平注射液后,立即尾静脉注射0.5%伊文思蓝溶液,15 min后麻醉处死,剪取背部皮肤,测量蓝斑直径,取蓝斑皮肤观察肥大细胞形态,计算脱颗粒率。再采用Pearson检验进行相关性分析。结果皮内注射C48/80、吐温-80、碘海醇注射液、紫杉醇注射液、注射用血塞通(冻干)后,蓝斑直径、肥大细胞脱颗粒率与药物质量浓度(体积分数)均呈正相关,两者之间亦然,但肥大细胞数均无明显变化[除0.8、1.6 mg/mL注射用血塞通(冻干)外];皮内注射喜炎平注射液后,蓝斑直径、肥大细胞数、脱颗粒率均无明显变化(除质量浓度5 mg/mL时蓝斑直径外)。结论大鼠皮肤类过敏试验组织学机制是类过敏阳性物质致皮肤肥大细胞脱颗粒,其脱颗粒率与阳性物质浓度、皮肤蓝斑直径呈高度正相关,可作为药物类过敏性及其反应强度评判的一项补充指标。

皮肤腐蚀性试验大鼠经皮电阻替代方法建立

目的建立大鼠经皮电阻(TER)试验,并初步评价试验方法的可行性。方法制作离体皮肤固定装置,用正常大鼠皮片固定于装置后的TER值变化及病理组织学变化来评价其可行性,参照OECD TG430的方法,采用10种化学物进行TER试验,并统计分析TER试验结果与动物试验结果的一致性。结果正常离体皮肤固定装置24 h期间能维持屏障功能稳定,3次重复实验TER值变化曲线一致,24 h时皮片组织形态结构仍然完好;TER试验对10种化学物的腐蚀性判别结果与动物试验的结果具有一致性(Mcnemar,P=0.500;Kappa=0.615,P=0.035),灵敏度为100%,特异度为66.7%。结论 TER试验可替代家兔皮肤腐蚀性试验用于评价化学物的皮肤腐蚀性。

抗脂肪细胞膜蛋白抗体对试验性肥胖大鼠5种激素水平的影响

为了验证抗脂肪细胞膜蛋白抗体减少动物脂肪沉积的作用效果,并对该抗体用于人类肥胖的治疗提供理论依据和试验资料,本试验分别对4组试验性肥胖大鼠注射0、0.1、0.5、1.0mg/mL剂量的抗脂肪细胞膜蛋白抗体,并检测4周内大鼠血清中5种激素含量及变化。结果显示,试验组血清中胰岛素(INS)含量低于对照组,Ⅰ组与Ⅳ组4周内均差异显著(P<0.05);试验组与对照组、胰岛素样生长因子1(IGF-1)含量无显著差异(P>0.05);注射抗体后,试验组生长激素(GH)含量显著增高,且Ⅰ、Ⅲ组4周内均差异显著(P<0.05);第1周内,试验组三碘甲状腺原氨酸(T3)含量与对照组无显著差异(P>0.05),后3周内Ⅰ组和Ⅳ组差异显著(P<0.05);第1、3、4周内,Ⅰ组和Ⅳ组四碘甲状腺原氨酸(T4)含量差异显著(P<0.05),第2周内无显著差异,Ⅱ组和Ⅲ组差异均不显著(P>0.05)。此外,不同组间的差异显著性随注射剂量不同而不同。

医疗器械重复接触全身毒性试验新方法的研究--大鼠胃肠外双途径接触试验

为评价医疗器械极性及非极性可沥滤物同时接触人体时产生重复接触全身毒性的可能性,该研究设计了大鼠胃肠外双途径接触试验法并验证其可行性。本研究设计了空白对照组,腹腔注射玉米油组和胃肠外双途径接触组(尾静脉注射生理盐水,同时腹腔注射玉米油)。试验期间每天进行临床观察,每周称重。14 d后,取血进行临床病理检测、大体病理以及组织病理学检查并将数据进行统计学分析。与对照组相比,双途径接触组各项指标均未见毒性相关性改变。结果表明该试验法能够使大鼠同时充分接触极性及非极性浸提介质又不引起不良病理反应。

二十八醇对大鼠90天喂养试验

二十八醇（ｏｃｔａｃｏｓａｎｏｌ）由浙江省粮食科学研究所从米糠油中提取而成。大鼠９０天喂养试验结果表明，高剂量组（２５０ｍｇ／ｋｇ）对大鼠生长发育、血象、生化功能及脏体比等各项指标未见不良影响。

硒酵母对大鼠90天喂养试验

硒酵母对大鼠９０天喂养试验结果表明，３ｍｇ／ｋｇ剂量组对大鼠的生长发育、血浆、生化功能及脏体比等各项指标未见不良影响。

两品系大鼠经皮电阻试验结果的比较

目的分析比较Wistar大鼠和SD大鼠大鼠经皮电阻试验(TER)结果。方法参照OECD化学品安全性评价指南和我国《化妆品安全技术规范》中的体外皮肤腐蚀性大鼠经皮电阻试验的流程,分别使用Wistar大鼠和SD大鼠对12种参考化学物质进行皮肤腐蚀性检测,对比分析两个品系两种不同判定标准判定的腐蚀性结果。结果两品系大鼠使用OECD指南方法对12种参考化学物质皮肤腐蚀性判定结论一致,灵敏性均为50%,特异性均为100%;在使用《化妆品安全技术规范》判定皮肤腐蚀性时,两品系大鼠对4-甲硫基-苯甲醛腐蚀性判定结论不一致,其余11种参考物质判定均一致,Wistar大鼠灵敏性100%,特异性83.3%,SD大鼠灵敏性和特异性均为100%。结论两品系大鼠经皮电阻试验结果基本一致,SD大鼠更适合应用于大鼠经皮电阻试验的检测。

若干药物的大鼠皮肤类过敏试验

目的考察和评价10种造影剂、中药注射剂和化学合成药的大鼠皮肤类过敏试验方法的适用性。方法大鼠皮内注射受试药物后立即尾静脉注射0.5%伊文思蓝染液,15 min后处死,测量蓝斑直径。设定蓝斑直径>0.5 cm为类过敏反应阳性。结果临床剂量下,碘海醇、复方泛影葡胺注射液、双黄连、生脉、脉络宁和喜炎平注射液出现类过敏反应阳性,而碘普罗胺注射液、清开灵和金纳多注射液呈类过敏反应阴性;高于临床剂量时,上述受试药物除清开灵外,均为类过敏反应阳性。盐酸川芎嗪在临床剂量和临床2倍剂量下类过敏反应均为阴性。结论蓝斑直径与给药剂量有关,大鼠皮肤类过敏试验方法可作为初步评价注射类药物临床前类过敏性的一种简便、快速的检测方法。

中药宝宝乐对幼龄厌食大鼠模型β-EP及CCK的作用

目的:研究运脾平肝复方宝宝乐口服液对小儿厌食症动物模型β-EP及CCK的调节作用。方法:模拟小儿厌食症的主要病因制作幼龄厌食大鼠模型,用宝宝乐口服液治疗,用放免检测技术测定实验动物下丘脑、胃窦部及外周血β-EP和CCK的含量,并与单纯运脾复方儿宝颗粒对照。结果:模型大鼠胃窦部及血浆中β-EP浓度明显下降(1.71±0.80vs6.87±1.63,P<0.01;6.53±1.05vs10.76±4.05,P<0.05),下丘脑无明显变化;下丘脑和血浆CCK—8浓度均明显增高(131.12±28.56vs91.08±18.68,P<0.05;486.95±113.32vs262.15±95.09,P<0.01);宝宝乐和儿宝颗粒治疗组血浆中β-EP浓度、下丘脑和血浆CCK—8浓度均恢复正常,宝宝乐治疗组下丘脑CCK-8浓度回降较儿宝颗粒明显(85.67±22.62vs108.36±20.97,P<0.05)。结论:宝宝乐能调节该模型中枢及外周β-EP和CCK的分泌与释放。

仙鹿壮骨方对骨质疏松大鼠I型胶原基因表达的影响

目的研究补肾中药仙鹿壮骨方对骨质疏松症大鼠骨组织I型胶原基因mRNA表达的影响。方法用地塞米松制造骨质疏松症大鼠模型,给予不同剂量的仙鹿壮骨方药,并与西药补钙剂对照观察。测定大鼠骨密度,以荧光定量PCR检测I型胶原基因表达水平。结果模型组骨密度明显下降,治疗各组骨密度均有提高。模型组I型胶原基因表达显著下降,治疗各组I型胶原基因表达明显上升,上升幅度以中药大剂量组最高,西药组次之,中药小剂量较差。结论补肾中药仙鹿壮骨方能促进地塞米松型骨质疏松症大鼠I型胶原的合成,其防治骨质疏松症可能是通过促进骨组织中I型胶原基因的表达,提高骨密度而实现的。

酸枣仁珍珠粉胶囊大鼠喂养试验

目的酸枣仁珍珠粉胶囊的大鼠30天喂养试验安全性考察。方法实验动物随机分四组,受试物组剂量分别为0.50g/(kg·bw)、1.00g/(kg·bw)、2.00g/(kg·bw),对照组给予蒸馏水,每日灌胃,连续30天。每周称一次体重,计算食物摄入量和食物利用率。30天后,检测大鼠血常规、血生化、脏器重量及脏器/体重比值,并进行大体解剖及组织学检查。结果实验期间,动物生长发育良好,各剂量组体重、增重、食物利用率、血常规指标、血生化指标、脏器重量及脏器/体重比值与对照组比较,无显著性差异。大体解剖和组织病理检查未见与样品有关的异常改变。结论样品30天喂养对大鼠未见明显毒副作用,在本试验的剂量范围内,酸枣仁珍珠粉胶囊是安全的。

牦牛骨粉对大鼠骨钙、骨密度及骨钙吸收率影响的研究

目的:研究牦牛骨粉钙吸收率及对大鼠骨钙、骨密度的影响。方法:清洁级雌性SD大鼠,70只,随机分为7组,即低钙对照组(饲料中含钙量为1180mg/kg),牦牛骨粉高、中、低三个剂量组(相当于人体推荐摄入量的5、10、20倍),实测值饲料中含钙量为1437、1852、2778mg/kg,另设与样品对照组剂量相对应的三个碳酸钙对照组。于实验第4w末进行三天的钙代谢试验。整个喂养时间为12w,实验结束日,测右侧股骨长度,干重,骨钙含量及骨密度。结果:牦牛骨粉10、20倍剂量组股骨钙含量、股骨骨密度高于低钙对照组,5、20倍剂量组钙表观吸收率高于相应剂量的碳酸钙对照组(p<0.05)。结论:牦牛骨粉不仅有增加骨密度功能,并具有较高的钙表观吸收率。

川芎嗪对肺动脉高压大鼠肺血管凋亡的影响

目的:观察川芎嗪对肺动脉高压大鼠肺血管凋亡的影响。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为两组,对照组(n=20)置于常压低O_2高CO_2舱内以模拟肺动脉高压大鼠模型;观察组(n=20)同于对照组,但均在入舱前30min腹腔注射川芎嗪80mg·kg^(-1)·d^(-1);比较两组大鼠的血流动力学变化、肺细小动脉管壁面积与总面积比值(WA/TA)、肺细小动脉凋亡指数、bcl-2与bax。结果:观察组的平均肺动脉压(m PAP)、右心室重量比、WA/TA均明显低于对照组(P<0.05);观察组的bcl-2显著低于对照组(P<0.05),但细胞凋亡指数(AI)、bax、bax/bcl-2均高于对照组(P<0.05)。结论:川芎嗪对肺动脉高压大鼠肺血管重建有明显抑制作用,推测其机制可能是与促进肺细小动脉凋亡、抑制肺细小动脉增殖有关。

水飞蓟合剂对实验大鼠高脂血症降脂作用的初步研究

目的:观察水飞蓟合剂对实验大鼠高脂血症的降脂效果为临床应用提供科学依据;方法:将试验大鼠随机分为5组,即高脂对照组、正常对照组及高脂给药(2%、3%、4%)组,各组饲喂相应的饲料配方,试验10周,应用生化仪器和酶试剂盒等测定指标;结果:水飞蓟合剂能明显降低TC、TG和LDC-C的水平(P<0.01),能使HDC-C的浓度升高(P<0.05)。结论:水飞蓟合剂对实验大鼠高脂血症有明显降脂作用。

己酮可可碱对内毒素血症大鼠心肌TLR4与TNFα mRNA表达影响及机制研究

目的:研究己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对内毒素血症(endotoxemia,ETM)大鼠心肌组织Toll样受体4(toll like receptor4,TLR4)及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNFα)mRNA表达的影响,探讨PTX在ETM中对急性心肌损伤的保护作用。方法:实验分空白对照组,ETM组,PTX组;ETM经尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)5mg/kg,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织TLR4和TNFαmRNA的表达。结果:ETM组心肌组织中TLR4与TNFα表达均较正常对照组显著增强(P<0.001);注射PTX后心肌组织中TLR4与TNFαmRNA表达分别比ETM组显著减少(P<0.01)。结论:PTX可通过抑制ETM心肌组织TLR4功能及其介导的信号转导,抑制促炎症因子表达,对ETM心肌损伤起保护作用。

新生大鼠在1-氨基-3,5-二甲基金刚烷盐酸急性毒理实验中的毒性反应

目的研究1-氨基-3,5-甲基金刚烷盐酸(美金胺)对SD新生大鼠的急性毒性反应.方法在对47只SD新生大鼠进行美金胺死亡剂量预初实验、得出新生大鼠100%死亡剂量和最大耐受剂量的基础上,将60只新生大鼠根据所选剂距随机分为5组,并设对照组,每组10只,分别经腹腔注射不同剂量美金胺和注射用水,观察毒性反应并应用Bliss方法计算美金胺的半数致死量(LD50)值.结果美金胺在SD新生大鼠LD50值为(74.386+2.811)mg/kg,95%可信区间为59.334～93.257mg/kg.大鼠多在用药后1～4 min出现不良反应,较低剂量组(52.0、61.2、72.0 mg/kg)主要表现为兴奋性颤动、共济失调、呼吸减慢和抑制,部分表现为侧卧、皮肤发绀和呼吸衰竭.较高剂量组(85、100 mg/kg)主要表现为明显的抑制症状、呼吸衰竭、侧卧、皮肤发绀,无颤动及共济失调.死亡新生大鼠多在用药后1 h左右死亡,存活新生大鼠于用药后4～5 h毒性反应消失.结论美金胺不同剂量对新生大鼠均产生毒性反应,新生大鼠的毒性反应及死亡率与美金胺的剂量呈正相关,剂量越大,毒性反应越重,死亡率越高,提示美金胺应用于临床时应密切监测其毒性反应.

一种体外皮肤腐蚀性试验替代方法的建立

目的建立皮肤腐蚀性的体外检测方法—大鼠经皮电阻试验(TER),优化OECD指南标准TG 430大鼠经皮电阻方法结果判定标准,并评价该方法作为替代方法用于评估化妆品原料的皮肤腐蚀性检测可行性。方法参照经合组织(OECD)化学品检测指南中TG 430体外皮肤腐蚀性大鼠经皮电阻试验的流程,使用Wistar大鼠对16种参考化学物质进行皮肤腐蚀性检测,设定不同的判定标准方案,通过对比筛选出最优的判定标准方案;并在5个实验室间进行11种参考物质的结果比对。结果改良后的TER结果判定方案结论与参考化学物质的实际腐蚀性结果具一致性(Kappa值0.64),改良方案B的特异性为66.7%,敏感性为100%,效能最高;实验室间比对结论差异无显著性(P>0.05),实验室间对11种参考物质的判定一致率为72.7%。结论经改良的大鼠经皮电阻试验可较好的筛选化学物质的腐蚀性,有望在我国的替代毒理学及化学物质安全性评价中发挥重要的作用。

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒在实验大鼠中的感染状况

目的对实验室留存的大鼠血清样本进行淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)抗体检测,调查LCMV在我国实验大鼠中的感染情况。方法依据现行国家标准中规定的免疫荧光试验(IFA)方法对我实验室保存的172份大鼠血清样本(包括48份无级别、100份清洁级和24份SPF级大鼠血清样本)进行LCMV抗体检测。结果无级别大鼠血清样本(n=48)15份阳性,阳性率为33.25%,强阳性样本滴度可达1∶1280;SPF级及清洁级大鼠血清样本全部阴性。结论大鼠可以感染LCMV,实验动物等级标准应增加对大鼠LCMV的检测。