简要介绍美国NCCLS药敏试验纸片扩散法法规（续）（1994年12月版）

简要介绍美国ＮＣＣＬＳ药敏试验纸片扩散法法规（续）（１９９４年１２月版）王辉，陈民钧，徐英春编者按《简要介绍美国ＮＣＣＬＳ药敏试验纸片扩散法法规（１９９３年１２月版）》续篇即将刊出时，作者又收到美国ＮＣＣＬＳ的１９９４年１２月最新版本，故将该法规最新...

双纸片协同试验检测产ESBLs方法的探讨

目的 选择检测产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)双纸片协同试验最佳条件。 方法 30株临床分离经基因法确定的产ESBLs菌 ,用CTX、CAZ、ATM、FEP药敏纸片与AMC药敏纸片做协同试验 ,纸片之间距离分别选择 10mm、15mm、2 0mm、2 5mm、30mm和 35mm。结果 FEP和ATM与AMC协同试验结果最佳 ,纸片之间距离在 10mm～ 2 5mm时阳性检出率是 10 0 % ;CTX与AMC协同试验结果次之 ,距离在 10mm～ 2 0mm之间时阳性检出率是 96 7% ;CAZ与AMC协同试验结果较差 ,距离在 10mm～ 15mm之间时阳性检出率是 86 7% ,距离在 2 0mm时检测率是 83 3%。结论 双纸片协同试验检测产ESBLs最佳底物是FEP和ATM ,最佳距离是 15mm。

纸片药敏试验对铜绿假单胞菌β-内酰胺类耐药表型的分析

目的用纸片药敏试验分析仁济医院临床分离的铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物的耐药表型。方法根据Vedel建立的方法,采用8种药敏纸片的药敏试验结果对147株铜绿假单胞菌的β-内酰胺类抗菌药物耐药表型进行分析。结果147株铜绿假单胞菌有13种不同β-内酰胺类抗菌药物的耐药表型,仁济医院西部外科、风湿和肾脏等病区有3种以上的不同耐药表型存在。结论铜绿假单胞菌耐药机制复杂,Vedel所建立的表型分析方法可方便有效的分析铜绿假单胞菌临床分离株的β-内酰胺类抗菌药物耐药表型。

EDTA纸片增效试验检测鲍曼不动杆菌金属β-内酰胺酶

目的探讨金属β-内酰胺酶(MBL)检测方法,为临床合理选择抗菌药物提供确切的依据。方法收集104株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌(CRAB),以乙二胺四乙酸(EDTA)纸片增效法检测MBL表型,并与聚合酶链反应(PCR)检测MBL基因结果进行比较。结果应用PCR方法,在104株受试菌中检出MBL基因阳性菌21株;EDTA纸片增效法检测出24株阳性菌株,对比PCR实验结果,该方法的敏感度95.2%,特异度95.1%。结论 EDTA纸片增效法检测鲍曼不动杆菌的MBL方法简便、结果可靠、成本低廉,适合于基层医院临床微生物学实验室对产MBL鲍曼不动杆菌的初步鉴定。

双纸片试验检测产ESBL菌的敏感性及特异性研究

目的 :研究双纸片试验检测超广谱β 内酰胺酶 (ESBL)的敏感性和特异性。 方法 :双纸片试验检测已知产ESBL的参考菌株和临床菌株。结果 :纸片间距为 2 0mm时 ,双纸片试验检测产ESBL参考菌株的敏感性为 90 .9% ,间距小于或大于2 0mm时敏感性显著下降。双纸片试验检测临床菌株的阳性检出率为 91.43 % ,特异性均为 10 0 %。 4种抗生素纸片单用对产ESBL菌总的检出率间差异均无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但均低于 4种纸片联用 (P <0 .0 5～P <0 .0 1)。结论 :双纸片试验检测产ESBL菌有较高的敏感性和特异性时 ,纸片间距对其敏感性有较大影响 ,多种抗生素纸片联用可以提高本试验的敏感性 ,因其操作方便 ,成本低 ,易于在临床上推广。

双纸片协同试验在检测产超广谱β-内酰胺酶细菌中的临床应用

用双纸片协同试验检测我院近 6个月来临床标本中产 ESBLS的细菌 ,并探讨双纸片协同试验的最佳方法。结果显示 ,在 2 44株大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中产 ESBLS菌 49株 ,总检出率为 19.6 7% ,另外在嗜麦芽窄食单胞菌检出 5例产 ESBLS株 ,铜绿假单胞菌 ,产气肠杆菌和枸橼酸杆菌各检出 1例产 ESBLS株 ,说明我院产 ESBLS菌株产生较广泛。由于 ESBLS阳性株对临床常用抗生素的耐药率远远高于 ESBLS阴性株 ,使临床治疗面临极大的困难 ,必须引起临床医生和临床微生物室的重视。提示我院双纸片协同试验的最佳底物是 FTX、 ATM和 FEP,最适距离是2 5 mm,该法与 Etest确证试验的阳性符合率为 10 0 % ,因此该法仍为临床微生物室检测 ESBLS的适宜、简便。

硼酸抑制纸片扩散试验检测肺炎克雷伯菌中的KPC

目的评估利用硼酸的纸片扩散试验检测肺炎克雷伯菌中肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)的效能。方法收集经基因鉴定非重复的36株产KPC肺炎克雷伯菌株;采用琼脂稀释法测定所有菌株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的最低抑菌浓度(MIC)值;聚合酶链反应(PCR)和DNA测序鉴定β-内酰胺酶基因型;使用标准和超过标准的2种测试菌量进行改良Hodge试验(MHT)以检测碳青霉烯酶表型;利用8种抗菌药物纸片含或不含硼酸抑制剂的纸片扩散试验检测KPC表型,以两者抑菌圈直径差值≥5 mm判定阳性结果。结果所有36株产KPC菌株至少对1种碳青霉烯类药物耐药。MHT检测碳青霉烯酶的敏感性和特异性为97.2%和91.0%,增加菌量后的敏感性和特异性为100.0%和87.0%。利用硼酸联合头孢吡肟、亚胺培南或美罗培南的纸片扩散试验检测肺炎克雷伯菌产KPC表型,敏感性和特异性均达到100.0%。结论硼酸联合头孢吡肟、亚胺培南或美罗培南的纸片扩散试验能检测出KPC表型,而且该方法操作简单、结果易读。

改良亚胺培南-EDTA纸片增效试验检测铜绿假单胞菌产金属酶表型

目的评估改良亚胺培南-乙二胺四乙酸(EDTA)纸片增效试验在检测铜绿假单胞菌(PA)产金属酶表型中的应用价值。方法收集95株耐碳青霉烯类药物PA,采用琼脂稀释法测定所有菌株对亚胺培南和美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)值,聚合酶链反应(PCR)和DNA测序鉴定金属酶基因型,亚胺培南-EDTA纸片增效试验常规法和改良法检测金属酶表型。结果 95株耐碳青霉烯类药物PA对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为100.0%和71.6%;常规法敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别是100.0%、96.6%、72.7%和100.0%,而改良法均为100.0%。结论改良亚胺培南-EDTA纸片增效试验可能是一种检测PA产金属酶表型的有效方法。

重视纸片扩散法药敏试验的主要影响因素

纸片扩散法药敏试验操作简便、结果准确,可在各级医院的细菌室使用,是适合国情的药敏试验方法。我国已经统一操作规程,但因各实验室条件的不同,要特别注意MH琼脂质量、药敏纸片稳定性、菌液浊度、抑菌环边缘不齐等因素影响纸片扩散法药敏试验结果的准确性。

用布氏菌病纸片试验对筛查布氏菌病患者的评价

布氏菌病纸片试验在凝集反应的基础上使用孟加拉红着色的牛型布氏菌悬液而且用pH3.65的缓冲液处理以防非特异性凝集。实地试验中,发现纸片试验是动物布氏菌病精确的诊断方法。然而,仅有几项研究报道在人类疾病的诊断中使用这种试验。已观察到纸片试验用于急性布氏菌病的诊断其结果令人满意。

纸片扩散试验检测β-内酰胺酶的研究进展

在产酶细菌感染的治疗和预后中，美国临床实验室标准化协会（CLSI）M100－S20文件弱化了细菌产酶机制的检测，而认为细菌最小抑菌浓度（MIC）与临床治疗结局的相关性更好，但是除了参考新修订的抗生素折点外，β内酰胺酶的检测和报告规则不变。该文件作为临床治疗重要的参考依据不容忽视，对于感染的控制及流行病学调查更是至关重要。

Carba NP直接纸片法检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的应用评估

目的:评估Carba NP直接纸片法快速检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶菌株的实用价值。方法:收集2015年4月至2016年12月来自各类标本的肠杆菌科细菌212株,其中122株试验菌,90株对照菌分别进行Carba NP试验和Carba NP直接纸片法检测,同时将耐药基因的普通PCR的检测结果作为金标准。结果:在122株细菌中,KPC-2耐药基因阳性菌株为112株;NDM-1基因阳性菌株为8株;2株未检出耐药基因;未发现携带D组OX A-4 8基因的实验菌。与PCR结果相比,Car ba NP试验与Carba NP直接纸片法对于所测菌株的碳青霉烯酶的敏感性高达98%,特异性高达100%;Carba NP试验在60 min内完成检测,而Carba NP直接纸片法最快可以在5 min内完成检测。结论:相对于Carba NP试验,Carba NP直接纸片法无需昂贵的蛋白抽提液,试剂成本价廉,操作简便,可以有效协助临床抗感染治疗。

香薷空气清新剂的制备工艺及抑菌效果评价

目的:以“药食兼用”的香薷为主要原料,研究中药香薷挥发油空气清新剂的制备工艺,以期为后续香薷防瘟疫系列产品的注册和工业化生产提供实验室依据。方法:以金黄色葡萄球菌为试验菌,抑菌圈直径为评价指标,采用纸片抑菌试验方法结合析因设计筛选空气清新剂最佳制备工艺,通过试管二倍稀释法测定香薷空气清新剂的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。结果:精油含量和含醇量对金黄色葡萄球菌的抑菌效果具有显著性影响(P<0.05),两因素间交互作用不明显,经析因设计确定香薷空气清新剂最佳制备工艺:香薷精油与雪松精油的配比为8∶2,精油与吐温-80的配比为1∶4,精油含量为6%、含醇量为40%。制得的香薷空气清新剂对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为7.81μL/mL,最低杀菌浓度为62.5μL/mL。结论:本实验制得了一种抑菌效果良好的中药空气清新剂。

细菌苯丙氨酸脱氨酶快速纸片法检测

细菌苯丙氨酸脱氨酶快速纸片法检测淮阴市妇产儿童医院检验科（２２３０００）魏红，赵旺胜，童明庆目前，绝大多数细菌的生化反应需１８～２４ｈ，有的甚至７２ｈ以上，这不仅延长了细菌鉴定时间，而且也延迟了疾病的诊断和治疗。我们参照国内外有关文献［１，２］，试制...

3-氨基苯硼酸纸片法检测大肠埃希菌高产AmpC酶的探讨

AmpC酶又称诱导酶,属于Bush分类中的Ⅰ类酶及分子生物学中的C类酶[1]。AmpC酶多数由染色体介导,部分呈诱导型表达。近年也陆续发现了质粒介导AmpC酶,其耐药基因可在同种或不同种属细菌间广泛传播,使细菌耐药日趋复杂,给临床治疗提出了严峻的挑战,迫切需要临床实验室能快速而准确地检测产AmpC酶的细菌。目前临床实验室标准化委员会（CLSI）尚未确定检测的标准方法,本研究以三维试验和聚合酶链反应（PCR）为参照,

3-氨基苯硼酸纸片法检测肺炎克雷伯菌高产AmpC酶

目的建立并评价一种检测肺炎克雷伯菌高产AmpC酶的新方法。方法用3-氨基苯硼酸(APB)双纸片协同法、三维试验和PCR法,对临床分离的头孢西丁耐药的87株肺炎克雷伯菌进行AmpC酶检测,将APB双纸片协同试验检测的结果分别与三维试验和PCR法的检测结果进行统计学分析。结果在87株肺炎克雷伯菌中,APB双纸片协同法、三维试验、PCR法对AmpC酶的检出率分别为48.3%、39.1%、41.4%。APB双纸片协同法与三维试验和PCR法结果的总符合率均为77.0%,Kappa值均为0.54,方法间的一致性较好。如以PCR结果为标准,APB双纸片协同法的敏感性为80.6%,特异性为74.5%,阳性预测值为69.0%,阴性预测值为84.5%。结论 APB双纸片协同试验具有操作简便、结果可靠、无需特殊仪器等优点,可用于AmpC酶常规检测。

纸片扩散法检测阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的结果评价

目的评价双纸片扩散确证试验检测阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的可靠性。方法以头孢曲松三维试验为标准,用双纸片扩散确证试验检测阴沟肠杆菌产ESBLs的情况。结果用双纸片扩散确证试验检测为ESBLs阴性的40株阴沟肠杆菌,头孢曲松三维试验检测也均为阴性;双纸片扩散确证试验检测为ESBLs阳性的61株阴沟肠杆菌,用头孢曲松三维试验检测出18株阴性。结论双纸片扩散确证试验检测阴沟肠杆菌的ESBLs敏感性较理想,但易造成假阳性,特异性仅为70.5%。

纸片法在检测念珠菌药物敏感性中的应用

目的探讨纸片法在临床念珠菌药敏检测中的应用价值。方法采用法国科玛嘉念珠菌显色培养基和生物梅里埃公司Vitec 32进行念珠菌菌种鉴定,用纸片法进行药物敏感性测定。结果临床感染念珠菌菌种分别为白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌和急落假丝酵母菌,对两性霉素B、酮康唑、氟康唑、伊曲康唑和氟胞嘧啶5种抗霉菌药,上述念珠菌的耐药率分别为:白色念珠菌:0、0、0、0、1.8%,光滑念珠菌和热带念珠菌均无耐药菌株,克柔假丝酵母菌:33.3%、33.3%、66.7%、33.3%和66.7%,近平滑假丝酵母菌无耐药菌株,皱落假丝酵母菌:100%、0、0、0、0。结论显色培养基鉴定念珠菌具有快速、准确的优点,纸片法具有操作简单、成本较低、结果可靠的优点,在临床念珠菌的鉴定和药敏试验中具有良好的应用前景。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在流感嗜血杆菌鉴定中的应用

目的分析基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOP MS)在流感嗜血杆菌鉴定中的应用。方法收集2022年1—12月南京艾迪康医学检验所有限公司实验室接收的1300份呼吸道感染患者的痰液或咽拭子样本培养和分离的嗜血杆菌,经16SrDNA序列测定检出50株为流感嗜血杆菌;分别使用MALDI-TOP MS检测系统、Analytic Products INC(API)生化细菌鉴定系统以及纸片法卫星试验对流感嗜血杆菌进行鉴定,比较并分析3种方法对流感嗜血杆菌的检出率、检测时间、检测成本及读取方式。结果MALDI-TOP MS检测系统对流感嗜血杆菌的检出率为98.0%,API生化细菌鉴定系统的检出率为90.0%,纸片法卫星试验的检出率为74.0%。MALDI-TOP MS对流感嗜血杆菌的检出率明显高于纸片法卫星试验,差异有统计学意义(P<0.05),而与API生化细菌鉴定系统比较检出率差异无统计学意义(P>0.05)。MALDI-TOP MS检测所用时间为5~10 min,API生化细菌鉴定检测所用时间为4~24 h,纸片法卫星试验检测所用时间为24~48 h。采用MALDI-TOP MS鉴定流感嗜血杆菌的成本更低,传统API生化细菌鉴定方法价格昂贵,而纸片法卫星试验操作比较繁琐。结论MALDI-TOP MS检测系统对流感嗜血杆菌鉴定的准确率较高,鉴定周期较短,成本较低,且使用方便,在临床上对流感嗜血杆菌的检出具有重要价值。