生防木霉菌T23及其诱变体的RAPD分析

运用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对生防木霉菌T23及其诱变体进行基因组DNA多态性分析，从38条随机引物中筛选出条带清晰、重复性好的10条引物，共扩增出145条RAPD谱带，多态性标记数为119条，占扩增总带数的82.1％。DNA片段大小范围在564～3530bp内，大多数集中在564～2027bp。并利用NTSYS统计软件对扩增结果进行统计和聚类。结果表明．生防木霉菌T23诱变前后具有一定的遗传稳定性和遗传多态性；生防木霉菌T23经过尿素、过磷酸钙、多菌灵、甲基硫菌灵、百菌清的长时间诱导能发生遗传变异。

Candida boidinii No.2201 及其诱变体生长特性研究之一

甲基营养酵母Ｃａｎｄｉｄａｂｏｉｄｉｎｉ２２０１经化学和化学物理双重诱变方法筛选出诱变体Ｃ·Ｙ１和Ｃ·Ｙ１ＣＰ。在同样培养条件下显示了诱变体快速生长的特性。诱变体比野生株提前２４小时进入对数生长期。预期诱变筛选可得到利用高底物浓度。

禾黑芽枝霉诱变体的果胶酶生产液体发酵动态研究

用10L的多参数玻璃发酵罐研究了突变菌株GBIBU7果胶酶生产的液体深层发酵动态．对培养基成分、温度、pH值、搅拌速度、通气量、罐压、溶氧量及发酵尾气中氧气和二氧化碳浓度等参数随发酵过程的变化动态进行了观察．测定了发酵过程中蛋白质含量及种类的变化和果胶酶的活性．实验结果表明，在发酵过程中，发酵液的pH值稳定在6.5左右，耗氧量随时间呈抛物线变化．果胶酶活性最高时间约为72h，此时发酵效率为66.4％，不同阶段发酵液中蛋白质的组分有明显的变化．

禾黑芽枝霉诱变体果胶酶的应用研究

将突变菌株GBIBU7发酵所得的粗酶应用于果胶降解、麻类脱胶和植物细胞原生质体制备等领域，并与Serva进口的精制果胶酶进行了比较．实验结果表明，两者在上述实验中都有较好的效果．它们都能使果胶胶体的粘度大大降低：青麻处理后变软，色泽变白，纤维细绒：能制备出很好的原生质体．在果胶降解、麻类脱胶时，进口精酶的作用较优，在制备植物原生质体时，GBIBU7所产粗酶效果更佳．

禾黑芽枝霉诱变体果胶酶的化学修饰

用乙基碳化亚二胺（EDC）、二乙基焦碳酸（DEPC）、磷酸吡哆醛（PLP）、过氧化氢（H2O2）、三硝基苯磺酸（TNBS）、对氯汞苯甲酸（PCMB）、N-溴化琥珀酰酸亚胺（NBS）、碘乙酸（IAc）和二硫基二硝基苯甲酸（DTNB）分别对禾黑芽枝霉诱变体的三种果胶裂解酶（PⅠ，PⅡ，PⅢ）进行了化学修饰．紫外可见光谱的实验结果证明，各种试剂都与果胶酶氨基酸特定线基共价结合．大多数氨基酸残基的化学修饰对果胶酶的活性无影响．而用TNBS修饰果胶酶的氨基，特别是用PLP修饰果胶酶的ε-氨基时，三种果胶酶都失活．相反用IAc进行烷基化修饰后，所有果胶酶的活性都成倍地提高．这样的结果证明：果胶裂解酶的氨基，特别是ε-氨基是在其活性中心，至少在其活性中心附近，是果胶裂解酶的催化作用的必要基团．进一步讨论了实验结果．

用离子束介导外源全DNA转化拟南芥菜的诱变体

植物特别是高等植物在漫长的历史形成过程中所具有的遗传保守性一般很不易打破，但用生物技术方法，目前可以打破，且可创造新的突变体和新物种，由此可达此目的。例如郑州大学离子束生物工程实验室的卞坡博士和华中农业大学食品科技学院的谈重芳先生等利用离子束介导外源全DNA转化拟南芥菜的诱变效应就是例证之一。

产紫杉醇菌株原生质体诱变育种的研究

对紫杉醇产生菌NCEU_1的原生质体进行了紫外线和氯化锂复合诱变,筛选制霉菌素抗性突变株,共筛选出了4株正突变株。经发酵筛选试验,获得了一株遗传性状稳定、高产紫杉醇的原生质体诱变菌株———UL04-5,其紫杉醇产量从出发菌株的314.07μgL提高至418.24μgL。

紫杉醇高产菌株的原生质体诱变选育及其遗传变异初探

以紫杉醇产生菌NCEU_1为出发菌株,分别采用紫外线和紫外线与氯化锂复合诱变方法对其原生质体进行诱变,获得了两株高产紫杉醇的突变株———UV4 0 - 1 9和UL50 - 6 ,其紫杉醇产量从出发菌株的314 0 7μg L分别提高至376 38μg L和392 6 3μg L ;同时,又采用RAPD和同工酶技术对出发菌株NCEU_1与两高产株UV4 0 - 1 9和UL50 - 6 间的遗传差异进行了研究。结果表明,出发菌株与诱变菌株之间以及两诱变菌株之间都存在明显差异。

平阳霉素离体诱变花生M_2农艺性状分析

以花生(Arachis hypogage L.)品种花育22号成熟种子胚小叶为诱变材料,培养在添加平阳霉素的体胚诱导培养基中进行诱变处理,将成活的形成体胚的外植体转移到添加NaCl的体胚萌发培养基中进行耐盐定向筛选。对获得的再生植株M2的部分农艺性状进行观察测定,结果显示,花生胚小叶经平阳霉素离体诱变和NaCl定向筛选获得的再生植株后代表现型存在广泛变异,如主茎高、侧枝长、分枝数、单株结果数、荚果形状和大小、种皮颜色等均发生明显的变异。从后代变异规律可以看出,利用高效低毒的平阳霉素作为诱变剂与组织培养结合可作为创造花生新种质的一种有效手段。

EMS对丽格海棠离体诱变的生物学效应

将不同浓度EMS处理的丽格海棠叶片作为外植体进行离体再生,以期获得性状优异的变异材料。结果表明:随EMS浓度的增加,其诱导率和增殖倍数降低,而变异率增加,0.4%(20℃,8h)EMS为丽格海棠叶片外植体再生的半抑制剂量,该浓度为诱变处理的适合浓度。对21株表型变异植株进行RAPD-PCR分析表明,有12株的电泳条带表现出多态性,进一步证明这些变异是由于基因组DNA的变异而引起的。

刺芹侧耳原生质体诱变育种初报

通过原生质体的制备再生及诱变技术进行了珍稀食用菌刺芹侧耳的菌种选育工作。结果表明:通过对再生菌株的筛选,得到速生优质菌株X1,其长速优于出发菌株,达到显著差异,且菇形好,商品性高。同时得到高产早熟菌株X401,比出发菌株产量提高了8%～10%左右。

甘蓝型油菜小孢子离体诱变——紫外线对小孢子胚状体再生的影响

用紫外线对3个甘蓝型油菜品系的离体小孢子进行照射0-60s。未经照射的对照和已照射的小孢子于NLN培养基进行培养,诱导胚状体。结果表明,照射20s和60s对胚状体的再生没有影响,照射40s则有促进作用。

秦岭链霉菌的原生质体再生与诱变育种

在秦岭链霉菌(Streptomyces qinlingensis sp.nov.)的菌种改良中,应用原生质体再生并结合物理化学诱变能够得到产量较高、稳定性较好的菌株。筛选实验表明:秦岭链霉菌原生质体再生菌株R-72、诱变菌株NTG-1和H30-7对枯草芽孢杆菌的抗菌活性均提高了20%以上,并且连续培养10代,其遗传性状均比较稳定。进一步的生测实验表明菌株R-72、NTG-1和H30-7对5种病原细菌和5种植物病原真菌的抗菌活性相比原始菌株有显著提高。

原生质体紫外诱变选育竹红菌甲素高产菌株

采用原生质体紫外诱变技术选育竹红菌甲素高产菌株。结果表明:以竹黄菌Shiraia sp.S8为出发菌株,当使用混合酶系(5 mg/mL纤维素酶和10 mg/mL蜗牛酶)在30℃处理菌丝2 h,获得菌丝原生质体3.24×106个/mL。以竹黄菌原生质体在距离15 W紫外灯30 cm处照射诱导,获得诱变菌株C6。其竹红菌甲素产量达到28.1 mg/L,比原始出发菌株提高了53.7%,且遗传稳定,具有较高的医药与工业应用价值。

原生质体诱变筛选香菇多糖高产菌株

对香菇原生质体进行诱变,以期望得到香菇多糖高产菌株。选择合适剂量的60Coγ射线,根据香菇多糖的产量,筛选出高产香菇多糖的菌株。选择剂量为600Gy的60Coγ射线对香菇原生质体进行诱变,得到香菇多糖产量比出发菌株提高了20.6%的突变菌株,传代8代后,其产香菇多糖遗传稳定性保持良好。通过对香菇原生质体进行60Coγ射线诱变,可以得到能提高香菇多糖产量的菌株,为香菇的良种选育和香菇多糖的开发提供参考。

原生质体紫外诱变筛选还原双乙酰能力强的啤酒酵母

实验采用原生质体紫外诱变方法 ,对啤酒酵母进行处理 ,然后用双乙酰梯度板检测突变株还原双乙酰能力 ,通过实验室摇瓶发酵 ,得到一株还原双乙酰能力强的菌株。

原生质体诱变选育高产谷胱甘肽菌株及基因表达分析

以Saccharomyces cerevisiaeY518为出发菌株,通过原生质体诱变提高产谷胱甘肽的能力。结果表明:用0.03mol/L HNO2处理原生质体3min,致死率为85.96%,突变率为6.85%;经过4轮连续的HNO2诱变,筛选得到一株胞内谷胱甘肽产量(14.85mg/g干质量)约比出发菌株高24%的突变株。进一步研究谷胱甘肽合成相关的基因表达量,发现其合成途径编码限速酶的基因GSH1的表达量上调了2.26倍。因此,突变株胞内谷胱甘肽水平的提高可能是由上调的GSH1的表达量导致的。

草菇原生质体诱变菌株V_p53的选育

对草菇原生质体诱变选育的菌株Vp53 与亲株V4菌株进行了同工酶、菌丝生长速度、营养成分、产量和形态特征等方面的分析比较, 结果表明, 都存在差异。Vp53菌株的产量较V4菌株高29.1% , 表明Vp53菌株是一个优良的变异菌株。

β-葡萄糖苷酶产生菌原生质体的诱变研究

以β-葡萄糖苷酶产生菌——无花果曲霉CN67为原始菌株,经溶菌酶、蜗牛酶和纤维素酶的混合酶系酶解获得原生质体,用紫外线照射诱变,获得产β-葡萄糖苷酶活相对较高的菌株UV-29,其酶活稳定在20.48IU/mL,比出发菌株提高了3.49IU/mL。再经传代实验,该菌株具有较好的遗传稳定性。

羊肚菌原生质体诱变筛选高生物量高氨基酸含量菌株

研究影响尖顶羊肚菌（MOrchellaconicaPers、）CGAC－9506原生质体制备、再生因素基础上，首次诱变羊肚菌原生质体，进行高生物量高氨基酸含量菌株选育。原生质体诱变再生株MconicaCGAC－950637生物量比出发株提高7．3％，总氨基酸比出发株提高38％。