Toll样受体4信号通路中髓样分化因子88和β干扰素Toll/IL-1受体结构域衔接蛋白在皮肤恶性黑素瘤中的表达及意义

目的探讨Toll样受体4(tol-likereceptor4,TLR4)信号通路下游的髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)和β干扰素Toll/IL-1受体结构域衔接蛋白(toll-like receptor-associated activator of interferon,TRIF)在皮肤恶性黑素瘤(cutaneous malignant melano ma,CMM)中的表达及与临床特征之间的关联。方法应用免疫组化方法检测40例CMM患者肿瘤组织、10例痣细胞痣患者皮损组织和10例健康皮肤组织中MyD88和TRIF的表达水平,采用SPSS22.0统计学软件进行t检验及Pearson检验处理分析。结果CMM中的MyD88及TRIF的表达强度显著高于痣细胞痣与正常皮肤组织(P<0.05);MyD88、TRIF的表达与CMM患者的年龄、性别等因素无明显相关性,而与发病部位、Clark分级、Breslow厚度、溃疡等因素相关,其中发生于肢端相较于非肢端的恶性黑素瘤表达更显著(P-0.002,0.001);随着Clark分级的增加,原位与浸润肿瘤之间,MyD88、TRIF的表达水平也增加(P=0.001,0.012);随着Breslow厚度的增加,两者表达水平也增加(P=0.004,0.026);合并溃疡的CMM中,MyD88表达增加,有统计学意义(P=0.019);TRIF表达强度无统计学差异(P>0.05);MyD88和TRIF均与CMM患者的淋巴结转移无相关性(P0.05)。结论TLR4下游的MyD88和TRIF相互协同,共同参与CMM的发生与发展。

解旋酶C诱导干扰素结构域蛋白1基因多态性与江苏地区汉族人群多发性肌炎／皮肌炎的相关性研究

目的探讨解旋酶C诱导干扰素结构域蛋白1基因（IFIH1）的单核苷酸多态性（SNP）rs1990760C〉T与江苏地区汉族PM／DM发病的相关性。方法共纳入183例PM／DM患者和400名健康对照。采用TaqmanMGB探针法对rs1990760进行基因分型；采用ELISA法检测抗黑色素瘤分化相关蛋白5（MDA5）抗体；基因型及等位基因的分布频率、Hardy-Weinberg平衡（HWE）采用r检验或Fisher确切概率法进行统计分析。结果各患者组和对照组IFIHI rs1990760。的基因型均符合HWE分布。T和C等位基因频率在PM／DM组（分别为20．8％和79．2％）、DM组（分别为20．9％和79．1％）、PM组（分别为20．5％和79．5％）和对照组（分别为18．0％和82．0％）之间的分布差异无统计学意义。在隐性模型（TT与CT＋CC）和加性模型（TT与CC）中，PM／DM组TT基因型频率均显著高于对照组（6．6％与2．8％，x2值分别为4．8和4．54，P值均为0．03），DM合并间质性肺疾病（ILD）组TT基因型频率均显著高于对照组（8．3％与2．8％，x2值分别为4．84和4．41，P值分别为0．03和0．04）差异有统计学意义。在隐性模型（TT与CT＋CC）中，PM未合并ILD组TT基因型频率显著高于对照组（9．8％与2．8％，x2=5．56，P=0．04），差异有统计学意义。抗MDA5阳性患者的rs1990760等位基因和基因型分布与对照组差异无统计学意义。结论IFIHI的rs1990760 TT基因型可能与江苏地区汉族PM／DM易感性相关，且其相关性可能因DM和PM患者是否合并ILD而有所不同。

基于TLR3/TRIF通路分析重组人干扰素α2b联合炎琥宁对病毒性肺炎患儿的疗效与作用机制

目的基于Toll样受体3(TLR3)/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)通路分析重组人干扰素α2b联合炎琥宁对病毒性肺炎(VP)患儿的疗效与作用机制。方法选取2020年1-5月收治的VP患儿200例,根据治疗方法不同分为观察组和对照组,每组100例。对照组给予重组人干扰素α2b治疗,观察组在对照组基础上加用炎琥宁治疗。治疗7 d后,比较2组临床疗效、临床症状改善时间、住院时间及不良反应发生情况,比较2组治疗前后外周血单个核细胞(PBMC)中TLR3/TRIF通路相关因子[TLR3、TRIF、核因子-κBp65(NF-κBp65)]mRNA表达量、血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)水平及呼吸功能[呼吸频率(RR)、潮气量(VT)、呼气达峰时间(TPTEF)/呼气时间(TE)]。结果观察组临床总有效率高于对照组,退热时间、咳嗽消失时间、呼吸困难消失时间、肺啰音消失时间及住院时间均短于对照组(P<0.01)。治疗7 d后,观察组PBMC中TLR3、TRIF、NF-κBp65 mRNA表达量以及RR低于对照组,血清IgG、IgA、IgM水平以及VT、TPTEF/TE高于对照组(P<0.05)。2组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组人干扰素α2b联合炎琥宁治疗VP患儿的效果显著,可改善临床症状、呼吸功能,提高免疫球蛋白含量,其作用机制与抑制TLR3/TRIF通路活化有关。

Toll样受体4接头分子对乳酸诱导巨噬细胞M2极化的促进作用及其机制

目的:探讨Toll样受体4 (TLR4)接头分子髓样分化因子88 (MyD88)和诱导β干扰素的Toll/白细胞介素1 (IL)受体(TIR)结构域衔接蛋白(TRIF)基因敲除后对乳酸诱导巨噬细胞极化的促进作用,初步阐明乳酸免疫调控的可能机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞Raw264.7,采用慢病毒法构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,定向敲除MyD88和TRIF基因(MyD88-KO组和TRIF-KO组),设未感染的Raw264.7细胞为对照组,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测基因敲除效果。实验分为未处理Raw264.7细胞组、Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组。15 mmol·L^(-1)乳酸诱导24 h后进行各指标检测。RT-qPCR法检测各组细胞中M2极化表型分子巨噬细胞甘露糖受体CD206和精氨酸酶1(Arg1) mRNA表达水平,光学显微镜下观察各组细胞形态表现,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子α (TNF-α)、γ干扰素(INF-γ)和白细胞介素10 (IL0)水平,Western blotting法检测各组细胞中核因子κB (NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平。采用Autodock软件将乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF分子对接并观察其结合情况。结果:采用CRISPR/Cas9技术进行基因定向敲除后,与对照组比较,MyD88-KO组和TRIF-KO组细胞中MyD88和TRIF mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。乳酸作用24 h后,与未处理Raw264.7细胞组比较,Raw264.7+乳酸组细胞中M2极化标志物CD206和Arg1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均降低(P<0.05)。细胞形态表现,Raw264.7+乳酸组细胞表现出M2极化形态,即体积增大、明显突起伪足和偏锥形细胞比例增加;MyD88-KO+乳酸组细胞同样表现出M2极化形态变化;TRIF-KO+乳酸组细胞形态变化不明显。ELISA法检测,与未处理Raw264.7细胞组比较,Raw264.7+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低(P<0.05),INF-γ和IL0水平差异无统计学意义(P>0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低(P<0.05),INF-γ水平差异无统计学意义(P>0.05),IL0水平明显升高(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显升高(P<0.05),INF-γ和IL0水平差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting法检测,与未处理Raw264.7组比较,Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组细胞中TLR4蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05),Raw264.7+乳酸组细胞中核因子κB抑制蛋白α (IκB-α)和p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。分子对接,乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF形成氢键数为2、4和4,结合能分别为-2.72、-3.24和-3.66。结结论论:乳酸作用巨噬细胞后,可通过调控TRIF抑制IκB-α活性进而抑制NF-κB,促进M2极化。

Ⅰ型干扰素诱生机理的研究进展

干扰素(Interferon,IFN)是1957年Isaaes和Lindenmann研究流感病毒干扰现象时发现的一种细胞因子,它可以干扰病毒的复制。IFN具有广谱抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等多种生物活性,已成为免疫学、临床医学和肿瘤学等相关领域的研究热点。I型IFN一直是IFN研究的重点,其诱生机理的阐明不仅为先天性免疫及其他细胞因子的研究奠定基础。

红芪多糖干预内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎的机制

目的探讨红芪多糖(hedysarum polybotrys saccharide,HPS)在内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎发病中的作用及对Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR-4)信号转导通路中关键分子肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)及TIR功能区接头蛋白诱导的干扰素β(TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-β,TRIF)表达的影响。方法选用SPF级健康成年Wistar大鼠40只,随机分为内毒素诱导的葡萄膜炎(endotoxin induced uveitis,EIU)模型组、HPS组、HPS+内毒素组、正常对照组(normal control,NC)组,每组10只。EIU模型组大鼠采用皮下注射1 mg·kg-1内毒素的方法建立大鼠急性前葡萄膜炎动物模型。HPS+内毒素组在内毒素注射前1 h给予腹腔注射HPS 400 mg·kg^-1。HPS组大鼠只注射HPS 400 mg·kg^-1。每2 h用裂隙灯观察大鼠眼前节炎症反应,注射后的0 h、6 h、12 h、18 h、24 h对各组眼部临床炎症反应进行评分。注射后24 h组织病理学检查炎症反应水平。RT-PCR检测核因子-κB、TRAF6及TRIF mRNA的表达。结果 NC组大鼠24 h内眼前节未见炎症反应。注射后24 h,EIU模型组可见虹膜血管扩张明显,瞳孔区大量白色渗出,HPS组仅可见虹膜血管扩张,未见其他眼部炎症反应,HPS+内毒素组大鼠可见虹膜血管扩张和瞳孔缘少量渗出。比较不同组间的大鼠眼部临床炎症反应评分可见,NC组与EIU模型组、HPS+内毒素组、HPS组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.001);EIU模型组与HPS+内毒素组、HPS组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);HPS+内毒素组与HPS组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。RT-PCR结果显示,HPS可降低核因子-κB mRNA和TRAF6 mRNA的表达(P<0.001),HPS对TRIF的表达无明显影响(P=0.236)。结论 HPS可能通过抑制TRAF6核酸的表达缓解EIU的炎症反应,HPS对TRIF的表达无明显影响。

慢病毒介导短发夹RNA干扰技术建立小鼠肺组织TRIF沉默模型

目的通过慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)干扰技术建立小鼠肺组织β干扰素Toll/白细胞介素1受体结构域衔接蛋白(TRIF)沉默模型。方法构建TRIF的siRNA干扰质粒及慢病毒载体。将18只Balb/c小鼠随机分为空白组、实验组、对照组,每组6只。分别将含TRIF-shRNA、对照慢病毒载体的病毒液经鼻滴入转染实验组、对照组小鼠的肺组织。第8天处死小鼠取肺组织检测绿色荧光蛋白表达情况,取肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、心脏组织检测TRIF mRNA和蛋白的表达水平。结果实验组肺组织中可见明显绿色荧光蛋白表达,且肺组织中的TRIF mRNA和及蛋白表达水平均低于空白组及对照组(均P<0.05)。3组肝脏、脾脏、肾脏、心脏组织中的TRIF mRNA表达水平差异无统计学意义(均P>0.05)。结论使用滴鼻方法可有效建立肺组织局部TRIF沉默小鼠模型。

鼠李糖乳杆菌GR-1介导TRIF/NF-κB信号通路抗大肠杆菌诱导奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤

为探讨鼠李糖乳杆菌GR-1(Lactobacillus rhamnosus GR-1,L.rhamnosus GR-1)对大肠杆菌(Escherichia coli)诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞(Bovineendometrialepithelialcells,BEECs)炎性损伤的保护作用及其机制,本研究建立BEECs细胞炎性损伤模型,利用Real-time qPCR和Western blot技术,观察在BAY11-7082或siRNA干预前后,L.rhamnosus GR-1对E.coli触发的信号通路及炎性因子表达的影响。结果显示,L.rhamnosusGR-1可以显著抑制由E.coli引起的NF-κB和TRIF通路的激活及炎性因子的表达,在BAY11-7082干预后,E.coli诱导的NF-κB通路的激活及炎性因子的表达得到了显著的抑制。同样,在添加TRIF siRNA后,E.coli诱导的TRIF mRNA及炎性因子的表达水平也显著下降,产生和L.rhamnosus GR-1一致的抗炎效果。本研究表明L.rhamnosus GR-1可通过介导NF-κB和TRIF通路调节E.coli诱导的BEECs的炎性损伤,为奶牛子宫内膜炎的防治提供有益参考。

伊伐布雷定联合常规药物治疗小儿病毒性心肌炎的临床效果分析

目的:分析伊伐布雷定联合常规药物治疗小儿病毒性心肌炎(VMC)的临床效果。方法:选取2020年7月—2022年7月淮安市妇幼保健院收治的VMC患儿94例作为研究对象,依据随机数字表法分为观察组与对照组,各47例。对照组给予常规治疗,观察组在对照组基础上应用盐酸伊伐布雷定治疗。比较两组治疗效果。结果:观察组治疗总有效率、白细胞介素-4水平高于对照组,血清γ干扰素、单核细胞趋化蛋白-1、血清淀粉样蛋白、心肌肌钙蛋白T、B型钠尿肽前体水平以及外周血Toll样受体3(TLR3)、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、核因子-κBp65表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:伊伐布雷定联合常规药物治疗VMC的效果较好,可通过抑制TLR3/TRIF信号通路减轻炎性反应,改善患者心功能,且安全性高。

包虫囊液对干扰素信号TRIF/IFITM3通路的影响

目的 探索包虫囊液干预人源肝细胞(L02)过程中TRIF/IFITM3通路相关蛋白的变化。方法 从感染细粒棘球蚴病的羊肝中获取囊液,用不同比例囊液浓度(1∶10、1∶100和1∶1000)干预肝细胞并设置阴性对照组(未加囊液干预)。采用囊液浓度(1∶1000)干预肝细胞后分别在0、24、48和72 h收集细胞。实时荧光定量PCR检测TRIF/IFITM3通路相关mRNA的表达,Western blot检测TRIF、IRF3、IFITM3、Foxp3的蛋白表达变化。免疫荧光检测IFITM3、Foxp3的表达和定位。Spearman分析TRIF、IFITM3及Foxp3的相关性。结果 Western blot显示囊液浓度(1∶1000)促进TRIF、IRF3、IFITM3蛋白表达,TRIF的相对表达量分别是(0.45±0.09)、(0.54±0.05)、(1.08±0.24)、(1.75±0.31);IFITM3的相对表达量分别是(1.02±0.41)、(1.00±0.16)、(1.24±0.12)、(1.84±0.20)。囊液浓度(1∶1000)刺激肝细胞0、24、48和72 h后,Western blot显示TRIF、IRF3、IFITM3蛋白表达量逐渐下降,而Foxp3表达量增高。TRIF的相对表达量分别是(1.00±0.31)、(1.08±0.19)、(0.90±0.13)、(0.57±0.05);IFITM3的相对表达量分别是(0.80±0.26)、(0.94±0.09)、(0.82±0.19)、(0.54±0.18)。Foxp3的相对表达量分别是(0.70±0.11)、(0.80±0.02)、(0.83±0.03)、(1.08±0.04)。免疫荧光显示,在泡球蚴感染60 d时,小鼠肝脏IFITM3和Foxp3发生共定位。Spearman分析TRIF与IFITM3存在正相关性(r=0.704,P<0.01),TRIF与Foxp3存在负相关性(r=-0.859,P<0.01),IFITM3与Foxp3存在负相关性(r=-0.686,P<0.01)。结论 较低浓度的包虫囊液刺激TRIF/IFITM3通路相关分子表达,进而激活天然免疫的抗病原体功能;随着囊液干预时间增加TRIF/IFITM3受抑制,而Foxp3高表达,促进包虫在宿主体内慢性寄生。

MyD88和TRIF在新生儿脑损伤中的表达及其与炎症反应的关系

目的探讨髓样分化因子88(MyD88)和β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)在新生儿脑损伤中的表达及其与炎症反应的关系。方法前瞻性选取2021年10月至2023年9月入同济大学附属妇产科医院诊断并接受治疗的新生儿脑损伤患儿103例为研究对象,作为新生儿损伤组。同时选择同期无神经系统疾病的正常新生儿80例,作为对照组。收集所有新生儿的临床资料,并采集外周静脉血3 mL,检测两组新生儿血清中降钙素原、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-2、IL-1β、IL-8和IL-6水平,采用实时荧光定量PCR检测血清中MyD88和TRIF mRNA表达,采用Pearson相关性分析对MyD88和TRIF mRNA表达与炎症反应的关系进行分析,并采用受试者操作特征(ROC)曲线评估MyD88和TRIF mRNA表达在新生儿脑损伤中的诊断价值。结果两组新生儿的胎龄、年龄、出生体重、男性占比、生产方式比较,差异均无统计学意义(P>0.05);脑损伤组Apgar评分为(7.42±1.87)分,明显低于对照组[(8.78±4.72)分],差异有统计学意义(P<0.05)。脑损伤组新生儿血清降钙素原、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-8和IL-6水平分别为(6.21±0.73)ng/L、(5.94±1.83)pg/mL、(8.93±2.95)pg/mL、(3.17±1.02)pg/mL、(32.98±9.83)pg/mL、(14.51±4.37)pg/mL,均明显高于对照组[(0.59±0.18)ng/L、(2.68±0.79)pg/mL、(4.19±1.36)pg/mL、(1.29±0.73)pg/mL、(7.37±2.91)pg/mL、(2.97±0.85)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。脑损伤组新生儿血清中MyD88和TRIF mRNA表达水平分别为2.46±0.73、2.11±0.65,均明显高于对照组(1.03±0.29、0.79±0.22),差异均有统计学意义(P<0.05)。MyD88和TRIF mRNA表达均与炎症反应指标降钙素原、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-8和IL-6均呈正相关(P<0.05)。血清MyD88 mRNA检测诊断新生儿脑损伤的最佳临界值为1.561,敏感度和特异度分别为77.50%和86.25%,ROC曲线下面积(AUC)为0.868(95%CI:0.804~0.932);血清TRIF mRNA检测诊断新生儿脑损伤的最佳临界值为1.249,敏感度和特异度分别为78.75%和87.64%,AUC为0.883(95%CI:0.823~0.938);MyD88联合TRIF mRNA诊断的敏感度和特异度分别为88.75%和93.64%,AUC为0.903(95%CI:0.852~0.955),MyD88联合TRIF mRNA诊断的AUC明显优于血清MyD88和TRIF单独检测的AUC(P<0.05)。结论脑损伤新生儿血清中MyD88和TRIF表达升高,且与炎症反应因子呈正相关,血清MyD88和TRIF检测对新生儿脑损伤具有一定的诊断价值,二者联合检测诊断价值更高。

IFITM3、BTBD7、PEA3在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:分析干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)、结构域蛋白7(BTBD7)、多瘤病毒增强子激活剂3(PEA3)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及相关性研究。方法:选取2021年2月~2022年2月江门市人民医院进行肺癌手术治疗的80例患者为研究对象,在进行手术过程中,切取其肺癌患者癌组织,为本研究组织标本,同时切取相应的癌旁组织,进行数据的比较。使用免疫组化法检测IFITM3、BTBD7、PEA3表达。观察IFITM3、BTBD7、PEA3在非小细胞肺癌中的表达及相关性。结果:与癌旁组织比较,癌组织IFITM3、BTBD7、PEA3阳性表达率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组织IFITM3、BTBD7、PEA3表达与患者年龄、性别、肿瘤直径、吸烟史、组织学分型比较差异均无统计学意义(P>0.05)。NSCLC组织中于IFITM3、BTBD7、PEA3表达于TNM分期、分化程度、胸膜转移、淋巴结转移,差异均有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组织IFITM3、BTBD7之间表达呈正相关(r=0.518,P=0.001);NSCLC组织BTBD7、PEA3表达呈正相关(r=0.604,P=0.001);NSCLC组织IFITM3、PEA3表达呈正相关(r=519,P=0.001)。结论:NSCLC IFITM3、BTBD7、PEA3表达呈上调状态,三者之间具有密切相关性,与其表达的高低变化与TNM分期、分化程度、胸膜转移、淋巴结转移等临床病理症状之间具有相关性,由此表明,IFITM3、BTBD7、PEA3可能参与NSCLC的发展过程。

针刺负调控TLR4/TRIF信号通路关键因子对脑出血大鼠炎性反应表达的影响

目的探讨针刺“百会”透“曲鬓”穴对急性脑出血大鼠TLR4/TRIF信号通路关键因子Toll样受体4(TLR4)、TRIF(TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-βTRIF)、TRAM(TRIF-related Adaptor Molecule,TRAM)、NF-κB(核因子κB)表达的影响。方法将72只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺+模型组(简称针刺组)、TAK242组,每组按1 d、3 d、7 d时间节点分为3个亚组,每组6只。自体血注入法建立脑出血大鼠模型。采用针刺“百会”透“曲鬓”穴干预,Longa评分法对脑出血后大鼠神经功能进行评估;Western-blot法检测血肿组织TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白表达。结果神经行为学:与模型组比较,针刺组于3 d、7 d时间节点大鼠神经功能评分差异显著(P<0.05);TAK242组于3 d、7 d时间节点大鼠神经功能评分差异显著(P<0.01);与针刺组比较,TAK242组于3 d时间节点大鼠神经功能评分差异显著(P<0.05)。Western-blot结果:针刺组、TAK242组各时间节点TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白表达水平均显著低于模型组(P<0.01);TAK242组各时间节点TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白表达水平均显著低于针刺组(P<0.01)。结论针刺可能通过负调控TLR4/TRIF信号通路中TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白的表达,减轻脑出血后炎性损伤,改善大鼠神经功能缺损症状,发挥脑保护作用。

NLRP3、AIM2、IFI16炎症小体在慢性乙型病毒性肝炎患者PBMC中的活化水平和与HBV感染的相关性分析

目的:探讨乙肝病毒(HBV)是否激活了慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMCs)内核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)和干扰素诱导蛋白16(IFI16)炎症小体,分析HBV影响炎症小体活化的可能机制.方法:收集感染内科临床确诊CHB患者35例.同时选取健康住院医师28例为对照.以常规淋巴细胞分层液密度梯度离心法分离健康对照组和CHB患者组静脉血得到PBMCs,采用逆转录、实时荧光定量PCR检测CHB患者组和健康对照组PBMCs NLRP3、AIM2、IFI16、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶1(CASP1)、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平,ELISA法检测两组血清中IL-1β蛋白分泌水平.结果:CHB患者组和健康对照组PBMCs ASC、NLRP3、AIM2、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平及两组血清IL-1β蛋白分泌水平无显著性差异.CHB患者组PBMCs IFI16、CASP1 mRNA表达水平显著上调,且IFI16 mRNA表达水平与患者血清HBV DNA载量显著正相关(r=0.699 8,P<0.01).结论:慢性HBV感染未导致CHB患者PBMCs NLRP3、AIM2炎症小体的活化;尽管HBV DNA可能诱导了CHB患者IFI16炎症小体的高表达,但通过抑制pro-caspase-1的活化、IL-1β的表达,HBV阻断了IFI16炎症小体的活化效应.

桔梗汤总黄酮对慢性阻塞性肺病大鼠TLR4/TRIF/IRF3通路的影响

目的考察桔梗汤总黄酮(FPG)对慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠的治疗作用,研究其对TLR4/TRIF/IRF3和TLR4/MyD88通路的影响,探讨其治疗COPD可能的分子机制。方法建立COPD大鼠模型,将60只SD大鼠分为空白组、模型组、阳性对照组及不同剂量的桔梗汤总黄酮治疗组,经过3周治疗后,通过分析大鼠肺功能指标、肺灌洗液中IL-6、IL-12、TNF-α的含量、血清中IFN-α、IFN-β的含量、肺组织病理切片及MyD88、TLR4、TRAM、TRIF、TRAF6、IRF3、P-IRF3蛋白表达量变化,探讨桔梗汤总黄酮防治COPD的分子机制。结果各个剂量组的桔梗汤总黄酮均可明显缓解COPD模型大鼠的肺部通气功能,可显著抑制COPD大鼠肺灌洗液中IL-6、IL-12、TNF-α的含量,抑制其血清中IFN-α、IFN-β的含量,以上结果均呈现明显的剂量依赖性;Western blot实验结果表明,桔梗汤总黄酮对COPD大鼠肺组织中的MyD88无显著影响,但可显著降低其中TLR4、TRAM、TRIF、TRAF6、IRF3、P-IRF3蛋白表达,差异具有统计学意义。结论桔梗汤总黄酮治疗COPD可能是通过抑制TLR4/TRIF/IRF3通路发挥作用,不是通过TLR4/MyD88经典通路实现的。

紫花地丁总黄酮对单纯疱疹病毒性脑炎小鼠的作用

目的 探究紫花地丁总黄酮(total flavones from Viola yedoensis Makino,TFV)调控Toll受体3(toll-like receptor 3,TLR3)、β干扰素TRI结构域衔接蛋白(TIR-domain containing adaptor inducing interferon-β,TIRF)通路对单纯疱疹病毒性脑炎(herpes simplex virus en-cephalitis,HSE)的作用机制。方法 取50只SPF小鼠随机分为空白对照组、TFV组、Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus-1,HSV1)-生理盐水(normal saline,NS)组、HSV-阿昔洛韦(acyclovir,ACV)组和HSV1-TFV组,每组10只。空白对照组、TFV组不做处理,其余3组注射HSV1病毒建立小鼠HSE模型(LD_(50),50×10^(-4)/mL^(-1))。造模后第1天,TFV组给予0.15 mL TFV灌胃(质量浓度50μg·mL^(-1)),HSV1+NS组给予NS 0.15 mL灌胃,HSV1+ACV组给予ACV 0.15 mL灌胃(质量浓度60μg·mL^(-1)),HSV1+TFV组给予TFV 0.15 mL灌胃(质量浓度50μg·mL^(-1))。HE染色观察脑组织的病理变化,ELISA法检测INF-α、IL-6的含量,Western blot检测TLR3、TRIF蛋白的表达水平,RT-PCR法检测TLR3、TRIF mRNA的表达水平。结果 与HSV1+NS组相比,HSV1+ACV组及HSV1+TFV组小鼠脑组织肿胀减轻,神经细胞变性减轻,轻微出血,炎性细胞明显减少,INF-α、IL-6含量及TLR3、TRIF mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),而空白对照组与TFV组各指标的差异无统计学意义。结论 TFV可减轻HSE小鼠炎性反应,改善脑组织损伤,可能与调控TLR3/TRIF通路有关。

TRIF在血栓闭塞性脉管炎患者血管组织中的表达水平及临床意义

目的探讨β干扰素Toll样受体结构域衔接蛋白(TRIF)在血栓闭塞性脉管炎(TAO)患者血管组织中的表达水平及临床意义。方法取因TAO行截肢手术的26例患者(TAO组)和因非血管疾病行截肢手术的18例患者(对照组)的血管组织,采用反转录PCR(RT-PCR)及Western blot检测两组患者血管组织中的TRIF表达水平并进行组间比较。进一步采用免疫荧光共聚焦技术观察TRIF在TAO患者血管组织中的表达特点。结果TAO患者血管组织中TRIF的mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。并且,在TAO患者中,TRIF主要表达于血管平滑肌细胞。结论TRIF的表达与TAO的起病关系密切,TRIF信号通路诱导的炎性反应可能是TAO发病的重要因素之一。

miR-27a-3p介导TLR4/TRIF信号通路对脑出血大鼠神经的保护作用

目的分析miR-27a-3p介导Toll样受体(TLR)4/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)信号通路对脑出血大鼠神经的保护作用。方法选取80只SD级雄性大鼠,20只作为正常组,其余60只建立大鼠脑出血模型后随机分为模型组、上调组、下调组各20只,做miR-27a-3p转染,鉴定miR-27a-3p转染率、脑组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β含量、神经功能缺损情况、TLR4/TRIF信号通路蛋白表达情况。结果与模型组相比,上调组miR-27a-3p表达量升高,下调组miR-27a-3p表达量降低,具有统计学差异(P<0.05),证明miR-27a-3p转染成功。相比于正常组,模型组、上调组、下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量升高,具有统计学差异(P<0.05);相比于模型组,下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量升高,上调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量降低,具有统计学差异(P<0.05);且下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量高于上调组,具有统计学差异(P<0.05)。结论miR-27a-3p可介导TLR4/TRIF信号通路对脑出血大鼠神经起到保护作用。减少大鼠脑内炎症反应。

PPARα在移植免疫中的作用

器官移植是治疗器官终末期疾病的主要方法,而移植排斥是移植物丧失功能的主要原因。先天性和获得性免疫均参与了移植排斥反应。长途/白细胞介素1受体结构域含适配器蛋白诱导干扰素（toll/interleukin-1receptor domain-containing adaptor-protein inducing interferon,TRIF）和髓样分化因子88（myeloid Differentiation Factor 88，MyD88）先天性免疫反应中具有重要作用，在先天性和获得性免疫中具有桥梁作用，过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator—activated receptor．PPAR）α具有抑制免疫反应和调节免疫偏移及抑制TRIF和MyD88表达的作用，因此，PPARα可能在诱导移植耐受上具有潜在的应用价值。

双歧杆菌在过敏性哮喘治疗中的作用机制研究进展

过敏性哮喘是一种由多种炎性因子介导的气道慢性炎症,以气道高反应和可逆性呼气气流受限为临床特征。肠道菌群失调可能与过敏性哮喘的发生有关。双歧杆菌是一种肠道有益菌。双歧杆菌可以通过色氨酸代谢途径,促进芳基烃受体(AHR)配体表达,调节辅助性T细胞/调节性T细胞平衡,抑制气道的炎症反应;AHR可通过抑制活性氧簇(ROS)-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3通路,减轻气道炎症反应及黏液分泌,缓解过敏性哮喘的发展。双歧杆菌可促进短链脂肪酸的生成,下调核因子-κB信号通路、抑制转化生长因子/Smads信号通路及上调G蛋白受体41和G蛋白受体43表达,减轻气道炎症、降低气道高反应,缓解过敏性哮喘的发展。双歧杆菌可抑制Toll样受体3/β干扰素TIR结构域衔接蛋白信号通路,减轻气道炎症及结构重塑,缓解过敏性哮喘的发展。