诱导毕赤酵母分泌表达致倦库蚊防御素Defensin成熟肽

目的诱导毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达表达致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)防御素(defensin)成熟肽,为进一步研究致倦库蚊defensin的抗病原作用、机理及其应用奠定基础。方法利用生物信息和RT-PCR技术克隆了编码致倦库蚊防御素的成熟肽全基因序列,并克隆到毕赤酵母甲醇诱导型分泌表达载体pPICZα-A的α-factor信号肽序列的下游,构建成pPICZα-A-defensin重组表达载体,表达载体经SacⅠ线性化处理后电击转化毕赤酵母X-33感受态细胞,转化子经Zeocin抗性筛选,菌落PCR,Mut表型鉴定和Tricine-SDS-PAGE分析,成功获得了能够有效表达重组defensin的pPICZα-A-Defensin/X-33甲醇利用表型工程菌。结果在甲醇诱导24 h后pPICZα-A-Defensin/X-33的工程菌分泌表达了预期Mr8 200大小的致倦库蚊防御素成熟重组肽。结论致倦库蚊防御素可以在毕赤酵母中诱导分泌表达。

WISP-1——开辟探究肿瘤形成发展的新途径

Wnt诱导的分泌型蛋白1(WISP-1),是高半胱氨酸蛋白61/结缔组织生长因子/肾母细胞瘤过度表达基因家族成员之一。WISP-1具有促进细胞增殖、介导细胞黏附、刺激细胞转移、促进有丝分裂及细胞外基质的形成等生物学功能。WISP1的表达水平与多种组织恶性肿瘤的发生、进展、浸润、转移及其预后有着密切的联系。在不同的肿瘤组织中,WISP-1的分布及生物学作用不同,WISP-1正向或负向调节的肿瘤发展。WISP-1促进肿瘤的机制及调节途径在肿瘤诊断学及治疗学上有广阔的应用背景。