阻断诱导型共刺激分子信号通路对小鼠急性移植物抗宿主病的影响

目的：观察以诱导型共刺激分子（inducible costimulator，ICOS）融合蛋白阻断ICOS-B7H途径对小鼠急性移植物抗宿主病（acute graft-versus—host disease，aGVHD）的作用。方法：建立以C57BL／6鼠为供体、致死剂量照射的BALB／c鼠为受体的aGVHD模型，分别在移植0、2、4、8d后腹腔注射100Ixg的ICOS-Ig，以注射同剂量的人Ig（h—Is）作为对照。观察小鼠体重、生存率及临床GVHD症状的改变；移植4d后取小鼠脾脏单个核细胞，流式细胞术检测H一2Kd—CD4＋及H-2Kd—CD8＋细胞的CFSE强度，确定供体T淋巴细胞的增殖率；移植10d后采用Annexin—V及PI试剂盒检测供体H-2Kd—CD4及H-2Kd—CD8＋细胞的凋亡率。结果：ICOS-Ig干预可有效减轻小鼠aGVHD的严重程度，ICOS—Ig组小鼠的生存时间比h-Ig组显著延长[（20．0±3．1）vs（10．0±2．1）d，P=0．0217，n=14]，其肠道黏膜病变及肝脏汇管区淋巴细胞浸润明显减少。移植3d后，ICOS-Ig组和h·Ig组小鼠的CD4＋CFSE-和CD8＋CFSE-细胞群比例无明显差异[（98．88±0．76）％铘（99．71±0．27）％，（98．62±0．63）％椰（99．53±0．51）％，P〉0．05]；ICOS—Ig增加了体内异基因CD8＋T淋巴细胞的凋亡率[（15．7±9．59）％掷（25．92±5．66）％，P=0．032]，不影响异基因CD4＋T细胞的凋亡率[（15．72±7．34）％vs（22．78±6．94）％，P=0．078]。结论：阻断ICOS—B7H通路可促进活化的T淋巴细胞凋亡，减轻造血干细胞移植治疗血液肿瘤中发生的aGVHD的严重程度。

PD-1、ICOS在ITP患者中的表达及意义

目的:检测原发免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血CD8+T细胞表面程序性死亡受体-1(PD-1)、诱导型共刺激分子(ICOS)的表达,探讨二者在ITP疾病中的意义。方法:选取2020年9月至12月于天津医科大学总医院血液科就诊的ITP患者28例,包括13例新诊断患者,15例慢性患者,同时选取健康志愿者22名作为对照组。采用流式细胞术检测外周血CD8+T细胞表面PD-1、ICOS的表达水平,并评估其与临床指标之间的相关性。结果:慢性组ITP患者CD8+T细胞百分比明显高于新诊断组及对照组(P<0.05);新诊断组及慢性组ITP患者CD8+T细胞表面PD-1的表达水平明显低于对照组(P<0.05),而ICOS的表达水平明显高于对照组(P<0.05);在ITP患者中,PD-1与血小板计数呈负相关(r=-0.4942,P<0.01),与ICOS呈正相关(r=0.4342);PD-1、ICOS与淋巴细胞计数均呈负相关(r_(PD-1)=-0.4374;r_(ICOS)=-0.4492)。结论:在ITP患者中,PD-1和ICOS的不平衡表达可能干扰机体的免疫稳态,可以作为ITP患者的治疗靶标。

靶向CS1的CAR-T细胞构建及其抗肿瘤活性的体外研究

文中利用基因工程方法构建包含4-1BB或ICOS的第二代Anti-CS1慢病毒表达载体,以及同时包含这两个共刺激因子的第三代Anti-CS1慢病毒表达载体,通过制备相应慢病毒感染人CD3^+T细胞,分别获得靶向CS1的第二代和第三代CAR-T细胞。研究结果表明:以ICOS为共刺激因子及以4-1BB为共刺激因子的第二代CAR-T抗肿瘤活性相似,且在效靶比为1︰1时,含ICOS共刺激因子比含4-1BB共刺激因子的第二代CAR-T细胞对IM9-lucgfp细胞的杀伤效力更高;在效靶比为1︰1、2︰1和5︰1时,第三代CAR-T细胞对IM9-lucgfp细胞的杀伤效力低于第二代;在效靶比为10︰1时,二代和三代CAR-T细胞对IM9-lucgfp细胞的杀伤效力都达到85%以上,显著高于对照组。综上所述,该研究成功构建了靶向CS1的第二代和第三代CAR-T细胞,其可高效杀伤高表达CS1的肿瘤细胞,且靶向CS1的第二代CAR-T细胞比第三代对肿瘤细胞的杀伤效力更强。