诱导型NOS与p53、Bax蛋白在胆囊良恶性病变中的表达及相关意义

目的 探讨诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)与凋亡诱导基因p5 3、Bax蛋白在胆囊良恶性病变中的表达及相关意义。 方法 采用免疫组织化学SP法检测iNOS及p5 3、Bax蛋白在 16例慢性胆囊炎、11例慢性胆囊炎伴胆囊腺肌瘤增生及 2 4例胆囊腺癌中的表达。 结果 1 在胆囊良恶性病变的胆囊壁中均有iNOS、Bax表达 ,在胆囊腺癌中iNOS、Bax表达下降 (P <0 0 5 ) ,p5 3仅在部分胆囊腺癌细胞核中有较强阳性表达 ;2 在胆囊良恶性病变中 ,iNOS与Bax表达呈正相关 (P <0 0 1) ,p5 3与Bax表达呈负相关 (P <0 0 1)。 结论 慢性胆囊炎尤其是慢性胆囊炎伴腺肌瘤增生是胆囊腺癌重要的危险因素 ,NO是重要中介分子 ,NO诱导胆囊良性病变恶变的作用与细胞凋亡有密切关系。

慢性胆囊炎和胆囊腺癌中诱导型NOS的表达及意义

目的 :研究诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在慢性胆囊炎和胆囊腺癌中的表达及意义。方法 :采用免疫组化SP法检测iNOS在 1 6例慢性胆囊炎、1 1例慢性胆囊炎伴胆囊腺肌瘤增生及 2 4例胆囊腺癌中表达。结果 :在慢性胆囊炎和胆囊腺癌胆囊壁中均有iNOS表达 ,且胆囊腺癌中iNOS表达明显下降 (P <0 .0 5 )。结论 :NO是胆囊良性病变恶变的重要中介分子。

重组法国梧桐花粉过敏原2(rPla a2)对诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子活性及基因表达的影响

目的:构建人诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子区,对NOS2启动子序列进行鉴定并分析其活性;探索重组法国梧桐花粉过敏原2(r Pla a2)对人NOS2基因启动子活性及基因表达的影响。方法:利用PCR扩增、限制性内切酶双酶切、DNA连接酶连接、大肠杆菌转化等方法将NOS2基因启动子区克隆至pGL3-Basic载体上,将所构建重组报告质粒转染至人胚肾(HEK293T)细胞中,利用双荧光素酶活性分析检测该重组报告质粒启动子活性及检测rPla a2对人NOS2基因启动子活性的影响;用实时荧光定量PCR法检测rPla a2对人NOS2基因mRNA水平的影响。结果:成功构建含有NOS2启动子的重组报告质粒,与对照(p GL3-Basic)组相比,含NOS2启动子区的重组质粒转染组荧光素酶活性显著增高;与不加刺激(NOS2)组相比,加入rPla a2刺激后含NOS2启动子区的重组报告质粒转染组荧光素酶活性显著增高,加入rPla a2刺激后NOS2 mRNA相对表达水平显著增高。结论:rPla a2可增强人NOS2基因启动子活性,并增加其基因表达。

高危型HPV阳性子宫颈癌组织和细胞株中TLR4/iNOS通路分子的表达及意义

目的:研究高危型HPV阳性子宫颈癌组织和细胞株中TLR4/iNOS通路分子的表达及意义。方法:选择高危型HPV阳性的子宫颈癌患者35例和接受宫颈组织活检的35例健康者进行研究,分析宫颈组织中TLRs、NOS的mRNA含量;培养CaSki细胞株(HPV16阳性)、Hela细胞株(HPV18阳性)、C33a细胞株(HPV阴性),转染siRNA并测定TLR4、NF-kB、iNOS以及NO的含量。结果:高危型HPV阳性子宫颈癌组织中TLR4、iNOS的mRNA含量显著高于正常子宫颈活检组织(均P<0.05),TLR3、TLR7、TLR8、TLR9、eNOS、nNOS的mRNA含量与正常子宫颈活检组织比较无明显差异(P>0.05);CaSki细胞株和Hela细胞株中TLR4、NF-kB、iNOS的mRNA含量以及NO的含量均高于C33a细胞株(均P<0.05);转染TLR4的siRNA后,CaSki细胞株和Hela细胞株中NF-kB、iNOS的mRNA含量以及NO的含量均低于转染阴性对照siRNA(均P<0.05)。结论:高危型HPV阳性的子宫颈癌组织和细胞株中TLR4/iNOS通路分子表达增多,TLR4能够通过NF-kB来增加iNOS表达和NO生成,进而参与高危型HPV所致宫颈癌的病理过程。

NOS在子宫内膜异位症患者在位内膜和异位内膜中的表达

目的:探讨一氧化氮合酶(NOS)在子宫内膜异位症患者在位内膜和异位内膜中的表达。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对20例正常子宫内膜和30例子宫内膜异位症患者在位和异位内膜进行内皮型NOS(eNOS)和诱导型NOS(iNOS)表达的半定量检测。结果:eNOS在子宫内膜的增生期和分泌期均有表达,增生期在位内膜为2.47±0.38,异位内膜为2.53±0.51,对照组为1.73±0.50,分泌期在位内膜为3.37±0.41,异位内膜为3.43±0.44,对照组为3.16±0.55,增生期eNOS的表达均高于对照组(P=0.01),分泌期eNOS的表达无统计学意义(P=0.064)。iNOS只在子宫内膜的分泌期有微量表达,在位内膜为1.17±0.22,异位内膜为1.33±0.28,对照组为0.86±0.24,分泌期iNOS的表达与对照组相比有统计学意义(P=0.016)。在位内膜和异位内膜中eNOS和iNOS的表达在月经各周期相比较均无统汁学意义(P值分别为0.25、0.106、0.073)。结论:NOS在子宫内膜异位症患者子宫内膜上的高表达可能与其发病机制存在一定的关系。

核转录因子-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷对急性一氧化碳中毒大鼠模型中iNOS动态变化的影响

目的通过使用二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对核转录因子-κB的抑制,观察急性一氧化碳中毒大鼠中NF⁃κB、iNOS因子的动态变化,探讨急性一氧化碳迟发性脑病中的发病机制。方法120只成年健康雄性SD大鼠随机分为空气对照组(AC组)、一氧化碳中毒组(CO组)、一氧化碳中毒+PDTC干预组(PD组),按各组大鼠染毒后1、3、7、14、21 d时间点分为5个小组,采用Morris水迷宫检测大鼠平均逃避潜伏期、穿越平台次数、平台运动总时间的变化,评估大鼠学习记忆能力损害程度,Western Blot和免疫荧光检测大鼠海马区NF⁃κB、iNOS的表达,HE染色观察海马区细胞形态变化,TUNEL染色检测大鼠海马CA1区细胞凋亡情况。结果AC组仅可检测到少量NF⁃κB、iNOS蛋白的表达;CO组NF⁃κB表达呈现逐渐增多,其iNOS蛋白表达于第3天达到高峰后逐渐减少。PD组与CO组相比,都呈现出PDTC抑制NF⁃κB的活化后,NF⁃κB、iNOS蛋白表达相对减少,且组间各时间点表达差异具有统计学意义(P<0.05),PD组与AC组相比差异明显,差异亦具有统计学意义(P<0.05)。CO组、PD组大鼠凋亡细胞于第7天开始明显增多,PD组与CO组各时间点比较大鼠凋亡细胞相对减少,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论NF⁃κB/iNOS信号通路参与了DEACMP的发病过程,PDTC的干预通过下调NF⁃κB的激活及减少iNOS的表达,从而减轻大鼠CO中毒症状。

曲张大隐静脉病理组织学变化及组织中诱导型一氧化氮合酶蛋白的表达

目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在曲张大隐静脉血管组织中的表达和意义。方法临床手术剥离获取曲张大隐静脉曲张段、未曲张段各10例,正常大隐静脉8例,采用Weigert氏间苯二酚品红法、天狼猩红染色法测定各组弹性纤维及胶原纤维分布及变化;免疫组化法测定各组iNOS蛋白表达,分析iNOS蛋白表达与大隐静脉曲张发生的关系。结果与正常对照组比较,曲张大隐静脉曲张段与未曲张段均出现管壁内弹性纤维断裂,分布不连续,排列紊乱,含量明显减少(P<0.05);而胶原纤维的含量增加(P<0.05),且曲张大隐静脉曲张段中胶原纤维含量增加明显高于未曲张段(P<0.05);iNOS蛋白在曲张大隐静脉曲张段组织中表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大隐静脉曲张发生与大隐静脉管壁iNOS蛋白表达增高有关。

团头鲂NOS2基因的克隆和组织表达分析

为了探究诱导型一氧化氮合酶(NOS2)在嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染团头鲂(Megalobrama amblycephala)时发挥的作用,克隆并分析了团头鲂NOS2基因。结果显示,NOS2基因的cDNA序列全长4 215 bp,编码1 080个氨基酸。氨基酸序列同源性分析表明,团头鲂NOS2基因与草鱼NOS2基因的相似性最高,达95%。进化关系分析表明,团头鲂NOS2基因与鲤科鱼类NOS2基因聚在一支。实时荧光定量PCR检测的结果表明,在嗜水气单胞菌感染团头鲂后,NOS2基因在肝脏和头肾中被诱导表达;在脾脏中NOS2基因在3 h被诱导表达,其余时间点表达量显著下调;在肠道组织中NOS2基因在3 h下调表达,在6 h有微弱的上调,之后趋于稳定。研究结果为进一步探索NOS2基因在嗜水气单胞菌感染团头鲂后免疫应答中发挥的作用打下基础。

一氧化氮合酶在去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤中的调控作用

目的研究一氧化氮合酶(NOS)在去卵巢大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤中的调控作用。方法选取雌性SD大鼠132只,为探究去卵巢对心肌IR损伤的影响,48只大鼠随机分为假手术组、IR组、去卵巢组、联合组,每组12只;为探究内皮型NOS(eNOS)和诱导型NOS(iNOS)在去卵巢加重心肌IR损伤中的作用,84只大鼠IR造模前进行去卵巢、尾静脉注射过表达eNOS或敲低iNOS的腺相关病毒,分为阴性假手术组、阴性IR组、阴性联合组、eNOS+IR组、eNOS联合组、iNOS小干扰RNA(si-iNOS)+IR组、si-iNOS联合组,每组12只。检测每组心肌梗死面积、血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、LVEF、左心室短轴缩短率(LVFS)及心肌eNOS和iNOS的表达。结果与IR组比较,联合组心肌iNOS表达、心肌梗死面积、血清LDH和CK-MB水平增高,心肌eNOS表达、LVEF和LVFS水平降低(P<0.05)。与阴性联合组比较,eNOS联合组和si-iNOS联合组心肌梗死面积、血清LDH和CK-MB水平降低[(23.51±3.22)%、(26.21±2.93)%vs(58.78±5.42)%,(176.31±15.48)U/L、(169.52±17.12)U/Lvs(328.85±37.12)U/L,(35.41±6.41)U/L、(34.77±5.94)U/Lvs(88.73±9.14)U/L,P<0.05],LVEF、LVFS水平增高[(41.31±3.12)%、(42.09±3.41)%vs(30.77±2.15)%,(21.47±1.57)%、(21.32±1.42)%vs(15.92±1.33)%,P<0.05]。结论eNOS表达降低、iNOS表达增高可加重去卵巢大鼠心肌IR损伤。

辐射损伤后小鼠外周血一氧化氮变化

一氧化氮（NO）是一种第一和第二信使分子，在体内NO是由L-精氨酸（L-Arg）与O2在一氧化氮合酶（NOS）的作用下合成的。机体受到一定的应激因素作用后，体内诱导型NOS的合成增加，进一步导致NO的含量增加。电离辐射作用于机体时，导致NOS的增加，

贫血与脑损伤：问题多，答案少

大量临床研究显示围手术期患者的脑损伤与急性贫血有关。这种损伤发生在接近于我们普遍认同的输血指征[血红蛋白（Hb）浓度7～8g/dl]，但高于脑组织缺氧的血红蛋白浓度（Hb3～4g／dl）的情况下。但是，贫血引起脑损伤的缺氧和非缺氧机制仍不清楚。此外，能最大程度降低急性贫血所致脑损伤的保护性机制仍未阐明。包括一氧化氮（NO）在内的血管扩张机制，在贫血时有助于维持大脑氧供，在各种急性稀释性缺血试验模型中，3种NO合成酶（NOS）（神经型、内皮型及可诱导型NOS）都有上调。近来的实验也证实了在相当于临床缺氧Hb浓度（Hb6—7g/dl）的啮齿类动物的大脑皮质中，重要的转录因子如缺氧诱导因子（HIF）-1α有所增加。这说明急性贫血对脑氧的供需平衡可能造成威胁，在缺氧的情况下，细胞浆中的HIF-1α降解被抑制，HIF-1α积聚成二聚体，移位到细胞核中并增加许多低氧分子的转录。这些低氧分子在贫血的脑组织中的表达也被发现上调，包括红细胞生成素，血管内皮生长因子，可诱导型NOS。此外，非低氧介质，包括细胞因子和血管激素，可以增加HIF-1α的转录。而且，源于NOS的NO也可以在没有组织缺氧时稳定HIF—1α。因此，在贫血时，HIF-1α在低氧和常氧情况下能对脑细胞进行调节。实验研究发现，针对不同类型的细胞，上调的HIF-1α可以表现为神经保护作用或神经毒性作用。在本综述中，我们描述了这些细胞作用过程，对贫血引起的脑损伤和保护机制有了更清晰的认识。贫血引起损伤的可能机制包括脑栓塞、组织缺氧、炎症、活性氧和兴奋性毒性。可能的细胞保护机制包括NOS／NO依赖的细胞氧供增强和包括HIF-1α、红细胞生成素及血管内皮生长因子在内的细胞保护机制。这些激活的细胞机制的总体平衡决定着它们在贫血时的上调是起细胞保护作用还是细胞损伤作用。深入了解这些机制有助于明确什么样的治疗措施可以降低围手术期贫血性脑损伤。