秋水仙素处理杜仲种子诱导多倍体的研究

以杜仲成熟种子为试材,借助组织培养再生植株手段,研究了不同浓度、处理时间和处理方式的秋水仙素对杜仲多倍体诱导的影响。结果表明:0.2%的秋水仙素水溶液浸泡处理种子48 h,其多倍体的诱导率高于其它处理方法,可达13%。种子用秋水仙素处理后再进行试管萌发处理,其多倍体的诱导率高于培养基中添加秋水仙素直接进行试管萌发的处理。试验共获得杜仲多倍体植株43株。气孔大小及密度可以作为鉴定杜仲多倍体的可靠间接指标。

“四季”青绿苔草多倍体诱导及鉴定

以“四季”青绿苔草的胚性愈伤组织为试验材料,选用秋水仙素为诱导剂,采用秋水仙素浸泡处理法进行诱变处理,研究了不同的秋水仙素浓度和不同的处理时间下诱导“四季”青绿苔草多倍体的最佳条件。通过流式细胞术、根尖染色体计数的方法对加倍植株进行倍性鉴定,并进行叶片气孔特征和植株表型特征分析,以期为“四季”青绿苔草的多倍体诱导及苔草新品种培育提供参考依据。结果表明:在秋水仙素浓度为0.10%,处理时间为48 h时诱导率最高,该条件下的诱导率可达65%。通过植株表型与气孔特征比较,加倍后的植株与二倍体植株有明显的差异,表现为叶型宽阔、株高降低、气孔变大等特点。

‘京枣39’离体多倍体诱导及其增殖、生根培养体系优化

【目的】研究秋水仙素溶液质量浓度、处理时间和预培养时间对‘京枣39’离体多倍体诱导的影响,优化枣树良种‘京枣39’的增殖和生根培养基,建立‘京枣39’的离体多倍体诱导体系,获得多倍体植株。【方法】采用完全随机区组试验设计,探索不同秋水仙素溶液质量浓度和处理时间组合对‘京枣39’不定芽再生的影响,不同预培养时间对‘京枣39’离体多倍体诱导的影响,不同生长调节剂组合对‘京枣39’增殖培养的影响,不同基本培养基和生长调节剂组合对‘京枣39’组培苗生根培养的影响。【结果】(1)当秋水仙素溶液质量浓度为80 mg/L、处理48 h时‘京枣39’刻伤叶片存活率为(50.00±7.07)%,分化系数为(2.06±0.17)。(2)最佳预培养时间为6 d,并施以80 mg/L秋水仙素浓度处理48 h,获得了纯合四倍体‘京枣39’。(3)最佳增殖培养基为MS+0.8 mg/L 6-BA+0.4 mg/L IBA+30 g/L麦芽糖,pH=5.8,平均增殖系数为(4.22±0.22)。(4)最佳生根培养基为改良1/2MS+0.8 mg/L IBA+30 g/L麦芽糖,pH=5.8,平均根长为(5.22±0.19) cm;平均生根数为(3.20±0.22)。【结论】初步建立了‘京枣39’的离体多倍体诱导体系,获得了‘京枣39’的多倍体植株,并优化了其增殖培养及生根培养方法。本研究为优良枣树品种‘京枣39’的种质创新提供了切实可行的技术方法,为多倍体诱导在枣树以及其他果树中的应用奠定了试验基础。

离体再生诱导创制多倍体桑树种质材料

建立稳定、高效的离体再生体系是创制桑树多倍体需要解决的关键技术之一。以野生桑树种质资源A07为材料,将其萌动的春芽作为外植体,于无菌环境下接种在添加3.0 mg/L 6-BA和0.2 mg/L NAA的MS培养基中,暗处理3 d后移至光照14 h/d、温度(25±2)℃的环境中培养,结果表明A07春芽外植体的污染率低,易再生且增殖率高、生长快。进一步将丛生芽用1.5 g/L秋水仙素溶液浸泡3 d,多倍体诱导率达到26.6%以上,再生丛生芽易生根,生根率高且根系壮,移栽成活率高。由此初步建立了野生桑树种质资源A07的组培快繁体系。

氨磺灵诱导滇杨多倍体及倍性鉴定

氨磺灵是一种三硝基苯胺类除草剂,在应用于植物多倍体的诱导中,取到了较好的诱导效果。本研究以氨磺灵为诱变剂,采用混培法对来自3个不同地点的滇杨材料进行多倍体诱导,探讨氨磺灵对滇杨的多倍化诱导效果,继而对诱导后的材料进行同质化处理,鉴定其倍性。结果显示:氨磺灵可诱导滇杨产生多倍体材料,变异率最高的处理组合为预培养4 d后,在添加50 mg/L氨磺灵的分化培养基(1/2 MS+TDZ 0.01mg/L+NAA 0.01mg/L)中培养2 d,变异率可达28.57%。多倍体植株与正常株形态差异明显,且染色体数目增加为76条,多倍体滇杨的荧光通道值约为二倍体滇杨的2倍,表明滇杨材料已加倍为四倍体。研究结果对滇杨乃至木本植物的多倍体育种具有重要的理论及实践意义。

滇丁香化学诱变的多倍体及其鉴定研究

为获得滇丁香新种质、选育抗性新品种,用不同浓度的氨磺灵溶液浸泡滇丁香种子,以种子下胚轴膨大视为变异株,统计变异率和发芽率,通过形态学观察、气孔观察、染色体计数及流式细胞仪检测确定其倍性。结果表明:15μmol/L氨磺灵浸泡种子24 h为滇丁香多倍体诱导最佳方法,变异率达60.1%,发芽率为66.7%,获得2株四倍体植株;25μmol/L氨磺灵诱导24 h,变异率为50%,获得1株八倍体植株。滇丁香变异植株在株高、叶长、叶厚方面均与对照植株呈显著差异,多倍体滇丁香植株株型矮小、叶片畸形较圆润且变厚、叶色较深、叶毛茎毛粗长。多倍体植株气孔的长和宽及保卫细胞的长和宽均显著大于二倍体植株,且气孔密度显著小于二倍体植株。经流式细胞仪检测,不同倍性植株DNA含量近似倍数关系。经染色体计数,滇丁香二倍体植株染色体数目为2n=44,四倍体植株4n=88。四倍体滇丁香丙二醛含量极显著低于二倍体,而脯氨酸含量极显著高于二倍体。

秋水仙碱诱导南丹参多倍体的研究

目的：探讨秋水仙碱诱导南丹参多倍体的方法。方法：将秋水仙碱加入培养基中采用幼苗、叶片和愈伤组织3种不同的外植体进行诱导。结果：经预培养1周的叶片和愈伤组织以15mg·L^-1秋水仙碱处理1周的诱导效果最好，加倍率可达33．33％，且多数为整株加倍。加倍植株叶片较肥厚宽大、皱折增多、色深、根粗壮，气孔比二倍体明显增大，染色体数为8～64条不等。应用过氧化物酶和酯酶同工酶技术比较分析表明，变异植株与未加倍植株同工酶谱存在明显差异。结论：用秋水仙碱诱导南丹参成多倍体植株是有效的，已有部分植株已加倍成为同源四倍体。

半支莲多倍体诱导的初步研究及鉴定

采用不同浓度的秋水仙素溶液对半支莲植株不同部位组织进行诱变处理,并采用不同的方法对变异株进行鉴定。结果表明,对半支莲萌动种子,0.05%秋水仙素处理12h的变异率最大、为11%;对茎尖生长点,0.10%秋水仙素处理48h的变异率最大、为75%;对根尖,采用4%二甲亚砜与0.05%秋水仙素混合溶液处理8h和16h的变异率最大、为16.7%。可见,秋水仙素诱导半支莲茎尖的效果最好,其次为改良浸根法,萌动种子效果较差。形态学鉴定结果发现,变异株叶片明显变短、变宽,叶色浓绿,花径变大;解剖学鉴定结果表明,变异株气孔长度和宽度明显大于对照株,气孔数少于对照株,花粉直径也明显增大;分子生物学鉴定结果表明,采用流式细胞仪对初选的13株拟多倍体进行DNA含量分析,有11株产生了多倍体变异,总变异率达84.6%,其中四倍体7株、八倍体3株、嵌合体1株。

火龙果多倍体诱导体系的优化

【目的】探讨适宜的火龙果多倍体诱导技术体系,以期解决火龙果品种单一、遗传相对狭窄的问题。【方法】以2个主栽的火龙果品种‘大红’和‘白水晶’为材料,通过秋水仙素浸渍法和混培法进行多倍体的诱导,比较不同秋水仙素浓度和处理时间的组合后代变异率和死亡率。【结果】随着秋水仙素浓度升高和处理时间的延长,诱导率和死亡率增加;5 g·L^-1秋水仙素浸渍萌动种子24~48 h和50 mg·L^-1秋水仙素在培养基中与无菌苗共培养3~5 d多倍体诱导效率较高且死亡率适中,混培法30 d表型变异率高于浸渍法,死亡率低于浸渍法。变异株气孔密度和气孔长度分别为对照的81%和115%,变异株染色体数目包括2n=2X=22,2n=4X=44,2n=6X=66等几种不同类型,此外还存在非整倍体。流式细胞仪检测结果发现:5 g·L^-1秋水仙素浸渍萌动种子24 h多倍体和同源四倍体诱导效率最高;50 mg·L^-1秋水仙素在培养基中与无菌苗共培养5 d多倍体和同源四倍体诱导效率最高,混培法多倍体和同源四倍体诱导效率高于浸渍法。【结论】50 mg·L^-1秋水仙素与无菌苗混培养5 d能提高火龙果多倍体诱导效率,火龙果混培法多倍体和同源四倍体诱导效率高于浸渍法,无菌苗与50 mg·L^-1秋水仙素混培5 d是火龙果多倍体诱导的最佳组合,本实验为火龙果多倍体新种质创建奠定了技术基础。

东方百合Siberia多倍体诱导及其细胞学鉴定

本文以东方百合Siberia的试管苗为试验材料,研究了预培养时间、秋水仙素处理方法及浓度等因素对诱导试管苗多倍体的影响。研究结果表明:秋水仙素溶液直接浸泡较共培养法好,且以0.05%的浓度和浸泡48h为最佳组合,最终获得了18株四倍体试管苗。通过根尖染色体计数确定其为稳定的同源四倍体。显微观测气孔特征后发现:二倍体与四倍体植株的叶下表皮气孔密度及气孔保卫细胞长、宽差异均达到了极显著水平。

药用百合的多倍体诱导及快速繁殖

为改良现有的药用百合栽培品种,丰富遗传育种资源。在无菌条件下,将丛生芽浸入0.02%,0.05%,0.10%,0.25%,0.50%秋水仙碱水溶液中1～4d,然后转入MS+1mg·L-16-BA+0.5mg·L-1NAA中培养;或将浸透0.02%,0.05%,0.10%,0.25%秋水仙碱溶液的药棉嵌入已转入MS+1mg·L-16-BA+0.5mg·L-1NAA中的丛生芽上培养1～5d。结果是培养30d后,2种方法都诱导出了变异芽。通过根尖细胞染色体检测,变异芽为四倍体或嵌合体。结论为以浓度为0.1%的秋水仙碱溶液浸泡处理丛生芽3d效果最好,得到的变异芽75%为纯合的四倍体,其染色体数量由24(2n=2x=24)变为48(2n=4x=48)。

腋花杜鹃多倍体诱导和鉴定

为探究秋水仙素对腋花杜鹃的诱变效应,以增殖培养15 d的腋花杜鹃无菌幼苗为材料,通过浸泡处理诱导多倍体,并进行倍性鉴定。结果表明,0.15%秋水仙素浸泡24 h后去除茎尖,培养茎段,通过茎段侧芽及其基部愈伤组织分化的丛生芽分离变异株,得到的形态变异率最高,为32%。形态观察结合流式细胞仪鉴定发现,叶片肥厚、叶片畸形扭曲和茎段变粗3种形态变异类型具有大于50%的多倍体得率。气孔观测表明,二倍体气孔趋近于圆形,变异株气孔为椭圆形;变异株平均长直径和平均短直径显著大于二倍体,而气孔数却显著少于二倍体。最终流式细胞仪鉴定得到四倍体腋花杜鹃141株。本研究结果为杜鹃花培育倍性新品种提供了技术支持和理论依据。

药用植物多倍体诱导研究进展

在查阅国内外相关文献的基础上,概述了药用植物多倍体在应用方面的优势及鉴定方法,总结了染色体人工诱导加倍的常用方法,并提出了药用植物多倍体研究中亟需解决的问题。

红果肉苹果‘红脆甜’多倍体诱导研究

【目的】建立红果肉苹果多倍体诱导方法,创新红果肉苹果多倍体新种质资源。【方法】以红果肉苹果‘红脆甜’组培苗叶片和茎段为材料,用秋水仙素进行诱变处理,利用流式细胞仪和根尖染色体计数法对诱导植株进行倍性鉴定,并测定55 d苗龄‘红脆甜’二倍体与四倍体植株高度、叶片长度、叶片宽度,观察叶缘锯齿、叶片颜色等性状变化。【结果】200~350 mg·L^-1秋水仙素溶液震荡培养4 d适于红果肉苹果‘红脆甜’经叶片诱导再生植株的染色体加倍,可以获得稳定的四倍体植株,而以茎段诱导的再生植株可鉴定出混倍体,未能获得成功加倍的四倍体植株。55 d苗龄四倍体植株株高明显低于其对照二倍体植株,表现矮壮;叶片长度较叶片宽度变异明显,四倍体植株叶片长度明显变短,导致叶片形状发生显著变化;叶缘锯齿由二倍体的浅锯齿变为四倍体的深锯齿;叶片颜色由二倍体的浅绿色转为四倍体的深绿色。【结论】经叶片诱导再生植株染色体加倍的方法比经茎段诱导再生植株加倍的方法更适于红果肉苹果‘红脆甜’的多倍体诱导,‘红脆甜’四倍体植株较对照二倍体植株株高、叶片长度、叶色、叶缘锯齿等性状发生了显著变化。

高温处理诱导染色体加倍获得白杨杂种多倍体

在掌握毛新杨×新疆杨合子有丝分裂规律基础上,对高温处理诱导毛新杨×新疆杨合子染色体加倍的技术条件进行研究。结果表明,在温室水培条件下,毛新杨×新疆杨合子第一次有丝分裂主要在授粉后7d;施加高温处理可有效诱导毛新杨×新疆杨合子染色体加倍,最高四倍体诱导率为7.4%,处理温度以39℃为宜;由于胚珠发育过程具有极强的不同步性,在诱导合子染色体加倍的同时还获得了部分三倍体植株。子代气孔特征观察显示:四倍体和三倍体植株都表现出多倍体特征,随着倍性水平增加,气孔增大,单位面积气孔数减少,与二倍体有显著差异。

不同浓度秋水仙素对贡蕉的多倍体诱导

本试验以贡蕉胚性细胞悬浮系、胚性愈伤组织和多芽体为试验材料,利用不同浓度的秋水仙素溶液对不同外植体材料进行不同时间的诱变处理,以期获得染色体加倍的植株。结果表明,试验所用的胚性悬浮细胞系、胚性愈伤组织和多芽体三种不同外植体对秋水仙素处理的敏感性都较高,出现了不同程度的死亡,以0.4%(w/v)浓度的秋水仙素溶液处理多芽体48h诱导效果较好,多芽体的死亡率达到45.83%,接近半致死率,诱变率为18.64%。通过染色体计数和气孔鉴定,获得62株纯合四倍体小苗。诱变获得的植株的染色体数目加倍,叶片气孔数量减少,体积增大。本次试验为香蕉多倍体诱变育种和新种质的创新提供了技术参考和相关依据。

连翘多倍体诱导与鉴定

以连翘籽苗为材料,采用秋水仙素溶液处理生长点的诱变,茎尖细胞染色体计数检测及流式细胞仪倍性鉴定等方法,研究了不同浓度秋水仙素对连翘的诱变效果。结果表明:0.2%的秋水仙素溶液处理连翘籽苗生长点72 h变异株率最高,达到58.3%,诱导效果最佳。经秋水仙素诱导后形成的多倍体植株叶片变宽变大,叶色变深,茎变粗且节距变大,气孔增大,单位叶面积气孔数目减少,保卫细胞叶绿体数明显增多。经茎尖细胞染色体计数检测,部分变异植株茎尖细胞染色体整倍体数目为2n=56条,而二倍体的染色体数目为2n=2x=28条,因此,部分变异植株(2n=4x=56)为四倍体。经流式细胞仪倍性分析验证,连翘四倍体体细胞DNA相对含量是二倍体的2倍。检测发现有少数个体为非整倍体变异。

野生紫斑百合多倍体诱导研究

【目的】对野生紫斑百合丛生芽进行多倍体诱导,以期获得多倍体新种质。【方法】以野外采集的野生紫斑百合为材料,以秋水仙素为诱变剂,分别采用浸泡法和混培法处理野生紫斑百合试管苗不定芽,比较分析不同处理方式、不同质量浓度及不同处理时间的秋水仙素对野生紫斑百合的诱变效果,并通过形态、气孔和细胞学观测鉴定变异植株。【结果】用浸泡法进行多倍体诱导,秋水仙素的最佳浓度为0.3%,最佳处理时间为12 h,变异率达到10.0%;用秋水仙素混培法进行染色体加倍的最佳浓度为0.7%,诱变率达到46.67%。通过鉴定,初步筛选出了野生紫斑百合的四倍体植株。【结论】秋水仙素的浸泡法和混培法均可诱导获得野生紫斑百合的多倍体,但以混培法诱导效果较好。

利用组织培养技术进行红千层多倍体诱导

利用组织培养技术培育红千层无菌苗,并运用秋水仙碱诱导多倍体。结果表明:利用0.2％秋水仙碱处理无菌苗茎段15-20 d,从60个茎段中成功地诱导出了四倍体植株6株,其形态特征为叶色浓绿、叶片增厚、根系肥大等;据方差分析结果表明,四倍体与二倍体的叶长宽比差异显著;其体细胞染色体数目由2n=2x=22变为2n=4x=44。

南丹参离体快速繁殖与多倍体诱导

MS附加 6 BA 2 .0mg·L-1和IAA 0 .2mg·L-1的培养基上诱导南丹参丛生芽的频率最高 (达 10 0 % ) ,每一丛生芽数达 2 0～ 30个 ,移栽成活率 90 %。MS附加 6 BA 2 .0mg·L-1和 2 ,4 D 0 .2mg·L-1培养基上 ,叶缘及叶柄上长出绿芽或浅褐色愈伤组织 ,经多次继代仍具有分化植株能力。多倍体诱导以秋水仙碱 15mg·L-1处理愈伤组织和预培养 1周 ,处理时间 1周的叶片诱导效果较好 ,加倍率可达 33.33% ,且多数为整株加倍。加倍植株叶片较肥厚宽大、皱折增多、色深、根粗壮 ,气孔比二倍体明显增大 ,染色体数为 2 8～ 32条不等 。