诱导性免疫共刺激分子转基因小鼠模型的建立

利用RT-PCR方法从人扁桃体的激活T细胞mRNA中扩增出诱导性免疫共刺激分子(ICOS)cDNA,继而将ICOS基因插入到pEGFP-N3中得到含ICOS和GFP融合蛋白的pEGFP-ICOS。将外源基因pEGFP-ICOS注射至FVB小鼠原核中,其胚胎移植到同期发情的假孕受体产出后代,经PCR和Southern检测获得阳性转基因小鼠。试验共注射移植胚胎117枚,出生小鼠43只,检出阳性小鼠2只,该转基因已稳定遗传至F3代,说明建立了ICOS转基因小鼠模型。

诱导性共刺激分子靶点用于小鼠佐剂诱导型关节炎模型的可行性

目的观察诱导性共刺激分子(ICOS)靶点用于小鼠佐剂诱导型关节炎(AIA)模型的可行性。方法选取20只BALB/c小鼠,于右后爪分别注射等剂量完全弗氏佐剂(AIA组,n=10)或磷酸盐缓冲液(对照组,n=10),之后经尾静脉分别注射ICOS-IRD680 mAb探针(AIA组)或IgG-IRD680 mAb探针对照组,比较24及48 h后2组近红外荧光成像右爪与左爪荧光强度比值;提取小鼠总RNA行转录组测序,筛选并分析差异表达基因。针对对照组提取脾脏原代T细胞并分选磁珠阴性T细胞,以佛波酯/离子霉素刺激、诱导活化T细胞形成,检测其表面ICOS蛋白表达水平,并进行安全性评价。结果相比对照组,AIA组ICOS基因表达显著上调、T细胞占比增高,FoxP3+调节性T细胞、CD8+T细胞及CD4+T细胞中ICOS分布较多。对照组分选磁珠阴性T细胞前、后CD3+T细胞纯度分别为65.31%和90.14%;其中,ICOS蛋白阳性小鼠CD4+T细胞在活化前、后占比分别为7.14%及31.20%,且活化CD4+T细胞ICOS蛋白平均荧光强度(586±25)显著高于未活化者(161±31)(t=25.390,P<0.001)。注射探针后24及48 h,AIA组右爪/左爪荧光强度比值均高于对照组(t=34.600、P<0.001;t=23.380、P<0.001)。相比对照组,AIA组小鼠心、肝、肾组织未见明显病理改变,且组间血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肌酐无明显差异(P均>0.05)。结论ICOS靶点用于小鼠AIA模型安全、可行。

可溶性共刺激分子在自身免疫性皮肤病中的研究进展

可溶性共刺激分子(soluble costimulatory molecules)是共刺激分子的可溶性形式,参与共刺激信号的传递并发挥重要的自我调控作用,其异常表达会影响机体免疫应答和免疫耐受的建立,与自身免疫性皮肤病的免疫调控和发生发展密切相关。本文就可溶性共刺激分子在自身免疫性皮肤病中的研究进展进行综述,旨在为临床医师和科研工作者明确该病的发病机制及有效治疗方案提供参考。

小鼠诱导性共刺激分子-Ig在小鼠树突状细胞中的表达及其效应研究

目的 获得mICoS-Ig基因修饰的小鼠DC,分析表达产物mICOS-Ig对T细胞活化的影响。方法 采用电转染方法将mICOS-Ig表达载体转入小鼠DC,通过ELISA法检测转染小鼠DC 60和96 h以及稳定表达的培养上清;观察mICOS-Ig对同种混合细胞培养反应的影响。结果 ELISA法检测证明将mICOS-Ig表达载体转入小鼠DC,获得瞬时表达及稳定表达,mICOS-Ig可抑制单向混合淋巴细胞反应,抑制率达40％,其效应呈剂量依赖性。结论 获得了稳定表达mICOS-Ig融合蛋白的小鼠DC,mICOS-Ig表达产物对同种细胞刺激的增殖反应有抑制作用。

可诱导共刺激分子与类风湿性关节炎免疫紊乱机制研究进展

T细胞活化的共刺激信号途径在自身免疫性疾病的发生、发展中发挥着重要作用,新的共刺激分子可诱导共刺激分子(ICOS)在免疫效应阶段的作用,可能使其在参与自身免疫性疾病类风湿性关节炎(RA)的免疫紊乱机制中扮演着重要角色。

诱导性共刺激分子表达与原因不明复发性流产的相关性研究

目的探讨诱导性共刺激分子(ICOS)的表达与原因不明复发性流产(URSA)的关系。方法采集10例诊断为难免流产的URSA患者(URSA组)和10例正常早孕妇女(正常对照组)的部分蜕膜组织和外周血,采用流式细胞术检测蜕膜组织和外周血CD3+和CD4+T细胞中ICOS的表达;Real-Time PCR检测蜕膜组织中ICOS mRNA的表达情况。结果 URSA组蜕膜组织中ICOS+CD3+T淋巴细胞亚群所占百分比为(0.612±0.693)%,显著高于正常对照组的(0.056±0.103)%,差异有统计学意义(P<0.001)。URSA组外周血ICOS+CD4+T淋巴细胞亚群所占百分比为(1.943±0.762)%,显著高于正常对照组的(0.221±0.127)%,差异有统计学意义(P<0.001)。URSA组蜕膜组织中ICOS mRNA的相对表达量较正常对照组显著升高[(9.875±1.464)vs(2.701±1.737)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论蜕膜组织中ICOS的表达异常与URSA的发病具有密切关系。

可诱导共刺激分子在原发免疫性血小板减少症发病机制中的研究进展

原发免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia, ITP)的发病与T细胞免疫异常有关,具体表现在人体对T细胞介导的血小板抗原失去免疫耐受,使T卵泡辅助细胞(Tfh细胞)刺激自身反应性B细胞分化为浆细胞,产生抗血小板抗体,引起血小板破坏增多,从而导致ITP的发生。通过阻断可诱导共刺激分子(Inducible co-stimulator, ICOS)途径可以抑制ITP患者的T细胞活性,并诱导T细胞对抗原产生特异性免疫耐受,为ITP的治疗提供潜在的靶点。本文综述了ICOS在ITP发病机制中的研究进展。

可诱导共刺激分子(ICOS)在寄生虫感染免疫中的作用

ICOS为近年来新发现的另一类协同刺激分子 ,是CD2 8家族的新成员 ,它与经典的CD2 8、CTLA 4共同参与对T细胞功能的调节 ,尤其对已活化的效应性T细胞有重要的调节作用。该文主要综述了ICOS在寄生虫感染免疫中的作用。

可诱导共刺激分子与自身免疫性葡萄膜炎

可诱导共刺激分子（ICOS）是共刺激分子CD28超家族的一员，大量表达于活化后的T细胞表面，与相应配体（ICOSL）结合后产生共刺激信号，促进活化后的T细胞增生、分化以及细胞因子的产生。临床研究和实验研究均表明，ICOS在多种自身免疫性疾病中发挥重要作用，在自身免疫性葡萄膜炎（AIU）和Behcet病的发病和转归过程中，ICOS／ICOSL共刺激通路通过调节T淋巴细胞的效应因子影响病变的严重程度。因此进一步研究ICOS／ICOSL共刺激通路在AIU中的作用机制对于寻找新的AIU治疗途径有重要意义。就ICOS的基本概念、ICOS／ICOSL共刺激通路与效应细胞的关系及其在AIU治疗中的展望进行综述。

阿奇霉素联合布地奈德对支原体肺炎患儿细胞因子、共刺激分子和免疫功能的影响

目的观察阿奇霉素联合布地奈德对支原体肺炎(MPP)患儿细胞因子、共刺激分子和免疫功能的影响。方法选取2013年10月至2016年6月诊治的MPP患儿110例,随机分为对照组和观察组,每组55例。2组均给予阿奇霉素治疗,观察组在对照组基础上加用布地奈德,疗程2周。观察2组临床疗效、症状消失时间及治疗前后肺功能(FVC、FEV1、PEF)、血清细胞因子(IL-4、IL-17、IL-18、IFN-γ)、sB7-H3、T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)变化。结果观察组总有效率明显高于对照组,症状消失时间明显短于对照组(P<0.05)。治疗前2组FVC、FEV1、PEF、血清IL-4、IL-17、IL-18、IFN-γ、CD3+、CD4+、CD8+、IgA、IgG、IgM及CD4+/CD8+比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后2组FVC、FEV1、PEF、血清CD3+、CD4+、IgA、IgG、IgM及CD4+/CD8+均明显高于治疗前,血清IL-4、IL-17、IL-18、IFN-γ、sB7-H3、CD8+均明显低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),且2组差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿奇霉素联合布地奈德治疗MPP疗效确切,能够明显降低患儿血清细胞因子、共刺激分子水平,改善患儿肺功能和免疫功能,值得临床推广应用。

共刺激信号分子对免疫性血小板减少症患者B淋巴细胞免疫功能的影响

目的:探讨共刺激信号分子(CD80、CD86)的表达对免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血B淋巴细胞数量及功能的影响。方法:选取初诊ITP患者30例、完全缓解ITP患者25例为研究对象,健康志愿者25例为正常对照者。采用流式细胞术检测CD19^+CD5^+、CD19^+CD80^+、CD19^+CD86^+、CD41a^+Ig G、CD41a^+Ig M及CD19^+B细胞内Ig G和Ig M的表达,并与ITP患者的临床指标进行相关性分析。结果:初诊ITP患者B1(CD19^+CD5^+)细胞数均显著高于完全缓解组和健康对照组(P<0.05)。初诊组ITP患者CD19^+CD80^+细胞数均明显高于完全缓解组和健康对照组(P<0.05)。初诊组ITP患者CD19^+B胞内抗体Ig G和Ig M表达水平均明显高于完全缓解组和健康对照组(P<0.05)。治疗后完全缓解组ITP患者Ig G和Ig M的表达水平均明显低于治疗前水平(P<0.05),难治组ITP患者治疗前后Ig G和Ig M表达水平无统计学差异(P>0.05)。CD19^+CD80^+细胞数与Th1的表达水平及Th1/Th2的比例呈正相关(r=0.502,r=0.471,P<0.05)。CD19^+CD80^+细胞数与Ig G和Ig M表达水平呈正相关(r=0.552,r=0.467,P<0.05),与外周血血小板计数呈负相关(r=^-0.424,P<0.05)。Ig G和Ig M表达水平与血小板计数呈负相关(r=^-0.658,r=^-0.526,P<0.05)。结论:ITP患者外周血CD19^+B细胞共刺激信号增强,导致B淋巴细胞异常活化,介导免疫系统发生紊乱,参与ITP发病。

阿糖胞苷增强K562细胞共刺激分子B7表达以及对T细胞的免疫应答

目的探讨阿糖胞苷(Ara-c)对白血病细胞(K562)B7分子表达以及对T细胞免疫应答的影响。方法用流式细胞术检测K562细胞经Ara-c处理后B7分子的表达以及对T细胞表面标记的影响。MTT法检测不同效靶比的情况下,诱导后的K562细胞对外周血单个核细胞(PBMNC)的刺激作用,以及用RT-PCR法检测B7分子刺激PBMNC分泌细胞因子γ干扰素(IFN-γ)的测定。结果Ara-c能刺激K562细胞B7分子的表达,呈时间依赖性。诱导后的K562细胞显著刺激PBMNC增殖并产生IFN-γ,并能检测到T细胞表面标记。结论Ara-c通过刺激K562细胞B7分子表达,显著提高了白血病细胞的免疫原性。

共刺激分子及其在特异性免疫应答中的调节

特异性免疫应答主要包括抗原递呈、免疫细胞相互作用、免疫效应3个阶段,是一个由多种免疫细胞和分子(膜分子和可溶性因子)参与并受到严格调控及制约的复杂生理过程,它涉及抗原递呈细胞(antigen presenting cells,APC)对抗原的特异性识别及记忆。APC与T细胞等兔疫细胞间相互作用及多种免疫分子构成有序的调控网络。

负性共刺激分子BTLA在感染免疫的作用

共刺激分子家族是既包括以CD28为代表的促进T细胞的生长、分化和细胞因子产生的正刺激分子,也包括诱导和维持T细胞免疫耐受及凋亡的负刺激分子。正性和负性刺激分子在适当的时间和部位表达,为T细胞提供正性信号和负性信号,调控T细胞的活化、增殖、分化和功能成熟。其中传递负向信号的分子受到越来越多的重视,也不断发现一些新的成员。

协同共刺激分子B7-H4参与肿瘤免疫逃逸的研究进展

近年来恶性肿瘤的治疗方法虽然取得了较大进展,但5年生存率仍不理想,寻找新的治疗策略和有效的治疗靶点显得尤为迫切。B7家族是近年来研究较广泛的共刺激分子,其中B7-H4是新近发现的B7家族新成员,对T淋巴细胞介导的免疫应答起重要的负性调节作用。

树突状细胞共刺激分子表达与免疫抑制剂的干预

背景:以往关于器官移植免疫抑制和抗排斥反应的研究,多关注T淋巴细胞介导的免疫反应及免疫抑制剂对T淋巴细胞的作用,树突状细胞作用尚不清楚,且对于免疫抑制剂对树突状细胞影响的表现及机制亦不尽相同。目的:比较不同免疫抑制剂对树突状细胞共刺激分子表达及功能的影响,探讨其免疫抑制作用机制。方法:在诱导C57BL/6小鼠骨髓细胞定向分化为树突状细胞时分别加入20μg/L雷帕霉素、0.04 mg/L霉酚酸酯、10μg/L他克莫司和1 mg/L环孢霉素A。结果与结论:流式细胞仪检测结果显示,各组CD40表达为:雷帕霉素<他克莫司<环孢霉素A<霉酚酸酯(P<0.01);CD86表达分别为:雷帕霉素<他克莫司<环孢霉素A=霉酚酸酯(P<0.01);CD80、CD11c及主要组织相容性复合体Ⅱ的表达各组差异无显著性意义(P>0.05)。单向混合淋巴细胞反应结果显示,各组树突状细胞共刺激T细胞增殖能力表现为:雷帕霉素<霉酚酸酯<他克莫司=环孢霉素A(P<0.05)。结果证实,雷帕霉素、他克莫司、环孢霉素A、霉酚酸酯均通过抑制树突状细胞共刺激分子CD40及CD86表达而发挥免疫抑制作用,以雷帕霉素最为显著;虽然以上药物对树突状细胞抗原递呈能力主要组织相容性复合体Ⅱ的表达均无明显抑制性,但均能抑制树突状细胞刺激T细胞增殖的能力,雷帕霉素的抑增殖能力最强。

T细胞亚群及共刺激分子表达与系统性红斑狼疮免疫病理的关系

目的 探讨T细胞亚群及共刺激分子表达与系统性红斑狼疮免疫病理的关系。方法 采用免疫荧光标记技术和流式细胞仪检测技术对系统性红斑狼疮 (SLE)患者和正常人外周血T细胞亚群及外周血单个核细胞膜表面共刺激分子的表达进行分析。结果 ①与正常人相比 ,SLE患者CD3+ 、CD4+ T细胞亚群显著减少 ,CD4/CD8比例失调 ,双标记CD4+ CD2 8+ 、CD8+ CD2 8+ T细胞亦显著减少 ;②患者共刺激分子CD2 8表达显著降低 ,4-1BB分子表达显著增高 ;③患者T细胞CD4/CD8与抗核抗体呈负相关 ,共刺激分子 4- 1BB与抗核抗体、尿蛋白呈正相关 ,而与CD4+ CD2 8+ T细胞亚群呈负相关。结论 T细胞亚群及共刺激分子表达异常在系统性红斑狼疮发病机制中可能具有重要作用。

滋水清肝饮加减方对2型糖尿病患者正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L免疫调节作用的影响

目的:研究滋水清肝饮加减方对2型糖尿病患者正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L的免疫调节作用的影响。方法:随机抽取2016年1月—2017年3月本院收治的90例2型糖尿病患者,依据治疗措施差异分作两组,各45例,对照组施予甘精胰岛素治疗,于此基础,观察组施予滋水清肝饮加减方治疗,比较两组正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L。结果:治疗后,(1)在B细胞上,观察组ICOS/ICOSL表达(0.71±0.04)%,OX40/OX40L(6.05±0.83)%,分别比对照组的(2.11±0.37)%及(11.58±2.10)%低,差异有统计学意义(P<0.05);(2)在CD4+T细胞上,观察组ICOS/ICOSL表达(0.61±0.01)%,OX40/OX40L(0.30±0.03)%,分别比对照组的(1.60±0.17)%及(1.13±0.20)%低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)对于合并大血管病变者,观察组B细胞、CD4+T细胞上的ICOS/ICOSL、OX40/OX40L表达均比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);(4)观察组血糖及总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、糖化血清蛋白(Glucosylated serum protein,GSP)水平均比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:于2型糖尿病患者中施予滋水清肝饮加减方治疗有助于改善正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L的免疫调节作用,促进合并大血管病变者转归,值得推广。

T细胞共刺激分子在自身免疫性甲状腺疾病中的表达

目的探讨T细胞共刺激分子CD54、CD40和B7-1分子在自身免疫性甲状腺疾病(AITD)中的作用。方法采用免疫组化法观察48例桥本甲状腺炎(HT)、51例Graves病(GD)和50例非毒性结节性甲状腺肿(NTG)的甲状腺组织中CD54、CD40和B7-1的表达,应用Mias99图像分析系统进行定量分析。结果①3种T细胞共刺激分子CD54、CD40和B7-1在HT患者的甲状腺组织中呈阳性表达,强阳性染色区域主要分布在甲状腺滤泡细胞胞膜和细胞质;在GD患者的甲状腺组织中大部分呈弱阳性表达,少数病例在浸润的淋巴细胞区呈强阳性表达;在NTG的甲状腺组织中呈阴性表达。②CD54、CD40和B7-1的阳性颗粒面积、平均吸光度及积分吸光度值比较:HT组明显高于GD组,而GD组明显高于NTG组,3组组间差异均有极显著性意义(均P<0.01)。结论T细胞共刺激分子CD54、CD40和B7-1的异常表达可能与AITD的发病有关。