小鼠诱导性共刺激分子-Ig在小鼠树突状细胞中的表达及其效应研究

目的 获得mICoS-Ig基因修饰的小鼠DC,分析表达产物mICOS-Ig对T细胞活化的影响。方法 采用电转染方法将mICOS-Ig表达载体转入小鼠DC,通过ELISA法检测转染小鼠DC 60和96 h以及稳定表达的培养上清;观察mICOS-Ig对同种混合细胞培养反应的影响。结果 ELISA法检测证明将mICOS-Ig表达载体转入小鼠DC,获得瞬时表达及稳定表达,mICOS-Ig可抑制单向混合淋巴细胞反应,抑制率达40％,其效应呈剂量依赖性。结论 获得了稳定表达mICOS-Ig融合蛋白的小鼠DC,mICOS-Ig表达产物对同种细胞刺激的增殖反应有抑制作用。

诱导性共刺激分子表达与原因不明复发性流产的相关性研究

目的探讨诱导性共刺激分子(ICOS)的表达与原因不明复发性流产(URSA)的关系。方法采集10例诊断为难免流产的URSA患者(URSA组)和10例正常早孕妇女(正常对照组)的部分蜕膜组织和外周血,采用流式细胞术检测蜕膜组织和外周血CD3+和CD4+T细胞中ICOS的表达;Real-Time PCR检测蜕膜组织中ICOS mRNA的表达情况。结果 URSA组蜕膜组织中ICOS+CD3+T淋巴细胞亚群所占百分比为(0.612±0.693)%,显著高于正常对照组的(0.056±0.103)%,差异有统计学意义(P<0.001)。URSA组外周血ICOS+CD4+T淋巴细胞亚群所占百分比为(1.943±0.762)%,显著高于正常对照组的(0.221±0.127)%,差异有统计学意义(P<0.001)。URSA组蜕膜组织中ICOS mRNA的相对表达量较正常对照组显著升高[(9.875±1.464)vs(2.701±1.737)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论蜕膜组织中ICOS的表达异常与URSA的发病具有密切关系。

诱导性免疫共刺激分子转基因小鼠模型的建立

利用RT-PCR方法从人扁桃体的激活T细胞mRNA中扩增出诱导性免疫共刺激分子(ICOS)cDNA,继而将ICOS基因插入到pEGFP-N3中得到含ICOS和GFP融合蛋白的pEGFP-ICOS。将外源基因pEGFP-ICOS注射至FVB小鼠原核中,其胚胎移植到同期发情的假孕受体产出后代,经PCR和Southern检测获得阳性转基因小鼠。试验共注射移植胚胎117枚,出生小鼠43只,检出阳性小鼠2只,该转基因已稳定遗传至F3代,说明建立了ICOS转基因小鼠模型。

诱导性协同共刺激分子及程序性细胞死亡受体1在大疱性类天疱疮皮损中的表达及意义

目的通过检测滤泡辅助性T细胞(Tfh)相关分子诱导性共刺激分子(ICOS)及程序性细胞死亡受体1(PD-1)在大疱性类天疱疮(BP)患者皮损中的表达,探讨Tfh在BP发病机制中的作用。方法收集大连市皮肤病医院2014-2017年间确诊的BP患者石蜡组织标本21份,其中女7例,男14例,平均年龄72.57岁。应用免疫组化SP法检测BP皮损中ICOS与PD-1的表达,以10例正常皮肤组织作为对照组。结果 ICOS、PD-1在BP皮损中均主要表达于表皮基底层、棘细胞层、颗粒层、角质层,以棘细胞层表达最为显著,细胞质、细胞核均见表达,偶见细胞膜表达,真皮层炎症细胞中亦有表达;正常皮肤组织中ICOS、PD-1表达少见。BP组ICOS表达率为85.71%(18/21),PD-1表达率为47.62%(10/21),均高于正常对照组(均为0),差异有统计学意义(P值分别<0.001、<0.05)。结论 Tfh细胞相关分子ICOS、PD-1在BP发病机制中可能发挥重要作用。

COPD合并肺源性心脏病患者血清ICOS、ICOSL水平变化及临床意义

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肺源性心脏病(PHD)患者血清诱导性共刺激分子(ICOS)和诱导性共刺激分子配体(ICOSL)水平变化及临床意义。方法选择2020年6月—2023年2月上海交通大学医学院苏州九龙医院心内科收治COPD患者172例,根据患者是否合并PHD分为合并PHD组82例和COPD组90例。根据肺动脉收缩压(PASP)将PHD患者分为轻度亚组(30~50 mmHg,21例)、中度亚组(51~70 mmHg,37例)和重度亚组(≥71 mmHg,24例),再根据纽约心脏病协会(NYHA)分级将PHD患者分为Ⅰ~Ⅱ级亚组(44例)、Ⅲ~Ⅳ级亚组(38例)。酶联免疫吸附试验检测血清ICOS、ICOSL水平,分析ICOS、ICOSL与PASP、NYHA分级之间的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析ICOS、ICOSL诊断COPD合并PHD的价值。结果合并PHD组血清ICOS、ICOSL水平高于COPD组(t=14.526、34.508,P均<0.001)。重度亚组血清ICOS、ICOSL及PASP水平高于中度亚组和轻度亚组(F/P=125.351/<0.001、163.591/<0.001、84.292/<0.001),Ⅲ~Ⅳ级亚组血清ICOS、ICOSL水平均高于Ⅰ~Ⅱ级亚组(t/P=11.658/<0.001、27.345/<0.001)。PHD患者血清ICOS、ICOSL水平与PASP、NYHA分级均呈正相关(r=0.439、0.416、0.501、0.497,P均<0.001)。血清ICOS、ICOSL及二者诊断COPD患者合并PHD的曲线下面积分别为0.780、0.723、0.926,二者联合高于单独ICOS、ICOSL诊断(Z=4.021、5.194,P均<0.001)。结论COPD合并PHD患者血清ICOS、ICOSL水平显著增高,且与肺动脉高压以及心功能降低有关,联合检测ICOS、ICOSL可有效评估COPD患者PHD风险。

γδT淋巴细胞及其亚型在毒性弥漫性甲状腺肿中的分布研究

目的研究γδT淋巴细胞及其亚型在毒性弥漫性甲状腺肿(GD)中的分布并探讨γδT淋巴细胞在GD免疫学发病机制中的作用。方法选取2022年6-12月上海市嘉定区中心医院内分泌门诊确诊的GD患者59例作为GD组,另选择同期65例健康志愿者作为对照组。检测两组相关甲状腺指标[包括游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TG-Ab)、抗促甲状腺激素受体抗体(TRAb)],采用流式细胞术检测两组外周血中γδT淋巴细胞及其亚型的比例,分析γδT淋巴细胞表面活化分子CD69、HLA-DR及协同刺激分子CD40配体(CD40L)与诱导性共刺激分子(ICOS)的表达水平。结果GD组TSH水平低于对照组,FT3、FT4、TPOAb、TG-Ab、TRAb水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组γδT淋巴细胞比例比较,差异无统计学意义(P>0.05);GD组Vδ1γδT淋巴细胞比例高于对照组,Vδ2γδT淋巴细胞比例低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。GD组γδT淋巴细胞表面活化分子CD69、HLA-DR表达水平及协同刺激分子CD40L、ICOS的表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论GD患者外周血γδT淋巴细胞亚型改变表现为Vδ1γδT淋巴细胞比例上调与Vδ2γδT淋巴细胞比例下调,γδT淋巴细胞功能活化并表达协同刺激分子CD40L、ICOS可能是促进GD产生自身抗体及自身体液免疫应答的重要病理机制。

诱导性协同共刺激分子研究进展

Naive CD4^+T细胞在接触抗原刺激后,具有向不同的Th细胞分化的潜力.诱导性协同共刺激分子(inducible synergistic co-stimulation molecules,ICOS),作为CD28超家族中的一员,表达在激活后的T细胞表面,参与调节T细胞的增殖分化和效应功能.ICOS分子表达的上调或下调与自身免疫性疾病和多种肿瘤性疾病的发生和发展密切相关.研究ICOS分子,ICOS与Th细胞免疫,以及ICOS与自身免疫性疾病和肿瘤性疾病之间的内在联系,可为寻找临床治疗靶点提供新观点.

慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞ICOS/ICOSL水平升高并与病情相关

目的检测慢性乙型肝炎(CHB)患者不同阶段外周血单个核细胞(PBMC)中诱导性共刺激分子(ICOS)及诱导性共刺激分子配体(ICOSL)mRNA的水平,并探索其临床意义。方法收集80例CHB患者以及20例健康对照者(HC)的外周血,检测血清中的丙氨酸转氨酶(ALT)、HBV血清标志物乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag)、乙型肝炎病毒e抗原(HBe Ag)和HBV DNA定量;采用实时荧光定量PCR检测PBMC中的ICOS、ICOSL mRNA的水平。结果与正常对照相比,HBeAg^+和HBeAg^-患者ICOS、ICOSL的mRNA水平均明显升高,但HBe Ag+和HBe Ag-患者间无显著差异。根据其血清ALT、HBsAg、HBeAg和HBV DNA定量结果将CHB患者其分为免疫耐受期、免疫活跃期、免疫低复制期、HBe Ag阴性慢性肝炎期,分析其结果发现免疫活跃期ICOS和ICOSL的mRNA水平较其他各期明显增加。结论 CHB患者PBMC中ICOS和ICOSL的mRNA水平升高,且与疾病活动度和病程相关。

Graves病外周血CD4^(+)T细胞ICOS及CD19^(+)B细胞ICOSL高表达且与促甲状腺素受体抗体(TRAb)水平正相关

目的探索诱导性共刺激分子及配体(ICOS/ICOSL)在Graves病(GD)外周血淋巴细胞上的表达及临床意义。方法募集105例初发未治疗的GD甲亢患者纳入初发GD甲亢组,匹配同时期性别、年龄无差异的健康对照组67例。其中初发GD甲亢组有19例患者接受抗甲状腺药物治疗并在门诊规律随访直至TRAb转阴,以动态观察ICOS、ICOSL在治疗前后的变化。分离初发GD甲亢患者外周血单个核细胞(PBMC),PCR检测PBMC上ICOS、ICOSL mRNA的表达;流式细胞术分别检测CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞亚群表面ICOS及CD19^(+)B淋巴细胞表面ICOSL的表达,分析其与甲状腺功能及促甲状腺素受体抗体(TRAb)水平的相关性。动态观察GD甲亢患者治疗前后ICOS、ICOSL表达的变化。结果与健康对照组相比,初发GD甲亢组PBMC上ICOS及ICOSL mRNA表达水平均显著增加。初发GD甲亢组CD4^(+)T细胞表面ICOS表达水平升高,且与游离甲状腺三碘原氨酸(FT3)水平显著正相关;TRAb高滴度组CD19+B细胞表面ICOSL表达水平显著高于TRAb低滴度组;GD甲亢患者TRAb转阴后,CD4^(+)T细胞表面ICOS及CD19+B细胞表面ICOSL的表达水平较初发时显著下降。结论Graves病患者外周血CD4^(+)T细胞表面ICOS及CD19+B细胞表面ICOSL表达水平显著升高;随着TRAb水平降低,CD4^(+)T细胞表面ICOS及CD19+B细胞表面ICOSL表达水平有所恢复。

人ICOS-Linker-Ig真核表达载体构建及二级结构分析

目的构建人重组ICOS-Linker-Ig真核表达载体并预测其二级结构及Linker的合理性。方法扩增人I-COS胞外域及IgG Fc段,设计一段柔性Linker将二者连接。经测序分析得到融合基因序列。应用核酸和蛋白质序列分析软件EditSeqTM对融合基因及Linker部位翻译后二级结构水平的一些生物学特性,诸如柔性、抗原性、亲水性及表位等加以预测分析。结果ICOS-Linker-Ig融合基因的氨基酸序列经软件分析,并分别与ICOS和IgG单独分析结果比较,发现在二级结构水平未出现新的抗原性,同时Linker部位具有很低的抗原性,亲水性无改变,Linker部位呈中性且柔性良好,不影响两端蛋白质二级结构和融合蛋白空间构象。ICOS和Ig具有各自原来的表位特征,无新表位出现。结论本研究构建的ICOS-Linker-Ig能够保留ICOS和Ig各自生物活性和功能,计算机分析表明翻译后不影响蛋白质空间结构的形成,适合融合蛋白功能的发挥。

特应性皮炎患者外周血滤泡性辅助性T细胞的特征

目的探讨特应性皮炎(AD)患者外周血滤泡性辅助性T(Tfh)细胞的表达特征,分析其在特应性皮炎发病机制中的作用。方法选择该院20例AD患者(AD组),运用欧洲特应性皮炎评分系统(SCORAD)评估病情严重程度。采用中药汤剂口服和他克莫司软膏外用治疗,治疗时间1个月。使用流式细胞技术检测患者治疗前、治疗1个月后和12例健康对照者(健康对照组)外周血Tfh细胞的频率及其表面程序性死亡受体1(PD-1)、诱导性共刺激分子(ICOS)的表达水平,并分析其与AD严重程度的相关性。结果与健康对照组比较,AD组外周血Tfh细胞频率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Tfh细胞PD-1、ICOS表达水平在AD组患者显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Tfh细胞频率与AD严重程度呈正相关关系(P<0.05),Tfh细胞PD-1、ICOS表达水平仅SCORAD评分升高而升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。经1个月治疗,患者皮疹好转、瘙痒减轻,外周血Tfh细胞频率及其表面PD-1、ICOS表达水平较治疗前明显降低(P<0.05)。结论 Tfh细胞频率和功能在AD患者外周血均发生改变,该细胞可能在AD的免疫学发病机制中具有重要的临床作用。

滤泡辅助性T细胞的研究进展

滤泡辅助性T细胞(Tfh)是最近发现的辅助B细胞新的CD4^+T细胞亚群。趋化因子受体5(C-X-C chemokine receptor type 5,CXCR5)、诱导性共刺激分子(inducible co-stimulator,ICOS)等主要功能分子参与了Tfh细胞的分化。Tfh细胞功能调节异常或Tfh细胞相关分子表达异常,可能与某些自身免疫性疾病、免疫缺陷病和恶性肿瘤的发病机制有关。本文就CXCR5和Tfh细胞的发现、Tfh细胞的起源与Tfh细胞功能相关的细胞因子,Tfh效应细胞和记忆细胞的迁移和定位、Tfh细胞异常与疾病等问题进行了综述。

系统性红斑狼疮患者血清B7-H4、ICOSL水平变化及与IKKβ/NF-κB通路的关系

目的 探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)患者血清可溶性共刺激因子B7同源体-4(B7 nomolog 4,B7-H4)、外周血淋巴细胞表面诱导共刺激分子配体(inducible costimulator ligand, ICOSL)的表达水平与核因子KappaB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路中IκB激酶(IκB-kinase, IKK)β间的关系。方法 将2020年4月至2021年12月50例SLE患者纳入研究组,选取同期来某院一般体检的50例健康人作为对照组,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清B7-H4及诱导性共刺激分子配体(inducible costimulator ligand, ICOSL)表达水平,反转录聚合酶链反应(reverse tran-scription PCR,RT-PCR)法检测NF-κB通路中IKKβ mRNA表达水平。组间比较采用t检验,两两变量的相关性采用Pearson分析,绘制受试者操作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线分析联合B7-H4、ICOSL、IKKβ检测对SLE患者的诊断价值。结果 研究组血清可溶性B7-H4、ICOSL表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t=-4.281、-31.439,P<0.05);研究组血清IKKβ mRNA表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t=-5.256,P<0.05);Pearson相关系数显示B7-H4、ICOSL与IKKβ mRNA均存在显著正相关关系(r=0.782、0.766,P<0.05);ROC曲线显示联合检测诊断SLE曲线下面积为0.855,显著高于任意单一检测(Z=3.412,P<0.001),特异度为83.20%,敏感度为89.40%,有较高诊断效能。结论 SLE患者体内存在B7-H4、ICOSL和IKKβ mRNA高表达,3者呈正相关关系,实时检测B7-H4、ICOSL水平能准确评估疾病发展,对改善患者预后及抑制该病进展有重要意义。

滤泡辅助性T淋巴细胞与儿童嗜酸性粒细胞性胃肠炎的相关性研究

目的探讨滤泡辅助性T淋巴(Tfh)细胞在儿童嗜酸性粒细胞性胃肠炎(EG)发病中的作用及临床意义。方法选取2018年10月至2020年1月在南京医科大学附属儿童医院消化科住院的EG患儿17例作为EG组,以同期结肠息肉患儿15例为对照组。采用流式细胞术检测2组患儿外周血中Tfh细胞及其功能性分子可诱导性共刺激分子(ICOS)、程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)的表达。结果EG组与对照组患儿外周血Tfh细胞频率的中位数(四分位间距)分别为7.3(2.6)%、2.8(1.4)%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。EG组与对照组患儿Tfh细胞上ICOS、PD-1的表达水平的中位数(四分位间距)分别为1.5(1.3)%、1.8(3.2)%及0.1(0.2)%、0.7(0.6)%,2组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。EG组患儿外周血中Tfh细胞频率与ICOS、PD-1表达量及免疫球蛋白E(IgE)水平均呈正相关(r=0.746、0.893、0.587,均P<0.05)。结论EG患儿外周血Tfh细胞增多,高表达ICOS、PD-1,处于增殖活化状态;EG患儿外周血Tfh细胞数量与IgE水平呈正相关性;Tfh细胞及其相关分子的异常表达在EG的发生机制中可能起促进作用。

急性期川崎病患儿CD4^＋CD25^highFOXP3^＋调节性T细胞亚群改变及意义

目的 探讨急性期川崎病患儿CD4^＋CD25^highFOXP3^＋调节性T细胞亚群改变及其在川崎病免疫发病机制中的作用.方法 急性期川崎病患儿36例,同年龄健康对照组32名,川崎病患儿治疗前、后取血备检.采用流式细胞术检测外周血CD4^＋CD25^highFOXP3^＋、可诱导性T细胞共刺激分子（ICOS）^＋调节性T细胞、ICOS-调节性T细胞比例及IL-10、TGF-β、IL-35p35、IL-35EBI3、TGF-βRⅡ、ICOS、CD28蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测CD4^＋T细胞Smad3/4、TGF-β诱导的早期反应基因1（TIEG1）、痒同源物E3泛素蛋白连接酶（hch）等mRNA表达;ELISA检测血浆中TGF-β浓度.采用t检验进行统计分析.结果 ①急性期川崎病患儿调节性T细胞比例[（3.2±1.8）％]明显低于对照组[（7.3±2.9）％,t=6.9,P＜0.05],其中ICOS^＋调节性T细胞和ICOS^-调节性T细胞比例[（2.3±1.0）％,（0.9±0.3）％]均明显低于健康对照组[（4.7±1.4）％,（2.6±0.9）％,t=11.7,9.8;P均＜0.05],且ICOS＋调节性T细胞/ICOS^-调节性T细胞比值（2.6±0.7）高于对照组[（1.8±0.5）,t=9.4,P＜ 0.05],治疗后均明显恢复[（5.9±2.3）％,（3.9±1.6）％,（2.0±0.8）％,（1.9±0.5）％;t=5.5,5.0,8.2,4.9;P均＜0.05];②急性期川崎病患儿ICOS＋调节性T细胞FOXP3、IL-10、TGF-β、IL-35p35和IL-35EBI3表达水平明显低于对照组（t=5.5,4.8,8.0,6.6,9.6;P均＜0.05）,而ICOS-调节性T细胞FOXP3、mTGF-β表达亦低于对照组（t=7.5,10.0;P均＜0.05）,治疗后上述分子表达显著上调（t=3.7,3.7,8.5,6.1,7.7,5.3,7.0;P均＜0.05）;③急性期川崎病患儿血浆TGF-β浓度及CD4＋T细胞TGF-βRⅡ、Smad3、Smad4、TIEG1、Itch表达水平明显低于对照组,调节性T细胞表面ICOS、CD28表达亦低于健康对照组,治疗后均明显恢复.结论 TGF-β、ICOS、CD28信号异常可能是导致急性期川崎病患儿CD4^＋CD25^highFOXP3^＋调节性T细胞及其亚群比例失调的重要因素.

外周血ICOS/ICOSL对乙肝患者病情的影响探究

目的探究外周血诱导性共刺激分子(ICOS)及诱导性共刺激分析配体(ICOSL)对乙肝患者病情的影响。方法选取2015年9月~2018年1月86例在我院接受治疗的乙肝患者为实验组,并选取同期86例健康体检者作为对照组,取两组参与者的外周血,检测血清中的丙氨酸转氨酶(ALT)、HBV血清标志物乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)和HBVDNA定量,并检测外周血中ICOS、ICOSLmRNA水平。结果免疫耐受期HBsAg、HBeAg及HBV-DNA水平高于其余两组(P<0.05),免疫活跃期ALT水平最高,与两组比较差异具有统计学意义(P<0.05);免疫耐受期、免疫活跃期及免疫低复制期的患者ICOS及ICOSL水平均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论乙肝患者ICOS/ICOSL水平升高,且与疾病活动程度有关。