干旱诱导性启动子驱动的海藻糖-6-磷酸合酶基因载体的构建及转基因烟草的耐旱性

通过PCR程序克隆拟南芥 (Arabidopsisthaliana (L .)Heynh .)的干旱诱导性启动子Prd2 9A及来自酿酒酵母(SaccharomycescerevisiaeHansen)的海藻糖_6_磷酸合酶基因 (TPS) ,并将它们组成可在植物中表达的载体RT。通过根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)LBA44 0 4介导 ,获得转基因烟草 (NicotianatabacumL .)。Southern分析表明TPS基因已经整合到烟草基因组中。Northern分析表明TPS基因的表达受干旱胁迫的诱导。转基因烟草的形态发生多种改变 ,包括变矮 ,茎变细 ,叶子呈柳叶状 ,腋芽明显 ,同时耐旱性得到增强。

受细菌诱导的植物启动子的克隆及其在转基因烟草中的活性

从烟草中克隆了受病原物诱导的植物启动子 (pathogen inducibleplantpromoters,PPPs)PPP1、PPP2、PPP3,其长度分别为 130 8,1170 ,2 2 0bp ,序列分析表明它们均含有受细菌诱导的反应元件 (Bac)。资料检索表明 ,PPP3可能是从植物分离的、受细菌诱导的最短的启动子。构建了包括每个PPP启动子和报道基因uidA (编码 β 葡萄糖醛酸酶 ,GUS)的转化单元 ,用它们以及包括来自椰菜花叶病毒 35S启动子和uidA单元 ,在相同条件下分别转化烟草 ,获得了分别含PPP和 35S启动子的 4类转基因烟草品系 ;分子检测表明 ,转化单元在转基因烟草染色体上能稳定整合。根据对转基因烟草GUS组织化学测定 。

诱导性表达Cre重组酶转基因载体的构建及鉴定

背景:猪在遗传上与人类相似,因此猪是研究人类疾病最好的动物模型,而对于这方面的研究在国内外报道较少。目的:建立诱导性表达Cre重组酶的转基因载体。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-10/2008-05在吉林大学农学部畜牧兽医学院完成。材料:DH5a菌株E.coliDH5α,质粒pcDNA3.1(+)、PET28a(+)、pCIneo,重组质粒PMD-Cre和猪成纤维细胞由北华大学医学部基础医学院细胞生物教研室保存;重组质粒pGC-FRT2NeoRRRR和Mx1克隆载体pGL3-Mx1由意大利Stefano教授馈赠。方法:构建的载体包括以下元件:Mx1启动子用来启动Cre的表达,Cre的作用是工具便于以后做基因敲除,BGHpolyA是一个终止信号,FRT2NeoR中的FRT是FLP酶的识别位点便于切除筛选标记,NeoR是筛选标记。通过聚合酶链反应方法分别从pGL3Mx1载体上和pcDNA3.1(+)载体上扩增猪Mx1启动子和BGHpolyA。利用重叠聚合酶链反应方法获得猪源的Cre重组酶基因,并从pGCFRT2NeoR上用XholⅠandSalⅠ酶切得到FRT2NeoR盒子。将上述4个片段利用SOE-PCR及酶连接的方法用T4DNA连接酶连接,然后利用原核表达载体PET28a(+)构建出Cre表达载体Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR。主要观察指标:Cre重组酶表载体PET28a(+)-Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR的鉴定。结果:PET28a(+)-Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR重组质粒经NheⅠ和NotⅠ双酶切后完全符合理论上可切出的大小片段,载体构建成功。结论:成功的构建了诱导性表达Cre重组酶表达载体Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR。

大豆中疫霉诱导性GmDRRP基因启动子的克隆与功能分析

本研究根据大豆与疫霉互作的基因芯片数据,筛选了一个受疫霉诱导表达的大豆抗病相关基因(Gm DRRP,glycine max disease resistance response protein),并对其启动子响应疫霉侵染的功能进行了研究。序列分析表明该基因编码一个大豆抗病相关蛋白。分别用SA、Me JA、ABA、ETH和GA3五种激素处理后,发现该基因的表达受激素的抑制。克隆其转录起始位点上游1 590 bp的启动子区,生物信息学分析发现该区域包含多个已知与逆境响应相关的顺式元件。进一步将启动子构建在融合Gus报告基因的植物表达载体上,分别瞬时转化烟草和稳定转化大豆根毛,并检测了Gus报告基因的表达情况。结果表明,Gm DRRP启动子均能在两种体系中不同程度的受疫霉诱导,其表达模式为接种后0.5 h被快速诱导,并在2 h时显著提高。根据生物信息学对顺式元件的预测结果,对启动子进行了分段分析,获得了一个222 bp的小片段,其疫霉诱导表达能力是全长启动子的34%。以上结果表明大豆的Gm DRRP启动子能被疫霉快速诱导。

植物诱导抗病基因工程育种研究进展

综述了植物抗病育种中主要功能基因的研究进展及其表达策略,在此基础上评述了诱导性抗病育种的研究进展及其优缺点,并对其今后应用进行了展望。

Regulated Gene Expression with Promoters Responding to Inducers

Genetically engineered transgenic animals and plants have proven to be extremely useful for analyzing biochemical and developmental processes.Promoters responding to chemical inducers will be powerful tools for basic research in molecular biology and biotechnological applications.Various chemical inducible systems based on activation and inactivation of the target gene had been described.The transfer of regulatory elements from prokaryotes,insects,and mammals has opened new avenues to construct chemically inducible promoters that differ in their ability to regulate the temporal and spatial expression patterns,and this will dramatically increase the application of transgenic technology.This review provides an overview on regulation of gene expression,promoter activating systems,promoter inactivation systems,inducible gene over expression,and inducible anti suppression.