人TGF融合疫苗诱导抗体在貂肺上皮细胞的活性检测

目的TGFβ1疫苗诱导Balb/c小鼠产生抗体及对TGFβ1体外中和活性。方法通过已构建成功的TGFβ1疫苗免疫小鼠,诱导产生高效价中和抗体,抗TGFβ1抗体及合成的抗原肽ELISA法检测免疫血清抗体滴度,经貂肺上皮细胞生长抑制法,检测抗体血清对TGFβ1体外中和活性。结果抗TGFβ1疫苗可以诱导高滴度的抗体产生,可与抗TGF抗体及抗原肽结合,可以阻断TGFβ1对貂肺上皮细胞的抑制活性。结论构建的抗TGFβ1疫苗可以诱导高滴度的中和抗体产生,在体外阻断TGFβ1活性,可以作为抗纤维化疫苗用于抗纤维化动物模型研究。

雷公藤内酯醇LLDT-8在抗GBM抗体诱导小鼠肾炎中的疗效作用及对Fc受体介导淋巴细胞活化的调控机制

目的研究(5R)-5-羟基雷公藤内酯醇(LLDT-8)对小鼠抗肾小球基底膜(GBM)肾炎的疗效作用,探讨LLDT-8对Fcγ受体介导的淋巴细胞活化的调控机制。方法 (1)运用兔抗小鼠GBM血清诱导的雄性NZW小鼠肾炎模型,以LLDT-8口服治疗4周。观察药物对肾炎小鼠的体重、蛋白尿、肾病理变化等指标的影响作用;(2)采用流式细胞术对LLDT-8治疗干预肾炎小鼠肾浸润细胞亚群比例及表型进行分析;(3)采用免疫荧光法观察小鼠肾小球中补体沉积及炎性单核细胞浸润;(4)采用PCR法检测肾组织中Fcγ受体及炎性因子表达;(5)采用肾炎小鼠疾病高峰脾淋巴细胞,考察LLDT-8对抗血清诱导记忆性细胞应答的影响。结果 (1)LLDT-8能缓解抗GBM抗体诱导肾炎小鼠的疾病进程,改善肾病变,减少肾补体沉积及免疫细胞浸润。(2)LLDT-8治疗能降低疾病高峰血清中IFN-γ及IL-6水平。(3)LLDT-8降低疾病发展各阶段的外周及肾CD11b+单核细胞Fcγ受体表达水平。(4)LLDT-8体外抑制肾炎小鼠淋巴细胞抗原特异性增殖,降低Ig G及IL-6的分泌水平。结论证实了LLDT-8对于抗GBM抗体诱导的小鼠肾炎具有显著的治疗作用,阐明了LLDT-8影响单核/淋巴细胞的Fcγ受体的表达,调控抗原特异性记忆淋巴细胞应答效应并抑制肾病灶中免疫细胞浸润,从而缓解肾小球肾炎进程的疗效机制。

诱导性抗-S联合抗-Wr a抗体致疑难配血分析

天然产生的抗-A和抗-B是人血清或血浆中唯一规则存在的红细胞抗体,其他所有抗体均称为“红细胞意外抗体”(不规则抗体)。红细胞不规则抗体已成为影响输血安全、血型鉴定及交叉配血不合的重要原因之一。我国仅少数血站将献血者不规则抗体筛查列为常规检测项目。本文对1例诱导性抗-S联合抗-Wr a抗体致疑难配血进行了分析。

同型半胱氨酸、同型半胱氨酸诱导基因-2抗体和叶酸对人胚心肌细胞超微结构的影响

目的研究同型半胱氨酸(HCY)、同型半胱氨酸诱导基因-2抗体(HCY-2Ab)及叶酸对人胚心肌细胞超微结构的影响。方法取培养的人胚心肌细胞,进行HE染色,常规电镜包埋,透射电镜观察。结果当HCY的浓度小于1·0mmol/L时,随着HCY浓度的升高,心肌细胞核内常染色质增多、细胞质内线粒体和粗面内质网均多于空白对照组,而糖原颗粒减少;当浓度超过1·0mmol/L时,心肌细胞逐渐退化,细胞核内常染色质减少,异染色质增多,核膜包裹染色质形成凋亡小体,细胞质内线粒体肿胀、数目减少,粗面内质网减少;加入外源性的HCY-2Ab或叶酸,心肌细胞形态较相同HCY浓度下的好转。结论HCY对培养的人胚心肌细胞超微结构的维持具有正调节和负调节双相作用;外源性的HCY-2Ab和叶酸在一定程度上可以逆转HCY的作用。

PAMPs对抗体诱导类风关样小鼠模型的影响

目的探讨病原相关模式分子（PAMPs）对抗体诱导的关节炎（CAIA）样小鼠模型建立的影响。方法 7~8周龄Balb/c雌鼠,第0天使用抗体混合物诱导,第3天使用LPS（TLR4激动剂）或Cp G ODN 1826（TLR9激动剂）激发,每天定时观察四肢关节发病情况并进行关节评分;小鼠腹腔注射O111：B4和O55：B5,绘制生存曲线进行毒性分析;ELISA检测PAMPs刺激小鼠巨噬细胞后IL-6、TNF-α的分泌水平;鲎实验定量检测相同浓度下O111：B4和O55：B5的有效活性。结果 PAMPs成功激发CAIA模型炎症,其中O55：B5低死亡率、高成模率;O111：B4的毒性强于O55：B5;O55：B5的炎症因子分泌量显著高于O111：B4和Cp G ODN 1826（P〈0.01）;O111：B4的有效活性显著高于O55：B5（P〈0.01）。结论低毒高致炎性的O55：B5激发模型效果最佳,说明PAMPs能够影响建模效果,而低毒高致炎性PAMPs适合该模型的激发。

抗体诱导免疫性溶血病SD大鼠模型的建立及组织病理研究

目的:建立抗体诱导免疫性溶血病SD大鼠模型,为其发病机制与病程研究及药物疗效评价提供实验平台。方法:分离SD大鼠红细胞并将其腹腔注入BALB/c小鼠,诱导其产生抗SD大鼠红细胞抗体血清。取20只SD大鼠随机分为2组,其模型组经尾静脉注射0.1 ml抗血清;给予对照组尾静脉注射0.1 ml生理盐水,分别观察两组大鼠全身反应、溶血相关指标及主要脏器组织病理学改变。结果:注射抗血清后,模型组SD大鼠鼻翼煽动、懒动、摄水摄食能力减弱、肉眼可见的皮肤黏膜黄疸及血红蛋白尿,d 4模型组SD大鼠较对照组大鼠体重明显下降(P <0.01),肝脏与脾脏系数明显上升(P <0.01);血WBC、MCV、MCH、DBIL、DBIL/TBIL、FHb值水平均明显升高,RBC、Hb、HCT、MCHC、Plt数值水平均明显下降,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。模型组SD大鼠肝、脾、肾、肺及小肠镜下均可见溶血性病理改变,骨髓涂片可见骨髓红系明显增生。结论:通过对SD大鼠尾静脉注射BALB/C小鼠抗SD大鼠红细胞抗体血清,可以成功建立SD大鼠免疫性溶血病模型,且成功率高、重复性佳,成本低等优点。

小剂量兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白与抗人T细胞猪免疫球蛋白在肾移植诱导治疗中的比较

目的:比较小剂量兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白(即复宁)与抗人T细胞猪免疫球蛋白(ALG-P)在肾移植诱导治疗中的效果。方法:将120例首次肾移植受者随机分为小剂量即复宁组(44例)、ALG-P组(36例)和对照组(40例)。随访1年后比较三组血白细胞、血小板、外周血T淋巴细胞绝对值、肾功能恢复程度、过敏反应发生情况、继发感染与急性排斥发生率和肾功能延迟恢复(DGF)发生率等。结果:小剂量即复宁组、ALG-P组与对照组相比,外周血T淋巴细胞绝对值下降更明显,尤其是CD4+T淋巴细胞,在术后3d、9d、1月、3月、6月均能明显下降(P<0.05);同时急性排斥反应发生时间延迟,1周内无急性排斥反应发生,急性排斥反应及DGF发生率更低(P<0.05),肾功能恢复情况更好(P<0.05);虽过敏反应及血小板严重下降增多(P<0.05),但并未导致严重后果。小剂量即复宁组患者在肾移植术后早期(术后3月内)外周血T淋巴细胞绝对值较ALG-P组下降更明显,以CD4+T淋巴细胞为著(P<0.05);小剂量即复宁组急性排斥反应及DGF发生率更低,肾功能恢复情况更好;但两组患者继发感染、过敏反应、血小板和白细胞等严重下降的发生率无明显差异。结论:小剂量即复宁和ALG-P在肾移植免疫诱导治疗中使用是安全而有效的,小剂量即复宁效果更佳,可作为免疫抑制诱导治疗的更优选择。

胶原抗体联合LPS建立C57BL/6小鼠关节炎模型

胶原抗体诱导性关节炎(CAIA)是一种新颖的关节炎小鼠模型,与胶原诱导性关节炎(CIA)模型相比,CAIA不需要7周以上才出现关节炎表型,对于CIA模型不敏感的品系也有较好的诱导效果。然而,使用的高剂量诱导剂,一方面给小鼠带来严重的不良反应,甚至出现死亡现象,另一方面也导致5-克隆胶原抗体混合物的不必要浪费。降低5-克隆胶原抗体混合物和脂多糖(LPS)的使用剂量,在避免模型小鼠死亡,节约5-克隆胶原抗体混合物的同时,成功高效诱发C57BL/6小鼠关节炎模型,为类风湿关节炎(RA)发病机制的研究提供了有效方法。

GLCCI1基因rs37973位点多态性对ICSs治疗哮喘-慢性阻塞性肺疾病重叠效果的影响

目的探讨GLCCI1基因rs37973位点多态性与哮喘-慢性阻塞性肺疾病重叠(ACO)患者使用吸入性糖皮质激素(ICSs)后应答反应的相关性。方法纳入2019年4月1日至2020年12月31日就诊于上海市浦东新区人民医院并首次诊断为ACO的患者173例。所有患者均使用沙美特罗替卡松吸入粉雾剂,每天2次,持续24周。测定患者的rs37973位点基因型和肺功能指标[第1秒用力呼气容积(FEV_(1))、FEV_(1)/用力肺活量(FVC)、FEV_(1)占预计值百分比(FEV_(1)%pred)]及肺功能改善情况(ΔFEV_(1)和ΔFEV_(1)%pre)。结果共有111例患者完成了24周随访及肺功能检测,其中,GLCCI1基因rs37973位点AA型42例、AG型52例、GG型17例。治疗12、24周后,患者的肺功能指标总体情况均显著优于治疗前患者的基线肺功能指标(P<0.05)。治疗24周后,AA型、AG型患者的肺功能改善情况均显著优于GG型,且AA型患者的ΔFEV_(1)%pred显著优于AG型(P<0.05)。治疗12、24周后,吸烟史≤20包年患者的肺功能改善情况均显著优于吸烟史>20包年患者,且吸烟史≤20包年患者中仅AA型患者的ΔFEV_(1)%pred显著优于AG型(P<0.05)。治疗12周后,吸烟史>20包年患者中,AA型和AG型患者肺功能改善情况均显著优于GG型,且AA型患者的ΔFEV_(1)%pred显著优于AG型(P<0.05);治疗24周后,AA型和AG型患者的肺功能改善情况均显著优于GG型(P<0.05)。结论GLCCI1基因rs37973位点GG型ACO患者对ICSs的治疗反应较其他基因型差,其中吸烟史>20包年的患者反应更差。

干扰素β通过RANK/RANKL信号分子调控胶原抗体诱导关节炎小鼠的分子学机制

目的:研究干扰素β(interferonβ,IFN-β)在抗胶原Ⅱ功能域抗体诱导的小鼠类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)样模型中的调控作用,探讨RA潜在的干预新靶点。方法:应用抗胶原Ⅱ功能域抗体诱导建立胶原抗体诱导关节炎(collagen antibody induced arthritis,CAIA)小鼠模型,通过其表型、关节评分、免疫组织化学染色、X射线衍射分析是否建模成功,并用IFN-β基因工程药物干预,RANK体外诱导破骨细胞生成,抗酒石酸酸性磷酸酶染色法检测破骨细胞数量,实时荧光定量聚合酶链反应检测RANK/RANKL关键分子变化。结果:CAIA小鼠建模成功,IFN-β能显著缓解CAIA小鼠的病情,实时荧光定量聚合酶链反应显示IFN-β干预后小鼠骨关节中c-FOS、NFATc-1的表达量下降,IFN-β能抑制破骨细胞生成。结论:IFN-β缓解CAIA小鼠模型发病的可能机制是通过RANK/RANKL-IFN-β-NFATc-1下调破骨细胞的生成。

阻断ICOS对小鼠移植胰岛功能影响的实验研究

目的:在小鼠胰岛移植模型基础上,通过阻断可诱导共刺激分子(ICOS),探讨ICOS单克隆抗体(ICOS mAb)对移植胰岛功能的影响。方法:供体为近交系昆明小鼠,受体为C57小鼠。受体小鼠随机分成5组,每组10只。假手术组:受体小鼠仅行开腹手术,不行胰岛移植;对照组:单纯胰岛移植,不给ICOS mAb;实验1、2、3组:分别于胰岛移植后1、3、5 d腹腔内注射ICOSmAb 50、100、200μg/kg。观察小鼠胰岛移植后移植物存活时间和移植胰岛病理改变,流式细胞仪检测ICOS在T淋巴细胞上的表达。结果:实验2组小鼠移植胰岛存活时间和实验3组相同,统计学分析无显著性差异,而较对照组及实验1组明显延长(P<0.05)I,COS在移植术后7 d受体小鼠T淋巴细胞上表达明显上调。结论I:COS分子在小鼠同种异体胰岛移植排斥反应中表达上调,参与了排斥反应的发生。ICOS mAb通过阻断ICOS共刺激信号途径,诱导小鼠同种异体胰岛移植免疫耐受,减轻排斥反应,延长移植胰岛有功能存活时间。ICOS mAb的最佳给药剂量为100μg/kg。

重复肾移植患者的临床特点及其转归

目的 :提高多次肾移植的尿毒症患者移植物的存活率 ,探讨其术式、用药特点和人 /肾存活情况。 方法 :回顾性分析 36例二次肾移植和 7例三次肾移植患者再次移植的时间 ,以及是否保留原移植肾 ,是否应用抗体诱导治疗 ,应用不同免疫抑制剂方案和人 /肾存活率等临床资料。 结果 :本组患者急性排斥反应发生率为34 9% (15 / 4 3) ,移植肾功能延迟恢复的发生率为 39 5 % (17/ 4 3) ,1年人 /肾存活率分别为 88 4 % (38/ 4 3) / 81 4 %(35 / 4 3) ,3年人 /肾存活率分别为 78 3% (18/ 2 3) / 6 5 2 % (15 / 2 3)。 结论 :再次肾移植的患者宜切除原移植肾 ,术前最好采用抗体诱导治疗 ,术后宜采用肝毒性较小的免疫抑制剂。多次肾移植的患者移植肾功能延迟恢复的发生率高 ,人 /肾存活率较初次移植的患者低。

大鼠动物实验中的重复开放肾活检技术

基础性医学研究中经常会使用大鼠来建立模拟人类疾病的动物模型[1],但大鼠实验周期较长,模型建立往往需要花费大量的时间和精力。同时,随着对动物伦理问题的日益重视[2],如何在动物实验中减少动物的数量,优化实验动物的使用和充分利用获得的实验动物材料,是一个非常重要的问题。

肾移植术后间质性肺炎的早期诊断、预防及处理原则

目的探讨肾移植术后间质性肺炎的早期诊断、预防及处理原则。方法选择吉林大学第一医院泌尿系统疾病诊治中心2008年至2011年肾移植术后出现间质性肺炎患者83例。比较2008年1-12月与2009年1月-2011年12月两个时期肾移植患者术后预防及治疗的差异,以及间质性肺炎的发生情况。结果 2008年1-12月138例患者进行肾移植,术后发生间质性肺炎38例,发生率为27.54%;2009-2011年435例患者行肾移植,45例术后发生间质性肺炎,发生率为10.34%。2008年组肾移植术后患者早期住院期间给予静脉注射更昔洛韦针剂,出院后口服更昔洛韦片剂及复方新诺明片剂。2009-2011年组肾移植术后患者出院后根据患者血药浓度及血肌酐水平给予口服更昔洛韦片剂及复方新诺明片剂。在患者检查肺部CT确诊为间质性肺炎后入院,2008年组采取根据患者的病情减少或停用免疫抑制剂,给予适量糖皮质激素冲击、更昔洛韦抗病毒及联合复方新诺明抗原虫治疗;2009-2011年组则采取根据患者的病情情况使用规律性大剂量糖皮质激素冲击,并停用免疫抑制剂,同时抗病毒及联合复方新诺明抗原虫治疗。2008年组治愈/好转35例,死亡2例,1例放弃治疗,治疗期间发生排异反应3例。2009-2011年组治愈/好转45例,死亡0例,治疗期间发生排异反应3例。2008-2011年573例肾移植术患者中,接受巴利昔单抗或抗胸腺细胞球蛋白(ATG)等抗体诱导治疗183例,未接受抗体诱导治疗390例;在83例肾移植术后发生间质性肺炎患者中,有27例患者应用巴利昔单抗或ATG等抗体诱导治疗,其余56例未接受抗体诱导治疗。结论①早期停用免疫抑制剂、给予糖皮质激素冲击治疗、更昔洛韦抗巨细胞病毒治疗、联合应用复方新诺明抗原虫治疗及有效的营养支持是治疗肾移植术后治疗间质性肺炎的有力措施。②在有效的肾移植术后预防间质性肺炎用药指导下,肾移植患者术前接受抗体诱导治疗未见其增加术后发生间质性肺炎的概率。

抗体免疫诱导疗法对肾移植受者的影响

器官移植术后早期应用环孢素或普乐可复、酶酚酸脂或硫唑嘌呤以及大剂量皮质激素,用于诱导免疫抑制状态,预防和治疗急性排斥反应,为常规免疫诱导疗法.在此基础上,加用各种抗淋巴细胞球蛋白(单克隆抗体或多克隆抗体)以增强免疫诱导效果(一般5～7天),称为抗体免疫诱导疗法.

干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白2抗体基因在胃癌进展中的作用

目的探讨干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白2抗体（IFIT2）在人胃癌进展中的作用及机制。 方法通过使用RNA干扰（RNAi）技术构建IFIT2稳定下调表达的人胃癌细胞株SGC-7901及AGS，聚合酶链反应（PCR）和Western blot分别在RNA水平和蛋白水平验证两株细胞株LV-IFIT2-短发卡RNA（shRNA）组的IFIT2的表达水平，进一步研究IFIT2在人胃癌细胞株中的生物学功能。 结果Real-time PCR检测结果显示，SGC-7901以及AGS细胞系中LV-IFIT2-shRNA组IFIT2 mRNA表达水平均显著低于LV-NC组（SGC-7901：0.426±0.140比1.000±0.157，P＝0.004；AGS：0.232±0.090比1.000±0.194，P＝0.003）；蛋白质印迹检测结果显示，SGC-7901以及AGS细胞系中LV-IFIT2-shRNA组的IFIT2的蛋白表达水平均显著低于LV-NC组（SGC-7901：0.344±0.041比1.000±0.062，P＝0.002；AGS：0.091±0.001比1.000±0.106，P＝0.000）。对稳定转染LV-IFIT2-shRNA及LV-NC的人胃癌细胞系SGC-7901和AGS进行CCK-8增殖实验、划痕实验、Transwell实验和细胞周期测定。在培养的48、72 h shRNA组的吸光度值显著高于LV-NC组，提示下调IFIT2的表达可以显著抑制人胃癌细胞系SGC-7901和AGS的增殖能力（SGC-7901：48 h：0.348±0.031比0.276±0.026，P＝0.013；72 h：0.523±0.042比0.411±0.027，P＝0.004；AGS：48 h：0.454±0.034比0.362±0.038，P＝0.011；72 h：0.696±0.053比0.553±0.030，P＝0.003）；划痕实验显示SGC-7901和AGS细胞IFIT2干扰组的迁移能力明显高于NC组的迁移能力，提示IFIT2表达的降低可明显增强SGC-7901和AGS细胞的迁移能力（SGC-7901：0.640±0.029比0.447±0.056，P＝0.006；AGS：0.444±0.036比0.166±0.034，P＝0.001）；Transwell侵袭实验中，LV-IFIT2-shRNA组的结晶紫染色迁移细胞数明显多于LV-NC组，表明SGC-7901和AGS细胞下调IFIT2表达后的侵袭能力提高（SGC-7901：299.3±45.6比162.3±25.9，P＝0.011；AGS：404.0±44.5比235.0±30.0，P＝0.003）；流式细胞术分析细胞周期显示，LV-IFIT2-shRNA组的S期细胞比例高于LV-NC组，提示人胃癌细胞系中IFIT2的敲除可显著影响细胞周期。 结论IFIT2表达降低可促进胃癌进展，并可预测患者的不良预后。

器官移植术后的合理免疫抑制与监测（续）——2008年美国移植大会（ATC）内容综述

3．恶性肿瘤：2004年的一项研究表明，采用抗淋巴细胞抗体诱导治疗能使发生移植后淋巴细胞增殖性疾病（PTLD）的相对危险（RR）增加（RR=1．78，P〈0.01），但与新生肿瘤的发生可能无关（RR=1．07，P〉0．05）。因此，评估诱导治疗与恶性肿瘤发生相关性可能有益于临床实践。